催产素类似物

摘要

本发明涉及新的化合物、包含所述化合物的药物组合物、所述化合物在制造用于治疗尤其是泌乳功能受损病症的药物中的应用以及用于治疗所述病症的方法，其中施用所述化合物。所述化合物由通式(I)表示，如说明书中进一步所限定。

权利要求

1.一种具有式(I)的化合物：

其中：

n选自0、1和2；

p选自0、1、2、3、4、5和6；

R1选自任选用至少一个OH、F、Cl、Br、烷基或O-烷基取代基取代的芳基；

R2选自R4、H、烷基、环烷基、芳基和5元-和6元-杂芳环体系；

R3选自H和，当R2为R4时与R2形成环结构的共价键；

R4为用至少一个O-烷基、S-烷基或OH取代基取代的C1-6亚烷基部分；

W和X各自独立地选自CH2和S，但不可以同时是CH2；

烷基选自C1-6直链和C4-8支链烷基并且任选地具有至少一个羟基取代基；

芳基选自苯基和单-或多-取代的苯基；

条件是当R2是H，p是1，R3是H，n是1且W和X同时是S时，R1不是4-羟基苯基；和其溶剂化物和药用盐。

2.根据权利要求1所述的化合物，其具有这样的条件，即当R2是H，p是0，R3是H，n是

1且W和X同时是S时，R1不是4-羟基苯基。

3.根据权利要求1或2所述的化合物，其中芳族体系任选地用至少一个烷基、O-烷基、OH、F、Cl或Br取代基取代。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的化合物，其中n是1。

5.根据权利要求1-4中任一项所述的化合物，其中p选自0、1、2、3、4和5。

6.根据权利要求1-5中任一项所述的化合物，其中R1选自苯基、4-羟基苯基、4-甲氧基苯基和4-乙基苯基中的任意一个。

7.根据权利要求1-6中任一项所述的化合物，其中R2选自乙基、正丙基、正丁基、环丙基、2-羟乙基、2-甲氧基乙基、2-苯乙基、苯基、苄基、2-甲基苯基、3-甲基苯基、4-甲基苯基、4-甲氧基苯基、4-氟苯基、3，4-二氟苯基、2-噻吩基、2-四氢呋喃基、2-呋喃基、2-吡啶基和4-吡啶基中的任意一个。

8.根据权利要求1-7中任一项所述的化合物，其中R3是H。

9.根据权利要求1-7中任一项所述的化合物，其中R3是共价键并且所述环结构选自(R)-4-甲氧基吡咯烷基，(R)-4-甲基硫代吡咯烷基和(S)-4-羟基吡咯烷基。

10.根据权利要求1-9中任一项所述的化合物，其中W是CH2且X是S。

11.根据权利要求1-9中任一项所述的化合物，其中W是S且X是CH2。

12.根据权利要求1-9中任一项所述的化合物，其中W和X同时是S。

13.根据权利要求1或2所述的化合物，其中R2选自未取代或取代的环烷基、芳基和5元-和6元-杂芳环体系。

14.根据权利要求1所述的化合物，其中所述化合物选自由下列各项组成的组：

15.根据权利要求1-14中任一项所述的化合物，其用作药物。

16.药物组合物，其包含作为活性成分的根据权利要求1-14中任一项所述的化合物和药用佐剂、稀释剂或载体。

17.根据权利要求1-14中任一项所述的化合物，其用于治疗泌乳功能受损病症、引产损伤、子宫收缩乏力病症、大量出血、炎症、疼痛、腹痛、背痛、男性和女性性功能障碍、肠易激综合征(IBS)、便秘、胃肠梗阻、孤独症、应激、焦虑症、抑郁症、焦虑障碍、外科手术失血、产后出血、伤口愈合、感染、乳腺炎、胎盘分娩损伤、骨质疏松症中的一种或多种，和/或用于诊断癌症和胎盘功能不全。

18.根据权利要求1-14中任一项所述的化合物在制造用于治疗泌乳功能受损病症、引产损伤、子宫收缩乏力病症、大量出血、炎症、疼痛、腹痛、背痛、男性和女性性功能障碍、肠易激综合征(IBS)、便秘、胃肠梗阻、孤独症、应激、焦虑症、抑郁症、焦虑障碍、外科手术失血、产后出血、伤口愈合、感染、乳腺炎、胎盘分娩损伤、骨质疏松症的药物，和制造用于诊断癌症和胎盘功能不全的药物中的应用。

