艾迪注射制剂的检测方法

摘要

本发明提供了艾迪注射制剂的检测方法，所述检测方法为性状、鉴别、检查以及含量测定项目；其中鉴别为α-萘酚显色反应、以人参皂苷Re、Rg1、Rb以及黄芪甲苷为对照对制剂中人参和黄芪的薄层色谱鉴别；含量测定是对制剂中人参所含人参皂苷Re、斑蝥所含斑蝥素的含量测定；检查为对PH值、重金属、热原、蛋白质、鞣质等安全性指标的检查；与现有技术相比，本发明质量控制方法可有效地控制产品质量，从而确保其临床疗效。

权利要求

1.一种艾迪注射制剂的检测方法，按照重量组份计算，艾迪注射制剂主要由斑蝥

0.5-5、人参20-80、黄芪200-600、刺五加100-200制备而成，其制备方法为：以上四味，人参切片，用20-85％乙醇加热回流提取1-5次，合并提取液，滤过，回收乙醇，药液备用；药渣与其余斑蝥等三味加水煎煮1-6次，合并煎液，滤过，滤液与人参提取液合并，以石硫法沉淀处理1-3次，所得上清液加乙醇使含醇量达50-99％，静置过夜，取上清液减压回收乙醇至无醇味，再按照常规方法分别制成冻干粉针剂、输液剂或水针剂，其特征在于：所述检测方法为：性状：对于冻干粉针剂，产品为浅黄色至浅棕色的疏松块状物；

对于输液剂，产品为浅黄色至浅棕色的澄明液体；

对于水针剂，产品为浅黄色至浅棕色的澄明液体；

鉴别：

(1)分别取冻干粉针加注射用水使溶解、或取输液浓缩、或直接取水针剂，加乙醇搅匀，滤过，沉淀物用乙醇洗涤1-5次，将沉淀物用蒸馏水溶解，取0.5-3ml置试管中，微热后加入

2-10％α-萘酚乙醇溶液，摇匀，再沿管壁缓缓加入浓硫酸，在二液面接界处显紫红色环；

(2)分别取冻干粉针加注射用水使溶解、或取输液浓缩、或直接取水针剂，置分液漏斗中，用水饱和的正丁醇提取1-4次，合并提取液，置水浴上蒸干，残渣用蒸馏水溶解，加入预先制备好的DA-201树脂柱上，用水洗涤，再用20-80％甲醇液洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇使溶解，作为供试品溶液；另取人参皂苷Re、Rg1、Rb及黄芪甲苷对照品，加甲醇溶解，作为对照品溶液；照中国药典2005年版一部附录薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿∶醋酸乙酯∶甲醇∶水＝1-10∶2-15∶1-10∶1-10，

10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热数分钟，置紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

检查：

PH值：应为3.0-6.5；

重金属：取冻干粉针20-40mg加注射用水2ml使溶解、或取输液8-20ml浓缩至2ml、或取水针剂2ml；置坩埚中，水浴上蒸干，照中国药典重金属检查法检查，含重金属不得过百万分之五；

热原：取冻干粉针300-600mg加注射用水30ml使溶解、或取输液100-300ml浓缩至

30ml、或取水针剂30ml；用氯化钠注射液或5～10％葡萄糖注射液稀释至100ml，按家兔体重1Kg注射10ml的剂量，照中国药典热原检查法检查，应符合规定；

蛋白质：取冻干粉针10-20mg加注射用水1ml使溶解、或取输液4-10ml浓缩至1ml、或取水针剂1ml；加新配制的30％磺基水杨酸溶液1ml，混匀，放置5分钟，不得出现浑浊；

鞣质：取冻干粉针10-20mg加注射用水1ml使溶解、或取输液4-10ml浓缩至1ml、或取水针剂1ml；加新配制的含1％鸡蛋清的生理氯化钠溶液5ml，必要时，用0.45um微孔滤膜滤过，放置10分钟，不得出现浑浊或沉淀；

树脂：取冻干粉针50-100mg加注射用水5ml使溶解、或取输液20-50ml浓缩至5ml、或取水针剂5ml；加盐酸1滴，放置30分钟，不得出现沉淀；

草酸盐：取冻干粉针20-40mg加注射用水2ml使溶解、或取输液8-20ml浓缩至2ml、或取水针剂2ml；用稀盐酸调节PH值至1-2，滤过，滤液调节PH值至5-6，加3％氯化钙溶液

2-3滴，放置10分钟，不得出现浑浊或沉淀；

钾离子：取冻干粉针20-40mg加注射用水2ml使溶解、或取输液8-20ml浓缩至2ml、或取水针剂2ml；蒸干，按照中国药典钾离子测定法测定，应符合规定；

砷盐：取冻干粉针10-20mg加注射用水1ml使溶解、或取输液4-10ml浓缩至1ml、或取水针剂1ml；精密量取，于坩埚中蒸干，加2％的硝酸镁乙醇溶液3ml，点燃，燃尽后，先用小火炽灼使炭化，再在500-600℃炽灼至完全灰化，放冷，加盐酸5ml与水21ml使溶解，照中国药典砷盐检查法检查；每1ml成品中含砷量不得过百万分之二；

溶血与凝聚：2％红细胞混悬液的制备取兔血或羊血数毫升，放入盛有玻璃珠的锥形瓶中，振摇10分钟，除去纤维蛋白原，使成脱纤血，加约10倍量的生理氯化钠溶液洗涤2-3次，至上清液不显红色为止，将所得红细胞用生理氯化钠溶液配成2％的混悬液，即得；

供试品溶液的制备：取冻干粉针100-200mg加注射用水10ml使溶解、或取输液

40-100ml浓缩至10ml、或取水针剂10ml；加生理氯化钠溶液稀释成50ml，混匀，即得；

试验方法：取试管6支，按下表中配比量依次加入2％红细胞混悬液和生理氯化钠溶液，混匀后，于37℃恒温箱中放置30分钟，分别加入不同量的供试品溶液，第6管为对照管，摇匀后，置37℃±0.5℃恒温箱中，开始每隔15分钟观察一次，1小时后，每隔1小时观察一次，共观察3小时；

按上法检查，以第3管为准，本品在3小时内不得出现溶血和红细胞凝聚；

异常毒性：取冻干粉针加注射用水使溶解、或取输液、或取水针剂；按小鼠每只0.5ml，照中国药典异常毒性检查法检查；

过敏物质检查：取冻干粉针加注射用水使溶解、或取输液、或取水针剂；以原药浓度，按豚鼠致敏剂量为0.5ml/只，激发剂量为1.0ml/只；照中国药典过敏物质检查法检查，应符合规定；

升压物质检查：取冻干粉针加注射用水使溶解、或取输液、或取水针剂；以原药浓度，按大鼠体重1kg注射10ml的剂量，照中国药典升压物质检查法检查，应符合规定；

降压物质检查：取冻干粉针加注射用水使溶解、或取输液、或取水针剂；以原药浓度，按猫体重1kg注射1ml的剂量，照中国药典降压物质检查法检查，应符合规定；

其他：应符合中国药典注射剂项下有关的各项规定；

含量测定：

(1)人参皂苷Re

对照品溶液的制备：精密称取人参皂苷Re对照品，加甲醇溶解，摇匀，即得；

标准曲线的制备：精密量取对照品溶液0、20、40、60、80、100μl，分别置10ml具塞试管中，置水浴上挥去溶剂，立即取出，放冷，加2-10％香草醛冰醋酸溶液、高氯酸，摇匀，置水浴中加热，取出，用水冷却，加冰醋酸，摇匀，照中国药典分光光度法，测定吸收度，以吸收度为纵坐标、浓度为横坐标，绘制标准曲线；

供试品溶液的制备：分别取冻干粉针加注射用水使溶解、或取输液浓缩、或直接取水针剂，置分液漏斗中，用氯仿提取1-5次，合并氯仿提取液，用蒸馏水洗涤1-4次，弃去氯仿液，洗液与上述水层合并，置分液漏斗中，用水饱和的正丁醇提取1-5次，合并正丁醇提取液，加入无水硫酸钠，搅拌，放至澄清，将正丁醇液移至蒸发皿中，用少量正丁醇洗涤无水硫酸钠，洗液并入蒸发皿中，蒸干，用少量蒸馏水溶解残渣，加到大孔吸附树脂DA-201柱上，待液面接近棉花层后，用蒸馏水洗脱，弃去洗液，用40-90％乙醇洗脱，收集洗脱液于蒸发皿中，置水浴上蒸干，用甲醇溶解残渣，移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得；

测定法：精密量取供试品溶液100μl，照标准曲线的制备项下的方法，自“置10ml具塞试管中”起依法测定吸收度；从标准曲线上读出供试品溶液中人参皂苷Re的重量μg，计算；该注射制剂中，冻干粉针剂中含人参以人参皂苷Re计，不得少于1％；输液剂中含人参以人参皂苷Re计，不得少于0.01mg/ml；水针剂中含人参以人参皂苷Re计，不得少于

0.1mg/ml；

(2)斑蝥素 照中国药典气相色谱法测定；

色谱条件与系统适用性试验：以聚乙二醇20M及甲基硅橡胶SE-30为固定液，涂布浓度分别为5-20％和1-10％，0.5-2∶0.5-2混合装柱；柱温为180±10℃；理论板数按斑蝥素峰计算，应不低于1500；

对照品溶液的制备：取斑蝥素对照品，精密称定，加氯仿溶解，作为对照品溶液；

供试品溶液的制备：分别取冻干粉针加注射用水使溶解、或取输液浓缩、或直接取水针剂，加入1-3mol/L硫酸溶液，用氯仿振摇提取1-5次，合并氯仿液，用K-D浓缩器浓缩定容，即得；

测定法分别精密量取对照品溶液和供试品溶液，注入气相色谱仪，计算，即得；

该注射制剂中，冻干粉针剂中含斑蝥素为0.0005％-0.05％；输液剂中含斑蝥素为

0.00001-0.001mg/ml；水针剂中含斑蝥素为0.0001-0.005mg/ml。

2.按照权利要求1所述艾迪注射制剂的检测方法，其特征在于：具体的检测方法为：性状：对于冻干粉针剂，产品为浅黄色至浅棕色的疏松块状物；

对于输液剂，产品为浅黄色至浅棕色的澄明液体；

对于水针剂，产品为浅黄色至浅棕色的澄明液体；

鉴别：

(1)取冻干粉针400-1000mg加注射用水5-20ml使溶解、或取输液200-500ml浓缩至

5-20ml、或取水针剂20-100ml浓缩至5-20ml；分别取上述药品，加乙醇20-100ml，搅匀，滤过，沉淀物用乙醇洗涤1-4次，将沉淀物用蒸馏水2-10ml溶解，取0.5-3ml置试管中，微热后加入2-10％α-萘酚乙醇溶液2-10滴，摇匀，再沿管壁缓缓加入浓硫酸0.2-2ml，在二液面接界处显紫红色环；

(2)取冻干粉针400-1000mg加注射用水20-100ml使溶解、或取输液200-500ml浓缩至20-100ml、或取水针剂20-100ml；置分液漏斗中，用水饱和的正丁醇提取1-4次，每次10-60ml，合并提取液，置水浴上蒸干，残渣用蒸馏水1-10ml溶解，加入预先制备好的DA-201树脂柱上，内径0.5～2cm，长10-20cm，填充10-15cm的DA-201树脂后，再填充1-5g中性氧化铝；用水50-200ml洗涤，再用20-80％甲醇液洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇

0.5-5ml使溶解，作为供试品溶液；另取人参皂苷Re、Rg1、Rb及黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml各含0.5-3mg的混合溶液，作为对照品溶液；照中国药典2005年版一部附录薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各3-20μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿∶醋酸乙酯∶甲醇∶水＝1-10∶2-15∶1-10∶1-10，10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热数分钟，置紫外光灯200-500nm下检视；

供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

检查：

PH值：应为3.0-6.5；

重金属：取冻干粉针20-40mg加注射用水2ml使溶解、或取输液8-20ml浓缩至2ml、或取水针剂2ml；置坩埚中，水浴上蒸干，照中国药典重金属检查法检查，含重金属不得过百万分之五；

热原：取冻干粉针300-600mg加注射用水30ml使溶解、或取输液100-300ml浓缩至

30ml、或取水针剂30ml；用氯化钠注射液或5～10％葡萄糖注射液稀释至100ml，按家兔体重1Kg注射10ml的剂量，照中国药典热原检查法检查，应符合规定；

蛋白质：取冻干粉针10-20mg加注射用水1ml使溶解、或取输液4-10ml浓缩至1ml、或取水针剂1ml；加新配制的30％磺基水杨酸溶液1ml，混匀，放置5分钟，不得出现浑浊；

鞣质：取冻干粉针10-20mg加注射用水1ml使溶解、或取输液4-10m1浓缩至1ml、或取水针剂1ml；加新配制的含1％鸡蛋清的生理氯化钠溶液5ml，必要时，用0.45um微孔滤膜滤过，放置10分钟，不得出现浑浊或沉淀；

树脂：取冻干粉针50-100mg加注射用水5ml使溶解、或取输液20-50ml浓缩至5ml、或取水针剂5ml；加盐酸1滴，放置30分钟，不得出现沉淀；

草酸盐：取冻干粉针20-40mg加注射用水2ml使溶解、或取输液8-20ml浓缩至2ml、或取水针剂2ml；用稀盐酸调节PH值至1-2，滤过，滤液调节PH值至5-6，加3％氯化钙溶液

2-3滴，放置10分钟，不得出现浑浊或沉淀；

钾离子：取冻干粉针20-40mg加注射用水2ml使溶解、或取输液8-20ml浓缩至2ml、或取水针剂2ml；蒸干，按照中国药典钾离子测定法测定，应符合规定；

砷盐：取冻干粉针10-20mg加注射用水1ml使溶解、或取输液4-10ml浓缩至1ml、或取水针剂1ml；精密量取，于坩埚中蒸干，加2％的硝酸镁乙醇溶液3ml，点燃，燃尽后，先用小火炽灼使炭化，再在500-600℃炽灼至完全灰化，放冷，加盐酸5ml与水21ml使溶解，照中国药典砷盐检查法检查；每1ml成品中含砷量不得过百万分之二；

溶血与凝聚：2％红细胞混悬液的制备取兔血或羊血数毫升，放入盛有玻璃珠的锥形瓶中，振摇10分钟，除去纤维蛋白原，使成脱纤血，加约10倍量的生理氯化钠溶液洗涤2-3次，至上清液不显红色为止，将所得红细胞用生理氯化钠溶液配成2％的混悬液，即得；

供试品溶液的制备：取冻干粉针100-200mg加注射用水10ml使溶解、或取输液

40-100ml浓缩至10ml、或取水针剂10ml；加生理氯化钠溶液稀释成50ml，混匀，即得；

试验方法：取试管6支，按下表中配比量依次加入2％红细胞混悬液和生理氯化钠溶液，混匀后，于37℃恒温箱中放置30分钟，分别加入不同量的供试品溶液，第6管为对照管，摇匀后，置37℃±0.5℃恒温箱中，开始每隔15分钟观察一次，1小时后，每隔1小时观察一次，共观察3小时；

按上法检查，以第3管为准，本品在3小时内不得出现溶血和红细胞凝聚；

异常毒性：取冻干粉针加注射用水使溶解、或取输液、或取水针剂；按小鼠每只0.5ml，照中国药典异常毒性检查法检查；

过敏物质检查：取冻干粉针加注射用水使溶解、或取输液、或取水针剂；以原药浓度，按豚鼠致敏剂量为0.5ml/只，激发剂量为1.0ml/只；照中国药典过敏物质检查法检查，应符合规定；

升压物质检查：取冻干粉针加注射用水使溶解、或取输液、或取水针剂；以原药浓度，按大鼠体重1kg注射10ml的剂量，照中国药典升压物质检查法检查，应符合规定；

降压物质检查：取冻干粉针加注射用水使溶解、或取输液、或取水针剂；以原药浓度，按猫体重1kg注射1ml的剂量，照中国药典降压物质检查法检查，应符合规定；

其他：应符合中国药典注射剂项下有关的各项规定；

含量测定：

(1)人参皂苷Re

对照品溶液的制备：精密称取人参皂苷Re对照品，置量瓶中，加甲醇溶解使每1ml中含人参皂苷Re 1-2mg，摇匀，即得；

标准曲线的制备：精密量取对照品溶液0、20、40、60、80、100μl，分别置10ml具塞试管中，置水浴上挥去溶剂，立即取出，放冷，加2-10％香草醛冰醋酸溶液0.05-1ml、高氯酸

0.5-1.5ml，摇匀，置40-80℃水浴中加热8-25分钟，取出，用水冷却1-3分钟，加冰醋酸

2-10ml，摇匀，照中国药典分光光度法，在400-700nm波长处测定吸收度，以吸收度为纵坐标、浓度为横坐标，绘制标准曲线；

供试品溶液的制备：取冻干粉针200-400mg加注射用水10-30ml使溶解、或取输液

50-200ml浓缩至10-30ml、或取水针剂10-30ml；分别精密量取上述药品，置分液漏斗中，用氯仿提取1-5次，每次10-30ml，合并氯仿提取液，用蒸馏水洗涤1-4次，每次2-10ml，弃去氯仿液，洗液与上述水层合并，置分液漏斗中，用水饱和的正丁醇提取1-5次，每次

40-60ml，合并正丁醇提取液，加入无水硫酸钠1-5g，搅拌，放至澄清，将正丁醇液移至蒸发皿中，用少量正丁醇洗涤无水硫酸钠，洗液并入蒸发皿中，蒸干，用少量蒸馏水溶解残渣，加到大孔吸附树脂DA-201柱上，待液面接近棉花层后，用蒸馏水100ml洗脱，控制流速为

0.3-0.6ml/min，弃去洗液，用40-90％乙醇70-100ml洗脱，收集洗脱液于蒸发皿中，置水浴上蒸干，用甲醇溶解残渣，移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得；

测定法：精密量取供试品溶液100μl，照标准曲线的制备项下的方法，自“置10ml具塞试管中”起依法测定吸收度；从标准曲线上读出供试品溶液中人参皂苷Re的重量μg，计算；该注射制剂中，冻干粉针剂中含人参以人参皂苷Re计，不得少于1％；输液剂中含人参以人参皂苷Re计，不得少于0.01mg/ml；水针剂中含人参以人参皂苷Re计，不得少于

0.1mg/ml；

(2)斑蝥素 照中国药典气相色谱法测定；

色谱条件与系统适用性试验：以聚乙二醇20M及甲基硅橡胶SE-30为固定液，涂布浓度分别为5-20％和1-10％，0.5-2∶0.5-2混合装柱；柱温为180±10℃；理论板数按斑蝥素峰计算，应不低于1500；

对照品溶液的制备：取斑蝥素对照品，精密称定，加氯仿制成每1ml含0.05-0.2mg的溶液，作为对照品溶液；

供试品溶液的制备：取冻干粉针400-1000mg加注射用水20-100ml使溶解、或取输液

200-500ml浓缩至20-100ml、或取水针剂20-100ml，加入1-3mol/L硫酸溶液2-10ml，用氯仿振摇提取1-5次，每次10-100ml，合并氯仿液，用K-D浓缩器浓缩定容至2-8ml，即得；测定法分别精密量取对照品溶液和供试品溶液，注入气相色谱仪，计算，即得；该注射制剂中，冻干粉针剂中含斑蝥素为0.0005％-0.05％；输液剂中含斑蝥素为0.00001-0.001mg/ml；

水针剂中含斑蝥素为0.0001-0.005mg/ml。

说明书

艾迪注射制剂的检测方法

[0001] 本申请是申请人于2007年11月19日提交的名称为：“艾迪注射制剂的质量控制方法”、申请号为：200710078008.X的发明专利申请的分案申请。

