拟人参皂苷RT5的提取方法及其药物用途

摘要

本发明涉及一种拟人参皂苷RT5的提取方法及其药物用途，属于医药领域。将西洋参总皂苷加于大孔树脂后，依次以水、25%~45%乙醇进行洗脱，洗脱至无皂苷反应，再继续用35%~55%乙醇洗脱，收集洗脱液，回收溶剂，蒸干，重结晶，得拟人参皂苷RT5。拟人参皂苷RT5在制备抗心肌缺血的药物中的应用。

权利要求

1.一种拟人参皂苷RT5的提取方法，其特征在于包括下列步骤：

将西洋参皂苷加于大孔树脂AB-8或大孔树脂D101或大孔树脂D4020后，依次以水、

25%~45%乙醇进行洗脱，洗脱至无皂苷反应，再继续用35%~55%乙醇洗脱，收集洗脱液，回收溶剂，蒸干，重结晶，得拟人参皂苷RT5。

2.根据权利要求1所述的拟人参皂苷RT5的提取方法，其特征在于包括下列步骤：将西洋参皂苷加于大孔树脂AB-8或大孔树脂D101或大孔树脂D4020后，依次以水、30%~40%乙醇进行洗脱，洗脱至无皂苷反应，再继续用40%~50%乙醇洗脱，收集洗脱液，回收溶剂，蒸干，重结晶，得拟人参皂苷RT5。

3.根据权利要求1或2所述的拟人参皂苷RT5的提取方法，其特征在于：西洋参皂苷包括西洋参茎叶总皂苷、西洋参总皂苷、西洋参果总皂苷或西洋参花总皂苷。

4.根据权利要求1或2所述的拟人参皂苷RT5的提取方法，其特征在于：重结晶试剂包括甲醇、乙醇或乙酸乙酯。

说明书

拟人参皂苷RT5的提取方法及其药物用途

技术领域

[0001] 本发明属于医药领域。

背景技术

[0002] 西洋参为五加科植物西洋参 Panax quinquefolium L．的干燥根。中医认为，西洋参具有补气养阴，清热生津的功能。用于气虚阴亏，内热，咳喘痰血，虚热烦倦，消渴，口燥咽干。现代研究证明，西洋参有抗疲劳、抗氧化、抗应激、抑制血小板聚集、降低血液凝固性的作用，另外，对糖尿病患者还有调节血糖的作用。

[0003] 西洋参中主要的有效成分是人参皂苷，也是生理活性最显著的物质。根据皂苷元的结构不同，人参皂苷主要包括以下三种类型：达玛烷型四环三萜皂苷(包括原人参二醇型皂苷和原人参三醇型皂苷)、奥克梯隆型四环三萜皂苷和齐墩果酸型五环三萜皂苷。与人参比较，西洋参中含有拟人参皂苷RT5等奥克梯隆型四环三萜皂苷特征皂苷。

[0004] 拟人参皂苷RT5分子式C36H62O10，分子量654.88，是西洋参特有的奥克梯隆型四环三萜皂苷。结构式如下：

[0005]

[0006] 文献报道，拟人参皂苷RT5能够逆转小胶质细胞活化造成对神经元细胞存活率的下降，降低小胶质细胞活化造成对神经元细胞造成的损伤，可用于治疗阿尔茨海默病；有报道认为拟人参皂苷RT5对吗啡引起的位置偏爱的形成有明显抑制作用，具有戒毒的生物活性。

[0007] 文献报道了一些拟人参皂苷RT5提取分离方法，都是以有机溶剂提取，然后上硅胶柱纯化，成本高，安全性差。

发明内容

[0008] 本发明提供一种拟人参皂苷RT5的提取方法及其药物用途，以解决目前拟人参皂苷RT5提取分离方法存在的成本高，安全性差的问题，同时提供拟人参皂苷RT5抗心肌缺血的新作用。

[0009] 本发明拟人参皂苷RT5的提取方法包括下列步骤：

[0010] 将西洋参皂苷加于大孔树脂后，依次以水、30%-40%乙醇进行洗脱，洗脱至无皂苷反应，再继续用40%-50%乙醇洗脱，收集洗脱液，回收溶剂，蒸干，重结晶，得拟人参皂苷RT5。

[0011] 西洋参皂苷包括西洋参茎叶总皂苷、西洋参总皂苷、西洋参果总皂苷、西洋参花总皂苷。

[0012] 本发明采用的大孔树脂包括AB-8、D101或D4020。

[0013] 本发明采用的重结晶试剂包括甲醇、乙醇或乙酸乙酯。

[0014] 拟人参皂苷RT5在制备抗心肌缺血的药物中的应用。

[0015] 当本发明用于制备抗心肌缺血的药物时，其口服或胃肠外给药，均是安全的，在口服情况下，其可以任何常规形式给药，如散剂、粒剂、片剂、胶囊剂、丸剂、溶液剂、悬浮液、糖浆、口腔含片、舌下含片等；当该药物肠胃外给药时，可采取任何常规形式，例如静脉内注射剂、软膏剂、栓剂、和吸入剂等。