19.一种用于治疗泌乳功能受损病症、引产损伤、子宫收缩乏力病症、大量出血、炎症、疼痛、腹痛、背痛、男性和女性性功能障碍、肠易激综合征(IBS)、便秘、胃肠梗阻、孤独症、应激、焦虑症、抑郁症、焦虑障碍、外科手术失血、产后出血、伤口愈合、感染、乳腺炎、胎盘分娩损伤、骨质疏松症，和用于诊断癌症和胎盘功能不全的方法，其中所述方法包括向动物，包括人，患者施用治疗有效量的根据权利要求1-14中任一项所述的化合物。

说明书

催产素类似物

[0001] 发明的领域

[0002] 本发明涉及新化合物、包含所述化合物的药物组合物、所述化合物在制造用于治疗尤其是泌乳功能受损病症(compromised lactation conditions)的药物中的应用以及用于治疗所述病症的方法，其中施用所述化合物。

[0003] 背景

[0004] 肽类催产素受体激动剂包括天然激素催产素和卡贝缩宫素(carbetocin)。

[0005] (催产素)

[0006] 催产素是有效的子宫收缩剂，临床上用来引产，并且已经显示促进泌乳的发生和维持，Gimpl，G.等，Physiol.Rev.(生理学评论)81(2001)629-683和Ruis H.等，British Medical Journal(英国医学杂志)283(1981)340-342。卡贝缩宫素(1-脱氨-1-carba-2-酪氨酸(O-甲基)-催产素)也是一种临床上用于控制子宫收缩乏力和大量出血的有效子宫收缩剂。进一步的研究表明催产素激动剂有效用于治疗炎症和疼痛，包括腹痛和背痛；性功能障碍，男性和女性；肠易激综合征(IBS)、便秘和胃肠梗阻；孤独症、应激(stress)、焦虑症(anxiety)(包括焦虑障碍(anxiety disorder))和抑郁症(Pitman R.等，Psychiatry Research(精神病学研究)，48：107-117；Kirsch P等，The Journal of Neuroscience(神经科学杂志)，25(49)：11489-11493)；外科手术失血，控制产后出血，伤口愈合和感染；乳腺炎和胎盘分娩；和骨质疏松症。另外，催产素激动剂可以有效用于诊断癌症和胎盘功能不全。

[0007] 催产素和卡贝缩宫素两者的缺点是它们缺少对血管加压素受体，尤其是V2受体的选择性。在施用催产素期间，通过诸如抗利尿作用和低钠血症的副作用观察到此缺点。

[0008] 为了改善催产素的药理性质，已经合成了催产素的类似物。所述类似物由Grozonka Z.等在J.Med.Chem.(药物化学杂志)26(1983)555-559和J.Med.Chem.(药物化学杂志)26(1983)1786-1787，和由 T.等在E.J.Pharmacol.(欧洲药理学杂志)355(1998)203-210中描述。另外，Fragiadaki M.等在E.J.Med.Chem.(欧洲药物化学杂志)(2007)799-806中已经描述了对催产素受体具有拮抗剂活性的催产素类似物。

[0009] 本发明可以提供选择性的有效化合物，其在例如，泌乳功能受损病症的治疗中提供可行的替代物和/或改善。

发明内容

[0010] 本发明涉及由通式(I)代表的化合物：

[0011]

[0012] 其中：

[0013] n选自0、1和2；

[0014] p选自0、1、2、3、4、5和6；

[0015] R1选自任选用至少一个OH、F、Cl、Br、烷基或O-烷基取代基取代的芳基；

[0016] R2选自R4、H、烷基、环烷基、芳基和5元-和6元-杂芳环体系；

[0017] R3选自H和，当R2为R4时与R2形成环结构的共价键；

[0018] R4为用至少一个O-烷基、S-烷基或OH取代基取代的C1-6亚烷基部分；

[0019] W和X各自独立地选自CH2和S，但不可以同时是CH2；

[0020] 烷基选自C1-6直链和C4-8支链烷基并且任选地具有至少一个羟基取代基；

[0021] 芳基选自苯基和单-或多-取代的苯基；

[0022] 条件是当R2是H，p是1，R3是H，n是1且W和X同时是S时，R1不是4-羟基苯基；

[0023] 环烷基选自C3-6环烷基和任选地具有至少一个羟基取代基；和其溶剂化物和药用盐。

[0024] 本发明可以进一步涉及由上面式(I)所代表的化合物，其具有进一步的条件，即当R2是H，p是0，R3是H，n是1且W和X同时是S时，R1不是4-羟基苯基。因此，本发明可以涉及上面式(I)的化合物，其具有的条件是所述化合物不是[1-β-Mpa，7-Sar]OT和/或不是{脱氨[7-甘氨酸]催产素}。

