一种白首乌C21甾总苷降解产物及其抗肿瘤作用

摘要

本发明涉及天然药物领域，具体涉及一种白首乌C21甾总苷降解产物，其特征是由下列方法制备：将白首乌C21甾总苷干燥粉末在酸或碱存在下降解，降解后调节PH＝7，用有机溶剂萃取，回收有机溶剂即得。本发明的白首乌C21甾总苷降解产物具有较强的抗肿瘤用途。

权利要求

1.一种白首乌C21甾总苷降解产物，其特征是由下列方法制备：将白首乌C21甾总苷干燥粉末加入降解液中降解，降解后调节pH＝7，用有机溶剂萃取，回收有机溶剂即得，其中降解液是冰醋酸、盐酸或氢氧化钠，冰醋酸或盐酸的浓度为0.1％～10％，氢氧化钠的浓度为5％～10％，均为重量百分比，有机溶剂是氯仿或乙酸乙酯，降解的温度为60℃～100℃。

2.权利要求1的降解产物，其中降解液是冰醋酸。

3.权利要求1的降解产物，其中降解时间为2～6小时。

4.权利要求1的降解产物，其中用有机溶剂萃取后还包括水洗和脱水。

5.权利要求1的降解产物用于制备抗肿瘤药物的用途。

说明书

一种白首乌C21甾总苷降解产物及其抗肿瘤作用

技术领域

[0001] 本发明涉及天然药物领域，具体涉及一种白首乌C21甾总苷降解产物，及其在抗肿瘤方面的应用。

背景技术

[0002] 白首乌为祖国传统中药之一，药源主要来自萝藦科鹅绒藤属植物耳叶牛皮消(Cynanchum auriculatum)、隔山牛皮消(C.wifordii)和戟叶牛皮消(C.bungei)的块根。白首乌历史上用作补益性中药，被历代医家视为养生防老的珍品，有养血益肝、固肾益精、强筋健骨、乌黑须发及延年益寿等功效。

[0003] C21甾苷是一类苷元为孕甾烷衍生物与2-去氧糖等形成的化合物，是白首乌中的主要药用成分，也是白首乌中发现较多的一类化合物。白首乌C21甾苷苷元主要有告达亭、开德苷元、萝藦苷元和加加明等，其混合物简称为C21甾总苷，糖大多为2，6-去氧糖，如洋地黄毒糖、2-去氧洋地黄糖、夹竹桃糖、磁麻糖，很多在末端连有葡萄糖。糖之间均以1→4糖苷键相连，糖链1-7个不等。发明人前期研究表明，告达庭-3-O-β-D-磁麻糖苷具有较强的抗肿瘤活性，尤其是对肝癌有很强的抑制效果(见中国专利ZL200710020032.8)。尽管单体的药理效果好，但由于其提取方法比较复杂，收率低，因此限制了其推广应用。

发明内容

[0004] 本发明公开了一种白首乌C21甾总苷的降解产物，其具有优异的抗肿瘤活性，并且制备方法简单，适合工业化大生产。

[0005] 本发明将白首乌C21甾总苷加入酸或碱进行降解，降解后调节PH＝7，用有机溶剂萃取，回收有机溶剂即得白首乌C21甾总苷降解产物。用来降解的酸或碱优选冰醋酸、盐酸或氢氧化钠。更优选冰醋酸。当使用冰醋酸或盐酸降解时，其浓度优选0.1％～10％，为重量百分比，本发明中的百分比均为重量百分比。当使用氢氧化钠降解时，其浓度优选5％～10％。

[0006] 用于萃取的有机溶剂优选氯仿或乙酸乙酯。用有机溶剂萃取后优选进一步水洗和脱水。

[0007] 降解的温度优选60℃～100℃。

[0008] 降解时间优选2～6小时。

[0009] 本发明白首乌C21甾总苷化学降解产物包含：开德苷元-3-O-β-D-洋地黄毒糖苷、开德苷元-3-O-α-L-迪吉糖-(1→4)-β-D-磁麻糖苷、告达庭-3-O-β-D-磁麻糖苷及告达庭等，其部分化学结构式如下，其中R、R1为糖链：

