蛭弧菌混合体菌液在斑节对虾养殖中的应用

摘要

本发明特别涉及蛭弧菌蛭质体与游泳体混合体菌液在斑节对虾等海产品养殖中的应用，方法为在水体中添加蛭弧菌蛭质体与游泳体混合菌剂，使水体蛭弧菌蛭质体与游泳体混合菌体浓度为101-107pfu/mL，同时饲料要用浓度为101-107pfu/mL的蛭弧菌蛭质体与游泳体混合菌剂浸泡30min，养殖期间可达到30天换水一次。本发明为生物养殖方法，绿色、安全、无污染，效果显著，能够改善水质，促进斑节对虾生长，提高免疫力，提高成活率，有极好的发展前景。对提高经济效益和食用安全性，保障人类健康具有十分重要的意义。

权利要求

1.蛭弧菌混合体菌液在斑节对虾养殖中的应用，其特征在于：所述蛭弧菌混合体菌液为蛭弧菌蛭质体菌液和游泳体菌液混合，所述蛭弧菌混合体菌液在斑节对虾养殖中的应用是将饲料在蛭弧菌混合体菌液中浸泡15-45min，所述蛭弧菌混合体菌液中蛭弧菌混合体的

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浓度为10 ～10pfu/mL；所述蛭弧菌为蛭弧菌（Bdellovibrio sp.）BDFM05，于2009年8月

7日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M 209172。

2.蛭弧菌混合体菌液在斑节对虾养殖中的应用，其特征在于：所述蛭弧菌混合体菌液在斑节对虾养殖中的应用是在水体中添加蛭弧菌混合体菌液，使水体中蛭弧菌混合体浓度

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为10 ～10pfu/mL；所述蛭弧菌为蛭弧菌（Bdellovibrio sp.）BDFM05，于2009年8月7日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M 209172。

3.根据权利要求1或2所述蛭弧菌混合体菌液在斑节对虾养殖中的应用，其特征在于：所述蛭弧菌混合体菌液为蛭质体菌液与游泳体菌液按细菌数1:1混合。

4.根据权利要求1或2所述蛭弧菌混合体菌液在斑节对虾养殖中的应用，其特征在于：所述蛭弧菌混合体菌液的制备方法如下：

所述蛭弧菌蛭质体菌液按照以下方法制备得到：接种宿主于营养肉汤液体培养基中，在35℃和200rpm摇床培养12h，培养液经4℃，5000～8000rpm离心10～20min后，沉淀加入至DNB液体培养基中，接入蛭弧菌BDFM05，在温度25～35℃下，以150～300rpm摇床培养36～48h，得到含蛭弧菌蛭质体和蛭弧菌游泳体的培养液，培养液在4℃温度下以

6000～8000rpm离心15～20min后，去除含蛭弧菌游泳体的上清，得到的沉淀即为蛭弧菌蛭质体；将蛭弧菌蛭质体用DNB液体培养基、水、生理盐水或0.2mol／L pH值为7.2～7.6

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的磷酸盐缓冲液悬浮，得到浓度为10 ～10pfu/mL的蛭弧菌蛭质体菌液，所述宿主为副溶血弧菌（Vibrio parahaemolyticus），购于美国典型物种保藏中心American Type Culture Collection，ATCC 17802；

所述蛭弧菌游泳体菌液按照以下方法制备得到：将蛭弧菌蛭质体制备方法中的含蛭弧菌游泳体的上清经16000～18000rpm离心15～20min后，沉淀用DNB液体培养基、水、生

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理盐水或0.2mol／L pH值为7.2～7.6的磷酸盐缓冲液悬浮，得到浓度为10 ～10pfu/mL的蛭弧菌游泳体菌液。

将蛭弧菌蛭质体菌液和游泳体菌液混合得蛭弧菌混合体菌液。

说明书

蛭弧菌混合体菌液在斑节对虾养殖中的应用

技术领域

[0001] 本发明属于生物技术领域，涉及一种细菌的应用，特别涉及蛭弧菌蛭质体与游泳体混合体菌液在斑节对虾等海产品养殖中的应用。

背景技术

[0002] 斑节对虾(Penaeus monodon)俗称鬼虾、草虾、花虾、竹节虾、斑节虾、牛形对虾，联合国粮农组织通称大虎虾。是对虾中个体最大的一种，成熟个体一般体长22cm-32cm，体重137g-211g，为当今世界上虾类养殖最普遍的品种之一。

