一种治疗乳腺癌的药物及其制备方法

摘要

本发明公开了一种治疗乳腺癌的药物及其制备方法，包括药物有效成份为：3β-羟基-28-去甲乌索-12,17-二烯-22-酮和药用辅料制成的药剂，按重量百分比计药物有效成份为1%-90%、药用辅料为10%-99%，药物有效成份的结构式为：。其制备方法包括以下步骤：①取地榆炭粉碎后为药物原料加入甲醇或乙醇提取过滤，滤液浓缩得到流浸膏；②将步骤①中流浸膏用水分散氯仿萃取，将萃取液回收溶剂得浸膏；③将步骤②的浸膏进行硅胶柱层析分离，抽滤所得固体重结晶得到化合物药物有效成份；④按重量比取药物有效成份，其余为药用辅助料制成药剂。本发明用于治疗乳腺癌使其治疗效果好，并可替代手术后化疗期内口服用的西药。

权利要求

1. 一种治疗乳腺癌的药物，其特征在于：包括药物有效成份为羟基-28-去甲乌索-12，17-二烯-22-酮和药用辅料制成的药剂，按重量百分比计药物有效成份为1%-90%、 药用辅料为10%-99%，3 β -羟基-28-去甲乌索-12，17- 二烯-22-酮的结构式为：

2.根据权利要求1所述的一种治疗乳腺癌的药物，其特征在于：所述药剂剂型为片剂， 片剂的药物有效成份为20%-70%、药用辅料为30%-80%。

3.根据权利要求1所述的一种治疗乳腺癌的药物，其特征在于：所述药剂剂型为胶囊， 胶囊的药物有效成份为20%-90%、药用辅料为10%-80%。

4.根据权利要求1所述的一种治疗乳腺癌的药物，其特征在于：所述药剂剂型为水针剂或冻干粉剂，药物有效成份为1%_5%、药用辅料为95%-99%。

5.根据权利要求1所述的一种治疗乳腺癌的药物，其特征在于：所述药剂剂型为散剂或颗粒剂，药物有效成份10%-20%、药用辅料为80%-90%。

6. 一种治疗乳腺癌的药物的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：①取地榆炭粉碎后为药物原料，加入原料十倍量的甲醇或乙醇，或含水醇类，常温或加热至60°C -90°C，提取小时，重复提取1一3次，过滤，滤液在常压或减压下浓缩得到流浸膏；②将步骤①中流浸膏用5-10倍重量水分散，以加水量1/3体积氯仿萃取，可重复萃取 5-8次，将萃取液常压或减压回收溶剂，得浸膏；③将步骤②的浸膏进行柱层析分离，采用石油醚-丙酮系统梯度洗脱，通过薄层层析将90:10洗脱部分合并，再经重结晶纯化得到化合物3 β -羟基-28-去甲乌索-12，17- 二烯-22-酮；④按重量百分比取3 β -羟基-28-去甲乌索-12，17- 二烯-22-酮为1%_90%、药用辅料为10%-99%，按照药剂的常规制备方法制成药剂。

说明书

一种治疗乳腺癌的药物及其制备方法

技术领域

[0001] 本发明涉及药品，是一种治疗乳腺癌的药物及其制备方法。 背景技术

[0002] 乳腺癌是一种发病率较高的疾病，据初步统计，近10年发病率呈逐渐上升趋势。 目前治疗乳腺癌的方法是药物和手术，大多数患者需要手术治疗，手术切除肿瘤后化疗是一种较好的治疗方法，无论药物治疗还是手术后的化疗期内服用的药物，有效的药物一般均为西药，然而，西药的副作用经临床证明是非常明显的。虽然已公开的资料中有治疗乳腺癌的中药，但是，尚未有数据表明其疗效显著。因此，为了降低乳腺癌患者服用西药的毒副作用，本领域多年来一直在不断研究毒副作用小，疗效显著的治疗乳腺癌的药物，以期降低西药的服用量。

