一种细胞保存液、其制备方法及用途

摘要

本发明属于细胞生物学领域，涉及一种细胞保存液、其制备方法及用途。具体地，所述细胞保存液包括固定剂、固定剂辅助剂、抗凝剂、缓冲液、以及离子强度维持剂，其特征在于，所述抗凝剂的含量为0.01％-1.5％(w/w)，所述离子强度维持剂的含量为0.01％-1％(w/w)，并且所述细胞保存液不含有二硫键打开试剂。所述细胞保存液能够有效地保存细胞DNA及感染细胞的病毒DNA，便于收集脱落细胞、便于DNA提取操作且能兼顾细胞结构保存。本发明还涉及该细胞保存液的制备方法和用途。本发明还涉及检测HPV或HPV DNA的试剂盒和方法。

权利要求

1.一种脱落细胞保存液，由固定剂、固定剂辅助剂、抗凝剂、缓冲液、离子强度维持剂、漂洗剂以及可选的抗生素组成，其中，所述抗凝剂为EDTA或EDTA的水溶性盐，其含量按重量百分比计为0.01％-1.5％；所述离子强度维持剂为NaCl和/或KCl，其含量按重量百分比计为0.01％-1％；所述固定剂选自甲醇、乙醇以及异丙醇中的一种或多种；所述固定剂辅助剂为醋酸或醋酸盐；所述固定剂的含量按体积百分比计为45％-60％；所述固定剂辅助剂的含量按重量百分比计为0.1％-15％；并且所述细胞保存液不含有二硫键打开试剂。

2.根据权利要求1所述的脱落细胞保存液，其中，所述抗凝剂的含量按重量百分比计为0.1％-1％。

3.根据权利要求1所述的脱落细胞保存液，其中，所述抗凝剂的含量按重量百分比计为0.1％-0.5％。

4.根据权利要求1所述的脱落细胞保存液，其中，所述抗凝剂的含量按重量百分比计为0.1％、0.2％、0.3％、0.4％或0.5％。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的脱落细胞保存液，其中，所述缓冲液选自磷酸盐缓冲液、醋酸盐缓冲液、N-(2-乙酰氨基)-2-氨基乙磺酸、N-(2-乙酰胺基)-2-亚氨基二乙酸、双(2-羟乙基)-三羟甲基氨基甲烷、2-(N-吗啡啉)乙磺酸以及哌臻-N，N’-双(2-乙磺酸)，所述缓冲液的含量按体积百分比计为10％-15％。