[0003] 近年来，养殖者为了追求高产量，对虾的放养密度过大。在养殖过程中因过量投饵和对虾排泄物引起底质极端恶化，水质发生突变，极易引起虾体的免疫力下降，从而引发虾病的发生。

[0004] 传统方法具有调控养殖水体的优点的同时，缺点也比比皆是。中草药对斑节对虾生长性能具有无药物残留、经济效益高的优点，但有见效慢的缺点。抗生素对抑制病原微生物的繁殖，减少其代谢毒素对虾的毒害作用等方面起到了积极的作用，但是长期使用抗生素，特别是滥用抗生素，其种种弊端也逐渐显露出来。如破坏虾塘中自然生态平衡，对虾的机体免疫力产生不良影响，产生耐药性和药物残留等副作用，给养殖业和作为消费者的人类的健康都带来了潜在的危害。因此，开发一种简便易行、安全、优质、营养的无公害健康的斑节对虾养殖新技术已经成为当今社会的共识。

[0005] 蛭弧菌是寄生于其他细菌，并能导致宿主细菌裂解的一类细菌。比一般细菌小，能通过细菌滤器，有类似噬菌体的作用。单细胞，呈弧形或逗点状，有时呈螺旋状，大小一般(0.2-0.6)×(0.8-1.2)微米，端生鞭毛，多为一根。革兰氏染色呈阴性，可以裂解包括副溶血弧菌、溶藻弧菌等引发虾病害的潜在致病菌。蛭弧菌游泳体是指蛭弧菌侵入宿主细菌前的生长形式。蛭弧菌在游泳体阶段，识别并与宿主发生不可逆结合，然后侵入宿主，蛭弧菌游泳体侵入宿主细菌的过程非常快，一般几秒钟内即可完成。蛭弧菌蛭质体是蛭弧菌在特定宿主细菌的周质空间内进行生长繁殖的形式。蛭弧菌进入宿主菌细胞周质空间后，主要通过降解宿主细胞的大分子成为单体，然后摄入用于其生物大分子的合成。

[0006] 蛭弧菌的生活史可分为脱离宿主细菌、具有鞭毛、自由游泳的游泳体状态和在宿主细菌内生长发育的蛭质体状态。游泳体蛭弧菌侵入宿主的周质空间的同时失去鞭毛，宿主细胞外膜产生一个孔隙供蛭弧菌入侵，当蛭弧菌侵入到宿主体内后，孔隙重新封闭。宿主细胞及在其周质空间的蛭弧菌则为″蛭质体″。与游泳体相比，蛭质体不仅具有制备、保存更为方便，环境耐受力强，作用时间虽略慢但更久的特点，同时还具有潜在的灭活疫苗功能。当游泳体蛭弧菌入侵宿主细胞后，宿主细胞的呼吸作用(respiration)很快被停止。蛭弧菌也进入蛭质体状态，开始分泌多种酶，消解宿主细胞的大分子为小分子物质，进而整合为自身的营养物质，使自身生长，变长。最终，长条状的蛭质体分成很多短的节段，长出鞭毛，重新成为游泳体。之后，它们分泌必需的酶类，破壁而出，再次成为脱离宿主细菌、具有鞭毛、自由游泳的游泳体。在此蛭质体发育期间，蛭弧菌并不改变宿主细胞的表面结构，使原宿主仍具有抗原作用，可刺激生物体，产生免疫应答反应。这一潜在功能使得应用蛭弧菌蛭质体于斑节对虾养殖中，可有效预防对虾弧菌病的产生，提高对虾抗病能力。

[0007] 蛭弧菌游泳体和蛭质体的混合菌剂兼具游泳体起效快，活力强和蛭质体制备、保存容易，杀菌作用时间更久，环境耐受力更强，以及具有潜在的免疫疫苗功效。目前，应用蛭弧菌游泳体和蛭质体的混合菌剂来提高斑节对虾成活率，促进斑节对虾快速生长的养殖方式，预防对虾弧菌病提高对虾抗病能力在国内外均未报道。

发明内容

[0008] 本发明的目的在于克服现有技术的弊端，提供蛭弧菌蛭质体与游泳体混合体菌剂在斑节对虾养殖中的应用方法。其特征按照养殖生态学原理，海洋生物的生长环境要求，生物之间的相互关系及无公害养殖标准，人工营造养殖环境，减少投入成本，提高斑节对虾免疫力，促进斑节对虾快速生长，提高经济效益。