[0010]

[0011] 白首乌C21甾总苷的制备可参见文献方法，也可用实施例1方法制备。

[0012] 本发明的化学降解产物具有如下优点：

[0013] 1、体内抗肿瘤活性更强。本发明制备的白首乌C21甾总苷的降解产物，在动物体内抗肿瘤试验中，相较于白首乌C21甾总苷对小鼠移植性肿瘤H22肝癌实体瘤及Lewis肺癌实体瘤具有更明显的抑制作用。醋酸水解产物的药效最强。

[0014] 2、有效成分的含量更高。本发明中白首乌C21甾总苷中告达庭-3-O-β-D-磁麻糖苷、告达庭苷元、开德苷元-3-O-β-D-洋地黄毒糖苷及开德苷元-3-O-α-L-迪吉糖-(1→4)-β-D-磁麻糖苷占总质量比5.53％。通过限制性降解白首乌C21甾总苷，将大量长糖链的化合物降解成苷元或含有1-2个糖残基的化合物，从而使得白首乌中开德苷元-3-O-β-D-洋地黄毒糖苷、开德苷元-3-O-α-L-迪吉糖-(1→4)-β-D-磁麻糖苷、告达庭苷元和告达庭-3-O-β-D-磁麻糖苷的含量增加。含有活性成分占总质量比为10％～55％。

[0015] 下面是部分药理学实验及结果。

[0016] (一)白首乌C21甾总苷和白首乌C21甾总苷的醋酸降解产物对小鼠H22实体瘤体内抗肿瘤试验

[0017] 在无菌条件下取生长8d的小鼠移植性肿瘤H22腹水，用无菌生理盐水按3∶1比例稀释，接种于健康小鼠右前肢腋窝皮下，每只0.2mL。接种次日随机分组，每组10只。设荷瘤对照组，白首乌总苷、白首乌总苷的醋酸降解产物和白首乌总苷的氢氧化钠降解产物的不同浓度给药剂量组，环磷酰胺(CTX)组。接种次日起，白首乌总苷组、白首乌总苷醋酸降解产物组、白首乌总苷氢氧化钠降解产物组每天腹腔注射给药1次，连用10天，CTX组于接种第四天起腹腔注射给药。荷瘤对照组腹腔注射同体积的蒸馏水。停药次日动物称体重，处死后剥取瘤组织，称瘤重。按下式计算肿瘤生长抑制率。

[0018] 抑瘤率＝(1-实验组平均瘤重/对照组平均瘤重)×100％。

[0019] 本试验共进行三批。结果见表1。所得数据用平均值±标准差表示，并用t检验法比较各组间的统计学差异。

[0020] 表1.白首乌C21甾总苷的醋酸/氢氧化钠水解产物对小鼠肉瘤H22的抑制作用[0021]

[0022] 注：与荷瘤对照组比较，**P＜0.01

[0023] 由表1可见，本发明的降解产物抑瘤率明显高于白首乌总苷，其中醋酸的降解产物效果又强于氢氧化钠的降解产物的药效。

[0024] (二)白首乌C21甾总苷和白首乌C21甾总苷的化学降解产物对小鼠Lewis实体瘤体内抗肿瘤试验

[0025] 取接种Lewis肺癌14d的C57BL/6荷瘤小鼠，脱颈椎处死，无菌条件下取瘤组织，用玻璃匀浆器加生理盐水(1∶3)磨制成细胞悬液，取0.2ml/只接种于C57BL/6健康小鼠右腋窝皮下，接种后将动物随机分组，每组10只，分别为荷瘤对照组、白首乌总苷组、白首乌总苷醋酸降解产物组、白首乌总苷氢氧化钠降解产物组的不同浓度给药剂量组，环磷酰胺(CTX)组。接种次日起，白首乌总苷组、白首乌总苷醋酸降解产物组、白首乌总苷氢氧化钠降解产物组每天腹腔注射给药1次，连用12天，CTX组采用间断法给药三次，分别于接种肿瘤后第1、5、9天给药。荷瘤对照组腹腔注射同体积的蒸馏水。停药次日动物称体重，处死后剥取瘤组织，称瘤重。按下式计算肿瘤生长抑制率。抑瘤率＝(1-实验组平均瘤重/对照组平均瘤重)×100％。