6.根据权利要求1至4中任一项所述的脱落细胞保存液，其中，所述漂洗剂为非离子去污剂，所述漂洗剂的含量按体积百分比计为0.01％-0.5％。

7.根据权利要求1所述的脱落细胞保存液，其中，按照脱落细胞保存液的总重量，所述抗生素的含量按重量百分比计为0.1％-5％。

8.权利要求1至6中任一项所述的脱落细胞保存液的制备方法，包括下述步骤：

1)在去离子水中，加入离子强度维持剂、缓冲液、和抗凝剂；

2)将步骤1)中的成分混匀后，将pH值调节至7.4-8.0之间；

3)然后加入固定剂、固定剂辅助剂及漂洗剂，混匀后灭菌。

9.根据权利要求8所述的制备方法，其还包括下面的步骤4)：4)进行真空包装。

10.一种收集和/或保存脱落细胞的方法，包括使用权利要求1-7中任一项所述的脱落细胞保存液的步骤。

11.根据权利要求10所述的方法，其中，所述脱落细胞为宫颈脱落细胞。

12.一种用于检测HPV的试剂盒，其包括权利要求1-7中任一项所述的脱落细胞保存液。

13.权利要求1-7中任一项所述的脱落细胞保存液在制备检测HPV或HPV DNA的试剂中的用途。

说明书

一种细胞保存液、其制备方法及用途

技术领域

[0001] 本发明属于细胞生物学领域，涉及一种细胞保存液，以及该细胞保存液的制备方法和用途。本发明还涉及检测HPV或HPV DNA的试剂盒和方法。

背景技术

[0002] 目前，市面上销售的细胞保存液多为以醇类、抗凝剂、缓冲溶液等为主要成份的细胞保存液。例如：

[0003] 公开号为EP0511430A2的欧洲专利申请公开了一种细胞保存液，其主要成分为醇类、乙酸、以及盐离子等。其中：醇类(45％-55％)，主要有甲醇、乙醇及异丙醇；抗凝剂(2-4％)，主要为EDTA及其盐；缓冲溶液(6％-8％)，为磷酸缓冲液、醋酸钠缓冲液、柠檬酸缓冲液等。

[0004] 公开号为CN101363011A的中国专利申请公开了一种宫颈脱落细胞保存液，其主要成分为醇类、抗凝剂、缓冲液、盐离子、抗微生物试剂、以及粘液溶解剂。其中：醇类(20％-50％)，主要有甲醇及乙醇、异丙醇；抗聚集剂(15-50％)，为EDTA；缓冲液(5％-10％)，主要为醋酸盐缓冲溶液；离子强度维持剂(1-20％)，主要为氯化钾；抗生物试剂(0.01％-0.5％)，主要为抗生素。粘液溶解试剂(0.1％-5％)，主要为二硫键打开试剂；清洁剂(0％-0.5％)，主要为表面活性剂。

[0005] 然而，这些保存液的目的是将保存的细胞用于细胞学检测(例如TCT检测，即液基薄层细胞学检测)，因此侧重于固定细胞结构，维持细胞或蛋白质的形态，但是对DNA的保存并不理想。随着技术的发展，质谱检测和DNA测序等已经成为重要的检测手段，检测结果的准确性对和细胞DNA样本的收集、储存、以及制备的要求越来越高，现有的细胞保存液已不能适应技术发展的需求。

发明内容

[0006] 为了解决上述问题，本发明经过大量的实验和不懈的努力，发明了一种细胞保存液，其便于收集脱落细胞，并且能够有效地保存细胞DNA及感染细胞的病毒DNA，便于DNA提取操作且能兼顾细胞结构保存。该细胞保存液粘稠度低、流动性强，更适于DNA提取以及后续的DNA检测，并且本发明人还惊奇地发现，使用该细胞保存液时，细胞(特别是脱落细胞)的初始采集量和保存量都很大，并且对DNA的保存时间和保存效果也都很好。由此提供了下述发明：

[0007] 本发明的一个方面涉及一种细胞保存液，包括固定剂、固定剂辅助剂、抗凝剂、缓冲液、以及离子强度维持剂，其中，所述抗凝剂的含量为0.01％-1.5％(w/w)，所述离子强度维持剂的含量为0.01％-1％(w/w)，并且所述细胞保存液不含有二硫键打开试剂。

[0008] 在本发明中，术语“二硫键打开试剂”是指能够打开二硫键的试剂，例如甲基半胱氨酸、N-乙酰基-L-半胱氨酸、二硫苏糖醇、二羟基二硫苏糖醇、2-巯-乙醇等等。

[0009] 在本发明的一个实施方案中，所述抗凝剂的含量为0.1％-1％(w/w)，优选为0.1％-0.5％(w/w)，例如为0.1％、0.2％、0.3％、0.4％、或0.5％(w/w)。

[0010] 在本发明的一个实施方案中，所述抗凝剂为螯合试剂EDTA和/或EDTA的水溶性盐(EDTA的钾盐、钠盐、或锂盐等，例如EDTA-K2，EDTA-Na2等)，也可选用肝激酶、链激酶等。然而，肝激酶、链激酶对PCR反应有一定的抑制作用，并且主要应用于血液制品，因此优选的是EDTA和/或EDTA的水溶性盐。