[0025] 为了本发明的目的，使用下面的术语。

[0026] C1-6直链烷基表示具有1-6个碳原子，包括其间的任何数目。

[0027] C4-8支链烷基表示含有4-8个碳原子的所有支链烷基基团，包括异-、仲-和叔-构型，因为所述表述不涉及正在讨论的烷基链的结合位点。

[0028] C3-6环烷基表示含有3-6个碳原子(包括其间的任何数目)的碳环体系。该环系可以含有碳原子之间的不饱和键。

[0029] 5元杂芳环体系是具有5个环原子的单环芳环体系，其中1、2、3或4个环原子独立地选自N、O和S。优选的环系选自由噻吩基、呋喃基、咪唑基、噻唑基、噻二唑基和四唑基组成的组。

[0030] 6元杂芳环体系是具有6个环原子的单环芳环体系，其中1、2、3或4个环原子独立地选自N、O和S。优选的环系选自由吡啶基组成的组。

[0031] 芳基表示选自苯基和单-或多取代的苯基的芳族基团。

[0032] 取代基部分可以选自氟(F)、氯(Cl)和溴(Br)原子和烷基、羟基(-OH)、烷氧基(-O-烷基)和烷硫基(-S-烷基)。

[0033] 药用盐的实例包括酸加成盐，例如，通过与氢卤酸诸如氢氯酸和无机酸，诸如硫酸、磷酸和硝酸，以及脂族酸、脂环酸、芳族酸或杂环磺酸或羧酸诸如甲酸、乙酸、丙酸、琥珀酸、羟基乙酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、抗坏血酸、马来酸、羟基马来酸、丙酮酸、对羟基苯甲酸、双羟萘酸(embonic acid)、甲磺酸、乙磺酸、羟基乙磺酸、卤代苯磺酸、三氟乙酸、三氟甲磺酸、甲苯磺酸和萘磺酸反应形成的盐。

[0034] 在优选的实施方案中，n是1。

[0035] 在优选的实施方案中，p选自1、2、3、4和5。

[0036] 在优选的实施方案中，R1选自苯基、4-羟基苯基、4-甲氧基苯基和4-乙基苯基。

[0037] 在优选的实施方案中，R2选自乙基、正丙基、正丁基、环丙基、2-羟乙基、2-甲氧基乙基、2-苯乙基、苯基、苄基、2-甲基苯基、3-甲基苯基、4-甲基苯基、4-甲氧基苯基、4-氟苯基、3，4-二氟苯基、2-噻吩基、2-四氢呋喃基、2-呋喃基、2-吡啶基和4-吡啶基。

[0038] 在优选的实施方案中，R3是H。

[0039] 在优选的实施方案中，所述环结构选自(R)-4-甲氧基吡咯烷基、(R)-4-甲基硫代吡咯烷基和(S)-4-羟基吡咯烷基。

[0040] 在优选的实施方案中，W是CH2且X是S。

[0041] 在优选的实施方案中，W是S且X是CH2。

[0042] 在优选的实施方案中，W和X同时是S。

[0043] 在最优选的实施方案中，本发明是选自由下列各项组成的组的化合物：

[0044]

[0045]

[0046] 此外，本发明涉及用作药物的如上所给出的化合物。

[0047] 因此，本发明还涉及包含作为活性成分的如上所给出的化合物和药用佐剂、稀释剂或载体的药物组合物。

[0048] 所述药物组合物可以适于口服、静脉内、局部、腹膜内、经鼻、口腔、眼内、耳内、舌下或皮下给药或适于经呼吸道给药，例如，以气雾剂或空气中悬浮的细粉的形式。因此所述组合物可以例如采取片剂、胶囊剂、粉剂、微粒、颗粒剂、糖浆剂、混悬剂、溶液、经皮贴片或栓剂的形式。