[0009] 本发明的目的通过下述方案实现，

[0010] 蛭弧菌混合体菌液在斑节对虾养殖中的应用，其特征在于：所述蛭弧菌混合体菌液为蛭弧菌蛭质体菌液和游泳体菌液混合。

[0011] 所述蛭弧菌为蛭弧菌(Bdellovibrio sp.)BDFM05，于2009年8月7日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址为中国武汉武汉大学，保藏编号为CCTCC NO：M 209172。

[0012] 所述蛭弧菌混合体菌液为蛭质体菌液与游泳体菌液按细菌数1∶1混合。

[0013] 所述蛭弧菌混合体菌液在斑节对虾养殖中的应用是将饲料在蛭弧菌混合体菌液中浸泡15-45min。

[0014] 所述蛭弧菌混合体菌液在斑节对虾养殖中的应用是在水体中添加蛭弧菌混合体1 7
菌液，使水体中蛭弧菌混合体浓度为10 ～10pfu/mL。

[0015] 所述蛭弧菌混合体菌液的制备方法如下：

[0016] 所述蛭弧菌蛭质体菌液按照以下方法制备得到：接种宿主于营养肉汤液体培养基中，在35℃和200rpm摇床培养12h，培养液经4℃，5000～8000rpm离心10～20min后，沉淀加入至DNB液体培养基中，接入蛭弧菌BDFM05，在温度25～35℃下，以150～300rpm摇床培养36～48h，得到含蛭弧菌蛭质体和蛭弧菌游泳体的培养液，培养液在4℃温度下以6000～8000rpm离心15～20min后，去除含蛭弧菌游泳体的上清，得到的沉淀即为蛭弧菌蛭质体；将蛭弧菌蛭质体用DNB液体培养基、水、生理盐水或0.2mol/L pH值为7.2～7.6
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的磷酸盐缓冲液悬浮，得到浓度为10 ～10pfu/mL的蛭弧菌蛭质体菌液；

[0017] 所述蛭弧菌游泳体菌液按照以下方法制备得到：将蛭弧菌蛭质体制备方法中的含蛭弧菌游泳体的上清经16000～18000rpm离心15～20min后，沉淀用DNB液体培养基、水、6 9
生理盐水或0.2mol/L pH值为7.2～7.6的磷酸盐缓冲液悬浮，得到浓度为10 ～10pfu/mL的蛭弧菌游泳体菌液。

[0018] 将蛭弧菌蛭质体菌液和游泳体菌液混合得蛭弧菌混合体菌液。本发明相对于现有技术，具有如下的优点及效果：

[0019] 1、本发明所述蛭弧菌游泳体和蛭质体的混合体菌剂兼具游泳体起效快，活力强和蛭质体制备、保存容易，杀菌作用时间更久和环境耐受力更强的优点，效果更好。

[0020] 2、本发明采用营养配制、蛭弧菌混合体菌剂预防和调节、环境调控相结合的方案，达到了提高斑节对虾成活率，增强免疫力，促进斑节对虾摄食和快速生长，降低生产成本，提高经济效益的效果。

[0021] 3、本发明所述蛭弧菌游泳体和蛭质体的混合体菌剂对大多数的水产致病菌，特别是海洋弧菌有较强的裂解力，对水质也有一定的净化作用，最长可达到30天不换水。在养殖水体中泼洒一定浓度的蛭弧菌混合体菌剂，既能促进斑节对虾的生长，又能净化水质，从而克服了抗生素滥用带来的副作用和对养殖废水进行处理的高成本，为人类提供安全、绿色、无公害的水产品，提高养殖户的收入。

[0022] 4、本发明所述蛭弧菌游泳体和蛭质体混合体菌剂在斑节对虾的应用中安全性好。

[0023] 5、本发明所述蛭弧菌游泳体和蛭质体混合菌剂在斑节对虾的应用中作用效果好，且应用广泛，可推广。

具体实施方式

[0024] 下面结合实施例及表格对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。

[0025] 实施例1混合体菌剂的制备

[0026] 所述的蛭质体通过以下方法得到：在1L含有副溶血弧菌(接种浓度为107cfu/mL的菌1mL)(Vibrio parahaemolyticus，购于美国典型物种保藏中心American Type Culture Collection，ATCC 17802)的1L DNB(dilute nutrientbroth)液体培养基(营养肉汤0.8g，酪蛋白酸水解物0.5g，酵母精提物0.1g，溶于1000mL蒸馏水中，pH值为7.6)中3
接入1mL浓度为10pfu/mL蛭弧菌，于28℃、250rpm培养48h，培养液经4℃6000rpm离心
15min后，去除上清，沉淀即是蛭质体，沉淀用100mL DNB液体培养基悬浮，蛭弧菌BDFM05蛭
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质体菌体的浓度达到10pfu/mL。