[0002] 技术领域：本发明涉及艾迪注射制剂的检测方法，属于药品的技术领域。

[0003] 背景技术：癌症是严重威胁人类健康的一大类疾病，艾迪注射制剂主要由斑蝥、人参、黄芪和刺五加组成，具有清热解毒、消瘀散结的作用，主要用于原发性肝癌，肺癌，直肠癌，恶性淋巴瘤，妇科恶性肿瘤等疾病。其中“艾迪注射液”刊登在中药部颁标准第20册。但是随着社会的发展，对于药品的质量控制的要求越来越高，而且对于寻找快捷方便可控的检测方法的需求也越来越迫切，本发明人经过研究发现，现有艾迪注射制剂质量控制标准中，产品性状的描述不够确切；对人参、黄芪的薄层鉴别中，供试品溶液的制备方法较繁琐，上柱洗脱的操作方法时间较长；展开剂的选择配比不够理想，很难将各有效成份特别是人参皂苷Rg1和黄芪甲苷完全分开，同时展开剂有配置条件的限制，这些都易导致在鉴别过程中分离度不好，斑点显色不够清晰；另外原标准中未对薄层板厚度进行规定，但经大量实现表明，人参对薄层板的要求很严，如果薄层板过薄，人参皂苷Rg1与黄芪甲苷很难分开，必须要厚板(500μm以上)才能将二者有效分离，同时湿度对其影响也很大，在展开过程中要严格控制湿度；故现有质量控制方法不能有效控制艾迪注射制剂的质量，从而将影响该制剂的临床疗效。
发明内容：

[0004] 本发明的目的在于：提供一种艾迪注射制剂的检测方法，该注射制剂包括冻干粉针剂、输液剂和水针剂。本发明针对现有技术的不足，对这种艾迪注射制剂的质量控制方法进行了研究，改进了斑蝥素的含量测定方法以及人参、黄芪的薄层鉴别方法，并增加了这种艾迪制剂的安全性指标检查项目，提高了艾迪注射制剂的质量控制标准，从而保证了该制剂的临床疗效。

[0005] 本发明所述艾迪注射制剂是这样构成的：按照重量组份计算：它主要由斑蝥0.5-5、人参20-80、黄芪200-600、刺五加100-200制备而成。其制备方法为：以上四味，人参切片，用20-85％乙醇加热回流提取1-5次，合并提取液，滤过，回收乙醇，药液备用；药渣与其余斑蝥等三味加水煎煮1-6次，合并煎液，滤过，滤液与人参提取液合并，以石硫法沉淀处理1-3次，所得上清液加乙醇使含醇量达50-99％，静置过夜，取上清液减压回收乙醇至无醇味，再按照常规方法分别制成冻干粉针剂、输液剂或水针剂。

[0006] 本发明所述质量控制方法主要包括性状、鉴别、检查以及含量测定项目中的部分或全部；其中鉴别包括α-萘酚显色反应、以人参皂苷Re、Rg1、Rb以及黄芪甲苷为对照对制剂中人参和黄芪的薄层色谱鉴别；含量测定是对制剂中人参所含人参皂苷Re、斑蝥所含斑蝥素的含量测定。

[0007] 人参和黄芪的鉴别方法是以人参皂苷Re、Rg1、Rb以及黄芪甲苷为对照，以三氯甲烷∶甲醇∶水＝10-50∶1-9∶0.5-5为展开剂的薄层色谱方法。

[0008] 人参和黄芪的鉴别方法还可以是以人参皂苷Re、Rg1、Rb以及黄芪甲苷为对照，以三氯甲烷∶醋酸乙酯∶甲醇∶水＝1-10∶2-15∶1-10∶1-10为展开剂的薄层色谱方法。

[0009] 鉴别方法包括以下项目的部分或全部：

[0010] (1)分别取冻干粉针加注射用水使溶解、或取输液浓缩、或直接取水针剂，加乙醇搅匀，滤过，沉淀物用乙醇洗涤1-5次，将沉淀物用蒸馏水溶解，取0.5-3ml置试管中，微热后加入2-10％α-萘酚乙醇溶液，摇匀，再沿管壁缓缓加入浓硫酸，在二液面接界处显紫红色环；

[0011] (2)方法一：分别取冻干粉针加注射用水使溶解、或取输液浓缩、或直接取水针剂，置分液漏斗中，用三氯甲烷振摇提取，弃去三氯甲烷液，水层用水饱和正丁醇提取1-4次，合并正丁醇液，用氨试液洗涤1-4次，弃去氨试液，正丁醇液于水浴上蒸干，残渣加甲醇使溶解，作为供试品溶液。另取人参皂苷Re、Rg1、Rb1及黄芪甲苷对照品，加甲醇溶解，作为对照品溶液；照中国药典2005年版一部附录薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷∶甲醇∶水＝10-50∶1-9∶0.5-5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，加热，放置后再置紫外光灯200-500nm下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

[0012] 方法二：分别取冻干粉针加注射用水使溶解、或取输液浓缩、或直接取水针剂，置分液漏斗中，用水饱和的正丁醇提取1-4次，合并提取液，置水浴上蒸干，残渣用蒸馏水溶解，加入预先制备好的DA-201树脂柱上，用水洗涤，再用20-80％甲醇液洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇使溶解，作为供试品溶液；另取人参皂苷Re、Rg1、Rb及黄芪甲苷对照品，加甲醇溶解，作为对照品溶液；照中国药典2005年版一部附录薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿∶醋酸乙酯∶甲醇∶水＝1-10∶2-15∶1-10∶1-10，10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以
10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热数分钟，置紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

[0013] 具体的鉴别方法包括以下项目的部分或全部：

[0014] (1)取冻干粉针400-1000mg加注射用水5-20ml使溶解、或取输液200-500ml浓缩至5-20ml、或取水针剂20-100ml浓缩至5-20ml；分别取上述药品，加乙醇20-100ml，搅匀，滤过，沉淀物用乙醇洗涤1-4次，将沉淀物用蒸馏水2-10ml溶解，取0.5-3ml置试管中，微热后加入2-10％α-萘酚乙醇溶液2-10滴，摇匀，再沿管壁缓缓加入浓硫酸0.2-2ml，在二液面接界处显紫红色环；

[0015] (2)方法一：取冻干粉针400-1000mg加注射用水20-100ml使溶解、或取输液200-500ml浓缩至20-100ml、或取水针剂20-100ml；置分液漏斗中，用10-50ml三氯甲烷振摇提取，弃去三氯甲烷液，水层用水饱和正丁醇提取1-4次，每次40-60ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤1-4次，每次10-50ml，弃去氨试液，正丁醇液于水浴上蒸干，残渣加甲醇
0.5-3ml使溶解，作为供试品溶液；另取人参皂苷Re、Rg1、Rb1及黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml各含0.5-3mg的混合溶液，作为对照品溶液；照中国药典2005年版一部附录薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各3-20μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，厚500μm及
500μm以上；以三氯甲烷∶甲醇∶水＝10-50∶1-9∶0.5-5为展开剂，在必要时控制湿度，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热数分钟，放置1小时以上后再置紫外光灯200-500nm下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

[0016] 方法二：取冻干粉针400-1000mg加注射用水20-100ml使溶解、或取输液200-500ml浓缩至20-100ml、或取水针剂20-100ml；置分液漏斗中，用水饱和的正丁醇提取
1-4次，每次10-60ml，合并提取液，置水浴上蒸干，残渣用蒸馏水1-10ml溶解，加入预先制备好的DA-201树脂柱上，内径0.5～2cm，长10-20cm，填充10-15cm的DA-201树脂后，再填充1-5g中性氧化铝；用水50-200ml洗涤，再用20-80％甲醇液洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇0.5-5ml使溶解，作为供试品溶液；另取人参皂苷Re、Rg1、Rb及黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml各含0.5-3mg的混合溶液，作为对照品溶液；照中国药典2005年版一部附录薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各3-20μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿∶醋酸乙酯∶甲醇∶水＝1-10∶2-15∶1-10∶1-10，10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热数分钟，置紫外光灯200-500nm下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

[0017] 制剂中人参皂苷Re的含量测定方法是以人参皂苷Re对照品为对照的分光光度法。

[0018] 制剂中斑蝥素的含量测定方法是以斑蝥素对照品为对照，以OV-17为固定液的气相色谱法。

[0019] 含量测定方法包括：

[0020] (1)人参皂苷Re

[0021] 对照品溶液的制备：精密称取人参皂苷Re对照品，加甲醇溶解，摇匀，即得；

[0022] 标准曲线的制备：精密量取对照品溶液0、20、40、60、80、100μl，分别置10ml具塞试管中，置水浴上挥去溶剂，立即取出，放冷，加2-10％香草醛冰醋酸溶液、高氯酸，摇匀，置水浴中加热，取出，用水冷却，加冰醋酸，摇匀，照中国药典分光光度法，测定吸收度，以吸收度为纵坐标、浓度为横坐标，绘制标准曲线；

[0023] 供试品溶液的制备：分别取冻干粉针加注射用水使溶解、或取输液浓缩、或直接取水针剂，置分液漏斗中，用氯仿提取1-5次，合并氯仿提取液，用蒸馏水洗涤1-4次，弃去氯仿液，洗液与上述水层合并，置分液漏斗中，用水饱和的正丁醇提取1-5次，合并正丁醇提取液，加入无水硫酸钠，搅拌，放至澄清，将正丁醇液移至蒸发皿中，用少量正丁醇洗涤无水硫酸钠，洗液并入蒸发皿中，蒸干，用少量蒸馏水溶解残渣，加到大孔吸附树脂DA-201柱上，待液面接近棉花层后，用蒸馏水洗脱，弃去洗液，用40-90％乙醇洗脱，收集洗脱液于蒸发皿中，置水浴上蒸干，用甲醇溶解残渣，移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得；

[0024] 测定法：精密量取供试品溶液100μl，照标准曲线的制备项下的方法，自“置10ml具塞试管中”起依法测定吸收度。从标准曲线上读出供试品溶液中人参皂苷Re的重量μg，计算；该注射制剂中，冻干粉针剂中含人参以人参皂苷Re计，不得少于1％；输液剂中含人参以人参皂苷Re计，不得少于0.01mg/ml；水针剂中含人参以人参皂苷Re计，不得少于0.1mg/ml。

[0025] (2)斑蝥素

[0026] 方法一：照中国药典气相色谱法测定。

[0027] 色谱条件与系统适用性试验：玻璃色谱柱1-2m×3mm id，以OV-17为固定液，OV-17由50％甲基、50％苯基聚硅氧烷组成，涂渍量为0.5-3％，担体Shimalite W(AW-DMCS)60-120目。柱温为160±10℃；理论板数按斑蝥素峰计算，应不低于1500；

[0028] 对照品溶液的制备：取斑蝥素对照品，精密称定，加氯仿溶解，摇匀，作为对照品溶液；

[0029] 供试品溶液的制备：分别取冻干粉针加注射用水使溶解、或取输液浓缩、或直接取水针剂，加入1-3mol/L硫酸溶液，再精密加入氯仿，振摇提取，静置分层，必要时离心，取下层液即得；

[0030] 测定法：分别精密量取对照品溶液和供试品溶液，注入气相色谱仪，计算；该注射制剂中，冻干粉针剂中含斑蝥素为0.0005％-0.05％；输液剂中含斑蝥素为
0.00001-0.001mg/ml；水针剂中含斑蝥素为0.0001-0.005mg/ml。

[0031] 方法二：照中国药典气相色谱法测定。

[0032] 色谱条件与系统适用性试验：以聚乙二醇20M及甲基硅橡胶SE-30为固定液，涂布浓度分别为5-20％和1-10％，0.5-2∶0.5-2混合装柱。柱温为180±10℃；理论板数按斑蝥素峰计算，应不低于1500。

[0033] 对照品溶液的制备：取斑蝥素对照品，精密称定，加氯仿溶解，作为对照品溶液。

[0034] 供试品溶液的制备：分别取冻干粉针加注射用水使溶解、或取输液浓缩、或直接取水针剂，加入1-3mol/L硫酸溶液，用氯仿振摇提取1-5次，合并氯仿液，用K-D浓缩器浓缩定容，即得。

[0035] 测定法分别精密量取对照品溶液和供试品溶液，注入气相色谱仪，计算，即得；该注射制剂中，冻干粉针剂中含斑蝥素为0.0005％-0.05％；输液剂中含斑蝥素为0.00001-0.001mg/ml；水针剂中含斑蝥素为0.0001-0.005mg/ml。

[0036] 更具体的含量测定方法包括：

[0037] (1)人参皂苷Re

[0038] 对照品溶液的制备：精密称取人参皂苷Re对照品，置量瓶中，加甲醇溶解使每1ml中含人参皂苷Re 1-2mg，摇匀，即得；

[0039] 标准曲线的制备：精密量取对照品溶液0、20、40、60、80、100μl，分别置10ml具塞试管中，置水浴上挥去溶剂，立即取出，放冷，加2-10％香草醛冰醋酸溶液0.05-1ml、高氯酸0.5-1.5ml，摇匀，置40-80℃水浴中加热8-25分钟，取出，用水冷却1-3分钟，加冰醋酸2-10ml，摇匀，照中国药典分光光度法，在400-700nm波长处测定吸收度，以吸收度为纵坐标、浓度为横坐标，绘制标准曲线；

[0040] 供试品溶液的制备：取冻干粉针200-400mg加注射用水10-30ml使溶解、或取输液50-200ml浓缩至10-30ml、或取水针剂10-30ml；分别精密量取上述药品，置分液漏斗中，用氯仿提取1-5次，每次10-30ml，合并氯仿提取液，用蒸馏水洗涤1-4次，每次2-10ml，弃去氯仿液，洗液与上述水层合并，置分液漏斗中，用水饱和的正丁醇提取1-5次，每次40-60ml，合并正丁醇提取液，加入无水硫酸钠1-5g，搅拌，放至澄清，将正丁醇液移至蒸发皿中，用少量正丁醇洗涤无水硫酸钠，洗液并入蒸发皿中，蒸干，用少量蒸馏水溶解残渣，加到大孔吸附树脂DA-201柱上，待液面接近棉花层后，用蒸馏水100ml洗脱，控制流速为
0.3-0.6ml/min，弃去洗液，用40-90％乙醇70-100ml洗脱，收集洗脱液于蒸发皿中，置水浴上蒸干，用甲醇溶解残渣，移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得；

[0041] 测定法：精密量取供试品溶液100μl，照标准曲线的制备项下的方法，自“置10ml具塞试管中”起依法测定吸收度。从标准曲线上读出供试品溶液中人参皂苷Re的重量μg，计算；该注射制剂中，冻干粉针剂中含人参以人参皂苷Re计，不得少于1％；输液剂中含人参以人参皂苷Re计，不得少于0.01mg/ml；水针剂中含人参以人参皂苷Re计，不得少于0.1mg/ml。

[0042] (2)斑蝥素

[0043] 方法一：照中国药典气相色谱法测定。

[0044] 色谱条件与系统适用性试验：玻璃色谱柱1-2m×3mm id，以OV-17为固定液，OV-17由50％甲基、50％苯基聚硅氧烷组成，涂渍量为0.5-3％，担体Shimalite W(AW-DMCS)60-120目。柱温为160±10℃；理论板数按斑蝥素峰计算，应不低于1500；

[0045] 对照品溶液的制备：取斑蝥素对照品，精密称定，加氯仿制成每1ml含0.005-0.02mg的溶液，作为对照品溶液；

[0046] 供试品溶液的制备：取冻干粉针30-100g加注射用水5-20ml使溶解、或取输液30-100ml浓缩至约5-20ml、或取水针剂5-20ml；分别精密量取上述药品，加入1-3mol/L硫酸溶液0.5-2ml，再精密加入0.5-2ml氯仿，振摇提取，静置分层，必要时离心，取下层液即得；

[0047] 测定法：分别精密量取对照品溶液和供试品溶液各2-12μl，注入气相色谱仪，计算；该注射制剂中，冻干粉针剂中含斑蝥素为0.0005％-0.05％；输液剂中含斑蝥素为0.00001-0.001mg/ml；水针剂中含斑蝥素为0.0001-0.005mg/ml。

[0048] 方法二：照中国药典气相色谱法测定。

[0049] 色谱条件与系统适用性试验：以聚乙二醇20M及甲基硅橡胶SE-30为固定液，涂布浓度分别为5-20％和1-10％，0.5-2∶0.5-2混合装柱。柱温为180±10℃；理论板数按斑蝥素峰计算，应不低于1500。

[0050] 对照品溶液的制备：取斑蝥素对照品，精密称定，加氯仿制成每1ml含0.05-0.2mg的溶液，作为对照品溶液。

[0051] 供试品溶液的制备：取冻干粉针400-1000mg加注射用水20-100ml使溶解、或取输液200-500ml浓缩至20-100ml、或取水针剂20-100ml，加入1-3mol/L硫酸溶液2-10ml，用氯仿振摇提取1-5次，每次10-100ml，合并氯仿液，用K-D浓缩器浓缩定容至2-8ml，即得。

[0052] 测定法分别精密量取对照品溶液和供试品溶液，注入气相色谱仪，计算，即得；该注射制剂中，冻干粉针剂中含斑蝥素为0.0005％-0.05％；输液剂中含斑蝥素为0.00001-0.001mg/ml；水针剂中含斑蝥素为0.0001-0.005mg/ml。

[0053] 检查项目包括以下项目的部分或全部：

[0054] PH值：应为3.0-6.5；

[0055] 重金属：取冻干粉针20-40mg加注射用水2ml使溶解、或取输液8-20ml浓缩至2ml、或取水针剂2ml；置坩埚中，水浴上蒸干，照中国药典重金属检查法检查，含重金属不得过百万分之五；

[0056] 热原：取冻干粉针300-600mg加注射用水30ml使溶解、或取输液100-300ml浓缩至30ml、或取水针剂30ml；用氯化钠注射液或5～10％葡萄糖注射液稀释至100ml，按家兔体重1Kg注射10ml的剂量，照中国药典热原检查法检查，应符合规定；

[0057] 蛋白质：取冻干粉针10-20mg加注射用水1ml使溶解、或取输液4-10ml浓缩至1ml、或取水针剂1ml；加新配制的30％磺基水杨酸溶液1ml，混匀，放置5分钟，不得出现浑浊；

[0058] 鞣质：取冻干粉针10-20mg加注射用水1ml使溶解、或取输液4-10ml浓缩至1ml、或取水针剂1ml；加新配制的含1％鸡蛋清的生理氯化钠溶液5ml，必要时，用0.45um微孔滤膜滤过，放置10分钟，不得出现浑浊或沉淀；

[0059] 树脂：取冻干粉针50-100mg加注射用水5ml使溶解、或取输液20-50ml浓缩至5ml、或取水针剂5ml；加盐酸1滴，放置30分钟，不得出现沉淀；

[0060] 草酸盐：取冻干粉针20-40mg加注射用水2ml使溶解、或取输液8-20ml浓缩至2ml、或取水针剂2ml；用稀盐酸调节PH值至1-2，滤过，滤液调节PH值至5-6，加3％氯化钙溶液2-3滴，放置10分钟，不得出现浑浊或沉淀；

[0061] 钾离子：取冻干粉针20-40mg加注射用水2ml使溶解、或取输液8-20ml浓缩至2ml、或取水针剂2ml；蒸干，按照中国药典钾离子测定法测定，应符合规定；

[0062] 砷盐：取冻干粉针10-20mg加注射用水1ml使溶解、或取输液4-10ml浓缩至1ml、或取水针剂1ml；精密量取，于坩埚中蒸干，加2％的硝酸镁乙醇溶液3ml，点燃，燃尽后，先用小火炽灼使炭化，再在500-600℃炽灼至完全灰化，放冷，加盐酸5ml与水21ml使溶解，照中国药典砷盐检查法检查；每1ml成品中含砷量不得过百万分之二；

[0063] 溶血与凝聚：2％红细胞混悬液的制备 取兔血或羊血数毫升，放入盛有玻璃珠的锥形瓶中，振摇10分钟，除去纤维蛋白原，使成脱纤血，加约10倍量的生理氯化钠溶液洗涤2-3次，至上清液不显红色为止，将所得红细胞用生理氯化钠溶液配成2％的混悬液，即得；

[0064] 供试品溶液的制备：取冻干粉针100-200mg加注射用水10ml使溶解、或取输液40-100ml浓缩至10ml、或取水针剂10ml；加生理氯化钠溶液稀释成50ml，混匀，即得；