[0049] 应当注意根据本发明的组合物可以任选地包括两种或以上的上面概述的化合物。

[0050] 本发明的药物组合物可以任选地包含，例如，至少一种另外的添加剂，所述添加剂选自崩解剂、粘合剂、润滑剂、调味剂、防腐剂、着色剂和它们的任意混合物。所述和其他添加剂的实例可见“Handbook of Pharmaceutical Excipients(药物赋形剂手册)”；A.H.Kibbe主编，第三版，American Pharmaceutical Association(美国药学协会)，美国，和英国药学出版社(Pharmaceutical Press UK)，2000。

[0051] 本发明的药物组合物可以适于经鼻给药。其可以包含优选地与受者的血液等渗的本发明的化合物的无菌含水制剂。此含水制剂可以根据已知的方法使用适当的分散剂或湿润剂和悬浮剂来配制。鼻腔喷雾剂 (催产素)是也适用于本文公开的本发明的化合物的适当的药物配方的实例。水、林格溶液和等渗氯化钠溶液是示例性的可接受的稀释剂。所述制剂还可以包含赋形剂诸如磷酸钠、柠檬酸、氯化钠、甘油、山梨醇溶液、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯和氯代丁醇。

[0052] 另外，本发明涉及如上所概述的化合物用于治疗一种或多种医学病症的应用，或在制造用于治疗一种或多种医学病症的药物中的应用，所述医学病症诸如泌乳功能受损病症；引产损伤(labour induction impairment)；子宫收缩乏力病症；大量出血；炎症和疼痛，包括腹痛和背痛；性功能障碍，男性和女性两者；肠易激综合征(IBS)、便秘和胃肠梗阻；孤独症、应激、焦虑症(包括焦虑障碍)和抑郁症；外科手术失血、产后出血、伤口愈合和感染；乳腺炎和胎盘分娩损伤；和骨质疏松症；以及用于诊断癌症和胎盘功能不全的应用。在此，术语焦虑症包括焦虑障碍。焦虑障碍包括亚指征广泛性焦虑障碍(sub indications generalized anxiety disorder)、恐慌症、恐旷症、恐怖症、社交焦虑障碍、强迫症、创伤后应激障碍和分离焦虑症。

[0053] 在另一个实施方案中，本发明涉及一种治疗泌乳功能受损病症；引产损伤；子宫收缩乏力病症；大量出血；炎症和疼痛，包括腹痛和背痛；性功能障碍，男性和女性两者；肠易激综合征(IBS)、便秘和胃肠梗阻；孤独症、应激、焦虑症(包括焦虑障碍)和抑郁症；外科手术失血、产后出血、伤口愈合和感染；乳腺炎和胎盘分娩损伤；和骨质疏松症；以及诊断癌症和胎盘功能不全的方法。

[0054] 根据本发明的化合物的典型剂量在宽范围内变化，并且将取决于各种因素诸如每个患者的个体需要和给药途径。具有本领域普通技术的医生应该能够根据手边的情况对剂量进行优化。

[0055] 例如，如果本发明的组合物用于促进泌乳的发生和维持，(例如，用于鼻内给药)，则典型剂量可以为每个吸奶期0.05-1.0μg/kg体重。鼻内剂量可以分为，例如，1、2或3个亚剂量(例如，多次喷鼻(puffs))，例如根据需要递送至一侧或双侧鼻孔。技术人员或医生可以考虑与此剂量范围和实际实施相关的变化从而适应于手边的情况。

[0056] 在另一个实施例中，本发明的组合物可以作为静脉(iv)输注液施用，例如，用于治疗产后出血或外科手术失血。在此实施例中，其可以在较长的时间内施用。通过静脉输注给药的剂量实例为每小时0.5-200μg/kg体重。

[0057] 在另一个实施例中，本发明的组合物可以用于皮下(sc)、鼻内或口腔给药，例如，用于治疗焦虑障碍或抑郁症。用于皮下(sc)、鼻内或口腔给药的剂量实例为0.5-1000μg/kg体重。所述剂量可以，例如，根据需要一天多次给药，例如，一天一次或两次。

[0058] 使用的缩写为：

[0059] AcOH 乙酸

[0060] Boc 叔丁氧基羰基

[0061] BOP 苯并三唑-1-基氧基三-二甲氨基鏻六氟磷酸盐

[0062] Bua 丁酸

[0063] Bu 丁基-烷基残基可以进一步表示为n(正，即，无

[0064] 支链)、i(异)、s(仲)和t(叔)