[0026] 本试验共进行三批。结果见表2。所得数据用平均值±标准差表示，并用t检验法比较各组间的统计学差异。

[0027] 表2.白首乌C21甾总苷的醋酸/氢氧化钠水解产物对Lewis实体瘤的抑制作用[0028]

[0029] 注：与荷瘤对照组比较，**P＜0.001

[0030] 由表2可见，本发明的降解产物抑瘤率明显高于白首乌总苷，其中醋酸的降解产物效果又强于氢氧化钠的降解产物的药效。

[0031] (三)白首乌C21甾总苷和白首乌C21甾总苷醋酸降解产物的急性毒性试验[0032] 取小鼠120只，每组10只，腹腔给不同剂量的药物，连续观察7天，计数死亡小鼠。计算LD50，试验结果见表3。

[0033] 表3急性毒性试验结果

[0034]

[0035] 由表3可见，本发明的降解产物的毒性小于其总苷的毒性。

附图说明

[0036] 图1是对照品溶液的HPLC图

[0037] 图2是白首乌C21甾总苷HPLC图

[0038] 图3是本发明的白首乌C21甾总苷醋酸降解产物HPLC图

具体实施方式

[0039] 本发明中白首乌C21甾总苷化学降解产物的含量测定，以活性成分告达庭-3-O-β-D-磁麻糖苷、告达庭、开德苷元-3-O-β-D-洋地黄毒糖苷及开德苷元-3-O-α-L-迪吉糖-(1→4)-β-D-磁麻糖苷的含量为测定指标，采用高效液相色谱法(HPLC)测定，采用外标法定量。采用Waters2695液相色谱分析系统，分析条件如下：LichrospherC18色谱柱(250mm×4.6mm，5μm)；采用梯度洗脱，流速1.0mL/min；柱温为
25℃；检测波长223nm。

[0040] HPLC法测定白首乌C21甾体苷类的流动相梯度见表4

[0041] 表4.流动相梯度

[0042]

[0043] 实施例1

[0044] 白首乌C21甾总苷制备方法

[0045] 取白首乌原药材饮片10kg，用7倍体积的95％乙醇回流提取3次，每次2h，合并三次提取液减压回收乙醇至无醇味，得醇提浸膏1.0千克。取醇提浸膏1.0千克加适量的水分散，依次用石油醚，氯仿，正丁醇各2.0L萃取3次，分别合并3次萃取液，回收有机溶剂，分别得到石油醚、氯仿、正丁醇部位。取正丁醇部位上D101大孔吸附树脂柱，依次用水和95％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，减压回收乙醇，得正丁醇大孔树脂柱吸附洗脱部分。取氯仿部位和正丁醇大孔树脂柱吸附洗脱部分合并，即得白首乌C21甾体总苷250g。

[0046] 实施例2

[0047] 白首乌总苷醋酸降解产物的制备方法

[0048] 取白首乌C21甾总苷粉末1g，精密称定，加5％的醋酸溶液50mL，置100℃水浴锅中，加热回流5h，取出，冷却，用10％的氢氧化钠溶液调节PH＝7，用氯仿萃取3次，每次50mL，萃取液合并，用水洗涤两次，每次100mL，弃水洗液，萃取液用无水硫酸钠脱水，回收氯仿得白首乌C21甾总苷的醋酸降解产物250mg，其中四种活性成分占总质量比为41％。

[0049] 实施例3

[0050] 白首乌总苷氢氧化钠降解产物的制备方法

[0051] 取白首乌C21甾总苷粉末1g，精密称定，加10％的氢氧化钠溶液50mL，置100℃水浴锅中，加热回流4h，取出，冷却，用10％的盐酸溶液调节PH＝7，用氯仿萃取3次，每次50mL，萃取液合并，用水洗涤两次，每次100mL，弃水洗液，萃取液用无水硫酸钠脱水，回收氯仿得白首乌C21甾总苷的氢氧化钠降解产物100mg，其中四种活性成分占总质量比为11％。