[0065] 试验方法：取试管6支，按下表中配比量依次加入2％红细胞混悬液和生理氯化钠溶液，混匀后，于37℃恒温箱中放置30分钟，分别加入不同量的供试品溶液，第6管为对照管，摇匀后，置37℃±0.5℃恒温箱中，开始每隔15分钟观察一次，1小时后，每隔1小时观察一次，共观察3小时；

[0066]

[0067] 按上法检查，以第3管为准，本品在3小时内不得出现溶血和红细胞凝聚；

[0068] 异常毒性：取冻干粉针加注射用水使溶解、或取输液、或取水针剂；按小鼠每只0.5ml，照中国药典异常毒性检查法检查；

[0069] 过敏物质检查：取冻干粉针加注射用水使溶解、或取输液、或取水针剂；以原药浓度，按豚鼠致敏剂量为0.5ml/只，激发剂量为1.0ml/只；照中国药典过敏物质检查法检查，应符合规定；

[0070] 升压物质检查：取冻干粉针加注射用水使溶解、或取输液、或取水针剂；以原药浓度，按大鼠体重1kg注射10ml的剂量，照中国药典升压物质检查法检查，应符合规定；

[0071] 降压物质检查：取冻干粉针加注射用水使溶解、或取输液、或取水针剂；以原药浓度，按猫体重1kg注射1ml的剂量，照中国药典降压物质检查法检查，应符合规定；

[0072] 其他：应符合中国药典注射剂项下有关的各项规定；

[0073] 本发明所述质量控制方法为：

[0074] 性状：对于冻干粉针剂，产品为浅黄色至浅棕色的疏松块状物；

[0075] 对于输液剂，产品为浅黄色至浅棕色的澄明液体；

[0076] 对于水针剂，产品为浅黄色至浅棕色的澄明液体；

[0077] 鉴别：

[0078] (1)分别取冻干粉针加注射用水使溶解、或取输液浓缩、或直接取水针剂，加乙醇搅匀，滤过，沉淀物用乙醇洗涤1-5次，将沉淀物用蒸馏水溶解，取0.5-3ml置试管中，微热后加入2-10％α-萘酚乙醇溶液，摇匀，再沿管壁缓缓加入浓硫酸，在二液面接界处显紫红色环；

[0079] (2)分别取冻干粉针加注射用水使溶解、或取输液浓缩、或直接取水针剂，置分液漏斗中，用三氯甲烷振摇提取，弃去三氯甲烷液，水层用水饱和正丁醇提取1-4次，合并正丁醇液，用氨试液洗涤1-4次，弃去氨试液，正丁醇液于水浴上蒸干，残渣加甲醇使溶解，作为供试品溶液；另取人参皂苷Re、Rg1、Rb1及黄芪甲苷对照品，加甲醇溶解，作为对照品溶液；照中国药典2005年版一部附录薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷∶甲醇∶水＝10-50∶1-9∶0.5-5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，加热，放置后再置紫外光灯200-500nm下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

[0080] 检查：

[0081] pH值：应为3.0-6.5；

[0082] 重金属：取冻干粉针20-40mg加注射用水2ml使溶解、或取输液8-20ml浓缩至2ml、或取水针剂2ml；置坩埚中，水浴上蒸干，照中国药典重金属检查法检查，含重金属不得过百万分之五；

[0083] 热原：取冻干粉针300-600mg加注射用水30ml使溶解、或取输液100-300ml浓缩至30ml、或取水针剂30ml；用氯化钠注射液或5～10％葡萄糖注射液稀释至100ml，按家兔体重1kg注射10ml的剂量，照中国药典热原检查法检查，应符合规定；

[0084] 其他：应符合中国药典注射剂项下有关的各项规定；

[0085] 含量测定：

[0086] (1)人参皂苷Re

[0087] 对照品溶液的制备：精密称取人参皂苷Re对照品，加甲醇溶解，摇匀，即得；

[0088] 标准曲线的制备：精密量取对照品溶液0、20、40、60、80、100μl，分别置10ml具塞试管中，置水浴上挥去溶剂，立即取出，放冷，加2-10％香草醛冰醋酸溶液、高氯酸，摇匀，置水浴中加热，取出，用水冷却，加冰醋酸，摇匀，照中国药典分光光度法，测定吸收度，以吸收度为纵坐标、浓度为横坐标，绘制标准曲线；

[0089] 供试品溶液的制备：分别取冻干粉针加注射用水使溶解、或取输液浓缩、或直接取水针剂，置分液漏斗中，用氯仿提取1-5次，合并氯仿提取液，用蒸馏水洗涤1-4次，弃去氯仿液，洗液与上述水层合并，置分液漏斗中，用水饱和的正丁醇提取1-5次，合并正丁醇提取液，加入无水硫酸钠，搅拌，放至澄清，将正丁醇液移至蒸发皿中，用少量正丁醇洗涤无水硫酸钠，洗液并入蒸发皿中，蒸干，用少量蒸馏水溶解残渣，加到大孔吸附树脂DA-201柱上，待液面接近棉花层后，用蒸馏水洗脱，弃去洗液，用40-90％乙醇洗脱，收集洗脱液于蒸发皿中，置水浴上蒸干，用甲醇溶解残渣，移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得；

[0090] 测定法：精密量取供试品溶液100μl，照标准曲线的制备项下的方法，自“置10ml具塞试管中”起依法测定吸收度；从标准曲线上读出供试品溶液中人参皂苷Re的重量μg，计算；该注射制剂中，冻干粉针剂中含人参以人参皂苷Re计，不得少于1％；输液剂中含人参以人参皂苷Re计，不得少于0.01mg/ml；水针剂中含人参以人参皂苷Re计，不得少于0.1mg/ml；

[0091] (2)斑蝥素 照中国药典气相色谱法测定；

[0092] 色谱条件与系统适用性试验：以聚乙二醇20M及甲基硅橡胶SE-30为固定液，涂布浓度分别为5-20％和1-10％，0.5-2∶0.5-2混合装柱；柱温为180±10℃；理论板数按斑蝥素峰计算，应不低于1500；

[0093] 对照品溶液的制备：取斑蝥素对照品，精密称定，加氯仿溶解，作为对照品溶液；

[0094] 供试品溶液的制备：分别取冻干粉针加注射用水使溶解、或取输液浓缩、或直接取水针剂，加入1-3mol/L硫酸溶液，用氯仿振摇提取1-5次，合并氯仿液，用K-D浓缩器浓缩定容，即得；

[0095] 测定法：分别精密量取对照品溶液和供试品溶液，注入气相色谱仪，计算，即得；该注射制剂中，冻干粉针剂中含斑蝥素为0.0005％-0.05％；输液剂中含斑蝥素为0.00001-0.001mg/ml；水针剂中含斑蝥素为0.0001-0.005mg/ml。

[0096] 具体的质量控制方法为：

[0097] 性状：对于冻干粉针剂，产品为浅黄色至浅棕色的疏松块状物；

[0098] 对于输液剂，产品为浅黄色至浅棕色的澄明液体；

[0099] 对于水针剂，产品为浅黄色至浅棕色的澄明液体；

[0100] 鉴别：

[0101] (1)取冻干粉针400-1000mg加注射用水5-20ml使溶解、或取输液200-500ml浓缩至5-20ml、或取水针剂20-100ml浓缩至5-20ml；分别取上述药品，加乙醇20-100ml，搅匀，滤过，沉淀物用乙醇洗涤1-4次，将沉淀物用蒸馏水2-10ml溶解，取0.5-3ml置试管中，微热后加入2-10％α-萘酚乙醇溶液2-10滴，摇匀，再沿管壁缓缓加入浓硫酸0.2-2ml，在二液面接界处显紫红色环；

[0102] (2)取冻干粉针400-1000mg加注射用水20-100ml使溶解、或取输液200-500ml浓缩至20-100ml、或取水针剂20-100ml；置分液漏斗中，用10-50ml三氯甲烷振摇提取，弃去三氯甲烷液，水层用水饱和正丁醇提取1-4次，每次40-60ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤1-4次，每次10-50ml，弃去氨试液，正丁醇液于水浴上蒸干，残渣加甲醇0.5-3ml使溶解，作为供试品溶液；另取人参皂苷Re、Rg1、Rb1及黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml各含0.5-3mg的混合溶液，作为对照品溶液；照中国药典2005年版一部附录薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各3-20μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，厚500μm及500μm以上；以三氯甲烷∶甲醇∶水＝10-50∶1-9∶0.5-5为展开剂，在必要时控制湿度，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热数分钟，放置1小时以上后再置紫外光灯200-500nm下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

[0103] 检查：

[0104] pH值：应为3.0-6.5；

[0105] 重金属：取冻干粉针20-40mg加注射用水2ml使溶解、或取输液8-20ml浓缩至2ml、或取水针剂2ml；置坩埚中，水浴上蒸干，照中国药典重金属检查法检查，含重金属不得过百万分之五；

[0106] 热原：取冻干粉针300-600mg加注射用水30ml使溶解、或取输液100-300ml浓缩至30ml、或取水针剂30ml；用氯化钠注射液或5～10％葡萄糖注射液稀释至100ml，按家兔体重1kg注射10ml的剂量，照中国药典热原检查法检查，应符合规定；

[0107] 其他：应符合中国药典注射剂项下有关的各项规定；

[0108] 含量测定：

[0109] (1)人参皂苷Re

[0110] 对照品溶液的制备：精密称取人参皂苷Re对照品，置量瓶中，加甲醇溶解使每1ml中含人参皂苷Re 1-2mg，摇匀，即得；

[0111] 标准曲线的制备：精密量取对照品溶液0、20、40、60、80、100μl，分别置10ml具塞试管中，置水浴上挥去溶剂，立即取出，放冷，加2-10％香草醛冰醋酸溶液0.05-1ml、高氯酸0.5-1.5ml，摇匀，置40-80℃水浴中加热8-25分钟，取出，用水冷却1-3分钟，加冰醋酸2-10ml，摇匀，照中国药典分光光度法，在400-700nm波长处测定吸收度，以吸收度为纵坐标、浓度为横坐标，绘制标准曲线；

[0112] 供试品溶液的制备：取冻干粉针200-400mg加注射用水10-30ml使溶解、或取输液50-200ml浓缩至10-30ml、或取水针剂10-30ml；分别精密量取上述药品，置分液漏斗中，用氯仿提取1-5次，每次10-30ml，合并氯仿提取液，用蒸馏水洗涤1-4次，每次2-10ml，弃去氯仿液，洗液与上述水层合并，置分液漏斗中，用水饱和的正丁醇提取1-5次，每次40-60ml，合并正丁醇提取液，加入无水硫酸钠1-5g，搅拌，放至澄清，将正丁醇液移至蒸发皿中，用少量正丁醇洗涤无水硫酸钠，洗液并入蒸发皿中，蒸干，用少量蒸馏水溶解残渣，加到大孔吸附树脂DA-201柱上，待液面接近棉花层后，用蒸馏水100ml洗脱，控制流速为
0.3-0.6ml/min，弃去洗液，用40-90％乙醇70-100ml洗脱，收集洗脱液于蒸发皿中，置水浴上蒸干，用甲醇溶解残渣，移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得；

[0113] 测定法：精密量取供试品溶液100μl，照标准曲线的制备项下的方法，自“置10ml具塞试管中”起依法测定吸收度；从标准曲线上读出供试品溶液中人参皂苷Re的重量μg，计算；该注射制剂中，冻干粉针剂中含人参以人参皂苷Re计，不得少于1％；输液剂中含人参以人参皂苷Re计，不得少于0.01mg/ml；水针剂中含人参以人参皂苷Re计，不得少于0.1mg/ml；

[0114] (2)斑蝥素 照中国药典气相色谱法测定；

[0115] 色谱条件与系统适用性试验：以聚乙二醇20M及甲基硅橡胶SE-30为固定液，涂布浓度分别为5-20％和1-10％，0.5-2∶0.5-2混合装柱；柱温为180±10℃；理论板数按斑蝥素峰计算，应不低于1500；

[0116] 对照品溶液的制备：取斑蝥素对照品，精密称定，加氯仿制成每1ml含0.05-0.2mg的溶液，作为对照品溶液；

[0117] 供试品溶液的制备：取冻干粉针400-1000mg加注射用水20-100ml使溶解、或取输液200-500ml浓缩至20-100ml、或取水针剂20-100ml，加入1-3mol/L硫酸溶液2-10ml，用氯仿振摇提取1-5次，每次10-100ml，合并氯仿液，用K-D浓缩器浓缩定容至2-8ml，即得；

[0118] 测定法：分别精密量取对照品溶液和供试品溶液，注入气相色谱仪，计算，即得；该注射制剂中，冻干粉针剂中含斑蝥素为0.0005％-0.05％；输液剂中含斑蝥素为0.00001-0.001mg/ml；水针剂中含斑蝥素为0.0001-0.005mg/ml。

[0119] 本发明所述质量控制方法还可为：

[0120] 性状：对于冻干粉针剂，产品为浅黄色至浅棕色的疏松块状物；

[0121] 对于输液剂，产品为浅黄色至浅棕色的澄明液体；

[0122] 对于水针剂，产品为浅黄色至浅棕色的澄明液体；

[0123] 鉴别：

[0124] (1)分别取冻干粉针加注射用水使溶解、或取输液浓缩、或直接取水针剂，加乙醇搅匀，滤过，沉淀物用乙醇洗涤1-5次，将沉淀物用蒸馏水溶解，取0.5-3ml置试管中，微热后加入2-10％α-萘酚乙醇溶液，摇匀，再沿管壁缓缓加入浓硫酸，在二液面接界处显紫红色环；

[0125] (2)分别取冻干粉针加注射用水使溶解、或取输液浓缩、或直接取水针剂，置分液漏斗中，用水饱和的正丁醇提取1-4次，合并提取液，置水浴上蒸干，残渣用蒸馏水溶解，加入预先制备好的DA-201树脂柱上，用水洗涤，再用20-80％甲醇液洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇使溶解，作为供试品溶液；另取人参皂苷Re、Rg1、Rb及黄芪甲苷对照品，加甲醇溶解，作为对照品溶液；照中国药典2005年版一部附录薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿∶醋酸乙酯∶甲醇∶水＝1-10∶2-15∶1-10∶1-10，10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以
10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热数分钟，置紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

[0126] 检查：

[0127] PH值：应为3.0-6.5；

[0128] 重金属：取冻干粉针20-40mg加注射用水2ml使溶解、或取输液8-20ml浓缩至2ml、或取水针剂2ml；置坩埚中，水浴上蒸干，照中国药典重金属检查法检查，含重金属不得过百万分之五；

[0129] 热原：取冻干粉针300-600mg加注射用水30ml使溶解、或取输液100-300ml浓缩至30ml、或取水针剂30ml；用氯化钠注射液或5～10％葡萄糖注射液稀释至100ml，按家兔体重1Kg注射10ml的剂量，照中国药典热原检查法检查，应符合规定；

[0130] 蛋白质：取冻干粉针10-20mg加注射用水1ml使溶解、或取输液4-10ml浓缩至1ml、或取水针剂1ml；加新配制的30％磺基水杨酸溶液1ml，混匀，放置5分钟，不得出现浑浊；

[0131] 鞣质：取冻干粉针10-20mg加注射用水1ml使溶解、或取输液4-10ml浓缩至1ml、或取水针剂1ml；加新配制的含1％鸡蛋清的生理氯化钠溶液5ml，必要时，用0.45um微孔滤膜滤过，放置10分钟，不得出现浑浊或沉淀；

[0132] 树脂：取冻干粉针50-100mg加注射用水5ml使溶解、或取输液20-50ml浓缩至5ml、或取水针剂5ml；加盐酸1滴，放置30分钟，不得出现沉淀；

[0133] 草酸盐：取冻干粉针20-40mg加注射用水2ml使溶解、或取输液8-20ml浓缩至2ml、或取水针剂2ml；用稀盐酸调节PH值至1-2，滤过，滤液调节PH值至5-6，加3％氯化钙溶液2-3滴，放置10分钟，不得出现浑浊或沉淀；

[0134] 钾离子：取冻干粉针20-40mg加注射用水2ml使溶解、或取输液8-20ml浓缩至2ml、或取水针剂2ml；蒸干，按照中国药典钾离子测定法测定，应符合规定；

[0135] 砷盐：取冻干粉针10-20mg加注射用水1ml使溶解、或取输液4-10ml浓缩至1ml、或取水针剂1ml；精密量取，于坩埚中蒸干，加2％的硝酸镁乙醇溶液3ml，点燃，燃尽后，先用小火炽灼使炭化，再在500-600℃炽灼至完全灰化，放冷，加盐酸5ml与水21ml使溶解，照中国药典砷盐检查法检查；每1ml成品中含砷量不得过百万分之二；

[0136] 溶血与凝聚：2％红细胞混悬液的制备 取兔血或羊血数毫升，放入盛有玻璃珠的锥形瓶中，振摇10分钟，除去纤维蛋白原，使成脱纤血，加约10倍量的生理氯化钠溶液洗涤2-3次，至上清液不显红色为止，将所得红细胞用生理氯化钠溶液配成2％的混悬液，即得；

[0137] 供试品溶液的制备：取冻干粉针100-200mg加注射用水10ml使溶解、或取输液40-100ml浓缩至10ml、或取水针剂10ml；加生理氯化钠溶液稀释成50ml，混匀，即得；

[0138] 试验方法：取试管6支，按下表中配比量依次加入2％红细胞混悬液和生理氯化钠溶液，混匀后，于37℃恒温箱中放置30分钟，分别加入不同量的供试品溶液，第6管为对照管，摇匀后，置37℃±0.5℃恒温箱中，开始每隔15分钟观察一次，1小时后，每隔1小时观察一次，共观察3小时；

[0139]

[0140] 按上法检查，以第3管为准，本品在3小时内不得出现溶血和红细胞凝聚；

[0141] 异常毒性：取冻干粉针加注射用水使溶解、或取输液、或取水针剂；按小鼠每只0.5ml，照中国药典异常毒性检查法检查；

[0142] 过敏物质检查：取冻干粉针加注射用水使溶解、或取输液、或取水针剂；以原药浓度，按豚鼠致敏剂量为0.5ml/只，激发剂量为1.0ml/只；照中国药典过敏物质检查法检查，应符合规定；

[0143] 升压物质检查：取冻干粉针加注射用水使溶解、或取输液、或取水针剂；以原药浓度，按大鼠体重1kg注射10ml的剂量，照中国药典升压物质检查法检查，应符合规定；

[0144] 降压物质检查：取冻干粉针加注射用水使溶解、或取输液、或取水针剂；以原药浓度，按猫体重1kg注射1ml的剂量，照中国药典降压物质检查法检查，应符合规定；

[0145] 其他：应符合中国药典注射剂项下有关的各项规定；

[0146] 含量测定：

[0147] (1)人参皂苷Re

[0148] 对照品溶液的制备：精密称取人参皂苷Re对照品，加甲醇溶解，摇匀，即得；

[0149] 标准曲线的制备：精密量取对照品溶液0、20、40、60、80、100μl，分别置10ml具塞试管中，置水浴上挥去溶剂，立即取出，放冷，加2-10％香草醛冰醋酸溶液、高氯酸，摇匀，置水浴中加热，取出，用水冷却，加冰醋酸，摇匀，照中国药典分光光度法，测定吸收度，以吸收度为纵坐标、浓度为横坐标，绘制标准曲线；

[0150] 供试品溶液的制备：分别取冻干粉针加注射用水使溶解、或取输液浓缩、或直接取水针剂，置分液漏斗中，用氯仿提取1-5次，合并氯仿提取液，用蒸馏水洗涤1-4次，弃去氯仿液，洗液与上述水层合并，置分液漏斗中，用水饱和的正丁醇提取1-5次，合并正丁醇提取液，加入无水硫酸钠，搅拌，放至澄清，将正丁醇液移至蒸发皿中，用少量正丁醇洗涤无水硫酸钠，洗液并入蒸发皿中，蒸干，用少量蒸馏水溶解残渣，加到大孔吸附树脂DA-201柱上，待液面接近棉花层后，用蒸馏水洗脱，弃去洗液，用40-90％乙醇洗脱，收集洗脱液于蒸发皿中，置水浴上蒸干，用甲醇溶解残渣，移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得；