[0065] CH3CN 乙腈

[0066] DCC N，N′-二环己基碳二亚胺

[0067] DCM 二氯甲烷

[0068] DIC N，N′-二异丙基碳二亚胺

[0069] DIPEA N，N-二异丙基乙胺

[0070] DMF N，N-二甲基甲酰胺

[0071] 4-FBzlGly N-(4-氟苄基)甘氨酸

[0072] Fmoc 9-芴基甲氧基羰基

[0073] Fmoc-Cl 9-芴基甲氧基羰酰氯

[0074] Fmoc-OSu N-(9-芴基甲氧基羰基)琥珀酰亚胺

[0075] h 小时

[0076] HBTU O-(苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲六氟磷酸盐[0077] Hcy 高半胱氨酸

[0078] HF 氢氟酸

[0079] HOBt 1-羟基苯并三唑

[0080] HPLC 高效液相色谱法

[0081] IPA 异丙醇

[0082] MeOH 甲醇

[0083] MBHA 4-甲基二甲苯胺(methylbenzyhydrylamine)

[0084] NMM 4-甲基吗啉

[0085] 4-Pic 4-吡啶甲基(4-吡啶基甲基)

[0086] PyBOP 苯并三唑-1-基氧基三吡咯烷鏻六氟磷酸盐

[0087] tBu 叔丁基

[0088] tBuOH 叔丁醇

[0089] TEA 三乙胺

[0090] TFA 三氟乙酸

[0091] TIS 三异丙基硅烷

[0092] Trt 三苯甲基[三苯基甲基，(C6H5)3C-]

[0093] 除非另外指明，使用L-氨基酸和对其采用常规的氨基酸术语。

[0094] 试验(合成)

[0095] 氨基酸衍生物和树脂购自商业供应商(Bachem，Novabiochem和Peptides International)。N-Fmoc-N-(R2(CH2)p)甘氨酸、Fmoc-Cys(叔丁氧基羰基丙基)-OH和Fmoc-Hcy(叔丁氧基羰基乙基)-OH根据文献合成[Weber等，J.Med.Chem.(药物化学杂志)，46 1918(2003)，Prochazka等Collect.Czech.Chem.Commun.(捷克化学通讯)，57，1335(1992)和Wisniewski等在WO 03/072597中]。其他化学品和溶剂由Sigma-Aldrich，Fluka和Acros Organics提供。

[0096] 本文的化合物通过固相肽化学中的标准方法使用Fmoc和Boc方法学来合成。Fmoc-保护的氨基酸的所有偶联使用DIC/HOBt/DMF介导，并且Boc-保护的氨基酸的所有偶联使用处于DCM中的DIC或DCC介导。使用处于DMF中的20％哌啶进行Fmoc基团的去除，并且使用1％间甲酚在50％TFA/DCM中进行Boc基团的去除，其进行5分钟和25分钟。
使用DCM、IPA、DMF和MeOH进行必需的树脂洗涤。根据需要，使用10％TEA/DCM，5分钟的
2次树脂洗涤来完成中和。

[0097] 除非另外提供，所有反应在室温下进行。除了前面引用的参考文献以外，下面的标准参考文献对一般的试验装置以及所需的起始物质和试剂的可用性提供了进一步的指导：

[0098] Kates，S.A.，Albericio，F.，Eds.，Solid Phase Synthesis：A PracticalGuide(固相合成：操作指南)，Marcel Dekker，New York(纽约)，Basel(巴塞尔)，2000；

[0099] Stewart，J.M.，Young，J.D.，Solid Phase Synthesis( 固 相 合 成 )，PierceChemical Company(皮尔斯化学公司)，1984；

[0100] Bisello等，J.Biol.Chem.(生物化学杂志)1998，273，22498-22505；和[0101] Merrifield，J.Am.Chem.Soc.(美国化学会会志)1963，85，2149-2154.[0102] 合成的肽的纯度可以通过分析性反相HPLC来确定。肽的结构完整性可以使用氨基酸分析和电喷雾质谱法来确认。

[0103] 使用Fmoc和Boc方法学来合成树脂结合的8位(Leu)和9位(Gly)二肽。

[0104] 氨基酸残基的7位中的氨基酸衍生物经两种途径中的一种来引入：溴乙酸与树脂结合的二肽在DIC/HOBt/DMF条件下偶联，并且用(R2(CH2)p)NH2替换溴原子，从而提供树脂结合的N-(R2(CH2)p)甘氨酸；或N-Fmoc-N-(R2(CH2)p)甘氨酸或Fmoc-pro-OH衍生物与树脂结合的二肽根据Fmoc方法学偶联。除非另外指明，所有随后的氨基酸偶联遵从Fmoc方法学。