[0027] 所用的蛭弧菌游泳体通过高密度蛭弧菌游泳体的发酵方法进行发酵：分别在3个装有100mL营养肉汤液体培养基(蛋白胨10g，酵母膏5g，蒸馏水1000mL，pH 7.2)的锥7
形瓶中接种1mL浓度为10cfu/mL副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus ATCC 17802，购于美国典型物种保藏中心American Type Culture Collection)，200rpm、28℃摇床培养18小时，培养液分别于4℃、5000rpm离心15min，弃上清。将沉淀加入到3个装有
100mLDNB(dilute nutrient broth)液体培养基(营养肉汤0.8g，酪蛋白酸水解物0.5g，酵母精提物0.1g，海水晶28g，溶于1000mL蒸馏水，pH值为7.6)的锥形瓶中，再分别接
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入1mL浓度为10pfu/mL蛭弧菌BDFM05。恒温摇床250rpm、28℃培养36h。培养液分别于
4℃6000rpm离心20min，取上清液，再将上清液分别于4℃16000rpm离心20min，保留沉淀，加入100mL DNB液体培养基(营养肉汤0.8g，酪蛋白酸水解物0.5g，酵母精提物0.1g，海水晶28g，溶于1000mL蒸馏水中，pH值为7.6)重新悬浮沉淀物，游泳体菌体的浓度达到
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10pfu/mL。

[0028] 实施例2混合体菌剂在斑节对虾普通养殖中的应用实验

[0029] 本发明的具体实施地点为华南地区某养殖场，实施时间为3个月。

[0030] (1)养殖池塘条件，养殖池底面积为10亩，池深2m，池底为泥沙质，池底平整，养殖池配备水泵、增氧机，并配备泵站闸门和较完备的进排水系统；

[0031] (2)放养前的准备，试验地海域的水源水质符合中华人民共和国国家标准渔业水质标准(GB11607-89)要求，海水经过砂滤、沉淀处理后进入养殖池，符合农业部《无公害食品海水养殖用水水质》(NY5052-2001)要求。放苗前10天，用80目的袖状网过滤后进水，同时施氮、磷、钾复合肥培养饵料生物，使池水透明度达到40cm，养殖池水盐度10‰；

[0032] (3)虾苗选择与放养，虾苗选择个体大小整齐，体长1.1-1.3cm的黑壳虾苗，群体发育整齐，肌肉饱满透明，附肢中色素正常，胃肠充满食物，虾苗流动活泼，对水流刺激反应灵敏，无外部寄生物及附着污物，放苗时水温20℃，3月20日放苗。养成池水色为黄绿色、透明度30cm，pH在8.5，投放密度为5万只/亩。虾苗运至养殖池边，用充氧气头向苗袋内充氧半小时，同时逐步加入养殖池水，使逐步缩小温差和醒苗；

[0033] (4)投饲管理，配合饲料1号(购买于广东恒兴集团有限公司，下同)为常规的对虾养殖饲料，符合中华人民共和国农业行业标准《无公害食品渔用配合饲料安全限量》(NY5072-2002)的规定。每次投饵前，将配合饲料1号用蛭弧菌游泳体与蛭质体混合菌剂浸1 3 5 7
泡30min，菌剂中的混合菌体浓度达到10、10、10、10pfu/mL，养殖前期和中期，虾平均体长6cm以下时，日投2次，日投放量控制在虾重的15％；养殖后期，平均体长6cm以上时，日投5次，日投放量控制在虾重的8％；

[0034] (5)养殖期的水环境管理，养殖期间正常曝气，使水中溶解氧达到5mg/L。采取不同换水周期，5、10、15、20、25、30天换水一次，每次换掉25cm深的水(量)，透明度保持在1 3
30cm，每次换水后加蛭弧菌蛭质体与游泳体混合菌剂，使水体中的菌体浓度达到10、10、
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10、10pfu/mL，加菌方法为：用相应的池水稀释菌液后，均匀泼洒全池，使菌液混合均匀。实验分组