[0011] 抗凝剂的主要作用为去除络合重金属离子，防止细胞凝结。由于血液样本含有的细胞数及血浆中蛋白及金属离子较多，现有技术中抗凝剂的用量较大，有时会达到15％-50％的程度。在宫颈脱落细胞保存液中，细胞数较少，且多数为完整细胞，游离蛋白和金属离子较少。而且过量的EDTA会抑制HPV-DNA检测的PCR等过程反应，因此对抗凝剂的用量进行了适当的减少，通过实验证明，在成本减低的基础上，仍能保证同样的抗凝效果。

[0012] 在本发明的一个实施方案中，所述离子强度维持剂的含量为0.1％-1％(w/w)，优选为0.5％-1％(w/w)，更优选为0.8％-1.0％，例如为0.8％、0.9％、或1.0％(w/w)。

[0013] 在本发明的一个实施方案中，所述离子强度维持剂为NaCl和/或KCl等氯化盐。

[0014] 离子强度维持剂的主要作用为维持离子强度，保持固有的细胞渗透压，维持细胞形态，防止细胞破裂，防止DNA消化酶及蛋白酶释放到保存液中。离子强度维持剂不仅要能够溶解在保存液中还不能产生抗凝剂(EDTA)沉淀，而且过高的离子强度会使细胞脱水皱缩。维持离子强度的物质要在先前溶液中额外加入，或另外兼容于缓冲液中。

[0015] 对于固定剂、固定剂辅助剂、缓冲液等具体物质以及含量的选择，本发明并不特别限定，例如，本领域技术人员可以根据现有技术或者通过简单实验确定。或者优选地，可以采用下述的实施方案。

[0016] 在本发明的一个实施方案中，所述固定剂选自甲醇、乙醇、以及异丙醇中的一种或多种，其含量为45％-60％(v/v)，优选为50％-60％(v/v)，例如为50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、或60％％(v/v)。

[0017] 固定剂的主要作用为固定细胞结构，维持细胞DNA和蛋白质完整性。同时，在采集宫颈脱落细胞时，有部分细胞已经破碎，因此使用固定剂对蛋白质进行变性，可以防止DNA消化酶及蛋白酶对DNA及蛋白的降解作用。固定剂在45％(例如甲醇、乙醇、或异丙醇)以下虽然可以固定蛋白质，但固定效果差，会导致DNA的降解，60％以上则会导致细胞严重变形凝聚，影响对细胞形态的观察及判读，同时也使DNA提取增加难度。

[0018] 在本发明的一个实施方案中，所述固定剂辅助剂为醋酸或醋酸盐(例如醋酸钾和/或醋酸钠)，其含量为0.1％-15％(w/w)，优选地，为0.1-5％(w/w)，更优选地为0.1-0.5％，进一步优选地，为0.3％-0.4％，例如为0.3％、0.35％或0.4％(w/w)。

[0019] 45％-60％的醇类可以固定流动性强的蛋白，但也会不同程度上造成细胞收缩，影响细胞判读，固定剂辅助剂则会使收缩细胞扩张，对醇类效果进行中和，在使用45％-60％的醇类后，使用0.1％-15％醋酸可以中和醇类效果，但是超过15％的醋酸含量则会使细胞过度膨胀，影响细胞形态观察。

[0020] 在本发明的一个实施方案中，所述缓冲液(pH在7.4-8.0左右)的含量为10％-15％(V/V)，例如为10％、11％、12％、13％、14％、或15％(V/V)。

[0021] 在本发明的一个实施方案中，所述缓冲液为磷酸盐缓冲液、醋酸盐缓冲液、N-(2-乙酰氨基)-2-氨基乙磺酸(ACES)、N-(2-乙酰胺)亚氨基二乙酸(ADA)、双(2-羟乙基)-三羟甲基氨基甲烷(BIS-TRIS)、2-(N-吗啡啉)乙磺酸(MES)、或哌臻-N，N’-双(2-乙磺酸)(PIPES)。其中，当缓冲液为醋酸盐缓冲液并且固定剂辅助剂也为醋酸盐时，总的醋酸盐的含量可以为上述的固定剂辅助剂的含量或者缓冲液的含量。