[0151] 测定法：精密量取供试品溶液100μl，照标准曲线的制备项下的方法，自“置10ml具塞试管中”起依法测定吸收度；从标准曲线上读出供试品溶液中人参皂苷Re的重量μg，计算；该注射制剂中，冻干粉针剂中含人参以人参皂苷Re计，不得少于1％；输液剂中含人参以人参皂苷Re计，不得少于0.01mg/ml；水针剂中含人参以人参皂苷Re计，不得少于0.1mg/ml；

[0152] (2)斑蝥素 照中国药典气相色谱法测定；

[0153] 色谱条件与系统适用性试验：以聚乙二醇20M及甲基硅橡胶SE-30为固定液，涂布浓度分别为5-20％和1-10％，0.5-2∶0.5-2混合装柱；柱温为180±10℃；理论板数按斑蝥素峰计算，应不低于1500；

[0154] 对照品溶液的制备：取斑蝥素对照品，精密称定，加氯仿溶解，作为对照品溶液；

[0155] 供试品溶液的制备：分别取冻干粉针加注射用水使溶解、或取输液浓缩、或直接取水针剂，加入1-3mol/L硫酸溶液，用氯仿振摇提取1-5次，合并氯仿液，用K-D浓缩器浓缩定容，即得；

[0156] 测定法分别精密量取对照品溶液和供试品溶液，注入气相色谱仪，计算，即得；该注射制剂中，冻干粉针剂中含斑蝥素为0.0005％-0.05％；输液剂中含斑蝥素为0.00001-0.001mg/ml；水针剂中含斑蝥素为0.0001-0.005mg/ml。

[0157] 具体的质量控制方法为：

[0158] 性状：对于冻干粉针剂，产品为浅黄色至浅棕色的疏松块状物；

[0159] 对于输液剂，产品为浅黄色至浅棕色的澄明液体；

[0160] 对于水针剂，产品为浅黄色至浅棕色的澄明液体；

[0161] 鉴别：

[0162] (1)取冻干粉针400-1000mg加注射用水5-20ml使溶解、或取输液200-500ml浓缩至5-20ml、或取水针剂20-100ml浓缩至5-20ml；分别取上述药品，加乙醇20-100ml，搅匀，滤过，沉淀物用乙醇洗涤1-4次，将沉淀物用蒸馏水2-10ml溶解，取0.5-3ml置试管中，微热后加入2-10％α-萘酚乙醇溶液2-10滴，摇匀，再沿管壁缓缓加入浓硫酸0.2-2ml，在二液面接界处显紫红色环；

[0163] (2)取冻干粉针400-1000mg加注射用水20-100ml使溶解、或取输液200-500ml浓缩至20-100ml、或取水针剂20-100ml；置分液漏斗中，用水饱和的正丁醇提取1-4次，每次10-60ml，合并提取液，置水浴上蒸干，残渣用蒸馏水1-10ml溶解，加入预先制备好的DA-201树脂柱上，内径0.5～2cm，长10-20cm，填充10-15cm的DA-201树脂后，再填充1-5g中性氧化铝；用水50-200ml洗涤，再用20-80％甲醇液洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇0.5-5ml使溶解，作为供试品溶液；另取人参皂苷Re、Rg1、Rb及黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml各含0.5-3mg的混合溶液，作为对照品溶液；照中国药典2005年版一部附录薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各3-20μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿∶醋酸乙酯∶甲醇∶水＝1-10∶2-15∶1-10∶1-10，10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热数分钟，置紫外光灯200-500nm下检视；
供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

[0164] 检查：

[0165] PH值：应为3.0-6.5；

[0166] 重金属：取冻干粉针20-40mg加注射用水2ml使溶解、或取输液8-20ml浓缩至2ml、或取水针剂2ml；置坩埚中，水浴上蒸干，照中国药典重金属检查法检查，含重金属不得过百万分之五；

[0167] 热原：取冻干粉针300-600mg加注射用水30ml使溶解、或取输液100-300ml浓缩至30ml、或取水针剂30ml；用氯化钠注射液或5～10％葡萄糖注射液稀释至100ml，按家兔体重1Kg注射10ml的剂量，照中国药典热原检查法检查，应符合规定；

[0168] 蛋白质：取冻干粉针10-20mg加注射用水1ml使溶解、或取输液4-10ml浓缩至1ml、或取水针剂1ml；加新配制的30％磺基水杨酸溶液1ml，混匀，放置5分钟，不得出现浑浊；

[0169] 鞣质：取冻干粉针10-20mg加注射用水1ml使溶解、或取输液4-10ml浓缩至1ml、或取水针剂1ml；加新配制的含1％鸡蛋清的生理氯化钠溶液5ml，必要时，用0.45um微孔滤膜滤过，放置10分钟，不得出现浑浊或沉淀；

[0170] 树脂：取冻干粉针50-100mg加注射用水5ml使溶解、或取输液20-50ml浓缩至5ml、或取水针剂5ml；加盐酸1滴，放置30分钟，不得出现沉淀；

[0171] 草酸盐：取冻干粉针20-40mg加注射用水2ml使溶解、或取输液8-20ml浓缩至2ml、或取水针剂2ml；用稀盐酸调节PH值至1-2，滤过，滤液调节PH值至5-6，加3％氯化钙溶液2-3滴，放置10分钟，不得出现浑浊或沉淀；

[0172] 钾离子：取冻干粉针20-40mg加注射用水2ml使溶解、或取输液8-20ml浓缩至2ml、或取水针剂2ml；蒸干，按照中国药典钾离子测定法测定，应符合规定；

[0173] 砷盐：取冻干粉针10-20mg加注射用水1ml使溶解、或取输液4-10ml浓缩至1ml、或取水针剂1ml；精密量取，于坩埚中蒸干，加2％的硝酸镁乙醇溶液3ml，点燃，燃尽后，先用小火炽灼使炭化，再在500-600℃炽灼至完全灰化，放冷，加盐酸5ml与水21ml使溶解，照中国药典砷盐检查法检查；每1ml成品中含砷量不得过百万分之二；

[0174] 溶血与凝聚：2％红细胞混悬液的制备取兔血或羊血数毫升，放入盛有玻璃珠的锥形瓶中，振摇10分钟，除去纤维蛋白原，使成脱纤血，加约10倍量的生理氯化钠溶液洗涤2-3次，至上清液不显红色为止，将所得红细胞用生理氯化钠溶液配成2％的混悬液，即得；

[0175] 供试品溶液的制备：取冻干粉针100-200mg加注射用水10ml使溶解、或取输液40-100ml浓缩至10ml、或取水针剂10ml；加生理氯化钠溶液稀释成50ml，混匀，即得；

[0176] 试验方法：取试管6支，按下表中配比量依次加入2％红细胞混悬液和生理氯化钠溶液，混匀后，于37℃恒温箱中放置30分钟，分别加入不同量的供试品溶液，第6管为对照管，摇匀后，置37℃±0.5℃恒温箱中，开始每隔15分钟观察一次，1小时后，每隔1小时观察一次，共观察3小时；

[0177]

[0178] 按上法检查，以第3管为准，本品在3小时内不得出现溶血和红细胞凝聚；

[0179] 异常毒性：取冻干粉针加注射用水使溶解、或取输液、或取水针剂；按小鼠每只0.5ml，照中国药典异常毒性检查法检查；

[0180] 过敏物质检查：取冻干粉针加注射用水使溶解、或取输液、或取水针剂；以原药浓度，按豚鼠致敏剂量为0.5ml/只，激发剂量为1.0ml/只；照中国药典过敏物质检查法检查，应符合规定；

[0181] 升压物质检查：取冻干粉针加注射用水使溶解、或取输液、或取水针剂；以原药浓度，按大鼠体重1kg注射10ml的剂量，照中国药典升压物质检查法检查，应符合规定；

[0182] 降压物质检查：取冻干粉针加注射用水使溶解、或取输液、或取水针剂；以原药浓度，按猫体重1kg注射1ml的剂量，照中国药典降压物质检查法检查，应符合规定；

[0183] 其他：应符合中国药典注射剂项下有关的各项规定；

[0184] 含量测定：

[0185] (1)人参皂苷Re

[0186] 对照品溶液的制备：精密称取人参皂苷Re对照品，置量瓶中，加甲醇溶解使每1ml中含人参皂苷Re 1-2mg，摇匀，即得；

[0187] 标准曲线的制备：精密量取对照品溶液0、20、40、60、80、100μl，分别置10ml具塞试管中，置水浴上挥去溶剂，立即取出，放冷，加2-10％香草醛冰醋酸溶液0.05-1ml、高氯酸0.5-1.5ml，摇匀，置40-80℃水浴中加热8-25分钟，取出，用水冷却1-3分钟，加冰醋酸2-10ml，摇匀，照中国药典分光光度法，在400-700nm波长处测定吸收度，以吸收度为纵坐标、浓度为横坐标，绘制标准曲线；

[0188] 供试品溶液的制备：取冻干粉针200-400mg加注射用水10-30ml使溶解、或取输液50-200ml浓缩至10-30ml、或取水针剂10-30ml；分别精密量取上述药品，置分液漏斗中，用氯仿提取1-5次，每次10-30ml，合并氯仿提取液，用蒸馏水洗涤1-4次，每次2-10ml，弃去氯仿液，洗液与上述水层合并，置分液漏斗中，用水饱和的正丁醇提取1-5次，每次40-60ml，合并正丁醇提取液，加入无水硫酸钠1-5g，搅拌，放至澄清，将正丁醇液移至蒸发皿中，用少量正丁醇洗涤无水硫酸钠，洗液并入蒸发皿中，蒸干，用少量蒸馏水溶解残渣，加到大孔吸附树脂DA-201柱上，待液面接近棉花层后，用蒸馏水100ml洗脱，控制流速为
0.3-0.6ml/min，弃去洗液，用40-90％乙醇70-100ml洗脱，收集洗脱液于蒸发皿中，置水浴上蒸干，用甲醇溶解残渣，移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得；

[0189] 测定法：精密量取供试品溶液100μl，照标准曲线的制备项下的方法，自“置10ml具塞试管中”起依法测定吸收度；从标准曲线上读出供试品溶液中人参皂苷Re的重量μg，计算；该注射制剂中，冻干粉针剂中含人参以人参皂苷Re计，不得少于1％；输液剂中含人参以人参皂苷Re计，不得少于0.01mg/ml；水针剂中含人参以人参皂苷Re计，不得少于0.1mg/ml；

[0190] (2)斑蝥素 照中国药典气相色谱法测定；

[0191] 色谱条件与系统适用性试验：以聚乙二醇20M及甲基硅橡胶SE-30为固定液，涂布浓度分别为5-20％和1-10％，0.5-2∶0.5-2混合装柱；柱温为180±10℃；理论板数按斑蝥素峰计算，应不低于1500；

[0192] 对照品溶液的制备：取斑蝥素对照品，精密称定，加氯仿制成每1ml含0.05-0.2mg的溶液，作为对照品溶液；

[0193] 供试品溶液的制备：取冻干粉针400-1000mg加注射用水20-100ml使溶解、或取输液200-500ml浓缩至20-100ml、或取水针剂20-100ml，加入1-3mol/L硫酸溶液2-10ml，用氯仿振摇提取1-5次，每次10-100ml，合并氯仿液，用K-D浓缩器浓缩定容至2-8ml，即得；

[0194] 测定法分别精密量取对照品溶液和供试品溶液，注入气相色谱仪，计算，即得；该注射制剂中，冻干粉针剂中含斑蝥素为0.0005％-0.05％；输液剂中含斑蝥素为0.00001-0.001mg/ml；水针剂中含斑蝥素为0.0001-0.005mg/ml。

[0195] 本发明所述质量控制方法还可为：

[0196] 性状：对于冻干粉针剂，产品为浅棕色的疏松块状物；

[0197] 对于输液剂，产品为浅棕色的澄明液体；

[0198] 对于水针剂，产品为浅棕色的澄明液体；

[0199] 鉴别：

[0200] (1)分别取冻干粉针加注射用水使溶解、或取输液浓缩、或直接取水针剂，加乙醇搅匀，滤过，沉淀物用乙醇洗涤1-5次，将沉淀物用蒸馏水溶解，取0.5-3ml置试管中，微热后加入2-10％α-萘酚乙醇溶液，摇匀，再沿管壁缓缓加入浓硫酸，在二液面接界处显紫红色环；

[0201] (2)分别取冻干粉针加注射用水使溶解、或取输液浓缩、或直接取水针剂，置分液漏斗中，用水饱和的正丁醇提取1-4次，合并提取液，置水浴上蒸干，残渣用蒸馏水溶解，加入预先制备好的DA-201树脂柱上，用水洗涤，再用20-80％甲醇液洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇使溶解，作为供试品溶液；另取人参皂苷Re、Rg1、Rb及黄芪甲苷对照品，加甲醇溶解，作为对照品溶液；照中国药典2005年版一部附录薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿∶醋酸乙酯∶甲醇∶水＝1-10∶2-15∶1-10∶1-10，10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以
10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热数分钟，置紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

[0202] 检查：

[0203] pH值：应为3.0-6.5；

[0204] 重金属：取冻干粉针20-40mg加注射用水2ml使溶解、或取输液8-20ml浓缩至2ml、或取水针剂2ml；置坩埚中，水浴上蒸干，照中国药典重金属检查法检查，含重金属不得过百万分之五；

[0205] 热原：取冻干粉针300-600mg加注射用水30ml使溶解、或取输液100-300ml浓缩至30ml、或取水针剂30ml；用氯化钠注射液或5～10％葡萄糖注射液稀释至100ml，按家兔体重1kg注射10ml的剂量，照中国药典热原检查法检查，应符合规定；

[0206] 其他：应符合中国药典注射剂项下有关的各项规定；

[0207] 含量测定：

[0208] (1)人参皂苷Re

[0209] 对照品溶液的制备：精密称取人参皂苷Re对照品，加甲醇溶解，摇匀，即得；

[0210] 标准曲线的制备：精密量取对照品溶液0、20、40、60、80、100μl，分别置10ml具塞试管中，置水浴上挥去溶剂，立即取出，放冷，加2-10％香草醛冰醋酸溶液、高氯酸，摇匀，置水浴中加热，取出，用水冷却，加冰醋酸，摇匀，照中国药典分光光度法，测定吸收度，以吸收度为纵坐标、浓度为横坐标，绘制标准曲线；

[0211] 供试品溶液的制备：分别取冻干粉针加注射用水使溶解、或取输液浓缩、或直接取水针剂，置分液漏斗中，用氯仿提取1-5次，合并氯仿提取液，用蒸馏水洗涤1-4次，弃去氯仿液，洗液与上述水层合并，置分液漏斗中，用水饱和的正丁醇提取1-5次，合并正丁醇提取液，加入无水硫酸钠，搅拌，放至澄清，将正丁醇液移至蒸发皿中，用少量正丁醇洗涤无水硫酸钠，洗液并入蒸发皿中，蒸干，用少量蒸馏水溶解残渣，加到大孔吸附树脂DA-201柱上，待液面接近棉花层后，用蒸馏水洗脱，弃去洗液，用40-90％乙醇洗脱，收集洗脱液于蒸发皿中，置水浴上蒸干，用甲醇溶解残渣，移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得；

[0212] 测定法：精密量取供试品溶液100μl，照标准曲线的制备项下的方法，自“置10ml具塞试管中”起依法测定吸收度；从标准曲线上读出供试品溶液中人参皂苷Re的重量μg，计算；该注射制剂中，冻干粉针剂中含人参以人参皂苷Re计，不得少于1％；输液剂中含人参以人参皂苷Re计，不得少于0.01mg/ml；水针剂中含人参以人参皂苷Re计，不得少于0.1mg/ml；

[0213] (2)斑蝥素 照中国药典气相色谱法测定；

[0214] 色谱条件与系统适用性试验：玻璃色谱柱1-2m×3mm id，以OV-17为固定液，OV-17由50％甲基、50％苯基聚硅氧烷组成，涂渍量为0.5-3％，担体Shimalite W(AW-DMCS)60-120目；柱温为160±10℃；理论板数按斑蝥素峰计算，应不低于1500；

[0215] 对照品溶液的制备：取斑蝥素对照品，精密称定，加氯仿溶解，摇匀，作为对照品溶液；

[0216] 供试品溶液的制备：分别取冻干粉针加注射用水使溶解、或取输液浓缩、或直接取水针剂，加入1-3mol/L硫酸溶液，再精密加入氯仿，振摇提取，静置分层，必要时离心，取下层液即得；

[0217] 测定法：分别精密量取对照品溶液和供试品溶液，注入气相色谱仪，计算；该注射制剂中，冻干粉针剂中含斑蝥素为0.0005％-0.05％；输液剂中含斑蝥素为
0.00001-0.001mg/ml；水针剂中含斑蝥素为0.0001-0.005mg/ml。

[0218] 具体的质量控制方法为：

[0219] 性状：对于冻干粉针剂，产品为浅棕色的疏松块状物；

[0220] 对于输液剂，产品为浅棕色的澄明液体；

[0221] 对于水针剂，产品为浅棕色的澄明液体；

[0222] 鉴别：

[0223] (1)取冻干粉针400-1000mg加注射用水5-20ml使溶解、或取输液200-500ml浓缩至5-20ml、或取水针剂20-100ml浓缩至5-20ml；分别取上述药品，加乙醇20-100ml，搅匀，滤过，沉淀物用乙醇洗涤1-4次，将沉淀物用蒸馏水2-10ml溶解，取0.5-3ml置试管中，微热后加入2-10％α-萘酚乙醇溶液2-10滴，摇匀，再沿管壁缓缓加入浓硫酸0.2-2ml，在二液面接界处显紫红色环；

[0224] (2)取冻干粉针400-1000mg加注射用水20-100ml使溶解、或取输液200-500ml浓缩至20-100ml、或取水针剂20-100ml；置分液漏斗中，用水饱和的正丁醇提取1-4次，每次10-60ml，合并提取液，置水浴上蒸干，残渣用蒸馏水1-10ml溶解，加入预先制备好的DA-201树脂柱上，内径0.5～2cm，长10-20cm，填充10-15cm的DA-201树脂后，再填充1-5g中性氧化铝；用水50-200ml洗涤，再用20-80％甲醇液洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇0.5-5ml使溶解，作为供试品溶液；另取人参皂苷Re、Rg1、Rb及黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml各含0.5-3mg的混合溶液，作为对照品溶液；照中国药典2005年版一部附录薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各3-20μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿∶醋酸乙酯∶甲醇∶水＝1-10∶2-15∶1-10∶1-10，10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热数分钟，置紫外光灯200-500nm下检视；
供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

[0225] 检查：

[0226] pH值：应为3.0-6.5；

[0227] 重金属：取冻干粉针20-40mg加注射用水2ml使溶解、或取输液8-20ml浓缩至2ml、或取水针剂2ml；置坩埚中，水浴上蒸干，照中国药典重金属检查法检查，含重金属不得过百万分之五；

[0228] 热原：取冻干粉针300-600mg加注射用水30ml使溶解、或取输液100-300ml浓缩至30ml、或取水针剂30ml；用氯化钠注射液或5～10％葡萄糖注射液稀释至100ml，按家兔体重1kg注射10ml的剂量，照中国药典热原检查法检查，应符合规定；

[0229] 其他：应符合中国药典注射剂项下有关的各项规定；

[0230] 含量测定：

[0231] (1)人参皂苷Re

[0232] 对照品溶液的制备：精密称取人参皂苷Re对照品，置量瓶中，加甲醇溶解使每1ml中含人参皂苷Re 1-2mg，摇匀，即得；

[0233] 标准曲线的制备：精密量取对照品溶液0、20、40、60、80、100μl，分别置10ml具塞试管中，置水浴上挥去溶剂，立即取出，放冷，加2-10％香草醛冰醋酸溶液0.05-1ml、高氯酸0.5-1.5ml，摇匀，置40-80℃水浴中加热8-25分钟，取出，用水冷却1-3分钟，加冰醋酸2-10ml，摇匀，照中国药典分光光度法，在400-700nm波长处测定吸收度，以吸收度为纵坐标、浓度为横坐标，绘制标准曲线；