[0035] 采用随机区组试验设计，平均分为A-D 4个试验组，B、C、D每个试验组有6个小组，分别为B1、C1、D1；B2、C2、D2；B3、C3、D3、；B4、C4、D4；B5、C5、D5；B6、C6、D6；B1-D6每小组再分为4组，即B1-1-B1-4...D6-1-D6-4，每组2个重复。对4组试验对虾初始体重进行方差整齐性检验，组间差异不显著(P＞0.05)。四组试验组的处理如下：

[0036] A组：工厂生产的养殖方式，池塘水透明度低于20cm时进行换水，每次换水换掉50cm深的水(量)，维持池水透明度在35cm，投放配合饲料1号

[0037] B组：在水中泼洒蛭弧菌蛭质体与游泳体混合菌剂，使水体中菌体浓度分别达到1 3 5 7
10、10、10、10pfu/mL，投放配合饲料1号

[0038] C组：投喂浓度为101、103、105、107pfu/mL的蛭弧菌蛭质体与游泳体混合菌剂浸泡后的配合饲料1号

[0039] D组：在水中加入蛭弧菌蛭质体与游泳体混合菌剂，使菌体浓度分别达到101、103、5 7 1 3 5 7
10、10pfu/mL，同时分别投喂浓度为10、10、10、10pfu/mL的蛭弧菌蛭质体与游泳体混合菌剂浸泡后的配合饲料1号；

[0040] B1、C1、D1组每5天换水一次，换掉25cm深的水(量)

[0041] B2、C2、D2组每10天换水一次，换掉25cm深的水(量)

[0042] B3、C3、D3组每15天换水一次，换掉25cm深的水(量)

[0043] B4、C4、D4组每20天换水一次，换掉25cm深的水(量)

[0044] B5、C5、D5组每25天换水一次，换掉25cm深的水(量)

[0045] B6、C6、D6组每30天换水一次，换掉25cm深的水(量)

[0046] B1-1、C1-1、D1-1...D6-1换水后加入蛭弧菌蛭质体与游泳体混合菌剂使水体中菌1
体浓度为10pfu/mL

[0047] B1-2、C1-2、D1-2...D6-2换水后加入蛭弧菌蛭质体与游泳体混合菌剂使水体中菌3
体浓度为10pfu/mL

[0048] B1-3、C1-3、D1-3...D6-3换水后加入蛭弧菌蛭质体与游泳体混合菌剂使水体中菌5
体浓度为10pfu/mL

[0049] B1-4、C1-4、D1-4...D6-4换水后加入蛭弧菌蛭质体与游泳体混合菌剂使水体中菌7
体浓度为10pfu/mL

[0050] 斑节对虾实验效果检测

[0051] (1)生长指标的测定

[0052] 每组随机抽取50尾对虾检测生长情况，对虾长度测定采用精度为0.1mm的游标卡尺度量，体重采用电子天平称量。试验生长指标按如下公式计算：

[0053] 成活率(％)＝Nt/No×100％；

[0054] 增重率(％)＝(Wt-Wo)/Wo×100％；

[0055] 体长增长率(％)＝(Lt-Lo)/Lo×100％；

[0056] 式中No为试验开始时斑节对虾总尾数；Nt为试验结束时斑节对虾总尾数；Wo为试验开始时斑节对虾体重；Wt为试验结束时斑节对虾体重；Lo为试验开始时斑节对虾体长；Lt为试验结束时斑节对虾体长；

[0057] 试验测得的斑节对虾各项生长指标见表一-表四：从表中可以看出，与A组相比，B、C、D组的成活率、增重率、体长增长率均有明显提高，B、C、D组成活率的增加值分别≥25.38％、26.28％、28.55％；增重率的增加值分别≥40.54％、65.62％、86.3％；体长增长率增加值分别≥1.89％、2.99％、3.03％。

[0058] 从表一-表四可以看出，在对虾养殖过程中，在相同的换水周期下，随着蛭弧菌蛭质体与游泳体混合菌剂浓度升高，成活率、增重率、体长增长率都明显升高，且都明显高于工厂生产对照A组，说明采用添加蛭弧菌蛭质体与游泳体混合菌剂的方法，能明显提高斑节对虾的成活率、增重率、体长增长率，这在实际生产过程中，不仅大大节约了用水量，而且节省了大量的人力，物力资源，节约了养殖成本；从不同换水周期来看，相同浓度下的各组对虾成活率、增重率、体长增长率没有明显的变化。说明新型养殖方法下，5-30天不换水蛭弧菌蛭质体与游泳体混合菌剂均能促进对虾的生长。就B、C、D三组不同处理方式而言，均提高对虾的养殖成活率、增重率和体长增长率，同时在水体与饲料中添加蛭弧菌蛭质体与游泳体混合菌剂效果最佳。