[0022] 缓冲液的作用是保持细胞保存液pH值稳定，大约在7.4-8.0左右，以便维持细胞形态。细胞保存液采用缓冲体系可以自调节样本中由于细胞释放自溶副产物所导致的pH变化，减少样本由于长时间处于pH过低或过高的状态，而导致的DNA的自然降解。因此，也可以不限定缓冲液的种类和含量，只要缓冲液满足使细胞保存液的pH在7.4-8.0的范围内。

[0023] 在本发明的一个实施方案中，所述细胞保存液还含有漂洗剂，所述漂洗剂为非离子去污剂，例如吐温20、NP-40、TritonX-100等，按照细胞保存液的总体积，所述漂洗剂的含量为0.01％-0.5％(v/v)，优选地为0.01％-0.1％(v/v)，更优选地为0.03％-0.06％(v/v)，例如为0.03％、0.04％、0.05％、或0.06％(v/v)。

[0024] 漂洗剂的主要作用为加强样本漂洗的程度，解离宫颈口分泌的粘液，增加细胞的收集率。

[0025] 由于大多数的抗生素都易见光降解，且醇类含量为45％-60％时，已经可以抑制大部分微生物的生理活动，故可以不加入抗生素等微生物抑制剂。可任选地，也可以选择加入抗生素，加入抗生素的含量为0.1％-5％(w/w)，优选为0.1％-1％(w/w)，例如0.1％、0.2％、0.3％、0.4％、0.5％、0.6％、0.7％、0.8％、0.9％、或1.0％(w/w)。

[0026] 在本发明中，所述细胞保存液除含有上述成份外，其余成分为水，具体地，为去离子水，更具体地，为无菌的去离子水，并且优选地为Milli-Q超纯水。

[0027] 本发明的细胞保存液能够更好地保存细胞DNA和感染细胞的病毒的DNA。本发明可以适用于任何细胞的DNA及感染该细胞的病毒的DNA的保存。具体地，所述细胞为脱落细胞，例如上皮脱落细胞，包括但不限于：宫颈脱落细胞、口腔脱落细胞(可以通过口腔拭子采集)、以及其它上皮脱落细胞；更具体地，为宫颈脱落细胞。

[0028] 在本发明中，术语“脱落细胞”是指在自然管腔器官内表面粘膜正常情况下，人体器官粘膜上皮细胞经常有脱落更新，有病变的粘膜上皮细胞，如口腔脱落细胞、宫颈上皮细胞(宫颈脱落细胞)、阴道上皮细胞，支气管粘膜上皮细胞、肾盂膀胱移行上皮细胞、和乳腺导管上皮细胞等都是自然脱落的上皮的细胞。脱落上皮细胞的结构大致一样，因此本领域技术人员可以理解，这些细胞都适于本发明细胞保存液和细胞保存方法。