[0234] 供试品溶液的制备：取冻干粉针200-400mg加注射用水10-30ml使溶解、或取输液50-200ml浓缩至10-30ml、或取水针剂10-30ml；分别精密量取上述药品，置分液漏斗中，用氯仿提取1-5次，每次10-30ml，合并氯仿提取液，用蒸馏水洗涤1-4次，每次2-10ml，弃去氯仿液，洗液与上述水层合并，置分液漏斗中，用水饱和的正丁醇提取1-5次，每次40-60ml，合并正丁醇提取液，加入无水硫酸钠1-5g，搅拌，放至澄清，将正丁醇液移至蒸发皿中，用少量正丁醇洗涤无水硫酸钠，洗液并入蒸发皿中，蒸干，用少量蒸馏水溶解残渣，加到大孔吸附树脂DA-201柱上，待液面接近棉花层后，用蒸馏水100ml洗脱，控制流速为
0.3-0.6ml/min，弃去洗液，用40-90％乙醇70-100ml洗脱，收集洗脱液于蒸发皿中，置水浴上蒸干，用甲醇溶解残渣，移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得；

[0235] 测定法：精密量取供试品溶液100μl，照标准曲线的制备项下的方法，自“置10ml具塞试管中”起依法测定吸收度；从标准曲线上读出供试品溶液中人参皂苷Re的重量μg，计算；该注射制剂中，冻干粉针剂中含人参以人参皂苷Re计，不得少于1％；输液剂中含人参以人参皂苷Re计，不得少于0.01mg/ml；水针剂中含人参以人参皂苷Re计，不得少于0.1mg/ml；

[0236] (2)斑蝥素照中国药典气相色谱法测定；

[0237] 色谱条件与系统适用性试验：玻璃色谱柱1-2m×3mm id，以OV-17为固定液，OV-17由50％甲基、50％苯基聚硅氧烷组成，涂渍量为0.5-3％，担体Shimalite W(AW-DMCS)60-120目；柱温为160±10℃；理论板数按斑蝥素峰计算，应不低于1500；

[0238] 对照品溶液的制备：取斑蝥素对照品适量，精密称定，加氯仿制成每1ml含0.005-0.02mg的溶液，作为对照品溶液；

[0239] 供试品溶液的制备：取冻干粉针30-100g加注射用水5-20ml使溶解、或取输液30-100ml浓缩至约5-20ml、或取水针剂5-20ml；分别精密量取上述药品，加入1-3mol/L硫酸溶液0.5-2ml，再精密加入0.5-2ml氯仿，振摇提取，静置分层，必要时离心，取下层液即得；

[0240] 测定法：分别精密量取对照品溶液和供试品溶液各2-12μl，注入气相色谱仪，计算；该注射制剂中，冻干粉针剂中含斑蝥素为0.0005％-0.05％；输液剂中含斑蝥素为0.00001-0.001mg/ml；水针剂中含斑蝥素为0.0001-0.005mg/ml。

[0241] 本发明质量控制方法是经过大量的筛选试验得到的最佳方案，以下实验研究为本发明的优选过程：

[0242] 一、斑蝥素含量测定方法研究

[0243] 斑蝥素为艾迪注射制剂中抗癌的有效成份，本发明斑蝥素含量测定方法二为原有标准中所用的方法，是用气相色谱法测定其含量，但其含量测定方法一直以来都受到限制，而且K-D浓缩器购买较为困难，这对测定该项目造成障碍，为了解决该问题，我们对斑蝥素含量测定的方法学进行了研究。

[0244] 1.仪器岛津GC-14C气相色谱仪，色谱柱：玻璃色谱柱1-2m×3mm id，OV-17(50％甲基50％苯基聚硅氧烷)固定液的涂渍量为0.5-3％，担体Shimalite W(AW-DMCS)60-120目；检测器：FID氢火焰离子化检测器，超纯氮气(80KPa)，氢气(60KPa)，空气(50KPa)；柱温：160℃，进样口温度：240℃，检测器温度：240℃，威玛珑工作站；微量进样器(10μl)。

[0245] 2.试药 硫酸、氯仿均为分析纯；供含量测定用斑蝥素对照品由中国药品生物制品检定所提供。

[0246] 3.色谱条件 玻璃色谱柱1-2m×3mm id，OV-17(50％甲基50％苯基聚硅氧烷)固定液的涂渍量为0.5-3％，担体Shimalite W(AW-DMCS)60～120目。柱温为160±10℃；理论板数按斑蝥素峰计，应不低于1500。

[0247] 因方法二中所用固定相色谱峰形不好，故将固定相改为OV-17(50％甲基50％苯基聚硅氧烷)固定液的涂渍量为0.5-3％，担体Shimalite W(AW-DMCS)60～120目。在照原标准的色谱条件进行检测后发现，样品在4.07min出峰，从获得的色谱图中可以看出，该主峰未落在基线处，前面还有一小峰未与之完全分离。通过试验，在把柱温降低到160℃时，样品分离度大于1.5，故将柱温改为160℃。

[0248] 4.系统适用性试验

[0249] 分别取斑蝥素对照品、供试品液、缺斑蝥素的阴性供试品液4μl注入气相色谱仪，斑蝥素对照品保留时间为8.33分钟，而阴性样品在8分钟时无吸收，样品在该时间分离度2.16，大于1.5，理论塔板数1904，故确定理论塔板数以斑蝥素峰计算，应不低于1500。

[0250] 5.对照品溶液的制备精密称取斑蝥素对照品适量，加氯仿制成每1ml含0.01mg的溶液，作为对照品溶液。

[0251] 6.供试品溶液的制备精密量取本品10ml，置具塞试管中，加入1.8mol/L硫酸溶液1ml，再精密加入1ml氯仿，密塞，振摇3分钟，静置分层，必要时离心，取下层液即得。

[0252] 7、精密度试验

[0253] 1)精密量取对照品溶液(C＝0.01088mg/ml)4ul，重复进样5次，结果见下表：

[0254]

[0255] 从结果可以看出，对照品重复进样5次，RSD％为1.4％，说明精密度良好。

[0256] 2)重复性试验：取同一批号药品，按供试品处理方法同时处理6份供试品，结果见下表：

[0257]

[0258] 从结果可以看出，6份重复性样品含量平均值为0.010945mg/支，RSD％为2.2％，说明该法重复性良好。

[0259] 8、稳定性试验

[0260] 取本制剂，按供试品处理方法处理成供试品液，结果见下表：

[0261]

[0262] 从结果可以看出，本品8小时内稳定性良好。

[0263] 9、准确度试验

[0264] 本品准确度试验按加样回收率计算：

[0265] 样品含量测定：精密量取本品水针剂10ml，共取2份，置具塞试管中，分别加入1.8mol/L硫酸溶液1ml，再分别精密加入1ml氯仿，密塞，振摇3分钟，静置分层，离心，取下层液即得。再分别精密量取对照品溶液和供试品溶液各4μl，注入气相色谱仪，计算，即得。

[0266] 对照品结果表：

[0267]浓度 峰面积1 峰面积2 平均值 RSD％
0.01088mg/ml 348618 344274 346446 0.9

[0268] 供试品结果表：

[0269]

[0270] 回收率测定：精密量取本品水针剂5ml，共取6份，置具塞试管中，分别加入1.8mol/L硫酸溶液1ml，再分别精密加入1ml斑蝥素对照品溶液(C＝0.01088mg/ml)，密塞，振摇3分钟，静置分层，离心，取下层液即得。再分别精密量取对照品溶液和供试品溶液各4μl，注入气相色谱仪，计算，即得。结果见下表：

[0271]

[0272] 从结果可以看出，平均回收率为100.4％，RSD％为1.0％，说明该方法回收率良好，准确度高。

[0273] 10.范围考察

[0274] 根据本发明制剂中斑蝥素的含量限度，其含量小于1％，考察的范围为±50％。取同一批样品，分别精密量取6份，两份5ml、两份10ml、两份15ml，按供试品处理方法处理成供试品液，结果见下表：

[0275]

[0276]

[0277] 从结果可以看出，6份样品斑蝥素含量测定平均值为0.01149mg/支，RSD为1.2％，说明范围试验良好。

[0278] 11.耐用性试验

[0279] 取本发明制剂，按供试品处理方法处理成供试品液，通过改变柱温和检测器温度，结果见下表：

[0280]

[0281] 从上表可以看出，柱温对保留时间影响较大，检测器温度对保留时间无影响，但改变柱温和检测器温度都能保证样品含量基本不变，说明该法耐用性良好。

[0282] 由上述方法研究结果可知，采用本发明所述斑蝥素的含量测定方法，准确度高，试验精密、稳定、耐用，方法重现性好，是艾迪制剂理想的含量测定方法。

[0283] 二、人参、黄芪薄层鉴别研究

[0284] 以人参皂苷Re、Rg1、Rb及黄芪甲苷对照品鉴别制剂中人参、黄芪药材：

[0285] 供试品溶液制备方法一：取药品，置分液漏斗中，用水饱和的正丁醇提取2次，合并提取液，置水浴上蒸干，残渣用蒸馏水溶解，加入预先制备好的DA-201树脂柱上，用水洗涤，再用40％甲醇液洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇使溶解，作为供试品溶液；同法制备缺人参、黄芪的阴性供试液。

[0286] 供试品溶液制备方法二：取药品，置分液漏斗中，用三氯甲烷振摇提取，弃去三氯甲烷液，水层用水饱和正丁醇提取2次，合并正丁醇液，用氨试液洗涤两次，弃去氨试液，正丁醇液于水浴上蒸干，残渣加甲醇使溶解，作为供试品溶液；同法制备缺人参、黄芪的阴性供试液。

[0287] 供试品溶液制备方法三：取药品，置分液漏斗中，用乙醚振摇提取，弃去乙醚液，水层用水饱和正丁醇提取2次，合并正丁醇液，用氨试液洗涤两次，弃去氨试液，正丁醇液于水浴上蒸干，残渣加甲醇使溶解，作为供试品溶液；同法制备缺人参、黄芪的阴性供试液。

[0288] 展开剂选择：分别以氯仿、醋酸乙酯、甲醇和水不同比例的混合溶液；环己烷、醋酸乙酯不同比例的混合溶液；三氯甲烷、甲醇和水不同比例的混合溶液；醋酸乙酯、丙酮、水不同比例的混合溶液为展开剂。

[0289] 研究发现，采用方法二制备供试品溶液，在水饱和正丁醇萃取的基础上经过了两次除杂过程，能有效除掉杂质，操作简单，省时省力；以三氯甲烷∶甲醇∶水为展开剂，一方面减少了一个组份醋酸乙酯，另一方面不需要在10℃以下放置，使操作简单化且使有效成份完全分开；使用厚度为500μm以上的薄层板，同时控制湿度，达到人参皂苷Rg1与黄芪甲苷有效分离的目的；原标准中显色后是直接置紫外光灯下检视，但经多次试验发现，薄层板在喷显色剂烘出斑点后，放置上一段时间(至少一小时)后再置紫外灯下检视，样品斑点更清晰。经过多次试验，采用本发明的薄层鉴别方法重现性好，专属性强，阴性无干扰。

[0290] 结果：采用方 法二制 备供试 品溶液，以三氯甲 烷∶甲 醇∶水 ＝10-50∶1-9∶0.5-5为展开剂，其分离度好，斑点显色清晰，阴性对照无干扰，方法重现性最好，最佳展开剂为：三氯甲烷∶甲醇∶水＝15∶6∶1。

[0291] 三、检查项下安全性指标的确定

[0292] 为配合国家提高中药注射剂质量标准的要求，同时也是为更好的控制这种艾迪注视制剂的质量，我们对艾迪注射制剂增加以下：蛋白质、鞣质、树脂、草酸盐、钾离子、砷盐、溶血与凝聚、过敏反应物质、降压物质、升压物质、异常毒性、渗透压等项目的检查。

[0293] 1.蛋白质的检查：照中国药典进行试验。

[0294] 方法1：取艾迪产品水针剂1ml，加新配制的30％磺基水杨酸溶液1ml，混匀，放置5分钟，观察结果；

[0295] 方法2：取艾迪产品水针剂1ml，加鞣酸试液1～3滴，观察结果。

[0296] 通过对10批样品采用以上两种方法进行试验，结果均未出现浑浊，故将方法1收入成品质量标准。

[0297] 2.鞣质的检查：照中国药典进行试验。

[0298] 方法1：取艾迪产品水针剂1ml，加新配制的含1％鸡蛋清的生理氯化钠溶液5ml〔必要时，用微孔滤膜(0.45um)滤过)〕，放置10分钟，观察结果。

[0299] 方法2：取艾迪产品水针剂1ml，加稀醋酸1滴，再加氯化钠明胶试液4～5滴，观察结果。

[0300] 通过对10批样品采用以上两种方法进行试验，结果均未出现浑浊或沉淀，故将方法1收入成品质量标准。

[0301] 3.树脂的检查：照中国药典进行试验。

[0302] 方法1：取艾迪产品水针剂5ml，加盐酸1滴，放置30分钟，观察结果。

[0303] 方法2：取艾迪产品水针剂5ml，加三氯甲烷10ml振摇提取，分取三氯甲烷液，置水浴上蒸干，残渣加冰醋酸2ml使溶解，置具塞试管中，加水3ml，混匀，放置30分钟，观察结果。

[0304] 通过对10批样品采用以上两种方法进行试验，结果均未出现沉淀，故将方法1收入成品质量标准。

[0305] 4.草酸盐的检查：照中国药典进行试验。取艾迪产品水针剂2ml，用稀盐酸调节pH值至1～2，滤过，滤液调节pH值至5～6，加3％氯化钙溶液2～3滴，放置10分钟，通过对10批样品进行试验，结果均未出现浑浊或沉淀，故将草酸盐的检查纳入成品质量标准。

[0306] 5.钾离子的检查：照中国药典进行试验。取艾迪产品水针剂2ml，蒸干，先用小火炽灼至炭化，再在500～600℃至完全灰化，加稀醋酸2ml使溶解，置25ml量瓶中，加水稀释至刻度，混匀，作为供试品溶液。取10ml纳氏比色管两只，甲管中精密加入标准钾离子溶液0.8ml，加碱性甲醛溶液0.6ml、3％乙二胺四醋酸二钠溶液2滴、3％四苯硼钠溶液0.5ml，加水稀释成10ml；乙管中精密加入供试品溶液1ml，与甲管同时依法操作，摇匀。甲、乙两管同置黑纸上，自上向下透视。通过对10批样品进行试验，结果供试品管浊度均浅于标准管，故将钾离子检查纳入成品质量标准。

[0307] 6.砷盐检查：艾迪注射制剂含有有机物对砷盐可能存在吸附、络合等作用影响检出，因此在实验中先加入硝酸镁乙醇溶液对本品进行有机破坏，照中国药典进行试验。根据“中药注射剂研究的技术要求”的“附件2：质量标准的内容及项目要求”砷盐的检查规定：“按《中国药典》现行版方法检查，暂定不得过百万分之二。”，而《中国药典》附录IX F砷盐检查法中关于标准砷斑的制备是：取用浓度为1ug/ml的标准砷溶液2ml。

[0308] 由此我们可以按下式计算样品的取样量为1ml：

[0309]

[0310] 具体操作方法为：取艾迪产品水针剂1ml于坩埚中，蒸干，加2％的硝酸镁乙醇溶液3ml，点燃，燃尽后，先用小火炽灼使炭化，再在500～600℃炽灼至完全灰化，放冷，加盐酸5ml与水21ml使溶解，再加碘化钾试液5ml与酸性氯化亚锡5滴，在室温放置10分钟，加锌粒2g照药典附录砷盐检查法第一法检查。用10个批号的成品按上法进行试验，均未出现砷斑。故将砷盐检查纳入成品质量标准。

[0311] 7.溶血与凝聚检查：人参萜三醇及齐墩果酸为苷元的人参皂苷具有显著的溶血作用，为提高药品的安全性，根据药典附录中药注射剂安全性检查法应用指导原则对艾迪注射制剂做溶血与凝聚检查。取试管6支，按下表中配比量依次加入2％红细胞混悬液和生理氯化钠溶液，混匀后，于37℃恒温箱中放置30分钟，分别加入不同量的供试品溶液(根据艾迪注射液用法用量“成人一次50～100ml，加0.9％的氯化钠注射液400～450ml中静脉滴注”，故选用取本品10ml，加生理氯化钠溶液稀释成50ml，混匀，作为供试品溶液；第6管为对照管)，摇匀后，置37℃±0.5℃恒温箱中，开始每隔15分钟观察一次，1小时后，每隔1小时观察一次，共观察3小时。

[0312]

[0313] 用10个批号的成品按上法进行试验，均未出现溶血与凝聚现象。故将溶血与凝聚检查纳入成品质量标准。

[0314] 8.异常毒性检查、过敏物质检查、升压物质检查、降压物质检查：经试验研究，结果表明艾迪注射液异常毒性检查、过敏物质检查、升压物质检查、降压物质检查均符合要求，故将其检测方法纳入质量标准。具体检测方法为：

[0315] 异常毒性检查：取艾迪注射制剂，按小鼠每只0.5ml，照中国药典方法检查，应符合规定。

[0316] 过敏物质检查：取艾迪注射制剂，以原药浓度，按豚鼠致敏剂量为0.5ml/只，激发剂量为1.0ml/只；照中国药典方法检查，应符合规定。

[0317] 升压物质检查：取艾迪注射制剂，以原药浓度，按大鼠体重1kg注射10ml的剂量，照中国药典方法检查，应符合规定。

[0318] 降压物质检查：取艾迪注射制剂，以原药浓度，按猫体重1kg注射1ml的剂量，照中国药典方法检查，应符合规定。

[0319] 9.渗透压的检查：因渗透压项目缺乏检测的仪器设备未能完成。

[0320] 通过安全性指标结果显示，本品安全性是可靠的；研究试验表明，各有关物质检查也是可行的。故将蛋白质、鞣质、树脂、草酸盐、钾离子、砷盐、溶血与凝聚、异常毒性检查、过敏反应物质、降压物质、升压物质项列入质量标准；而渗透压因缺乏仪器设备未能完成，故未能将渗透压纳入质量标准。

[0321] 与现有技术相比，本发明质量控制方法提供了α-萘酚显色反应、以人参皂苷Re、Rg1、Rb以及黄芪甲苷为对照对制剂中人参和黄芪的薄层色谱鉴别，对制剂中所含人参皂苷Re、和斑蝥素的含量测定方法；以及对PH值、重金属、热原、蛋白质、鞣质等安全性指标的检查；以上质量控制方法可有效控制艾迪注射制剂的质量，从而确保其临床疗效。

[0322] 具体实施方式：以下通过实施例进一步说明本发明，但不作为对本发明的限制。

[0323] 本发明实施例1：

[0324] 性状：对于冻干粉针剂，产品为浅黄色至浅棕色的疏松块状物；

[0325] 对于输液剂，产品为浅黄色至浅棕色的澄明液体；

[0326] 对于水针剂，产品为浅黄色至浅棕色的澄明液体；

[0327] 鉴别：

[0328] (1)取冻干粉针1000mg加注射用水20ml使溶解、或取输液500ml浓缩至20ml、或取水针剂100ml浓缩至20ml；分别取上述药品，加乙醇20ml，搅匀，滤过，沉淀物用乙醇洗涤1次，将沉淀物用蒸馏水10ml溶解，取0.5ml置试管中，微热后加入2％α-萘酚乙醇溶液
2滴，摇匀，再沿管壁缓缓加入浓硫酸2ml，在二液面接界处显紫红色环；