[0105] 在6位中引入的氨基酸衍生物为下面之一：Fmoc-Cys(Trt)-OH；Fmoc-Hcy(叔丁氧基羰基乙基)-OH或Fmoc-Cys(叔丁氧基羰基丙基)-OH。6位为Fmoc-Cys(Trt)-OH的肽类似物需要Mpa(Trt)-OH与树脂结合的九肽残基的N端偶联。

[0106] 使用TFA/TIS/H2O 95/2.5/2.5(v/v/v)溶液将使用rink amide树脂支持物合成的肽和任何酸易分解保护基团诸如Boc、三苯甲基和叔丁基一起从树脂上裂解。在从树脂上裂解肽之前将所述肽环化。使用HF/茴香醚14/1(v/v)溶液将使用MBHA树脂支持物合成的肽从树脂上裂解。在从树脂上裂解肽之前将所述肽环化。

[0107] 通过用碘氧化溶解在10％TFA(aq)中的线性肽来实现线性九肽通过形成二硫化物(环)的环化作用。通过用高稀释度的HBTU/DIPEA/DMF或PyBOP/DIPEA/DMF介导来实现线性九肽通过形成酰胺键的环化作用。

[0108] 肽通过在三乙基磷酸铵缓冲液(aq)中的制备性HPLC进行纯化并用乙酸(aq)/乙腈缓冲系统脱盐。汇集并冻干纯度超过97％的级分。

[0109] 表1列举了通过上述步骤制备的化合物。星号“*”标记最优选的实施方案。

[0110] 表1：制备的具有式(I)的化合物

[0111]

[0112]

[0113]

[0114] 提供下面的详细实施例以进一步说明合成：

[0115] 在所有的合成中，在waters 600液相色谱仪上进行分析性HPLC，使用Vydac C18，5μm，4.6x250mm柱，流速为2ml/min。在Waters 2000液相色谱仪上进行制备性HPLC，使用PrePak 47x300mm柱体，流速为100ml/min。最终的化合物分析在1100Agilent液相色谱仪上进行，使用VydacC18，5μm，2.1x250mm柱，流速为0.3ml/min。在Finnigan MAT光谱仪上记录质谱。

[0116] 化合物49；carba-1-[4-FBzlGly7]dOT：

[0117] 使 用 的 氨 基 酸 衍 生 物 为Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Cys( 叔 丁氧 基 羰 基 丙 基 )-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Gln(Trt)-OH、Fmoc-Ile-OH 和Boc-Tyr(tBu)-OH(Peptides International)。Fmoc-Cys(叔丁氧基羰基丙基)-OH如上进行合成。

[0118] 完全保护的肽树脂从1.45g(0.87mmol)Rink Amide AM树脂(200-400目，Novabiochem)开始手工合成。进行DIC/HOBt/DMF介导的与3倍过量的氨基酸Gly和Leu衍生物的单偶联(single coupling)。使用处于DMF中的4倍过量的BrCH2CO2H/DIC/HOBt引入N-(4-氟苄基)甘氨酸残基，随后用处于DMF中的10倍过量的4-氟苄胺进行溴取代。进行DIC/DCM介导的与4倍过量的Fmoc-Cys(叔丁氧基羰基丙基)-OH的偶联。随后进行DIC/HOBt/DMF介导的与3倍过量的氨基酸Asn、Gln、Ile和Tyr衍生物的单偶联。使用处于DMF中的20％哌啶去除Fmoc基团。在完成固相合成后，所述树脂用TFA/TIS/H2O 96/2.5/1.5(v/v/v)溶液(50ml)处理1.5h并滤出。滤液真空浓缩，并且用二乙醚沉淀粗制的线性肽。处于DMF(300ml)中的沉淀分三部分(3x100ml)加入至充分搅拌的处于DMF(100ml)中DIPEA(1ml)溶液中。在加入每个100ml部分的肽溶液后向反应混合物中加入处于DMF(5ml)中的HBTU(150mg)；根据需要，通过加入纯DIPEA而将反应溶液的pH保持在pH 9。通过分析性HPLC监测反应。反应溶液真空浓缩并将残渣溶解在AcOH/CH3CN/H2O中。混合物负载至HPLC柱上并使用pH 5.2的三乙基磷酸铵缓冲液纯化。使用乙腈梯度洗脱化合物。汇集纯度超过97％的级分，用水(2体积)稀释，并且负载至用2％AcOH(aq)预平衡的柱上。所需的化合物用CH3CN的快速(3％/min)梯度洗脱。对含有所需产物的级分进行汇集并冻干。获得434mg(基于起始树脂的负载量并假设85％的肽含量，～40％产率)白色非晶态粉末。HPLC：Rt＝19.4min，梯度：5％B持续0.5min.，0.5min内5→30％B，20min内30→50％B和100％B持续5min.，t＝40℃，溶剂A 0.01％TFA(aq)，溶剂B +
70％CH3CN，0.01％TFA(aq)；纯度：99.3％；MS(M+H)：预测值1042.4，观察值1042.5。

