提高卤虫卵孵化率的方法

摘要

本发明公开了一种提高卤虫卵孵化率的方法，卤虫卵的孵化在孵化培养基中进行，在孵化时向孵化培养基中通入臭氧气体，使孵化培养基中臭氧的浓度为0.08～2.75mg/L，通入臭氧的时间为1～12小时，卤虫卵的密度为2.5～6g干卤虫卵/L孵化培养基。本发明的方法操作简单，通入臭氧9小时以内卤虫卵的孵化率即可达到88％。

权利要求

1.一种提高卤虫卵孵化率的方法，卤虫卵的孵化在孵化培养基中进行，所述孵化培养基为经过处理的清洁海水，其特征在于：在孵化时向孵化培养基中通入臭氧气体，使孵化培养基中臭氧的浓度为0.08～2.75mg/L，通入臭氧的时间为1～12小时，卤虫卵的密度为

2.5～6g干卤虫卵/L孵化培养基，孵化设备采用锥形的孵化桶，利用空气泵将空气通入到孵化桶的底部打气，让虫卵全部悬浮在培养基中，首先将臭氧发生器连接到空气泵的前端，或者是将臭氧发生器置于空气泵的后端，然后将产生的气体直接通入到包含卤虫卵的孵化培养基中，或者直接将臭氧发生器产生的臭氧引入到孵化培养基中，使得在孵化过程中的卤虫卵能够有效地和溶解在海水中的臭氧接触。

2.根据权利要求1所述的提高卤虫卵孵化率的方法，其特征在于：孵化培养基中臭氧气体的浓度为0.15～2.25mg/L。

3.根据权利要求1所述的提高卤虫卵孵化率的方法，其特征在于：所述的卤虫卵的密度为3～5g干卤虫卵/L孵化培养基。

4.根据权利要求1所述的提高卤虫卵孵化率的方法，其特征在于：向孵化培养基中通入臭氧气体的时间为3～9小时。

5.根据权利要求4所述的提高卤虫卵孵化率的方法，其特征在于：向孵化培养基中通入臭氧气体的时间为4～7小时。

6.根据权利要求5所述的提高卤虫卵孵化率的方法，其特征在于：向孵化培养基中通入臭氧气体的时间为5小时。

说明书

提高卤虫卵孵化率的方法

技术领域

[0001] 本发明涉及水产养殖领域，特别是涉及一种提高卤虫卵孵化率的方法。

背景技术

[0002] 卤虫卵(brine shrimp eggs)，产于高盐度水域，由于很多资料来自国外，有时称卤虫卵为卤虫胞囊(artemia cysts)，在我国很多地方称之为丰年虫卵。卤虫卵经过在培养基中孵化后孵出卤虫无节幼体，成为水产幼苗的最佳活饵料，该方法特别适用于产于高盐度内陆盐湖的卤虫卵(包括滞育卤虫卵)。卤虫无节幼体一般用作水产养殖的活体生物饲料，尤其是作为海鱼、海虾幼虫阶段的活体饲料。市场上一般没有卤虫无节幼体这样的活体饲料，只有卤虫卵，卤虫无节幼体就是从卤虫卵中孵化的。卤虫卵的孵化通常在孵化培养基中完成。卤虫卵经充分脱水并在低温无氧无光照的干燥环境下可以存活很长时间甚至长达几年。超长的存储能力以及较短时间(24h)内即可产生自由游动的无节幼体特性使其成为水产养殖中最便利的活体饲料来源。

[0003] 卤虫卵是从自然界如海边盐田和内陆盐湖中收集的。在这些收集的卤虫卵中，存在不同比例的休眠卵和滞育卵。将卤虫卵经纯化去除碎渣、经洗涤去除盐分、最后进行干燥处理和冷室保存，使其处于休眠状态。卤虫卵的质量是通过评估参数来判定的，其中卤虫卵的可孵化能力是最受人们关注的指标，因为它直接表明了在人工孵育条件下，从一定数量的卤虫卵中可以获得的活体饲料(无节幼体)的数量。卤虫卵的可孵化能力通常用孵化率(HR％)来表示，即指从100个完整卤虫卵中孵化出的自由游动的无节幼体的个数。

[0004] 处于滞育或休眠状态下的卤虫卵不能孵化成自由游动的无节幼体，除非处于促进孵化的条件下，因此卤虫卵的孵化需要在孵化培养基中完成，孵化培养基通常为经过处理的清洁海水。在孵化过程中，需要控制孵化培养基的非生物参数，如：盐度、PH值、氧气浓度和水温。一般情况下培养基就是来自经过过滤的海水，目前普遍采用的最佳参数范围为：