[0029] 在本发明中，术语“宫颈脱落细胞”是指女性生殖道的阴道及宫颈阴道部表面为复层鳞状上皮细胞，和/或少量宫颈柱状上皮细胞及子宫内膜细胞。

[0030] 本发明的另一方面涉及一种细胞保存液的制备方法，包括下述步骤：

[0031] 1)在去离子水中，按照上述含量加入离子强度维持剂、缓冲溶液、和抗凝剂；

[0032] 2)将步骤1)中的成分混匀后，将PH值调节至7.4-8.0之间；

[0033] 3)然后按照上述比例加入固定剂、固定剂辅助剂及漂洗剂，混匀后灭菌；

[0034] 可选地，还包括下面的步骤4)，

[0035] 4)进行真空包装。

[0036] 在本发明的一个实施方案中，所述制备方法中的步骤3)的灭菌为环氧乙烷灭菌。

[0037] 本发明的还一方面涉及一种收集脱落细胞的方法，包括本发明的细胞保存液的步骤；具体地，所述脱落细胞为宫颈脱落细胞。

[0038] 本发明的还一方面涉及一种用于检测HPV的试剂盒，其包括本发明的细胞保存液。

[0039] 本发明的还一方面涉及一种检测HPV或HPV DNA的方法，包括使用本发明的细胞保存液的步骤。

[0040] 本发明的还一方面涉及本发明的细胞保存液在制备检测HPV或HPV DNA的试剂中的用途。

[0041] 本发明的还一方面涉及一种用于细胞收集和/或保存的试剂盒，包括使用本发明的细胞保存液的步骤。

[0042] 本发明的还一方面涉及一种收集和/或保存细胞的方法，包括使用本发明的细胞保存液的步骤。

[0043] 在本发明中，所述“w/w”或“v/v”，分母中的“w”或“v”均指配好的细胞保存液的总重量或者总体积，分子中的“w”或“v”指相应组分的重量或者体积。

[0044] 在本发明中，本发明的细胞保存液的用量并不特别限定，例如浸没采集细胞的刷子即可，一般大于2ml。本领域技术人员可以根据具体情况确定用量。

[0045] 发明的有益效果

[0046] 1)本发明的细胞保存液能够保存细胞DNA及感染细胞的病毒DNA，防止DNA消化酶对DNA的降解作用；

[0047] 2)现有技术中加入了较高浓度的抗凝剂和离子强度维持剂，并含有粘液溶解试剂(二硫键打开试剂)。这些会导致在DNA提取过程中，抗凝剂或粘液溶解试剂残留在DNA样本中，抑制后续PCR反应的进行。而本发明更有利于HPV-DNA后续检测(如PCR等)。

[0048] 3)现有技术主要用于细胞固定及巴氏细胞涂片，因此产品液体较粘稠，这给DNA提取操作增加了难度，容易造成移液器倒吸，导致污染现象的发生，使DNA提取失败。本发明的细胞保存液中的抗凝剂等成份比例比现有技术低，并且不含二硫键打开试剂，因此，本发明的细胞保存液粘稠度低、流动性强，更适于DNA提取以及后续的DNA检测。

[0049] 4)本发明添加了漂洗剂，能最大程度解离宫颈粘液，加大保存液对脱落细胞的漂洗能力，更适用于宫颈脱落细胞的采集，与现有技术比较更加便捷有效。而且漂洗剂含量较少，也不会对后续检测造成影响。

附图说明

[0050] 图1：细胞样品1-4的DNA提取量随保存时间的比较(OD值法)。

[0051] 图2：细胞样品1-4的DNA提取量随保存时间的比较(凝胶电泳法)。

[0052] 图3：细胞样品1的细胞形态观察(20×)。

[0053] 图4：细胞样品2的细胞形态观察(20×)。

[0054] 图5：细胞样品6和细胞样品7在不同保存时间(第1、3、5、7天)HPV-DNA的阳性检出率。注：由于在第1、3天细胞样品6和7的HPV-DNA的阳性检出率均为100％，两个细胞样品的检出率重合，在图中第1、3天的时间区域只显示了细胞样品7的检出率和曲线。

具体实施方式

[0055] 下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述。本领域技术人员将会理解，下面的实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件(例如参考J.萨姆布鲁克等著，黄培堂等译的《分子克隆实验指南》，第三版，科学出版社)或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。

[0056] 实施例1：细胞保存液1的制备

[0057] 在Milli-Q超纯水中，依次加入表1所示配方量的缓冲液、离子强度维持剂、将PH调整至8.0后，加入固定剂、固定剂辅助剂及漂洗剂。其中，磷酸缓冲溶液配比为：100ml水中加入磷酸二氢钠(NaH2PO4·H2O)0.9g，磷酸氢二钠(Na2HPO4·7H2O)24.97g。

[0058] 表1：细胞保存液1的配方

[0059]组分名称 加入量
甲醇 500ml
醋酸 3.5g
乙二胺四乙酸二钠 1g
磷酸缓冲液 100ml
NaCl 10g
吐温-20 0.5ml
去离子水 399.5ml