发明内容

[0003] 本发明的目的是提供一种治疗乳腺癌的药物及其制备方法，它用于治疗乳腺癌，使其治疗效果好，并可替代手术后化疗期内口服用的西药。

[0004] 本发明为实现上述目的，通过以下技术方案实现：一种治疗乳腺癌的药物，其特征在于：包括药物有效成份为羟基-28-去甲乌索-12，17-二烯-22-酮和药用辅料制成的药剂，按重量百分比计药物有效成份为1%_90%、药用辅料为10%-99%，3 β -羟基-28-去甲乌索-12，17- 二烯-22-酮的结构式为：

[0006] 所述药剂剂型为片剂，片剂的药物有效成份为20%_70%、药用辅料为30%_80%。

[0007] 所述药剂剂型为胶囊，胶囊的药物有效成份为20%_90%、药用辅料为10%_80%。

[0008] 所述药剂剂型为水针剂或冻干粉剂，药物有效成份为1%_5%、药用辅料为 95%-99%。

[0009] 所述药剂剂型为散剂或颗粒剂，药物有效成份10%_20%、药用辅料为80%_90%。

[0010] 一种治疗乳腺癌的药物的制备方法，包括以下步骤：

[0011] ①取地榆炭粉碎后为药物原料，加入原料十倍量的甲醇或乙醇，或含水醇类，常温或加热至60°C -90°C，提取小时，重复提取1一3次，过滤，滤液在常压或减压下浓缩得到流浸膏；

[0012] ②将步骤①中流浸膏用5-10倍重量水分散，以加水量1/3体积氯仿萃取，可重复萃取5-8次，将萃取液常压或减压回收溶剂，得浸膏；

[0013] ③将步骤②的浸膏进行柱层析分离，采用石油醚-丙酮系统梯度洗脱，通过薄层层析将90:10洗脱部分合并，再经重结晶纯化得到化合物3 β -羟基-28-去甲乌索-12，17- 二烯-22-酮；

[0014] ④按重量百分比取3β-羟基-28-去甲乌索-12，17-二烯-22-酮为1%_90%、药用辅料为10%-99%，按照药剂的常规制备方法制成药剂。

[0015] 本发明药物有效成份的结构式，以高分辨快原子轰击质谱给出准分子离子峰m/z % 425. 3393 [M+H]+ (C29H45O2,计算值：425. 3414)确定化合物的分子式为 C29H4402。DEPT 谱显示分子中含有7个CH3,8个CH2,6个CH和8个季C。核磁共振氢谱（600兆赫兹，氘代氯仿）显示 5 个甲基单峰信号 δ 1. 01 (Η-23)，0. 81 (Η_24)，0·98 (Η_25)，0·86 (Η-26), 0· 89 (Η-27)和 2 个甲基双峰信号 0· 94 (Η-29, 3Η, d, J=7. 2Hz), 1. 03 (H-30, 3H, d, J=5. 4Hz)； —个连氧碳上的氢信号δ 3. 25 (Η-3, 1Η, dd, J=Il. 4，4. 8Ηζ)和一个烯氢信号δ 6. M (H-12, br s)。核磁共振炭谱显示4个烯碳特征信号δ 128. 4 (C-12)，δ 137. 4 (C-13)，δ 129. 2 (C-17)和 δ 156. 1 (C-18)，1 个连氧碳信号 δ 78. 9 (C-3)以及 1 个羰基碳信号δ 200. 5 (C-22)，推测该化合物可能为观位羧酸缺失的乌苏烷型化合物。化合物的异核多重键相关谱（HMBC谱）和异核多量子相干谱（HMQC谱）显示H-Il与C_12、C_13，H-27 与C-13，H-19、H-29与C-18，Η_15、Η_16与C-17，Η-21与C-22分别有远程相关。综合化合物的核磁共振炭谱、氢谱、无畸变极化转移增强谱（DEPT谱)、异核多重键相关谱（HMBCHf) 和异核多量子相干谱（HMQC谱）使化合物的C、H归属得以确认，故确定该化合物的结构，即 3 β -羟基-28-去甲乌索-12，17- 二烯-22-酮。