[0005] 盐度：15～35g溶解的盐/升；

[0006] PH值：＞8；

[0007] 氧气浓度：＞5mg/L；

[0008] 水温：25～28℃；

[0009] 水面上的光照强度：不小于2000lux。

[0010] 卤虫卵的孵化是一个极其复杂的过程，通常包括三个阶段：前发育期、伞形期和实际孵化期。能够在24小时之内孵化出丰年虫幼体的虫卵，在12小时之内基本完成了发育期，在18小时之内完成伞型期，在24小时之内成为卤虫无节幼体。在孵化场，因为孵化设备是有限的，为了有效利用孵化设备，一般情况下，在24小时之内必须将卤虫幼体孵化出来，这样孵化设备才能够继续使用。但是影响卤虫卵孵化过程的因素很多，按照上述给定的孵化条件进行的孵化过程往往不能达到预期的孵化效果，因此需要采取特殊的滞育失活方法，例如延长干燥卤虫卵的冷冻存放时间、重复吸水～脱水循环和在特殊化学物质如过氧化氢溶液中短时间孵化等来提高卤虫卵的孵化率，而使用过氧化氢溶液来提高卤虫卵的孵化率是目前普遍采用的方法。

[0011] 最早较为权威的记载利用过氧化氢提高卤虫卵孵化率的是原苏联的公开号为SU-A-935044(公开日为1982年6月15日、发明名称为的“从甲壳纲动物的虫卵获得无节幼体的方法”的发明专利。另外，1998年比利时Van Stappenden等人也公开发表了使用过氧化氢来增加卤虫卵孵化率的方法。

[0012] 但是上述采用过氧化氢溶液处理卤虫卵的方法存在以下缺点：

[0013] 1)使用前需要针对不同卤虫株系或同一株系不同批次的卤虫卵，进行大量的试验来确定最适宜参数，而且为了获得理想的孵化效果，操作时还必须严格控制在该最适宜参数下进行，这给使用者带来了极大的不便；

[0014] 2)实施过程中需要把水合后的卤虫卵转移到过氧化氢溶液和相应的孵化培养基中，而且这些步骤的进行对实施时间的要求非常严格，使实施过程极其繁琐复杂；

[0015] 3)卤虫卵在经过过氧化氢溶液后，必须及时的用水洗涤以去除残存的过氧化氢，甚至需要进行中和处理，从而提高了生产成本。

[0016] 为此，中国发明专利ZL01817979.7公开了一种生产自由游动的卤虫无节幼体的方法，通过在孵化培养基中直接添加过氧化氢或过氧化物例如过氧化钙、过氧化镁来提高卤虫卵的孵化率。此方法虽然操作简单，但是对孵化培养基的PH值改变较大，在卤虫卵孵化过程中容易造成幼体死亡，从而降低了卤虫卵的孵化率。

发明内容

[0017] 本发明要解决的技术问题是提供一种操作简单且可提高卤虫卵孵化率的方法。

[0018] 卤虫卵孵化成卤虫幼体是一个非常复杂的生化过程，在这个过程中存在着很多细胞的新陈代谢过程，而细胞的新陈代谢过程是细胞中的氧与细胞食物在细胞的线粒体中经过酶的促降解作用而产生能量的过程。线粒体中的能量是以三磷酸腺苷(ATP)的分子形式产生的。一个动物细胞所消耗的氧，平均90％以上是在线粒体中燃烧并产生ATP。线粒体使氧和氢结合成水，然后利用其释放的能量产生ATP。细胞中的氧在转变成水的过程中会产生许多活性氧(ROS)。而活性氧正是能够促进滞育卵和休眠卵孵化的最佳成份，也就是说，对于提高卤虫卵的孵化率来说，其中起作用的不是H2O2。不管是利用过氧化氢、过氧化物还是含有邻羟基苯的化合物，其作用机理都是利用单位时间内短时间存在的氧离子、单态氧来解除虫卵的滞育，从而提高卤虫卵的孵化率。而O3同样能够产生氧离子、单态氧，本发明即是利用这一机理而提出的。

[0019] 本发明的技术方案如下：

[0020] 一种提高卤虫卵孵化率的方法，卤虫卵的孵化在孵化培养基中进行，所述孵化培养基为经过处理的清洁海水，孵化设备是锥形的孵化桶，利用空气泵将空气通入到孵化桶的底部打气，让虫卵全部悬浮在培养基中，首先将臭氧发生器连接到空气泵的前端，或者是将臭氧发生器置于空气泵的后端，然后将产生的气体直接通入到包含卤虫卵的孵化培养基中，或者直接将臭氧发生器产生的臭氧引入到孵化培养基中，使得在孵化过程中的卤虫卵能够有效地和溶解在海水中的臭氧接触，在孵化时向孵化培养基中通入臭氧气体，使孵化培养基中臭氧的浓度为0.08～2.75mg/L，通入臭氧的时间为1～12小时，卤虫卵的密度为2.5～6g干卤虫卵/L孵化培养基。