[0119] 下面是化合物49；carba-1-[4-FBzlGly7]dOT的示例性大规模(即，放大)合成：

[0120] 使用的氨基酸衍生物为Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-4-FBzlGly-OH、Fmoc-Cys(叔丁氧基羰基丙基)-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Gln(Trt)-OH、Fmoc-Ile-OH和Boc-Tyr(tBu)-OH(Peptides International)。Fmoc-4-FBzlGly-OH和Fmoc-Cys(叔丁氧基羰基丙基)-OH如上进行合成。通过DIC/HOBt/DMF介导的与3倍过量的氨基酸衍生物的单偶联来合成肽。化合物49的其余的合成和表征遵循上面所提供的步骤。获得434mg(基于起始树脂的负载量并假设85％的肽含量，～40％产率)的白色非晶态粉末。

[0121] 化合物10；[4-PicGly7]dOT：

[0122] 使用 的氨 基酸 衍生 物为 Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Cys(Trt)-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Gln(Trt)-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Tyr(tBu)-OH 和Mpa(Trt)-OH(Peptides International)。完全保护的肽树脂从1.33g(0.65mmol)Rink AM树脂(200-400目，Novabiochem)开始手工合成。进行DIC/HOBt/DMF介导的与3倍过量的氨基酸Gly和Leu衍生物的单偶联。用处于DMF中的4倍过量的BrCH2CO2H/DIC/HOBt引入N-(4-吡啶甲基)甘氨酸残基并且随后用处于DMF中的10倍过量的4-吡啶甲基胺进行溴取代。进行DIC/DCM介导的与4倍过量的Fmoc-Cys(Trt)-OH的偶联和进行DIC/HOBt/DMF介导的与3倍过量的氨基酸Asn、Gln、Ile、Tyr和Mpa衍生物的单偶联。用处于DMF中的20％哌啶去除Fmoc基团。在完成固相合成后，树脂用TFA/TIS/H2O 96/2/2(v/v/v)溶液(50ml)处理1.5h并滤出。滤液真空浓缩，并用二乙醚沉淀粗制的线性肽。沉淀物溶解在纯TFA(50ml)中，倒入磁性搅拌的5％乙腈(600ml)水溶液上，并且通过加入处于甲醇中的0.1M I2氧化所述肽直至黄色不发生变化。过量的碘用固体抗坏血酸(Sigma-Aldrich)还原，并且通过加入浓氨水(aq)将溶液的pH调节至约4。所述混合物负载在HPLC柱上，并使用pH 5.2的三乙基磷酸铵缓冲液纯化。使用乙腈梯度洗脱化合物。汇集纯度超过97％的级分，用水(2体积)稀释，并且负载至用2％AcOH(aq)预平衡的柱上。所需的化合物用乙腈的快速(3％/min)梯度洗脱。对含有所需产物的级分进行汇集并冻干。获得348.7mg(基于起始树脂的负载量并假设85％的肽含量，～44％产率)白色非晶态粉末。HPLC：Rt＝
21.7min，梯度：5％B持续0.5min.，在0.5min内5→10％B，在20min内10→30％B和
100％B持续5min.，t＝40℃，溶剂A 0.01％TFA(aq)，溶剂B 70％CH3CN，0.01％TFA(aq)；
+
纯度：99.9％；MS(M+H)：预测值1043.4，观察值1043.4。