[0016] 表1 化合物的核磁共振炭谱(溶剂为二甲基亚砜-d6)及无畸变极化转移增强谱 (DEPT谱）数据

[0017]

[0018] 用。申请人研究发现，地榆炭中的3 β -羟基-28-去甲乌索-12，17- 二烯_22_酮对乳腺肿瘤细胞有显著的抑制其生长的作用，并且还能抑制乳腺肿瘤新生血管的形成，从而为治疗乳腺癌提供了极好的基础。

[0019] 实验表明3 β -羟基-28-去甲乌索-12，17- 二烯_22_酮具有显著的抗乳腺肿瘤的作用。

[0020] 1、抗肿瘤

[0021] 本发明药物的有效成份为乌苏烷型五环三萜苷类化合物，熊果酸(乌苏酸）是该类化合物的代表性成分。熊果酸为一广谱的抗肿瘤化合物，在体外对多种肿瘤细胞有毒性作用。熊果酸不但能抑制乳腺肿瘤细胞生长，而且还能抑制乳腺肿瘤新生血管的形成。

[0022] 实验材料：

[0023] 人乳腺癌MCF-7细胞细胞株。

[0024] 培养方法：

[0025] 人乳腺癌细胞MCF-7在含10%胎牛血清的DMEM(—种含各种氨基酸和葡萄糖的培养基)中采用开放式单层贴壁培养，培养条件为37摄氏度，5% 二氧化碳，饱和湿度，待细胞生长至80%浓度时，0. 25%胰酶消化，每3天更换1次培养液。加受试物前7天将细胞用磷酸盐缓冲液（PBS)洗涤后改为含10%去雌激素胎牛血清的无酚红DMEM中培养，以耗尽细胞内储存的雌激素。

[0026] 噻唑兰（MTT)实验：

[0027] 将在去雌激素培养基中培养7天的MCF-7细胞接种于96孔板，细胞接种浓度为5 000个/孔。培养12小时待细胞贴壁后弃去旧培养基，每孔加入200微升含各浓度受试物的去雌激素培养基。以0. 1% 二甲基亚砜（DMSO)为溶剂对照组，设8个剂量组，每组3个平行样。培养48小时后加入噻唑兰（MTT)溶液20微升/孔，继续孵育4小时后终止培养， PBS洗涤3次，每孔加入150微升二甲基亚砜，振荡10分钟，酶联免疫检测仪上于波长490 纳米测各孔吸光度㈧值，结果以各组5孔吸光度值的x±s表示。计算在不同浓度作用下 MCF-7细胞的存活率。

[0028] 细胞存活率（％)=实验组吸光度/正常组吸光度X 100%

[0029]

[0030] 由图1可知，本发明药物有效成份对人乳腺癌细胞MCF-7的生长具有较强的抑制作用，并且显示一定的剂量依赖关系，在0. 01毫摩尔/升时，对细胞的抑制作用最强， 达80%作用。

[0031] 本发明所述药物经动物实验表明对乳腺癌具有极显著的治疗作用；

[0032] 本发明药物对乳腺癌细胞MCF-7荷瘤小鼠的治疗作用动物实验如下：

[0033] 1、实验材料：

[0034] 人乳腺癌MCF-7。裸鼠，雌性，体重20士2克（山东大学动物中心，实验动物许可号 SCXK 鲁 20030004)。

[0035] 受试药物3 β -轻基-28-去甲乌索-12，17- 二烯_22_酮注射液，生理盐水稀释至所需浓度。

[0036] 2、实验方法：

[0037] 取对数生长的乳腺癌细胞，在无菌条件下，用1毫升注射器将肿瘤细胞接种于裸小鼠左侧第二乳头的脂肪垫，接种量为IXlO6/只；待成瘤后（肿瘤长、短径大于1毫米Xl 毫米）开始治疗。