[0021] 优选的是，孵化培养基中臭氧气体的浓度为0.15～2.25mg/L。

[0022] 优选的是，所述的卤虫卵的密度为3～5g干卤虫卵/L孵化培养基。

[0023] 优选的是，向孵化培养基中通入臭氧气体的时间为3～9小时，更优选的通入臭氧气体的时间为4～7小时，最佳通入臭氧气体的时间为5小时。

[0024] 本发明的有益效果是：由于在孵化培养基中加入的臭氧能够破坏卤虫卵的滞育机制，促使滞育虫卵在孵化期间产生自由游动的卤虫无节幼体，所以能够明显提高孵化效率，通入臭氧9小时以内卤虫卵的孵化率即可达到88％；由于臭氧的溶解度远高于氧气，臭氧分解产生氧气，提高了孵化培养基中氧气的可利用率，相当于提高了孵化培养基的溶解氧，提高了孵化培养基的孵化密度；另一个突出的特点是控制引入培养基中的臭氧量是非常方便的，也就是所可以随时停止通入臭氧或者减少臭氧的通入量。

具体实施方式

[0025] 臭氧(化学分子式O3)的半衰期仅为30～60min。由于它不稳定、易分解，无法作为一般的产品贮存，因此需在现场制造。用空气制成臭氧的浓度一般为1～10mg/L，用氧气制成臭氧的浓度为10-30mg/L。

[0026] 低浓度臭氧在水中的溶解度并不大，在水中的溶解度基本满足亨利定律。低浓度臭氧在水中的溶解度见表1-4。

[0027] 表1-4低浓度臭氧在水中的溶解度/(mg/L)

[0028]

[0029] 卤虫卵孵化时需要将空气通入到水中，孵化设备一般是锥形的孵化桶，利用空气泵将空气通入到孵化桶的底部打气，让虫卵全部悬浮在培养基中。

[0030] 首先将臭氧发生器连接到空气泵的前端，或者是将臭氧发生器置于空气泵的后端，然后将产生的气体直接通入到包含卤虫卵的孵化培养基中。也可以直接将臭氧发生器产生的臭氧引入到孵化培养基中，使得在孵化过程中的卤虫卵能够有效地和溶解在海水中的臭氧接触，臭氧会分解产生活性氧，促进卤虫卵的孵化，并且在孵化过程中不再需要给培养基添加其他药物。通入的含有臭氧的空气在有效地提高卤虫卵孵化率的同时，还改善了培养基的水质、有效地对水体进行了消毒处理。

[0031] 经过多次试验，我们发现利用臭氧提高丰年虫卵孵化率时，臭氧在培养基中的浓度范围可以很宽。

[0032] 现在以500公斤产地为俄罗斯的卤虫卵为例，具体说明本发明的提高卤虫卵孵化率的方法。这些卤虫卵已进行了去除杂质、盐分、空壳和干燥处理。孵化培养基为经过处理的清洁海水，其非生物参数为：盐度20克溶解盐/升；PH值8.2；氧气浓度3毫克/升；温度28℃。

[0033] 首先，取本批卤虫卵中的50克进行如下实验，通臭氧的时间为孵化开始后8小时内：

[0034] 将卤虫卵按1～6(g干卤虫卵/L孵化培养基)不同的卤虫卵密度分组，在相同的孵化培养基中，通入相同重量的臭氧，使培养基中的臭氧浓度达到0.1mg/L孵化培养基，在相同的孵化时间(20小时)，得到不同卤虫卵密度的孵化率如下：

[0035]卤虫卵密度(g/L) 1 2.5 3 4 5 6 7
孵化率(H％) 62 83 88 86 88 85 53

[0036] 可以看出卤虫卵密度在2.5～6g/L时都能获得最佳的孵化效果，在培养基中卤虫卵的最佳孵化密度为3～5g/L。

[0037] 然后，选取中间值，即卤虫卵密度为4g/L进行下面的实验：

[0038] 将培养基中臭氧浓度按0～3.75mg/L孵化培养基分组，在相同的孵化培养基中，卤虫卵密度均为4g/L，在相同的孵化时间(24小时)，得到不同添加量时的孵化率如下：

[0039]臭氧浓度(mg/L) 0 0.05 0.06 0.07 0.08 0.1 0.15 0.18 0.2 0.25 0.5

孵化率(H％) 40 52 69 68 82 83 85 86 85 87 87

[0040]

[0041]臭氧浓度(mg/L) 0.75 1.25 1.75 2.25 2.75 3.00 3.25 3.75
孵化率(H％) 85 87 87 86 83 79 72 30

[0042] 可以看出，当培养基中臭氧浓度为0.08～2.75mg/L时，都可以得到较高的卤虫卵孵化率，而臭氧浓度为0.15～2.25mg/L时，卤虫卵孵化率更高。

[0043] 另外，在培养基中浓度为1.75mg/L的情况下，在相同的孵化培养基中，卤虫卵密度均为4g/L，测量不同臭氧通入时间下的孵化率如下：

[0044]通入臭氧时间，小时 1 2 3 4 5 7 9 12
孵化率(H％) 65 75 78 80 87 82 79 65

[0045] 在其它条件相同的情况下，通入臭氧3～9小时都可以得到较高的孵化率；通入臭氧4～7小时时，虫卵的孵化率更高；通入臭氧的时间为5小时时，虫卵的孵化率最高。

[0046] 根据不同孵化场的臭氧发生器的型号和臭氧产量，测定出在28摄氏度时定量海水中的臭氧浓度，需要孵化虫卵时，按上述数据孵化即可。本发明的实施方法简易可行，使