一种检测精浆果糖浓度试剂盒及检测方法

摘要

本发明公开了一种检测精浆果糖浓度试剂盒及检测方法，该检测精浆果糖浓度试剂盒，包括果糖标准液、间苯二酚与盐酸的混合液。该检测方法为首先设定检测仪器参数；在空白管中加入间苯二酚与盐酸的混合液，在标准管中加入果糖标准液和间苯二酚与盐酸的混合液，在样品管中加入精浆和间苯二酚与盐酸的混合液；将上述空白管、标准管和样品管同时进行水浴，水浴时间为10min、水浴温度为70℃；再将水浴好的空白管、标准管和样品管同时经流水冷却，通过检测仪器进行比色，得出结果。本发明中的试剂盒及检测方法能使操作简便、省时、节省试剂；采用本发明，能够作同步对比试验，使得结果稳定可靠，适用于各级医院的男科实验室。

权利要求

1.一种检测精浆果糖浓度试剂盒，其特征在于，包括果糖标准液、浓度为2g/L的间苯二酚与浓度为10mol/L的盐酸的混合液；其中所述间苯二酚与盐酸的混合液中间苯二酚与盐酸的体积比为1∶3；所述果糖标准液的浓度为2g/L。

2.根据权利要求1所述的一种检测精浆果糖浓度试剂盒，其特征在于，按每个试剂盒装载100个测试所需检测试剂计算，所述果糖标准液为0.5ml±20μl、间苯二酚与盐酸的混合液为100ml±4ml。

3.用权利要求1或2所述的一种检测精浆果糖浓度试剂盒检测精浆果糖浓度的方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：

1)依据反应原理和仪器性能设定检测参数；

2)在空白管中加入间苯二酚与盐酸的混合液，在标准管中加入果糖标准液和间苯二酚与盐酸的混合液，在样品管中加入精浆和间苯二酚与盐酸的混合液；

3)将步骤2)中的空白管、标准管和样品管同时进行水浴，水浴时间为10min、水浴温度为70℃；

4)再将步骤3)中水浴好的空白管、标准管和样品管同时经流水冷却，通过检测仪器进行比色，得出结果。

4.根据权利要求3所述的一种用检测精浆果糖浓度试剂盒检测精浆果糖浓度的方法，其特征在于，所述检测仪器为半自动生化分析仪，它的参数为：项目类型为终点法；主波长为492nm；延迟时间为3s；测量时间为3s；项目单位为g/L；标准浓度为2g/L；比色皿温度为37℃。

5.根据权利要求3所述的一种用检测精浆果糖浓度试剂盒检测精浆果糖浓度的方法，其特征在于，步骤2)中所述的精浆是将液化精液通过3000g离心15min获得的上清液。

说明书

一种检测精浆果糖浓度试剂盒及检测方法

技术领域

[0001] 本发明涉及一种生物化学试剂盒及检测方法，具体说是一种检测精浆果糖浓度试剂盒及检测方法。

背景技术

[0002] 精浆果糖测定对判断男性生育力具有重要意义。研究发现，精浆果糖浓度减少的病例，精子存活率常较低，精子的活动力明显减弱。果糖含量与精子浓度明显相关，精子浓度越高，果糖分解率越高，故果糖含量随精子浓度的增加而降低。

[0003] 精浆果糖测定常用于判断精囊腺功能和输精管道的阻塞。精囊腺炎症后可引起精囊萎缩，精液果糖浓度常降低；射精管阻塞亦可使精液果糖下降或难以被检测出。测定精浆果糖含量有助于辅助诊断阻塞性无精子症和非阻塞性无精子症，非阻塞性无精子症患者精浆果糖浓度常正常或高于正常生育组，而阻塞性无精子症患者精浆果糖含量常显著降低甚至为0。先天性输精管精囊发育缺陷患者精浆果糖也常显著低于正常生育男性或为0。果糖检测还可用于逆行射精的辅助诊断，即取射精后膀胱尿液作果糖测定。许多学者将人类精浆中果糖浓度作为间接衡量睾酮活性的指标。精浆果糖浓度亦可作为判断节育术是否对精囊腺功能有影响的指标。

[0004] 鉴于此，精浆果糖的检测就显得尤为重要。目前，我国部分男科实验室开展了精浆果糖的检测，使用的方法为手工间苯二酚法。其原理是果糖与溶于强酸的间苯二酚溶液加热后，产生红色化合物，根据红色的深浅可判定果糖浓度的高低，在具体操作过程中精浆样品需用氢氧化钡和硫酸锌沉淀蛋白后才能检测，预处理的精浆样品与间苯二酚和浓盐酸需90℃水浴10min后用分光光度计比色，然后手工计算获得结果，每次检测需用果糖标准液
1ml，样品100μl，间苯二酚1ml，浓盐酸3ml。该法操作步骤较多，费时、费试剂，很难在临床常规检测中广泛使用。

发明内容

[0005] 发明目的：本发明的目的是为了提供一种能使检测精浆果糖浓度时操作简便、省时、节省试剂、结果稳定可靠、能广泛适用于临床检测的检测精浆果糖浓度试剂盒及检测方法。

[0006] 技术方案：为了解决上述技术问题，本发明所述的一种检测精浆果糖浓度试剂盒，包括果糖标准液、浓度为2g/L的间苯二酚与浓度为10mol/L的盐酸的混合液；其中所述间苯二酚与盐酸的混合液中间苯二酚与盐酸的体积比为1∶3；所述果糖标准液的浓度为2g/L。