[0038] 将植瘤小鼠随机分为5组，阳性组为环磷酰胺，空白组和模型组为生理盐水，每天给药1次，共用3周后停药。治疗4周后，处死实验动物，完整切除肿瘤，测量肿瘤长短径，肿瘤体积采用ab2/2公式计算（a为瘤体长径，b为瘤体短径），剥离胸腺，计算抑瘤率、 胸腺指数。

[0039] 抑瘤率=(对照组平均肿瘤体积-给药组平均肿瘤体积）/对照组平均肿瘤体积 X 100%

[0040] 胸腺指数=胸腺重量/体重*10[0041]

[0042] 与模型组相比*P<0. 05 #P<0. 01 与正常组相比：#P<0. 05 ##P<0. 01

[0043] 受试本发明药物可抑制小鼠移植性肿瘤的生长，高、中剂量组抑瘤率分别为 53. 76%,3. 14%，与模型组相比P<0. 01或P<0. 05 ；阳性对照环磷酰胺可明显抑制小鼠肿瘤的生长，但小鼠体重明显偏小，胸腺指数明显偏低，本发明药物各剂量组不会降低小鼠体重和胸腺指数，本发明药物对正常机体影响较小，无明显毒副作用。

[0044] 实验表明由于本发明药物对治疗乳腺癌有显著的效果，因此，患者可以在乳腺癌治疗中使用本发明所述的各种药物剂型。本发明药物还可以替代手术后的化疗期联合使用的西药，从而彻底消除西药的毒副作用。

附图说明

[0045] 图1为本发明药物有效成份对人乳腺癌细胞MCF-7的抑制作用曲线图。

具体实施方式

实施例

[0046] 本发明药物由药物有效成份及药用辅料制成药剂，药物有效成份的结构式为 3 β -羟基-28-去甲乌索-12，17- 二烯-22-酮

[0047]

[0048] 按重量百分比计药物有效成份为1%_90%、药用辅料为10%_99%，本发明药物可以制成各种剂型，如：注射剂：水针剂、冻干粉剂，片剂、胶囊、颗粒剂、散剂或口服液。

[0049] 所述药剂剂型为片剂，片剂的药物有效成份为20%_70%、药用辅料为30%_80%。

[0050] 所述药剂剂型为胶囊，胶囊的药物有效成份为20%_90%、药用辅料为10%_80%。

[0051] 所述药剂剂型为水针剂或冻干粉剂，药物有效成份为1%_5%、药用辅料为 95%-99%。

[0052] 所述药剂剂型为散剂或颗粒剂，药物有效成份10%_20%、药用辅料为80%_90%。

[0053] 本发明药物的制备方法是先采用地榆炭提取药物有效成份，然后按照常规制药方法制备成所需药剂，包括以下步骤：

[0054] ①取地榆炭粉碎后为药物原料，加入原料十倍量的甲醇或乙醇，或含水醇类，常温或加热至60°C -90°C，提取小时，重复提取1一3次，过滤，滤液在常压或减压下浓缩得到流浸膏；

[0055] ②将步骤①中流浸膏用5-10倍重量水分散，以加水量1/3体积氯仿萃取，可重复萃取5-8次，将萃取液常压或减压回收溶剂，得浸膏；

[0056] ③将步骤②的浸膏进行柱层析分离，采用石油醚-丙酮系统梯度洗脱，通过薄层层析将90:10洗脱部分合并，再经重结晶纯化得到化合物3 β -羟基-28-去甲乌索-12，17- 二烯-22-酮；