[0329] (2)取冻干粉针1000mg加注射用水100ml使溶解、或取输液500ml浓缩至100ml、或取水针剂100ml；置分液漏斗中，用50ml三氯甲烷振摇提取，弃去三氯甲烷液，水层用水饱和正丁醇提取1次，每次60ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤4次，每次10ml，弃去氨试液，正丁醇液于水浴上蒸干，残渣加甲醇3ml使溶解，作为供试品溶液；另取人参皂苷Re、Rg1、Rb1及黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml各含3mg的混合溶液，作为对照品溶液；照中国药典2005年版一部附录薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各3μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，厚800μm；以三氯甲烷∶甲醇∶水＝10∶9∶5为展开剂，在必要时控制湿度，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热数分钟，放置1小时以上后再置紫外光灯500nm下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

[0330] 检查：

[0331] pH值：应为3.0-6.5；

[0332] 重金属：取冻干粉针40mg加注射用水2ml使溶解、或取输液20ml浓缩至2ml、或取水针剂2ml；置坩埚中，水浴上蒸干，照中国药典重金属检查法检查，含重金属不得过百万分之五；

[0333] 热原：取冻干粉针300mg加注射用水30ml使溶解、或取输液100ml浓缩至30ml、或取水针剂30ml；用氯化钠注射液或5～10％葡萄糖注射液稀释至100ml，按家兔体重1kg注射10ml的剂量，照中国药典热原检查法检查，应符合规定；

[0334] 其他：应符合中国药典注射剂项下有关的各项规定；

[0335] 含量测定：

[0336] (1)人参皂苷Re

[0337] 对照品溶液的制备：精密称取人参皂苷Re对照品，置量瓶中，加甲醇溶解使每1ml中含人参皂苷Re 1mg，摇匀，即得；

[0338] 标准曲线的制备：精密量取对照品溶液0、20、40、60、80、100μl，分别置10ml具塞试管中，置水浴上挥去溶剂，立即取出，放冷，加10％香草醛冰醋酸溶液0.05ml、高氯酸0.5ml，摇匀，置80℃水浴中加热8分钟，取出，用水冷却1分钟，加冰醋酸2ml，摇匀，照中国药典分光光度法，在700nm波长处测定吸收度，以吸收度为纵坐标、浓度为横坐标，绘制标准曲线；

[0339] 供试品溶液的制备：取冻干粉针400mg加注射用水10ml使溶解、或取输液200ml浓缩至10ml、或取水针剂10ml；分别精密量取上述药品，置分液漏斗中，用氯仿提取1次，每次30ml，合并氯仿提取液，用蒸馏水洗涤1次，每次2ml，弃去氯仿液，洗液与上述水层合并，置分液漏斗中，用水饱和的正丁醇提取5次，每次40ml，合并正丁醇提取液，加入无水硫酸钠5g，搅拌，放至澄清，将正丁醇液移至蒸发皿中，用少量正丁醇洗涤无水硫酸钠，洗液并入蒸发皿中，蒸干，用少量蒸馏水溶解残渣，加到大孔吸附树脂DA-201柱上，待液面接近棉花层后，用蒸馏水100ml洗脱，控制流速为0.6ml/min，弃去洗液，用90％乙醇100ml洗脱，收集洗脱液于蒸发皿中，置水浴上蒸干，用甲醇溶解残渣，移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得；

[0340] 测定法：精密量取供试品溶液100μl，照标准曲线的制备项下的方法，自“置10ml具塞试管中”起依法测定吸收度；从标准曲线上读出供试品溶液中人参皂苷Re的重量μg，计算；该注射制剂中，冻干粉针剂中含人参以人参皂苷Re计，不得少于1％；输液剂中含人参以人参皂苷Re计，不得少于0.01mg/ml；水针剂中含人参以人参皂苷Re计，不得少于0.1mg/ml；

[0341] (2)斑蝥素 照中国药典气相色谱法测定；

[0342] 色谱条件与系统适用性试验：以聚乙二醇20M及甲基硅橡胶SE-30为固定液，涂布浓度分别为20％和10％，2∶0.5混合装柱；柱温为180±10℃；理论板数按斑蝥素峰计算，应不低于1500；

[0343] 对照品溶液的制备：取斑蝥素对照品，精密称定，加氯仿制成每1ml含0.2mg的溶液，作为对照品溶液；

[0344] 供试品溶液的制备：取冻干粉针1000mg加注射用水20ml使溶解、或取输液200ml浓缩至20ml、或取水针剂20ml，加入3mol/L硫酸溶液10ml，用氯仿振摇提取1次，每次100ml，合并氯仿液，用K-D浓缩器浓缩定容至8ml，即得；

[0345] 测定法：分别精密量取对照品溶液和供试品溶液，注入气相色谱仪，计算，即得；该注射制剂中，冻干粉针剂中含斑蝥素为0.0005％-0.05％；输液剂中含斑蝥素为0.00001-0.001mg/ml；水针剂中含斑蝥素为0.0001-0.005mg/ml。

[0346] 本发明实施例2：

[0347] 性状：对于冻干粉针剂，产品为浅黄色至浅棕色的疏松块状物；

[0348] 对于输液剂，产品为浅黄色至浅棕色的澄明液体；

[0349] 对于水针剂，产品为浅黄色至浅棕色的澄明液体；

[0350] 鉴别：

[0351] (1)取冻干粉针400mg加注射用水5ml使溶解、或取输液200ml浓缩至5ml、或取水针剂20ml浓缩至5ml；分别取上述药品，加乙醇100ml，搅匀，滤过，沉淀物用乙醇洗涤4次，将沉淀物用蒸馏水2ml溶解，取3ml置试管中，微热后加入10％α-萘酚乙醇溶液10滴，摇匀，再沿管壁缓缓加入浓硫酸0.2ml，在二液面接界处显紫红色环；

[0352] (2)取冻干粉针400mg加注射用水20ml使溶解、或取输液200ml浓缩至20ml、或取水针剂20ml；置分液漏斗中，用10ml三氯甲烷振摇提取，弃去三氯甲烷液，水层用水饱和正丁醇提取4次，每次40ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤1次，每次50ml，弃去氨试液，正丁醇液于水浴上蒸干，残渣加甲醇0.5ml使溶解，作为供试品溶液；另取人参皂苷Re、Rg1、Rb1及黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml各含0.5mg的混合溶液，作为对照品溶液；照中国药典2005年版一部附录薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各20μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，厚1000μm；以三氯甲烷∶甲醇∶水＝50∶1∶0.5为展开剂，在必要时控制湿度，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热数分钟，放置1小时以上后再置紫外光灯200nm下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

[0353] 检查：

[0354] pH值：应为3.0-6.5；

[0355] 重金属：取冻干粉针20mg加注射用水2ml使溶解、或取输液8ml浓缩至2ml、或取水针剂2ml；置坩埚中，水浴上蒸干，照中国药典重金属检查法检查，含重金属不得过百万分之五；

[0356] 热原：取冻干粉针600mg加注射用水30ml使溶解、或取输液300ml浓缩至30ml、或取水针剂30ml；用氯化钠注射液或5～10％葡萄糖注射液稀释至100ml，按家兔体重1kg注射10ml的剂量，照中国药典热原检查法检查，应符合规定；

[0357] 其他：应符合中国药典注射剂项下有关的各项规定；

[0358] 含量测定：

[0359] (1)人参皂苷Re

[0360] 对照品溶液的制备：精密称取人参皂苷Re对照品，置量瓶中，加甲醇溶解使每1ml中含人参皂苷Re 2mg，摇匀，即得；

[0361] 标准曲线的制备：精密量取对照品溶液0、20、40、60、80、100μl，分别置10ml具塞试管中，置水浴上挥去溶剂，立即取出，放冷，加2％香草醛冰醋酸溶液1ml、高氯酸1.5ml，摇匀，置40℃水浴中加热25分钟，取出，用水冷却3分钟，加冰醋酸10ml，摇匀，照中国药典分光光度法，在400nm波长处测定吸收度，以吸收度为纵坐标、浓度为横坐标，绘制标准曲线；

[0362] 供试品溶液的制备：取冻干粉针200mg加注射用水30ml使溶解、或取输液50ml浓缩至30ml、或取水针剂30ml；分别精密量取上述药品，置分液漏斗中，用氯仿提取5次，每次10ml，合并氯仿提取液，用蒸馏水洗涤4次，每次10ml，弃去氯仿液，洗液与上述水层合并，置分液漏斗中，用水饱和的正丁醇提取1次，每次60ml，合并正丁醇提取液，加入无水硫酸钠1g，搅拌，放至澄清，将正丁醇液移至蒸发皿中，用少量正丁醇洗涤无水硫酸钠，洗液并入蒸发皿中，蒸干，用少量蒸馏水溶解残渣，加到大孔吸附树脂DA-201柱上，待液面接近棉花层后，用蒸馏水100ml洗脱，控制流速为0.3ml/min，弃去洗液，用40％乙醇70ml洗脱，收集洗脱液于蒸发皿中，置水浴上蒸干，用甲醇溶解残渣，移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得；

[0363] 测定法：精密量取供试品溶液100μl，照标准曲线的制备项下的方法，自“置10ml具塞试管中”起依法测定吸收度；从标准曲线上读出供试品溶液中人参皂苷Re的重量μg，计算；该注射制剂中，冻干粉针剂中含人参以人参皂苷Re计，不得少于1％；输液剂中含人参以人参皂苷Re计，不得少于0.01mg/ml；水针剂中含人参以人参皂苷Re计，不得少于0.1mg/ml；

[0364] (2)斑蝥素 照中国药典气相色谱法测定；

[0365] 色谱条件与系统适用性试验：以聚乙二醇20M及甲基硅橡胶SE-30为固定液，涂布浓度分别为5％和10％，0.5∶0.5混合装柱；柱温为180±10℃；理论板数按斑蝥素峰计算，应不低于1500；

[0366] 对照品溶液的制备：取斑蝥素对照品，精密称定，加氯仿制成每1ml含0.05mg的溶液，作为对照品溶液；

[0367] 供试品溶液的制备：取冻干粉针1000mg加注射用水100ml使溶解、或取输液500ml浓缩至100ml、或取水针剂100ml，加入1mol/L硫酸溶液2ml，用氯仿振摇提取5次，每次10ml，合并氯仿液，用K-D浓缩器浓缩定容至2ml，即得；

[0368] 测定法：分别精密量取对照品溶液和供试品溶液，注入气相色谱仪，计算，即得；该注射制剂中，冻干粉针剂中含斑蝥素为0.0005％-0.05％；输液剂中含斑蝥素为0.00001-0.001mg/ml；水针剂中含斑蝥素为0.0001-0.005mg/ml。

[0369] 本发明实施例3：

[0370] 性状：对于冻干粉针剂，产品为浅黄色至浅棕色的疏松块状物；

[0371] 对于输液剂，产品为浅黄色至浅棕色的澄明液体；

[0372] 对于水针剂，产品为浅黄色至浅棕色的澄明液体；

[0373] 鉴别：

[0374] (1)取冻干粉针750mg加注射用水10ml使溶解、或取输液400ml浓缩至10ml、或取水针剂50ml浓缩至10ml；分别取上述药品，加乙醇50ml，搅匀，滤过，沉淀物用乙醇洗涤2次，将沉淀物用蒸馏水5ml溶解，取1ml置试管中，微热后加入5％α-萘酚乙醇溶液5滴，摇匀，再沿管壁缓缓加入浓硫酸0.5ml，在二液面接界处显紫红色环；

[0375] (2)取冻干粉针750mg加注射用水5ml使溶解、或取输液400ml浓缩至500ml、或取水针剂50ml；置分液漏斗中，用30ml三氯甲烷振摇提取，弃去三氯甲烷液，水层用水饱和正丁醇提取2次，每次50ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤2次，每次30ml，弃去氨试液，正丁醇液于水浴上蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取人参皂苷Re、Rg1、Rb1及黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml各含1mg的混合溶液，作为对照品溶液；照中国药典2005年版一部附录薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5-10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，厚500μm；以三氯甲烷∶甲醇∶水＝15∶6∶1为展开剂，在必要时控制湿度，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热数分钟，放置1小时以上后再置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

[0376] 检查：

[0377] pH值：应为3.0-6.5；

[0378] 重金属：取冻干粉针30mg加注射用水2ml使溶解、或取输液10ml浓缩至2ml、或取水针剂2ml；置坩埚中，水浴上蒸干，照中国药典重金属检查法检查，含重金属不得过百万分之五；

[0379] 热原：取冻干粉针500mg加注射用水30ml使溶解、或取输液200ml浓缩至30ml、或取水针剂30ml；用氯化钠注射液或5～10％葡萄糖注射液稀释至100ml，按家兔体重1kg注射10ml的剂量，照中国药典热原检查法检查，应符合规定；

[0380] 其他：应符合中国药典注射剂项下有关的各项规定；

[0381] 含量测定：

[0382] (1)人参皂苷Re

[0383] 对照品溶液的制备：精密称取人参皂苷Re对照品，置量瓶中，加甲醇溶解使每1ml中含人参皂苷Re 1.6mg，摇匀，即得；

[0384] 标准曲线的制备：精密量取对照品溶液0、20、40、60、80、100μl，分别置10ml具塞试管中，置水浴上挥去溶剂，立即取出，放冷，加5％香草醛冰醋酸溶液0.2ml、高氯酸0.8ml，摇匀，置60℃水浴中加热15分钟，取出，用水冷却2分钟，加冰醋酸5ml，摇匀，照中国药典分光光度法，在544nm波长处测定吸收度，以吸收度为纵坐标、浓度为横坐标，绘制标准曲线；

[0385] 供试品溶液的制备：取冻干粉针300mg加注射用水20ml使溶解、或取输液100ml浓缩至20ml、或取水针剂20ml；分别精密量取上述药品，置分液漏斗中，用氯仿提取3次，每次20ml，合并氯仿提取液，用蒸馏水洗涤2次，每次5ml，弃去氯仿液，洗液与上述水层合并，置分液漏斗中，用水饱和的正丁醇提取3次，每次50ml，合并正丁醇提取液，加入无水硫酸钠3g，搅拌，放至澄清，将正丁醇液移至蒸发皿中，用少量正丁醇洗涤无水硫酸钠，洗液并入蒸发皿中，蒸干，用少量蒸馏水溶解残渣，加到大孔吸附树脂DA-201柱上，待液面接近棉花层后，用蒸馏水100ml洗脱，控制流速为0.4ml/min，弃去洗液，用70％乙醇80ml洗脱，收集洗脱液于蒸发皿中，置水浴上蒸干，用甲醇溶解残渣，移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得；

[0386] 测定法：精密量取供试品溶液100μl，照标准曲线的制备项下的方法，自“置10ml具塞试管中”起依法测定吸收度；从标准曲线上读出供试品溶液中人参皂苷Re的重量μg，计算；该注射制剂中，冻干粉针剂中含人参以人参皂苷Re计，不得少于1％；输液剂中含人参以人参皂苷Re计，不得少于0.01mg/ml；水针剂中含人参以人参皂苷Re计，不得少于0.1mg/ml；

[0387] (2)斑蝥素 照中国药典气相色谱法测定；

[0388] 色谱条件与系统适用性试验：以聚乙二醇20M及甲基硅橡胶SE-30为固定液，涂布浓度分别为10％和5％，1∶1混合装柱；柱温为180±10℃；理论板数按斑蝥素峰计算，应不低于1500；

[0389] 对照品溶液的制备：取斑蝥素对照品，精密称定，加氯仿制成每1ml含0.1mg的溶液，作为对照品溶液；

[0390] 供试品溶液的制备：取冻干粉针800mg加注射用水50ml使溶解、或取输液450ml浓缩至50ml、或取水针剂50ml，加入1.8mol/L硫酸溶液5ml，用氯仿振摇提取3次，分别为50ml、30ml、30ml，合并氯仿液，用K-D浓缩器浓缩定容至5ml，即得；

[0391] 测定法：分别精密量取对照品溶液和供试品溶液各5μl，注入气相色谱仪，计算，即得；该注射制剂中，冻干粉针剂中含斑蝥素为0.0005％-0.05％；输液剂中含斑蝥素为0.00001-0.001mg/ml；水针剂中含斑蝥素为0.0001-0.005mg/ml。

[0392] 本发明实施例4：

[0393] 性状：对于冻干粉针剂，产品为浅黄色至浅棕色的疏松块状物；

[0394] 对于输液剂，产品为浅黄色至浅棕色的澄明液体；

[0395] 对于水针剂，产品为浅黄色至浅棕色的澄明液体；

[0396] 鉴别：

[0397] (1)取冻干粉针1000mg加注射用水20ml使溶解、或取输液500ml浓缩至20ml、或取水针剂100ml浓缩至20ml；分别取上述药品，加乙醇20ml，搅匀，滤过，沉淀物用乙醇洗涤1次，将沉淀物用蒸馏水10ml溶解，取0.5ml置试管中，微热后加入2％α-萘酚乙醇溶液
2滴，摇匀，再沿管壁缓缓加入浓硫酸2ml，在二液面接界处显紫红色环；

[0398] (2)取冻干粉针1000mg加注射用水100ml使溶解、或取输液500ml浓缩至100ml、或取水针剂100ml；置分液漏斗中，用水饱和的正丁醇提取1次，每次60ml，合并提取液，置水浴上蒸干，残渣用蒸馏水10ml溶解，加入预先制备好的DA-201树脂柱上，内径0.5～2cm，长10cm，填充10cm的DA-201树脂后，再填充5g中性氧化铝；用水50ml洗涤，再用80％甲醇液洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇5ml使溶解，作为供试品溶液；另取人参皂苷Re、Rg1、Rb及黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml各含0.5mg的混合溶液，作为对照品溶液；
照中国药典2005年版一部附录薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各3μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿∶醋酸乙酯∶甲醇∶水＝1∶15∶10∶1，10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热数分钟，置紫外光灯200nm下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

[0399] 检查：

[0400] PH值：应为3.0-6.5；

[0401] 重金属：取冻干粉针40mg加注射用水2ml使溶解、或取输液20ml浓缩至2ml、或取水针剂2ml；置坩埚中，水浴上蒸干，照中国药典重金属检查法检查，含重金属不得过百万分之五；

[0402] 热原：取冻干粉针600mg加注射用水30ml使溶解、或取输液300ml浓缩至30ml、或取水针剂30ml；用氯化钠注射液或5～10％葡萄糖注射液稀释至100ml，按家兔体重1Kg注射10ml的剂量，照中国药典热原检查法检查，应符合规定；

[0403] 蛋白质：取冻干粉针20mg加注射用水1ml使溶解、或取输液10ml浓缩至1ml、或取水针剂1ml；加新配制的30％磺基水杨酸溶液1ml，混匀，放置5分钟，不得出现浑浊；

[0404] 鞣质：取冻干粉针20mg加注射用水1ml使溶解、或取输液10ml浓缩至1ml、或取水针剂1ml；加新配制的含1％鸡蛋清的生理氯化钠溶液5ml，必要时，用0.45um微孔滤膜滤过，放置10分钟，不得出现浑浊或沉淀；

[0405] 树脂：取冻干粉针100mg加注射用水5ml使溶解、或取输液50ml浓缩至5ml、或取水针剂5ml；加盐酸1滴，放置30分钟，不得出现沉淀；

[0406] 草酸盐：取冻干粉针40mg加注射用水2ml使溶解、或取输液20ml浓缩至2ml、或取水针剂2ml；用稀盐酸调节PH值至1-2，滤过，滤液调节PH值至5-6，加3％氯化钙溶液2-3滴，放置10分钟，不得出现浑浊或沉淀；

[0407] 钾离子：取冻干粉针40mg加注射用水2ml使溶解、或取输液20ml浓缩至2ml、或取水针剂2ml；蒸干，按照中国药典钾离子测定法测定，应符合规定；

[0408] 砷盐：取冻干粉针20mg加注射用水1ml使溶解、或取输液10ml浓缩至1ml、或取水针剂1ml；精密量取，于坩埚中蒸干，加2％的硝酸镁乙醇溶液3ml，点燃，燃尽后，先用小火炽灼使炭化，再在500-600℃炽灼至完全灰化，放冷，加盐酸5ml与水21ml使溶解，照中国药典砷盐检查法检查；每1ml成品中含砷量不得过百万分之二；