[0123] 化合物29；carba-6-[Phe2，MeOEtGly7]dOT：

[0124] 使用的氨基酸衍生物为Boc-Gly-OH和Boc-Leu-OH(Bachem)，Fmoc-Hcy(叔丁 氧 基 羰 基 乙 基 )-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Gln(Trt)-OH、Fmoc-Ile-OH 和Boc-Phe-OH(Peptides International)。Fmoc-Hcy(叔丁氧基羰基乙基)-OH如上进行合成。

[0125] 完全保护的肽树脂从1.33g MBHA树脂(0.94mmol，Novabiochem)开始手工合成。使用处于DCM中的10％TEA中和所述树脂。进行DIC/DCM介导的与1.7倍过量的氨基酸Boc-Gly-OH和Boc-Leu-OH的单偶联。用处于DMF中的3.6倍过量的BrCH2CO2H/DIC/HOBt引入N-(2-甲氧基乙基)甘氨酸残基并且随后用处于DMF(10ml)中的7倍过量的2-甲氧基乙胺和4倍过量的DIPEA进行溴的取代；反应搅拌5h。进行DIC/DCM介导的与4倍过量的Fmoc-Hcy(叔丁氧基羰基乙基)-OH的单偶联和进行DIC/HOBt/DMF介导的与3倍过量的氨基酸Asn和Gln衍生物的单偶联。使用DIC/DCM进行两次最后的与Fmoc-Ile-OH和Boc-Phe-OH的单偶联，从而提供所需的受保护的树脂结合的线性肽。用处于DMF中的20％哌啶去除Fmoc基团。所述树脂用TFA/H2O/TIS 95/3/2(v/v/v)处理2h以去除三苯甲基、Boc和叔丁基基团。BOP(4eq)和DIPEA(10eq)加入至所述树脂在DMF(10mL)中的搅拌悬浮液中；2h后加入PyBOP(2eq)和DIPEA(5eq)。通过使用70ml含有5ml茴香醚的无水HF在
0℃下90分钟从所述树脂上裂解所述肽。真空去除HF，并且用二乙醚(300ml)洗涤粗制的线性肽。所述肽溶解在AcOH/CH3CN/H2O 1/2/7(v/v/v)(400ml)中。所得的混合物直接负载在HPLC柱上，并使用处于pH 2.3的三乙基磷酸铵缓冲液纯化。化合物用乙腈梯度洗脱。汇集纯度超过97％的级分，用水(2体积)稀释，并且负载至用2％乙酸(aq)预平衡的柱上。
所需的化合物用1％AcOH/CH3CN梯度洗脱。对含有所需产物的级分进行汇集并冻干。

[0126] 获得292.7mg(基于起始树脂的负载量并假设85％的肽含量，～27％产率)的白色非晶态粉末。HPLC：Rt＝16.7min，梯度：5％B持续0.5min.，在0.5min内5→30％B，在20min内30→50％B和100％B持续5min.，t＝40℃，溶剂A 0.01％TFA(水溶液)，溶+剂B 70％CH3CN，0.01％TFA(aq)；纯度：100.0％；MS(M+H)：预测值976.5，观察值976.3。

[0127] 通过这些合成步骤的类似变化形式制备其他化合物。

[0128] 试验(生物学测试)

[0129] 体外受体测定：

[0130] 在转录报告基因测定中通过将hOT受体表达DNA与含有调节萤火虫荧光素酶的表达的细胞内钙响应型启动子元件的报告DNA一起瞬时转染至中国仓鼠卵巢(CHO)细胞系中来确定化合物对hOT受体的激动剂活性。对于该测定的进一步指导参见Boss，V.，Talpade，D.J.，Murphy，T.J.J.Biol.Chem.(生物化学杂志)1996年5月3日；271(18)，10429-10432。细胞暴露于稀释10倍/剂量的化合物的系列稀释液5h，紧接着溶解细胞，确定荧光素酶活性，并且通过非线性回归确定化合物效力和EC50值。在每个试验中使用催产素(OT)作为内部对照，并且在至少三次独立的试验中测试化合物。为了确定选择性，化合物在表达人血管加压素(hV2)受体的基于荧光素酶的转录报告基因测定中进一步测试。

[0131] 为了进一步比较，卡贝缩宫素也用作参考化合物。

[0132] 体内测定的结果显示在下面的表2中。给出的EC50值是以纳摩尔/l(nM)表示的几何平均数。选择性值作为EC50比给出。

[0133] 表2：生物学测试的结果

[0134]

[0135]