[0057] ④按重量百分比取3β-羟基-28-去甲乌索-12，17-二烯-22-酮为1%_90%、药用辅料为10%-99%，按照药剂的常规制备方法制成药剂。

[0058] 举例说明几种剂型：

[0059] 一、水针剂：

[0060] 1.含药物有效成分1%，其余为辅料

[0061] 1000 亳升

[0062] 3 β-羟基-28-去甲乌索-12，17-二烯-22-酮10克，吐温80 10毫升，氯化钠8克。

[0063] 取3 β -羟基-28-去甲乌索-12，17- 二烯-22-酮10克，加吐温80 10毫升，注射用水250毫升，加热溶解，滤过，加10%碳酸钠调酸碱度至7. 0-7. 5，加入氯化钠，加注射用水至1000毫升，G3垂熔漏斗（玻璃）滤过，分装，灌封，100摄氏度流通蒸汽灭菌30分钟，分装于1毫升安瓿瓶中，每支含有含3 β -羟基-28-去甲乌索-12，17- 二烯-22-酮10毫克。

[0064] 2.含药物有效成分2.5%，其余为辅料

[0065] 3 β-羟基-28-去甲乌索-12，17-二烯-22-酮25克，吐温80 10毫升，氯化钠8克。

[0066] 取3 β -羟基-28-去甲乌索-12，17- 二烯-22-酮25克，加吐温80 10毫升，注射用水250毫升，加热溶解，滤过，加10%碳酸钠调酸碱度至7. 0-7. 5，加入氯化钠，加注射用水至1000毫升，G3垂熔漏斗（玻璃）滤过，分装，灌封，100摄氏度流通蒸汽灭菌30分钟，分装于1毫升安瓿瓶中，每支含有含3 β -羟基-28-去甲乌索-12，17- 二烯-22-酮25毫克。

[0067] 3.含药物有效成分5%，其余为辅料

[0068] 3 β-羟基-28-去甲乌索-12，17-二烯-22-酮50克，吐温80 10毫升，氯化钠8克。

[0069] 取3 β -羟基-28-去甲乌索-12，17- 二烯-22-酮50克，加吐温80 10毫升，注射用水250毫升，加热溶解，滤过，加10%碳酸钠调酸碱度至7. 0-7. 5，加入氯化钠，加注射用水至1000毫升，G3垂熔漏斗（玻璃）滤过，分装，灌封，100摄氏度流通蒸汽灭菌30分钟，分装于1毫升安瓿瓶中，每支含有含3 β -羟基-28-去甲乌索-12，17- 二烯-22-酮50毫克。

[0070] 二、胶囊剂：

[0071] 1、含药物有效成分20%，其余为辅料

[0072] 1000 粒

[0073] 3 β -羟基-28-去甲乌索-12，17- 二烯_22_酮40克，微晶纤维素160克，硬脂酸镁1克。

[0074] 取3 β -羟基-28-去甲乌索-12，17- 二烯_22_酮、微晶纤维素、硬脂酸镁，混勻， 装胶囊，每粒重0. 2克，含3 β -羟基-28-去甲乌索-12，17- 二烯-22-酮40毫克。

[0075] 2、含药物有效成分50%，其余为辅料

[0076] 1000 粒

[0077] 3 β -轻基-28-去甲乌索-12，17- 二烯-22-酮100克，微晶纤维素100克，硬脂酸镁1克。

[0078] 取3 β -羟基-28-去甲乌索-12，17- 二烯_22_酮、微晶纤维素、硬脂酸镁，混勻， 装胶囊，每粒重0. 2克，含3 β -羟基-28-去甲乌索-12，17- 二烯-22-酮100毫克。

[0079] 3、含药物有效成分70%，其余为辅料

[0080] 1000 粒

[0081] 3β-羟基-28-去甲乌索-12，17-二烯_22_酮140克，微晶纤维素60克，硬脂酸镁1克。

[0082] 取3 β -羟基-28-去甲乌索-12，17- 二烯_22_酮、微晶纤维素、硬脂酸镁，混勻， 装胶囊，每粒重0. 2克，含3 β -羟基-28-去甲乌索-12，17- 二烯-22-酮140毫克。