[0060] 本领域技术人员可以理解，尽管上面的表1中的各组分的重量单位是g或ml，但是也可以分别理解为重量份或体积份，即各组分之间满足上面的表1中的比例就可以。

[0061] 实施例2：细胞保存液2的制备

[0062] 按照与实施例1相同的方法制备细胞保存液2，不同之处在于，所用组分及其加入量如下面的表2所示。其中醋酸缓冲液配比为：100ml水中加入乙酸(CH3COOH)0.32g，乙酸钠(CH3COONa)12.89g)。

[0063] 表2：细胞保存液2的配方

[0064]组分名称 加入量
乙醇 450ml
醋酸 1g
乙二胺四乙酸二钠 3g
醋酸缓冲液 100ml
KCl 1g
吐温-20 0.1ml
去离子水 449.9ml

[0065] 本领域技术人员可以理解，尽管上面的表2中的各组分的重量单位是g或ml，但是也可以分别理解为重量份或体积份，即各组分之间满足上面的表2中的比例就可以。

[0066] 实施例3：细胞保存液3的制备

[0067] 按照与实施例1相同的方法制备细胞保存液3，不同之处在于，所用组分及其加入量如下面的表3所示。其中哌嗪-N，N′-双(2-乙磺酸)(PIPES)缓冲溶液配比为：150ml水中加入哌嗪-N，N′-双(2-乙磺酸)3.02g。

[0068] 表3：细胞保存液3的组分及其加入量

[0069]组分名称 加入量
乙二醇 550ml
醋酸 2.5g
乙二胺四乙酸二钠 7g
哌嗪-N，N′-双(2-乙磺酸)(PIPES) 150ml
NaCl 5g
NP-40 2.5ml
去离子水 297.5ml

[0070] 本领域技术人员可以理解，尽管上面的表3中的各组分的重量单位是g或ml，但是也可以分别理解为重量份或体积份，即各组分之间满足上面的表3中的比例就可以。

[0071] 实施例4：细胞保存液4的制备

[0072] 按照与实施例1相同的方法制备细胞保存液4，不同之处在于，所用组分及其加入量如下面的表4所示。其中哌嗪-N，N′-双(2-乙磺酸)(PIPES)缓冲溶液配比为：150ml水中加入哌嗪-N，N′-双(2-乙磺酸)：3.02g。

[0073] 表4：细胞保存液4的组分及其加入量

[0074]组分名称 加入量
乙醇 600ml
醋酸 5g
乙二胺四乙酸二钠 10g
哌嗪-N，N′-双(2-乙磺酸)(PI PES) 150ml
NaCl 8g
TritonX-100 5ml
去离子水 245ml

[0075] 本领域技术人员可以理解，尽管上面的表4中的各组分的重量单位是g或，但是也可以分别理解为重量份或体积份，即各组分之间满足上面的表4中的比例就可以。

[0076] 实施例1-4是示例性的，本领域技术人员可以根据实施例1-4的教导，制备本发明范围内的其它细胞保存液(尽管组分或/和组分含量不尽相同)。

[0077] 实施例5：细胞样品1-5的制备。

[0078] 由于宫颈上皮脱落细胞不易获得，本实验采用口腔上皮脱落细胞模拟宫颈上皮脱落细胞。每种保存液测试样本数为30例，最终根据结果进行平均值的比较，具体的操作如下：