[0409] 溶血与凝聚：2％红细胞混悬液的制备取兔血或羊血数毫升，放入盛有玻璃珠的锥形瓶中，振摇10分钟，除去纤维蛋白原，使成脱纤血，加约10倍量的生理氯化钠溶液洗涤2-3次，至上清液不显红色为止，将所得红细胞用生理氯化钠溶液配成2％的混悬液，即得；

[0410] 供试品溶液的制备：取冻干粉针200mg加注射用水10ml使溶解、或取输液100ml浓缩至10ml、或取水针剂10ml；加生理氯化钠溶液稀释成50ml，混匀，即得；

[0411] 试验方法：取试管6支，按下表中配比量依次加入2％红细胞混悬液和生理氯化钠溶液，混匀后，于37℃恒温箱中放置30分钟，分别加入不同量的供试品溶液，第6管为对照管，摇匀后，置37℃±0.5℃恒温箱中，开始每隔15分钟观察一次，1小时后，每隔1小时观察一次，共观察3小时；

[0412]

[0413] 按上法检查，以第3管为准，本品在3小时内不得出现溶血和红细胞凝聚；

[0414] 异常毒性：取冻干粉针加注射用水使溶解、或取输液、或取水针剂；按小鼠每只0.5ml，照中国药典异常毒性检查法检查；

[0415] 过敏物质检查：取冻干粉针加注射用水使溶解、或取输液、或取水针剂；以原药浓度，按豚鼠致敏剂量为0.5ml/只，激发剂量为1.0ml/只；照中国药典过敏物质检查法检查，应符合规定；

[0416] 升压物质检查：取冻干粉针加注射用水使溶解、或取输液、或取水针剂；以原药浓度，按大鼠体重1kg注射10ml的剂量，照中国药典升压物质检查法检查，应符合规定；

[0417] 降压物质检查：取冻干粉针加注射用水使溶解、或取输液、或取水针剂；以原药浓度，按猫体重1kg注射1ml的剂量，照中国药典降压物质检查法检查，应符合规定；

[0418] 其他：应符合中国药典注射剂项下有关的各项规定；

[0419] 含量测定：

[0420] (1)人参皂苷Re

[0421] 对照品溶液的制备：精密称取人参皂苷Re对照品，置量瓶中，加甲醇溶解使每1ml中含人参皂苷Re 1mg，摇匀，即得；

[0422] 标准曲线的制备：精密量取对照品溶液0、20、40、60、80、100μl，分别置10ml具塞试管中，置水浴上挥去溶剂，立即取出，放冷，加10％香草醛冰醋酸溶液0.05ml、高氯酸0.5ml，摇匀，置80℃水浴中加热8分钟，取出，用水冷却1分钟，加冰醋酸2ml，摇匀，照中国药典分光光度法，在700nm波长处测定吸收度，以吸收度为纵坐标、浓度为横坐标，绘制标准曲线；

[0423] 供试品溶液的制备：取冻干粉针400mg加注射用水10ml使溶解、或取输液200ml浓缩至10ml、或取水针剂10ml；分别精密量取上述药品，置分液漏斗中，用氯仿提取1次，每次30ml，合并氯仿提取液，用蒸馏水洗涤1次，每次2ml，弃去氯仿液，洗液与上述水层合并，置分液漏斗中，用水饱和的正丁醇提取5次，每次40ml，合并正丁醇提取液，加入无水硫酸钠5g，搅拌，放至澄清，将正丁醇液移至蒸发皿中，用少量正丁醇洗涤无水硫酸钠，洗液并入蒸发皿中，蒸干，用少量蒸馏水溶解残渣，加到大孔吸附树脂DA-201柱上，待液面接近棉花层后，用蒸馏水100ml洗脱，控制流速为0.6ml/min，弃去洗液，用90％乙醇100ml洗脱，收集洗脱液于蒸发皿中，置水浴上蒸干，用甲醇溶解残渣，移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得；

[0424] 测定法：精密量取供试品溶液100μl，照标准曲线的制备项下的方法，自“置10ml具塞试管中”起依法测定吸收度；从标准曲线上读出供试品溶液中人参皂苷Re的重量μg，计算；该注射制剂中，冻干粉针剂中含人参以人参皂苷Re计，不得少于1％；输液剂中含人参以人参皂苷Re计，不得少于0.01mg/ml；水针剂中含人参以人参皂苷Re计，不得少于0.1mg/ml；

[0425] (2)斑蝥素照中国药典气相色谱法测定；

[0426] 色谱条件与系统适用性试验：以聚乙二醇20M及甲基硅橡胶SE-30为固定液，涂布浓度分别为20％和10％，2∶0.5混合装柱；柱温为180±10℃；理论板数按斑蝥素峰计算，应不低于1500；

[0427] 对照品溶液的制备：取斑蝥素对照品，精密称定，加氯仿制成每1ml含0.2mg的溶液，作为对照品溶液；

[0428] 供试品溶液的制备：取冻干粉针1000mg加注射用水20ml使溶解、或取输液200ml浓缩至20ml、或取水针剂20ml，加入3mol/L硫酸溶液10ml，用氯仿振摇提取1次，每次100ml，合并氯仿液，用K-D浓缩器浓缩定容至8ml，即得；

[0429] 测定法：分别精密量取对照品溶液和供试品溶液，注入气相色谱仪，计算，即得；该注射制剂中，冻干粉针剂中含斑蝥素为0.0005％-0.05％；输液剂中含斑蝥素为0.00001-0.001mg/ml；水针剂中含斑蝥素为0.0001-0.005mg/ml。

[0430] 本发明实施例5：

[0431] 性状：对于冻干粉针剂，产品为浅黄色至浅棕色的疏松块状物；

[0432] 对于输液剂，产品为浅黄色至浅棕色的澄明液体；

[0433] 对于水针剂，产品为浅黄色至浅棕色的澄明液体；

[0434] 鉴别：

[0435] (1)取冻干粉针400mg加注射用水5ml使溶解、或取输液200ml浓缩至5ml、或取水针剂20ml浓缩至5ml；分别取上述药品，加乙醇100ml，搅匀，滤过，沉淀物用乙醇洗涤4次，将沉淀物用蒸馏水2ml溶解，取3ml置试管中，微热后加入10％α-萘酚乙醇溶液10滴，摇匀，再沿管壁缓缓加入浓硫酸0.2ml，在二液面接界处显紫红色环；

[0436] (2)取冻干粉针400mg加注射用水20ml使溶解、或取输液200ml浓缩至20ml、或取水针剂20ml；置分液漏斗中，用水饱和的正丁醇提取4次，每次10ml，合并提取液，置水浴上蒸干，残渣用蒸馏水1ml溶解，加入预先制备好的DA-201树脂柱上，内径0.5～2cm，长20cm，填充15cm的DA-201树脂后，再填充1g中性氧化铝；用水200ml洗涤，再用20％甲醇液洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇0.5ml使溶解，作为供试品溶液；另取人参皂苷Re、Rg1、Rb及黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml各含3mg的混合溶液，作为对照品溶液；照中国药典2005年版一部附录薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各20μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿∶醋酸乙酯∶甲醇∶水＝10∶2∶1∶10，10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热数分钟，置紫外光灯
500nm下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

[0437] 检查：

[0438] PH值：应为3.0-6.5；

[0439] 重金属：取冻干粉针20mg加注射用水2ml使溶解、或取输液8ml浓缩至2ml、或取水针剂2ml；置坩埚中，水浴上蒸干，照中国药典重金属检查法检查，含重金属不得过百万分之五；

[0440] 热原：取冻干粉针300mg加注射用水30ml使溶解、或取输液100ml浓缩至30ml、或取水针剂30ml；用氯化钠注射液或5～10％葡萄糖注射液稀释至100ml，按家兔体重1Kg注射10ml的剂量，照中国药典热原检查法检查，应符合规定；

[0441] 蛋白质：取冻干粉针10mg加注射用水1ml使溶解、或取输液4ml浓缩至1ml、或取水针剂1ml；加新配制的30％磺基水杨酸溶液1ml，混匀，放置5分钟，不得出现浑浊；

[0442] 鞣质：取冻干粉针10mg加注射用水1ml使溶解、或取输液4ml浓缩至1ml、或取水针剂1ml；加新配制的含1％鸡蛋清的生理氯化钠溶液5ml，必要时，用0.45um微孔滤膜滤过，放置10分钟，不得出现浑浊或沉淀；

[0443] 树脂：取冻干粉针50mg加注射用水5ml使溶解、或取输液20ml浓缩至5ml、或取水针剂5ml；加盐酸1滴，放置30分钟，不得出现沉淀；

[0444] 草酸盐：取冻干粉针20mg加注射用水2ml使溶解、或取输液8ml浓缩至2ml、或取水针剂2ml；用稀盐酸调节PH值至1-2，滤过，滤液调节PH值至5-6，加3％氯化钙溶液2-3滴，放置10分钟，不得出现浑浊或沉淀；

[0445] 钾离子：取冻干粉针20mg加注射用水2ml使溶解、或取输液8ml浓缩至2ml、或取水针剂2ml；蒸干，按照中国药典钾离子测定法测定，应符合规定；

[0446] 砷盐：取冻干粉针10mg加注射用水1ml使溶解、或取输液4ml浓缩至1ml、或取水针剂1ml；精密量取，于坩埚中蒸干，加2％的硝酸镁乙醇溶液3ml，点燃，燃尽后，先用小火炽灼使炭化，再在500-600℃炽灼至完全灰化，放冷，加盐酸5ml与水21ml使溶解，照中国药典砷盐检查法检查；每1ml成品中含砷量不得过百万分之二；

[0447] 溶血与凝聚：2％红细胞混悬液的制备取兔血或羊血数毫升，放入盛有玻璃珠的锥形瓶中，振摇10分钟，除去纤维蛋白原，使成脱纤血，加约10倍量的生理氯化钠溶液洗涤2-3次，至上清液不显红色为止，将所得红细胞用生理氯化钠溶液配成2％的混悬液，即得；

[0448] 供试品溶液的制备：取冻干粉针100mg加注射用水10ml使溶解、或取输液40ml浓缩至10ml、或取水针剂10ml；加生理氯化钠溶液稀释成50ml，混匀，即得；

[0449] 试验方法：取试管6支，按下表中配比量依次加入2％红细胞混悬液和生理氯化钠溶液，混匀后，于37℃恒温箱中放置30分钟，分别加入不同量的供试品溶液，第6管为对照管，摇匀后，置37℃±0.5℃恒温箱中，开始每隔15分钟观察一次，1小时后，每隔1小时观察一次，共观察3小时；

[0450]

[0451]

[0452] 按上法检查，以第3管为准，本品在3小时内不得出现溶血和红细胞凝聚；

[0453] 异常毒性：取冻干粉针加注射用水使溶解、或取输液、或取水针剂；按小鼠每只0.5ml，照中国药典异常毒性检查法检查；

[0454] 过敏物质检查：取冻干粉针加注射用水使溶解、或取输液、或取水针剂；以原药浓度，按豚鼠致敏剂量为0.5ml/只，激发剂量为1.0ml/只；照中国药典过敏物质检查法检查，应符合规定；

[0455] 升压物质检查：取冻干粉针加注射用水使溶解、或取输液、或取水针剂；以原药浓度，按大鼠体重1kg注射10ml的剂量，照中国药典升压物质检查法检查，应符合规定；

[0456] 降压物质检查：取冻干粉针加注射用水使溶解、或取输液、或取水针剂；以原药浓度，按猫体重1kg注射1ml的剂量，照中国药典降压物质检查法检查，应符合规定；

[0457] 其他：应符合中国药典注射剂项下有关的各项规定；

[0458] 含量测定：

[0459] (1)人参皂苷Re

[0460] 对照品溶液的制备：精密称取人参皂苷Re对照品，置量瓶中，加甲醇溶解使每1ml中含人参皂苷Re 2mg，摇匀，即得；

[0461] 标准曲线的制备：精密量取对照品溶液0、20、40、60、80、100μl，分别置10ml具塞试管中，置水浴上挥去溶剂，立即取出，放冷，加2％香草醛冰醋酸溶液1ml、高氯酸1.5ml，摇匀，置40℃水浴中加热25分钟，取出，用水冷却3分钟，加冰醋酸10ml，摇匀，照中国药典分光光度法，在400nm波长处测定吸收度，以吸收度为纵坐标、浓度为横坐标，绘制标准曲线；

[0462] 供试品溶液的制备：取冻干粉针200mg加注射用水30ml使溶解、或取输液50ml浓缩至30ml、或取水针剂30ml；分别精密量取上述药品，置分液漏斗中，用氯仿提取5次，每次10ml，合并氯仿提取液，用蒸馏水洗涤4次，每次10ml，弃去氯仿液，洗液与上述水层合并，置分液漏斗中，用水饱和的正丁醇提取1次，每次60ml，合并正丁醇提取液，加入无水硫酸钠1g，搅拌，放至澄清，将正丁醇液移至蒸发皿中，用少量正丁醇洗涤无水硫酸钠，洗液并入蒸发皿中，蒸干，用少量蒸馏水溶解残渣，加到大孔吸附树脂DA-201柱上，待液面接近棉花层后，用蒸馏水100ml洗脱，控制流速为0.3ml/min，弃去洗液，用40％乙醇70ml洗脱，收集洗脱液于蒸发皿中，置水浴上蒸干，用甲醇溶解残渣，移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得；

[0463] 测定法：精密量取供试品溶液100μl，照标准曲线的制备项下的方法，自“置10ml具塞试管中”起依法测定吸收度；从标准曲线上读出供试品溶液中人参皂苷Re的重量μg，计算；该注射制剂中，冻干粉针剂中含人参以人参皂苷Re计，不得少于1％；输液剂中含人参以人参皂苷Re计，不得少于0.01mg/ml；水针剂中含人参以人参皂苷Re计，不得少于0.1mg/ml；

[0464] (2)斑蝥素照中国药典气相色谱法测定；

[0465] 色谱条件与系统适用性试验：以聚乙二醇20M及甲基硅橡胶SE-30为固定液，涂布浓度分别为5％和10％，0.5∶0.5混合装柱；柱温为180±10℃；理论板数按斑蝥素峰计算，应不低于1500；

[0466] 对照品溶液的制备：取斑蝥素对照品，精密称定，加氯仿制成每1ml含0.05mg的溶液，作为对照品溶液；

[0467] 供试品溶液的制备：取冻干粉针1000mg加注射用水100ml使溶解、或取输液500ml浓缩至100ml、或取水针剂100ml，加入1mol/L硫酸溶液2ml，用氯仿振摇提取5次，每次10ml，合并氯仿液，用K-D浓缩器浓缩定容至2ml，即得；

[0468] 测定法：分别精密量取对照品溶液和供试品溶液，注入气相色谱仪，计算，即得；该注射制剂中，冻干粉针剂中含斑蝥素为0.0005％-0.05％；输液剂中含斑蝥素为0.00001-0.001mg/ml；水针剂中含斑蝥素为0.0001-0.005mg/ml。

[0469] 本发明实施例6：

[0470] 性状：对于冻干粉针剂，产品为浅黄色至浅棕色的疏松块状物；

[0471] 对于输液剂，产品为浅黄色至浅棕色的澄明液体；

[0472] 对于水针剂，产品为浅黄色至浅棕色的澄明液体；

[0473] 鉴别：

[0474] (1)取冻干粉针750mg加注射用水10ml使溶解、或取输液400ml浓缩至10ml、或取水针剂50ml浓缩至10ml；分别取上述药品，加乙醇50ml，搅匀，滤过，沉淀物用乙醇洗涤2次，将沉淀物用蒸馏水5ml溶解，取1ml置试管中，微热后加入5％α-萘酚乙醇溶液5滴，摇匀，再沿管壁缓缓加入浓硫酸0.5ml，在二液面接界处显紫红色环；

[0475] (2)取冻干粉针700mg加注射用水50ml使溶解、或取输液400ml浓缩至50ml、或取水针剂50ml；置分液漏斗中，用水饱和的正丁醇提取2次，每次30ml，合并提取液，置水浴上蒸干，残渣用蒸馏水3ml溶解，加入预先制备好的DA-201树脂柱上，内径1～1.5cm，长15cm，填充12cm的DA-201树脂后，再填充2g中性氧化铝；用水100ml洗涤，再用40％甲醇液50ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取人参皂苷Re、Rg1、Rb及黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml各含1mg的混合溶液，作为对照品溶液；
照中国药典2005年版一部附录薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿∶醋酸乙酯∶甲醇∶水＝4∶8∶3∶4，10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热数分钟，置紫外光灯
365nm下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

[0476] 检查：

[0477] PH值：应为3.0-6.5；

[0478] 重金属：取冻干粉针30mg加注射用水2ml使溶解、或取输液10ml浓缩至2ml、或取水针剂2ml；置坩埚中，水浴上蒸干，照中国药典重金属检查法检查，含重金属不得过百万分之五；

[0479] 热原：取冻干粉针500mg加注射用水30ml使溶解、或取输液200ml浓缩至30ml、或取水针剂30ml；用氯化钠注射液或5～10％葡萄糖注射液稀释至100ml，按家兔体重1Kg注射10ml的剂量，照中国药典热原检查法检查，应符合规定；

[0480] 蛋白质：取冻干粉针15mg加注射用水1ml使溶解、或取输液6ml浓缩至1ml、或取水针剂1ml；加新配制的30％磺基水杨酸溶液1ml，混匀，放置5分钟，不得出现浑浊；

[0481] 鞣质：取冻干粉针15mg加注射用水1ml使溶解、或取输液8ml浓缩至1ml、或取水针剂1ml；加新配制的含1％鸡蛋清的生理氯化钠溶液5ml，必要时，用0.45um微孔滤膜滤过，放置10分钟，不得出现浑浊或沉淀；

[0482] 树脂：取冻干粉针80mg加注射用水5ml使溶解、或取输液40ml浓缩至5ml、或取水针剂5ml；加盐酸1滴，放置30分钟，不得出现沉淀；

[0483] 草酸盐：取冻干粉针30mg加注射用水2ml使溶解、或取输液10ml浓缩至2ml、或取水针剂2ml；用稀盐酸调节PH值至1-2，滤过，滤液调节PH值至5-6，加3％氯化钙溶液2-3滴，放置10分钟，不得出现浑浊或沉淀；

[0484] 钾离子：取冻干粉针30mg加注射用水2ml使溶解、或取输液15ml浓缩至2ml、或取水针剂2ml；蒸干，按照中国药典钾离子测定法测定，应符合规定；

[0485] 砷盐：取冻干粉针15mg加注射用水1ml使溶解、或取输液8ml浓缩至1ml、或取水针剂1ml；精密量取，于坩埚中蒸干，加2％的硝酸镁乙醇溶液3ml，点燃，燃尽后，先用小火炽灼使炭化，再在500-600℃炽灼至完全灰化，放冷，加盐酸5ml与水21ml使溶解，照中国药典砷盐检查法检查；每1ml成品中含砷量不得过百万分之二；

[0486] 溶血与凝聚：2％红细胞混悬液的制备 取兔血或羊血数毫升，放入盛有玻璃珠的锥形瓶中，振摇10分钟，除去纤维蛋白原，使成脱纤血，加约10倍量的生理氯化钠溶液洗涤2-3次，至上清液不显红色为止，将所得红细胞用生理氯化钠溶液配成2％的混悬液，即得；

[0487] 供试品溶液的制备：取冻干粉针150mg加注射用水10ml使溶解、或取输液80ml浓缩至10ml、或取水针剂10ml；加生理氯化钠溶液稀释成50ml，混匀，即得；

[0488] 试验方法：取试管6支，按下表中配比量依次加入2％红细胞混悬液和生理氯化钠溶液，混匀后，于37℃恒温箱中放置30分钟，分别加入不同量的供试品溶液，第6管为对照管，摇匀后，置37℃±0.5℃恒温箱中，开始每隔15分钟观察一次，1小时后，每隔1小时观察一次，共观察3小时；

[0489]