[0016] 本发明制备抗心肌缺血的药物是由有效成分单体或有效成分与固体或液体的赋形剂一起构成的，这里使用的固体或液体的赋形剂在本领域是众所周知的，下面举几个具体例子，散剂是内服的粉末剂，它的赋形剂有乳糖、淀粉、浆糊精、碳酸钙、合成或天然硫酸铝、氧化镁、硬脂酸镁，碳酸氢钠、干燥酵母等；溶液剂的赋形剂有水、甘油、1，2-丙二醇、单糖浆、乙醇、乙二醇、聚乙二醇、山梨糖醇等；软膏剂的赋形剂可以使用脂油，含水羊毛脂、凡士林、甘油、蜂腊、木腊、液体石腊、树脂、高级腊等组合成的疏水剂或亲水剂。

[0017] 本法所得拟人参皂苷RT5纯度达80%以上。为其提取分离建立了一个简单高效的方法。该方法成本低，步骤简单，无三废处理，产品纯度高，适合工业化生产。

[0018] 本发明提供了一种新型的抗心肌缺血药物。有效物质的剂量可以根据给药方式，病人的年龄和体重及病情严重程度和其它类似的因素而改变，口服量为：30mg~240mg，每日两次服用；注射，10 mg ~120 mg，每日一次。

具体实施方式

[0019] 实施例1

[0020] 将西洋参总皂苷1000g，加于大孔树脂后，依次以水、30%乙醇进行洗脱，洗脱至无皂苷反应，再继续用40%乙醇洗脱，收集洗脱液，回收溶剂，蒸干，重结晶，得拟人参皂苷RT5；

[0021] 大孔树脂采用AB-8；重结晶试剂采用甲醇。

[0022] 实施例2

[0023] 将西洋参总皂苷1000g，加于大孔树脂后，依次以水、40%乙醇进行洗脱，洗脱至无皂苷反应，再继续用45%乙醇洗脱，收集洗脱液，回收溶剂，蒸干，重结晶，得拟人参皂苷RT5；

[0024] 大孔树脂采用D101；重结晶试剂采用乙醇。

[0025] 实施例3

[0026] 将西洋参总皂苷1000，加于大孔树脂后，依次以水、35%乙醇进行洗脱，洗脱至无皂苷反应，再继续用55%乙醇洗脱，收集洗脱液，回收溶剂，蒸干，重结晶，得拟人参皂苷RT5；

[0027] 大孔树脂采用D4020；重结晶试剂采用乙酸乙酯。

[0028] 下面结合药效学实验进一步说明本发明。

[0029] 实验例：拟人参皂苷RT5对AMI大鼠MIS及血清AST、CPK及LDH的影响

[0030] 2.1药物

[0031] 试验药品: 拟人参皂苷RT5，纯度98%，由吉林圣亚医药科技有限公司提供，批号:20060820。

[0032] 阳性对照药: 硝酸甘油注射液，规格: 5mg/ml，由山西康宝生物制品有限公司提供，批号: 20051103L4674。

[0033] 试验动物

[0034] Wistar大鼠，156只，雌雄各半，体重280～380g，吉林大学基础医学院实验动物中心提供，动物合格证号: SCXK(吉)2003-0001。

[0035] 给药剂量

[0036] 拟人参皂苷RT5 5、10、20mg/kg，硝酸甘油5mg/kg。给药途径:舌下静脉给药。给药体积均为2ml/kg。

[0037] 试验方法

[0038] 大鼠按体重随机分为7组，即：假手术组12只、梗死模型组、阳性药硝酸甘油注射液5mg/kg组、拟人参皂苷RT5 5、10、20mg/kg组，每组24只。按文献方法制作心肌梗死模型：在乙醚麻醉下，将大鼠仰位固定于手术台上，测定大鼠Ⅱ导联正常心电图后，正中剃毛，以10号线做荷包缝合，以手术刀正中切开，用止血钳剥离肋间肌肉，自左侧3～4肋间开胸，暴露心脏，在肺动脉圆锥及左心房间找出冠脉左前降支，于左心耳下2～3mm处用0号线立即结扎之，将心脏送回胸腔，迅速挤出胸腔内气体，拉紧荷包缝合线结扎以关闭胸腔，整个开胸时间不超过30秒，假手术组不结扎而只置手术线。各组动物于术前30min及术后6h分别舌下静脉注射给药1次。待结扎冠脉24h后，用戊巴比妥钠30mg/kg 腹腔注射麻醉，测定大鼠Ⅱ导联心电图。然后，将各组存活下来的大腹主动脉插管取血，测血清天门冬氨酸氨基转换酶（AST）、磷酸肌酸激酶（CPK）及乳酸脱氢酶（LDH）活性。切下缺血组织称重，以缺血心肌与心室湿重的百分比计算心肌梗死范围（MIS）。试验数据以均值±标准差（ ±s）表示，按组间t检验进行统计分析。

[0039] 试验结果

[0040] 与假手术组比较，梗死模型组大鼠的MIS及血清AST、CPK、LDH活性均明显增加(P<0.05，0.001)。

[0041] 与梗死模型组比较，拟人参皂苷RT5小、中、大剂量组能明显缩小大鼠冠脉结扎24小时后 MIS(P<0.01或P<0.001)，并能明显降低血清CPK及LDH活性(P<0.05或P<0.01)，拟人参皂苷RT5大剂量组亦能明显降低血清AST活性(P<0.01)。

[0042] 与梗死模型组比较，阳性药硝酸甘油注射液组能明显缩小大鼠冠脉结扎24小时后 MIS(P<0.001)，并能明显降低血清CPK及LDH活性(P<0.01)。结果见表1。