[0083] 4、含药物有效成分90%，其余为辅料

[0084] 1000 粒

[0085] 3 β -轻基-28-去甲乌索-12，17- 二烯-22-酮180克，微晶纤维素20克，硬脂酸镁1克。

[0086] 取3 β -羟基-28-去甲乌索-12，17- 二烯_22_酮90克，微晶纤维素10克，硬脂酸镁1克，混勻，装胶囊，每粒重0. 2克，含3 β -羟基-28-去甲乌索-12，17- 二烯-22-酮 180毫克。

[0087] 三、散剂：100包

[0088] 1、含药物有效成分10%，其余为辅料

[0089] 3β-羟基-28-去甲乌索-12，17-二烯-22-酮5克，乳糖495克。

[0090] 取3 β -羟基-28-去甲乌索-12，17- 二烯_22_酮、乳糖，研细，混勻，过筛，分包， 每包重5克，含3 β -羟基-28-去甲乌索-12，17- 二烯-22-酮50毫克。

[0091] 2、含药物有效成分15%，其余为辅料

[0092] 3 β -羟基-28-去甲乌索-12，17- 二烯-22-酮7. 5克，乳糖492. 5克。

[0093] 取3 β -羟基-28-去甲乌索-12，17- 二烯_22_酮、乳糖，研细，混勻，过筛，分包， 每包重5克，含3 β -羟基-28-去甲乌索-12，17- 二烯-22-酮75毫克。

[0094] 3、含药物有效成分20%，其余为辅料[0095] 3β-羟基-28-去甲乌索-12，17-二烯-22-酮10克，乳糖490克。

[0096] 取3 β -羟基-28-去甲乌索-12，17- 二烯_22_酮、乳糖，研细，混勻，过筛，分包， 每包重5克，含3β-羟基-28-去甲乌索-12，17-二烯-22-酮100毫克。

[0097] 四、片剂：

[0098] 1、含药物有效成分20%、辅料80%

[0099] 1000 片

[0100] 化合物3 β -羟基-28-去甲乌索-12，17- 二烯_22_酮40克，羟丙甲纤维素60克， 糊精100克，硬脂酸镁1克。

[0101] 化合物3 β -羟基-28-去甲乌索-12，17- 二烯_22_酮、羟丙甲纤维素、糊精混合， 以75%乙醇为粘合剂制湿颗粒，过22目筛，50摄氏度干燥3小时，22目筛整粒，加入硬脂酸镁混勻压片，每片重0. 2克，含化合物3 β -轻基-28-去甲乌索-12，17- 二烯-22-酮40毫克。

[0102] 2、含药物有效成分50%、辅料50% ：

[0103] 1000 片

[0104] 化合物3 β -羟基-28-去甲乌索-12，17- 二烯_22_酮100克，羟丙甲纤维素40 克，糊精60克，硬脂酸镁1克。

[0105] 化合物3 β -羟基-28-去甲乌索-12，17- 二烯_22_酮、羟丙甲纤维素、糊精混合， 以75%乙醇为粘合剂制湿颗粒，过22目筛，50摄氏度干燥3小时，22目筛整粒，加入硬脂酸镁混勻压片，每片重0. 2克，含化合物3 β -羟基-28-去甲乌索-12，17- 二烯-22-酮100毫克。

[0106] 3、含药物有效成分70%、辅料30% ：

[0107] 1000 片

[0108] 化合物3 β -羟基-28-去甲乌索-12，17- 二烯_22_酮140克，羟丙甲纤维素20 克，糊精30克，硬脂酸镁1克。

[0109] 化合物3 β -羟基-28-去甲乌索-12，17- 二烯_22_酮、羟丙甲纤维素、糊精混合， 以75%乙醇为粘合剂制湿颗粒，过22目筛，50摄氏度干燥3小时，22目筛整粒，加入硬脂酸镁混勻压片，每片重0. 2克，含化合物3 β -羟基-28-去甲乌索-12，17- 二烯-22-酮140毫克。