[0079] 1)使用口腔脱落细胞采样器，在左右两内颊(上下牙齿之间的面颊)各刷取16次。

[0080] 2)将口腔脱落细胞采样器，刷头浸入本发明实施例1中制备的细胞保存液1中，拧紧瓶盖，得到细胞样品1。

[0081] 类似地，按照上述方法，分别使用本发明实施例2-4中制备的细胞保存液2-4，得到细胞样品2-4。

[0082] 类似地，使用按照中国专利申请CN101363011A制备的细胞保存液，按照上述方法，得到细胞样品5。

[0083] 实施例6：细胞样品1-5的DNA保存验证实验

[0084] 将实施例5中制得的细胞样品1-5在37℃保存15天，并在第1、3、7、15天，以同样的细胞量并且使用相同的方法进行DNA提取(可以使用市售的DNA提取试剂盒)。并分别测量OD值，OD值表示DNA含量(ng)(图1)。将得到的DNA样品进行凝胶电泳(图2)。

[0085] 结果如图1和图2所示：在上述的4个时间点，细胞样品1-4的DNA提取量都远大于细胞样品5的提取量，并且细胞样品本1的保存效果的稳定性最好。说明本发明的细胞保存液对细胞DNA的提取量及保存效果都要优于现有的细胞保存液。

[0086] 实施例7：细胞样品6-7的制备

[0087] 使用已确认HPV阳性的30份宫颈脱落细胞样本，随机分成两组，每组15份：

[0088] 第一组：使用本发明实施例1制备的细胞保存液1保存，得到细胞样品6(实际上包含15份宫颈脱落细胞，在此统称为细胞样品6)；

[0089] 第二组：使用按照中国专利申请CN101363011A制备的细胞保存液5保存，得到细胞样品7(实际上包含15份宫颈脱落细胞，在此统称为细胞样品7)。

[0090] 实施例8：细胞形态保存的验证实验

[0091] 观察实施例7制备的细胞样品6和细胞样品7的细胞形态。

[0092] 结果显示：细胞样品6(图3)与细胞样品7(图4)在细胞总量、细胞形态保存上，无明显差异。说明本发明的细胞保存液和现有的细胞保存液对细胞形态的保存效果相近。

[0093] 由实施例6和实施例8的实验结果可见，本发明的细胞保存液特别适用于脱落细胞尤其是宫颈脱落细胞的保存尤其是DNA的保存，同时还能够兼顾细胞形态的维持。

[0094] 本实施例是示例性的，本领域技术人员可以理解，对于本发明范围内的其它的细胞保存液(尽管组分或/和组分含量不尽相同)，可以取得与细胞保存液1类似的技术效果。

[0095] 实施例9：HPV检测实验

[0096] 在第1、3、7、15天，提取实施例7中的细胞样品6和7的HPV-DNA(实际上提取的包括HPV病毒的DNA和细胞本身的DNA，可以使用本领域常用的细胞DNA提取手段，例如使用商购的DNA提取试剂盒)。使用学术界广泛认可的MY09/11引物(Bauer，H.M.，C.E.Greer，and M.M.Manos.1992.Determination of genital human papillomavirus infection using consensus PCR，p.132 152.；In C.S.Herrington and J.O.D.McGee(ed.)，Diagnostic molecular pathology：a practical approach.Oxford University Press，Oxford，United Kingdom.)进行HPV-DNA的特异性PCR扩增，经过凝胶电泳后，对比两种细胞保存液所保存细胞样品6和7的HPV阳性检出率。

[0097] 从图5中可以看到，随着时间的增加，细胞样品7的阳性检出率有所下降，而细胞样品6得经过15日保存后，阳性检出率依然为100％。(图5)。这说明本发明的细胞保存液更有利于感染细胞的病毒DNA的PCR检测，同时也说明本发明的细胞保存液能够更好地保存感染细胞的病毒的DNA，特别是感染宫颈脱落细胞的HPV病毒的DNA。

[0098] 本实施例是示例性的，本领域技术人员可以理解，对于本发明范围内的其它的细胞保存液(尽管组分或/和组分含量不尽相同)，可以取得与细胞保存液1类似的技术效果。

[0099] 尽管本发明的具体实施方式已经得到详细的描述，本领域技术人员将会理解。根据已经公开的所有教导，可以对那些细节进行各种修改和替换，这些改变均在本发明的保护范围之内。本发明的全部范围由所附权利要求及其任何等同物给出。