[0007] 按每个试剂盒装载100个测试所需检测试剂计算，所述果糖标准液为0.5ml±20μ1、间苯二酚与盐酸的混合液为100ml±4ml。

[0008] 一种用检测精浆果糖浓度试剂盒检测精浆果糖浓度的方法，该方法包括如下步骤：

[0009] 1)依据反应原理和仪器性能设定检测参数；

[0010] 2)在空白管中加入间苯二酚与盐酸的混合液，在标准管中加入果糖标准液和间苯二酚与盐酸的混合液，在样品管中加入精浆和间苯二酚与盐酸的混合液；

[0011] 3)将步骤2)中的空白管、标准管和样品管同时进行水浴，水浴时间为10min、水浴温度为70℃；

[0012] 4)再将步骤3)中水浴好的空白管、标准管和样品管同时经流水冷却，通过检测仪器进行比色，得出结果。

[0013] 所述检测仪器为半自动生化分析仪，它的参数为：项目类型为终点法；主波长为492nm；延迟时间为3s；测量时间为3s；项目单位为g/L；标准浓度为2g/L；比色皿温度为
37℃。

[0014] 步骤2)中所述的精浆是将液化精液通过3000g离心15min获得的上清液。

[0015] 有益效果：与现有技术相比，使用本发明中的试剂盒以及用该试剂盒进行检测的方法，能使操作简便、省时，无需进行样品预处理，无需计算仪器直接给出结果，孵育温度降低20℃；果糖果糖标准液用量为原来的1/200，间苯二酚和盐酸用量为原来的1/4，无需氢氧化钡和硫酸锌，从而节省试剂用量；采用本发明，能够作同步对比试验，使得结果稳定可靠，能广泛适用于各级医院的男科实验室。

附图说明

[0016] 图1为手工法和半自动生化分析仪法的检测结果相关性分析图；

[0017] 图2为光密度与果糖标准液浓度的线性关系图。

具体实施方式

[0018] 下面结合实施例对发明作进一步的详细说明，应理解这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。

[0019] 实施例1：本发明一种检测精浆果糖浓度试剂盒，包括果糖标准液、间苯二酚(浓度为2g/L)与盐酸(浓度为10mol/L)的混合液；其中所述间苯二酚与盐酸的混合液中间苯二酚与盐酸的体积比为1∶3；所述果糖标准液的浓度为2g/L。按每个试剂盒装载100个测试所需检测试剂计算，所述果糖标准液为0.5ml±20μl、间苯二酚与盐酸的混合液为100ml±4ml。

[0020] 实施例2：一种用实施例1中的一种检测精浆果糖浓度试剂盒进行检测精浆果糖浓度的方法，该方法的具体步骤如下：

[0021] 1)设定检测仪器参数：所述检测仪器为半自动生化分析仪，它的参数为：项目类型为终点法；主波长为492nm；延迟时间为3s；测量时间为3s；项目单位为g/L；标准浓度为2g/L；比色皿温度为37℃；

[0022] 2)在空白管中加入间苯二酚与盐酸的混合液，在标准管中加入果糖标准液和间苯二酚与盐酸的混合液，在样品管中加入精浆和间苯二酚与盐酸的混合液；其中所述的精浆是将液化精液通过3000g离心15min获得的上清液；

[0023] 3)将上述空白管、标准管和样品管同时进行水浴，水浴时间为10min、水浴温度为70℃；

[0024] 4)再将水浴好的空白管、标准管和样品管同时经流水冷却，通过检测仪器进行比色，得出结果。

[0025] 实施例3：按照实施例2的检测方法对适合反应体系的反应温度进行确定[0026] 取20μl果糖标准液加1ml间苯二酚与盐酸的混合液，分别于70、80、90℃水浴10min，流水冷却，492nm比色，读取结果。发现不同温度下的反应结果无显著差异，温度越低危险性越小，故选择70℃水浴。

[0027] 实施例4：在实施例2和实施例3的基础上进行批内和批间变异检测[0028] 依据手工法检测结果，选择果糖浓度在正常参考值范围0.87～3.95g/L上限和下限附近的精浆样本各1例，均分成2份，每份500μl，1份在同一批次内用半自动生化分析仪按照实施例2的方法并按照表一中的检测步骤和反应条件重复检测10次，计算批内变异系数(CV)，得CV＜15％；另1份置于-20℃冻存，检测方法如实施例2，检测步骤和反应条件如表一，每天检测1次，共10次，计算批间变异系数(CV)，得CV＜15％，结论：批内和批间的变异检测得到的CV接近，表示使用该试剂盒方法检测精浆果糖浓度稳定、可靠。

[0029] 表一：反应条件

[0030]

[0031] 实施例5：半自动生化分析仪法和手工法检测结果的相关性分析

[0032] 用常规方法手工法和半自动生化分析仪法同时检测51例精浆样本果糖浓度，经Pearson相关分析，两种方法的检测结果呈显著正相关(r＝0.806，P＜0.01)。具体结果见图1。

[0033] 实施例6：线性范围

[0034] 取500μl 2g/L的果糖标准液加入1500μl蒸馏水混匀。分别取5、10、20、30、40μl稀释液，加1ml间苯二酚与盐酸的混合液；空白管只加间苯二酚与盐酸的混合液；混匀，70℃水浴10min，检测。记录每管光密度值并与稀释液量作图，计算相关系数(R)。发现
2
精浆果糖在0～4g/L之间线性关系良好，R ＝0.9966。具体结果见图2。

[0035] 实施例7：正常参考值范围的确定

[0036] 51例精液常规分析参数均正常的男性精浆果糖浓度，其结果经统计分析为正态分布，以x(均值)±1.96s(标准差)计算参考值范围为0.87～5.23g/L。