[0490] 按上法检查，以第3管为准，本品在3小时内不得出现溶血和红细胞凝聚；

[0491] 异常毒性：取冻干粉针加注射用水使溶解、或取输液、或取水针剂；按小鼠每只0.5ml，照中国药典异常毒性检查法检查；

[0492] 过敏物质检查：取冻干粉针加注射用水使溶解、或取输液、或取水针剂；以原药浓度，按豚鼠致敏剂量为0.5ml/只，激发剂量为1.0ml/只；照中国药典过敏物质检查法检查，应符合规定；

[0493] 升压物质检查：取冻干粉针加注射用水使溶解、或取输液、或取水针剂；以原药浓度，按大鼠体重1kg注射10ml的剂量，照中国药典升压物质检查法检查，应符合规定；

[0494] 降压物质检查：取冻干粉针加注射用水使溶解、或取输液、或取水针剂；以原药浓度，按猫体重1kg注射1ml的剂量，照中国药典降压物质检查法检查，应符合规定；

[0495] 其他：应符合中国药典注射剂项下有关的各项规定；

[0496] 含量测定：

[0497] (1)人参皂苷Re

[0498] 对照品溶液的制备：精密称取人参皂苷Re对照品，置量瓶中，加甲醇溶解使每1ml中含人参皂苷Re 1.6mg，摇匀，即得；

[0499] 标准曲线的制备：精密量取对照品溶液0、20、40、60、80、100μl，分别置10ml具塞试管中，置水浴上挥去溶剂，立即取出，放冷，加5％香草醛冰醋酸溶液0.2ml、高氯酸0.8ml，摇匀，置60℃水浴中加热15分钟，取出，用水冷却2分钟，加冰醋酸5ml，摇匀，照中国药典分光光度法，在544nm波长处测定吸收度，以吸收度为纵坐标、浓度为横坐标，绘制标准曲线；

[0500] 供试品溶液的制备：取冻干粉针300mg加注射用水20ml使溶解、或取输液100ml浓缩至20ml、或取水针剂20ml；分别精密量取上述药品，置分液漏斗中，用氯仿提取3次，每次20ml，合并氯仿提取液，用蒸馏水洗涤2次，每次5ml，弃去氯仿液，洗液与上述水层合并，置分液漏斗中，用水饱和的正丁醇提取3次，每次50ml，合并正丁醇提取液，加入无水硫酸钠3g，搅拌，放至澄清，将正丁醇液移至蒸发皿中，用少量正丁醇洗涤无水硫酸钠，洗液并入蒸发皿中，蒸干，用少量蒸馏水溶解残渣，加到大孔吸附树脂DA-201柱上，待液面接近棉花层后，用蒸馏水100ml洗脱，控制流速为0.4ml/min，弃去洗液，用70％乙醇80ml洗脱，收集洗脱液于蒸发皿中，置水浴上蒸干，用甲醇溶解残渣，移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得；

[0501] 测定法：精密量取供试品溶液100μl，照标准曲线的制备项下的方法，自“置10ml具塞试管中”起依法测定吸收度；从标准曲线上读出供试品溶液中人参皂苷Re的重量μg，计算；该注射制剂中，冻干粉针剂中含人参以人参皂苷Re计，不得少于1％；输液剂中含人参以人参皂苷Re计，不得少于0.01mg/ml；水针剂中含人参以人参皂苷Re计，不得少于0.1mg/ml；

[0502] (2)斑蝥素 照中国药典气相色谱法测定；

[0503] 色谱条件与系统适用性试验：以聚乙二醇20M及甲基硅橡胶SE-30为固定液，涂布浓度分别为10％和5％，1∶1混合装柱；柱温为180±10℃；理论板数按斑蝥素峰计算，应不低于1500；

[0504] 对照品溶液的制备：取斑蝥素对照品，精密称定，加氯仿制成每1ml含0.1mg的溶液，作为对照品溶液；

[0505] 供试品溶液的制备：取冻干粉针800mg加注射用水50ml使溶解、或取输液450ml浓缩至50ml、或取水针剂50ml，加入1.8mol/L硫酸溶液5ml，用氯仿振摇提取3次，分别为50ml、30ml、30ml，合并氯仿液，用K-D浓缩器浓缩定容至5ml，即得；

[0506] 测定法：分别精密量取对照品溶液和供试品溶液各5μl，注入气相色谱仪，计算，即得；该注射制剂中，冻干粉针剂中含斑蝥素为0.0005％-0.05％；输液剂中含斑蝥素为0.00001-0.001mg/ml；水针剂中含斑蝥素为0.0001-0.005mg/ml。

[0507] 本发明实施例7：

[0508] 性状：对于冻干粉针剂，产品为浅黄色至浅棕色的疏松块状物；

[0509] 对于输液剂，产品为浅黄色至浅棕色的澄明液体；

[0510] 对于水针剂，产品为浅黄色至浅棕色的澄明液体；

[0511] 鉴别：

[0512] (1)取冻干粉针1000mg加注射用水20ml使溶解、或取输液500ml浓缩至20ml、或取水针剂100ml浓缩至20ml；分别取上述药品，加乙醇20ml，搅匀，滤过，沉淀物用乙醇洗涤1次，将沉淀物用蒸馏水10ml溶解，取0.5ml置试管中，微热后加入2％α-萘酚乙醇溶液
2滴，摇匀，再沿管壁缓缓加入浓硫酸2ml，在二液面接界处显紫红色环；

[0513] (2)取冻干粉针1000mg加注射用水100ml使溶解、或取输液500ml浓缩至100ml、或取水针剂100ml；置分液漏斗中，用水饱和的正丁醇提取1次，每次60ml，合并提取液，置水浴上蒸干，残渣用蒸馏水10ml溶解，加入预先制备好的DA-201树脂柱上，内径0.5～2cm，长10cm，填充10cm的DA-201树脂后，再填充5g中性氧化铝；用水50ml洗涤，再用
80％甲醇液洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇5ml使溶解，作为供试品溶液；另取人参皂苷Re、Rg1、Rb及黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml各含0.5mg的混合溶液，作为对照品溶液；照中国药典2005年版一部附录薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各3μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿∶醋酸乙酯∶甲醇∶水＝1∶15∶10∶1，10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热数分钟，置紫外光灯200nm下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；检查：

[0514] pH值：应为3.0-6.5；

[0515] 重金属：取冻干粉针40mg加注射用水2ml使溶解、或取输液20ml浓缩至2ml、或取水针剂2ml；置坩埚中，水浴上蒸干，照中国药典重金属检查法检查，含重金属不得过百万分之五；

[0516] 热原：取冻干粉针300mg加注射用水30ml使溶解、或取输液100ml浓缩至30ml、或取水针剂30ml；用氯化钠注射液或5～10％葡萄糖注射液稀释至100ml，按家兔体重1kg注射10ml的剂量，照中国药典热原检查法检查，应符合规定；

[0517] 其他：应符合中国药典注射剂项下有关的各项规定；

[0518] 含量测定：

[0519] (1)人参皂苷Re

[0520] 对照品溶液的制备：精密称取人参皂苷Re对照品，置量瓶中，加甲醇溶解使每1ml中含人参皂苷Re 1mg，摇匀，即得；

[0521] 标准曲线的制备：精密量取对照品溶液0、20、40、60、80、100μl，分别置10ml具塞试管中，置水浴上挥去溶剂，立即取出，放冷，加10％香草醛冰醋酸溶液0.05ml、高氯酸0.5ml，摇匀，置80℃水浴中加热8分钟，取出，用水冷却1分钟，加冰醋酸2ml，摇匀，照中国药典分光光度法，在700nm波长处测定吸收度，以吸收度为纵坐标、浓度为横坐标，绘制标准曲线；

[0522] 供试品溶液的制备：取冻干粉针400mg加注射用水10ml使溶解、或取输液200ml浓缩至10ml、或取水针剂10ml；分别精密量取上述药品，置分液漏斗中，用氯仿提取1次，每次30ml，合并氯仿提取液，用蒸馏水洗涤1次，每次2ml，弃去氯仿液，洗液与上述水层合并，置分液漏斗中，用水饱和的正丁醇提取5次，每次40ml，合并正丁醇提取液，加入无水硫酸钠5g，搅拌，放至澄清，将正丁醇液移至蒸发皿中，用少量正丁醇洗涤无水硫酸钠，洗液并入蒸发皿中，蒸干，用少量蒸馏水溶解残渣，加到大孔吸附树脂DA-201柱上，待液面接近棉花层后，用蒸馏水100ml洗脱，控制流速为0.6ml/min，弃去洗液，用90％乙醇100ml洗脱，收集洗脱液于蒸发皿中，置水浴上蒸干，用甲醇溶解残渣，移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得；

[0523] 测定法：精密量取供试品溶液100μl，照标准曲线的制备项下的方法，自“置10ml具塞试管中”起依法测定吸收度；从标准曲线上读出供试品溶液中人参皂苷Re的重量μg，计算；该注射制剂中，冻干粉针剂中含人参以人参皂苷Re计，不得少于1％；输液剂中含人参以人参皂苷Re计，不得少于0.01mg/ml；水针剂中含人参以人参皂苷Re计，不得少于0.1mg/ml；

[0524] (2)斑蝥素照中国药典气相色谱法测定；

[0525] 色谱条件与系统适用性试验：玻璃色谱柱1-2m×3mm id，以OV-17为固定液，OV-17由50％甲基、50％苯基聚硅氧烷组成，涂渍量为3％，担体Shimalite W(AW-DMCS)120目；柱温为160±10℃；理论板数按斑蝥素峰计算，应不低于1500；

[0526] 对照品溶液的制备：取斑蝥素对照品适量，精密称定，加氯仿制成每1ml含0.02mg的溶液，作为对照品溶液；

[0527] 供试品溶液的制备：取冻干粉针100g加注射用水20ml使溶解、或取输液100ml浓缩至约20ml、或取水针剂20ml；分别精密量取上述药品，加入3mol/L硫酸溶液2ml，再精密加入2ml氯仿，振摇提取，静置分层，必要时离心，取下层液即得；

[0528] 测定法：分别精密量取对照品溶液和供试品溶液各2μl，注入气相色谱仪，计算；该注射制剂中，冻干粉针剂中含斑蝥素为0.0005％-0.05％；输液剂中含斑蝥素为0.00001-0.001mg/ml；水针剂中含斑蝥素为0.0001-0.005mg/ml；

[0529] 本发明实施例8：

[0530] 性状：对于冻干粉针剂，产品为浅黄色至浅棕色的疏松块状物；

[0531] 对于输液剂，产品为浅黄色至浅棕色的澄明液体；

[0532] 对于水针剂，产品为浅黄色至浅棕色的澄明液体；

[0533] 鉴别：

[0534] (1)取冻干粉针400mg加注射用水5ml使溶解、或取输液200ml浓缩至5ml、或取水针剂20ml浓缩至5ml；分别取上述药品，加乙醇100ml，搅匀，滤过，沉淀物用乙醇洗涤4次，将沉淀物用蒸馏水2ml溶解，取3ml置试管中，微热后加入10％α-萘酚乙醇溶液10滴，摇匀，再沿管壁缓缓加入浓硫酸0.2ml，在二液面接界处显紫红色环；

[0535] (2)取冻干粉针400mg加注射用水20ml使溶解、或取输液200ml浓缩至20ml、或取水针剂20ml；置分液漏斗中，用水饱和的正丁醇提取4次，每次10ml，合并提取液，置水浴上蒸干，残渣用蒸馏水1ml溶解，加入预先制备好的DA-201树脂柱上，内径0.5～2cm，长20cm，填充15cm的DA-201树脂后，再填充1g中性氧化铝；用水200ml洗涤，再用20％甲醇液洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇0.5ml使溶解，作为供试品溶液；另取人参皂苷Re、Rg1、Rb及黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml各含3mg的混合溶液，作为对照品溶液；照中国药典2005年版一部附录薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各20μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿∶醋酸乙酯∶甲醇∶水＝10∶2∶1∶10，10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热数分钟，置紫外光灯
500nm下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

[0536] 检查：

[0537] pH值：应为3.0-6.5；

[0538] 重金属：取冻干粉针20mg加注射用水2ml使溶解、或取输液8ml浓缩至2ml、或取水针剂2ml；置坩埚中，水浴上蒸干，照中国药典重金属检查法检查，含重金属不得过百万分之五；

[0539] 热原：取冻干粉针600mg加注射用水30ml使溶解、或取输液300ml浓缩至30ml、或取水针剂30ml；用氯化钠注射液或5～10％葡萄糖注射液稀释至100ml，按家兔体重1kg注射10ml的剂量，照中国药典热原检查法检查，应符合规定；

[0540] 其他：应符合中国药典注射剂项下有关的各项规定；

[0541] 含量测定：

[0542] (1)人参皂苷Re

[0543] 对照品溶液的制备：精密称取人参皂苷Re对照品，置量瓶中，加甲醇溶解使每1ml中含人参皂苷Re 2mg，摇匀，即得；

[0544] 标准曲线的制备：精密量取对照品溶液0、20、40、60、80、100μl，分别置10ml具塞试管中，置水浴上挥去溶剂，立即取出，放冷，加2％香草醛冰醋酸溶液1ml、高氯酸1.5ml，摇匀，置40℃水浴中加热25分钟，取出，用水冷却3分钟，加冰醋酸10ml，摇匀，照中国药典分光光度法，在400nm波长处测定吸收度，以吸收度为纵坐标、浓度为横坐标，绘制标准曲线；

[0545] 供试品溶液的制备：取冻干粉针200mg加注射用水30ml使溶解、或取输液50ml浓缩至30ml、或取水针剂30ml；分别精密量取上述药品，置分液漏斗中，用氯仿提取5次，每次10ml，合并氯仿提取液，用蒸馏水洗涤4次，每次10ml，弃去氯仿液，洗液与上述水层合并，置分液漏斗中，用水饱和的正丁醇提取1次，每次60ml，合并正丁醇提取液，加入无水硫酸钠1g，搅拌，放至澄清，将正丁醇液移至蒸发皿中，用少量正丁醇洗涤无水硫酸钠，洗液并入蒸发皿中，蒸干，用少量蒸馏水溶解残渣，加到大孔吸附树脂DA-201柱上，待液面接近棉花层后，用蒸馏水100ml洗脱，控制流速为0.3ml/min，弃去洗液，用40％乙醇70ml洗脱，收集洗脱液于蒸发皿中，置水浴上蒸干，用甲醇溶解残渣，移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得；

[0546] 测定法：精密量取供试品溶液100μl，照标准曲线的制备项下的方法，自“置10ml具塞试管中”起依法测定吸收度；从标准曲线上读出供试品溶液中人参皂苷Re的重量μg，计算；该注射制剂中，冻干粉针剂中含人参以人参皂苷Re计，不得少于1％；输液剂中含人参以人参皂苷Re计，不得少于0.01mg/ml；水针剂中含人参以人参皂苷Re计，不得少于0.1mg/ml；

[0547] (2)斑蝥素照中国药典气相色谱法测定；

[0548] 色谱条件与系统适用性试验：玻璃色谱柱1-2m×3mm id，以OV-17为固定液，OV-17由50％甲基、50％苯基聚硅氧烷组成，涂渍量为0.5％，担体Shimalite W(AW-DMCS)60目；柱温为160±10℃；理论板数按斑蝥素峰计算，应不低于1500；

[0549] 对照品溶液的制备：取斑蝥素对照品适量，精密称定，加氯仿制成每1ml含0.005mg的溶液，作为对照品溶液；

[0550] 供试品溶液的制备：取冻干粉针30g加注射用水50ml使溶解、或取输液30ml浓缩至约5ml、或取水针剂5ml；分别精密量取上述药品，加入1mol/L硫酸溶液0.5ml，再精密加入0.5ml氯仿，振摇提取，静置分层，必要时离心，取下层液即得；

[0551] 测定法：分别精密量取对照品溶液和供试品溶液各12μl，注入气相色谱仪，计算；该注射制剂中，冻干粉针剂中含斑蝥素为0.0005％-0.05％；输液剂中含斑蝥素为0.00001-0.001mg/ml；水针剂中含斑蝥素为0.0001-0.005mg/ml；

[0552] 本发明实施例9：

[0553] 性状：对于冻干粉针剂，产品为浅黄色至浅棕色的疏松块状物；

[0554] 对于输液剂，产品为浅黄色至浅棕色的澄明液体；

[0555] 对于水针剂，产品为浅黄色至浅棕色的澄明液体；

[0556] 鉴别：

[0557] (1)取冻干粉针750mg加注射用水10ml使溶解、或取输液400ml浓缩至10ml、或取水针剂50ml浓缩至10ml；分别取上述药品，加乙醇50ml，搅匀，滤过，沉淀物用乙醇洗涤2次，将沉淀物用蒸馏水5ml溶解，取1ml置试管中，微热后加入5％α-萘酚乙醇溶液5滴，摇匀，再沿管壁缓缓加入浓硫酸0.5ml，在二液面接界处显紫红色环；

[0558] (2)取冻干粉针700mg加注射用水50ml使溶解、或取输液400ml浓缩至50ml、或取水针剂50ml；置分液漏斗中，用水饱和的正丁醇提取2次，每次30ml，合并提取液，置水浴上蒸干，残渣用蒸馏水3ml溶解，加入预先制备好的DA-201树脂柱上，内径1～1.5cm，长15cm，填充12cm的DA-201树脂后，再填充2g中性氧化铝；用水100ml洗涤，再用40％甲醇液50ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取人参皂苷Re、Rg1、Rb及黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml各含1mg的混合溶液，作为对照品溶液；
照中国药典2005年版一部附录薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿∶醋酸乙酯∶甲醇∶水＝4∶8∶3∶4，10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热数分钟，置紫外光灯
365nm下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

[0559] 检查：

[0560] pH值：应为3.0-6.5；

[0561] 重金属：取冻干粉针30mg加注射用水2ml使溶解、或取输液10ml浓缩至2ml、或取水针剂2ml；置坩埚中，水浴上蒸干，照中国药典重金属检查法检查，含重金属不得过百万分之五；

[0562] 热原：取冻干粉针500mg加注射用水30ml使溶解、或取输液200ml浓缩至30ml、或取水针剂30ml；用氯化钠注射液或5～10％葡萄糖注射液稀释至100ml，按家兔体重1kg注射10ml的剂量，照中国药典热原检查法检查，应符合规定；

[0563] 其他：应符合中国药典注射剂项下有关的各项规定；

[0564] 含量测定：

[0565] (1)人参皂苷Re

[0566] 对照品溶液的制备：精密称取人参皂苷Re对照品，置量瓶中，加甲醇溶解使每1ml中含人参皂苷Re 1.6mg，摇匀，即得；

[0567] 标准曲线的制备：精密量取对照品溶液0、20、40、60、80、100μl，分别置10ml具塞试管中，置水浴上挥去溶剂，立即取出，放冷，加5％香草醛冰醋酸溶液0.2ml、高氯酸0.8ml，摇匀，置60℃水浴中加热15分钟，取出，用水冷却2分钟，加冰醋酸5ml，摇匀，照中国药典分光光度法，在544nm波长处测定吸收度，以吸收度为纵坐标、浓度为横坐标，绘制标准曲线；

[0568] 供试品溶液的制备：取冻干粉针300mg加注射用水20ml使溶解、或取输液100ml浓缩至20ml、或取水针剂20ml；分别精密量取上述药品，置分液漏斗中，用氯仿提取3次，每次20ml，合并氯仿提取液，用蒸馏水洗涤2次，每次5ml，弃去氯仿液，洗液与上述水层合并，置分液漏斗中，用水饱和的正丁醇提取3次，每次50ml，合并正丁醇提取液，加入无水硫酸钠3g，搅拌，放至澄清，将正丁醇液移至蒸发皿中，用少量正丁醇洗涤无水硫酸钠，洗液并入蒸发皿中，蒸干，用少量蒸馏水溶解残渣，加到大孔吸附树脂DA-201柱上，待液面接近棉花层后，用蒸馏水100ml洗脱，控制流速为0.4ml/min，弃去洗液，用70％乙醇80ml洗脱，收集洗脱液于蒸发皿中，置水浴上蒸干，用甲醇溶解残渣，移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