[0059] 因此，无论在水中添加蛭弧菌蛭质体与游泳体混合菌剂，使水体蛭弧菌蛭质体与1 7 1 7
游泳体混合菌剂菌体浓度为10-10pfu/mL，或者是在饲料中添加浓度为10-10pfu/mL蛭弧菌蛭质体与游泳体混合菌剂，或是两者兼用，虽长达30天不换水，均可促进斑节对虾的摄食和快速生长，并且同时在水中与饲料中添加菌液的效果最好。

[0060] 表一斑节对虾生长指标的检测

[0061]

[0062] 表二斑节对虾生长指标的检测

[0063]

[0064] 表三斑节对虾生长指标的检测

[0065]

[0066] 表四斑节对虾生长指标的检测

[0067]

[0068]

[0069] (2)、免疫指标的检测

[0070] 用1mL的无菌注射器自对虾心脏抽取血液，每组抽取50尾对虾血液合并置于无菌离心管中4℃静置过夜后，3000r/min离心10min，取上层血清置于-80℃超低温冰箱保存待测。

[0071] 1、溶菌酶活力测定血清溶菌酶活性通过浊度比色法测定(Ellis A E.Lysozyme assays.[M]//Stolen J S，Fletcher T C，Anderson D P，etal.Techniques in Fish Immunology I.USA：SOS Publications，1990：101-103.)实验条件下，每mL血清每min吸光值减少0.001为1个酶活性单位(U)。

[0072] 2、酚氧化酶(PO)活力的测定

[0073] 酚氧化酶活性测定采用Hernández-López等(Hernández-López J，Gollas-Galvan T.Vargas-Albores F.Activation of the prophenoloxidase system of the brown Penaeus californiensis Holmes[J].Comp Biochem Physiol，1996.113C：61-66.)的方法。以实验条件下，每mL血清每min吸光增加0.001，定义为1个酶活性单位(U)。

[0074] 3、超氧化物歧化酶(SOD)活力

[0075] 超氧化物歧化酶(SOD)活力测定采用YI Sun等(A Simple Method for Clinical Assay ofSuperoxide Dismutase[J].Clin.Chem.1988：497-500)的方法。一个酶活力单位定义为：在试验条件下，硝基四氮唑溶液(NBT)被SOD抑制50％所需的酶蛋白量。

[0076] 斑节对虾各项免疫指标的测定结果见表五-表八：

[0077] 从表中可以看出，与A组相比，B、C、D组的溶菌酶活力、超氧化物歧化酶活力、酚氧化酶活力均有明显提高。B、C、D组溶菌酶活力增加值分别≥8.49U/mL、9.58U/mL、10.2U/mL；超氧化物歧化酶活力增加值分别≥53.58U/mL、79.98U/mL、97.48U/mL；酚氧化酶活力增加值分别≥10.1U/mL、10.8U/mL、11U/mL。

[0078] 从表五～表八可以看出，在斑节对虾养殖过程中，在相同的换水周期下，随着蛭弧菌蛭质体与游泳体混合菌剂的浓度升高，成活率都明显升高，且都明显高于工厂生产对照A组，说明采用新型的添加蛭弧菌蛭质体与游泳体混合菌剂的方法，能明显提高斑节对的免疫力，增强酶的活力，这在实际生产过程中，不仅节约了养殖成本，而且增强对虾的免疫能力，促进生长；从不同换水周期来看，相同浓度下的各组对虾酶活力没有明显差异，说明新型对虾养殖方法下，5-30天不换水蛭弧菌蛭质体与游泳体混合菌剂都能提高对虾免疫力。就B、C、D三组不同处理方式而言，均提高免疫力，但同时在水体与饲料中添加蛭弧菌蛭质体与游泳体混合菌剂效果最佳。

[0079] 因此，无论在水中添加蛭弧菌蛭质体与游泳体混合菌剂，使水体蛭弧菌蛭质体与1 7 1 7
游泳体混合菌剂菌体浓度为10-10pfu/mL，或者是在饲料中添加浓度为10-10pfu/mL蛭弧菌蛭质体与游泳体混合菌剂，或是两者兼用，虽长达30天不换水，都能够明显提高斑节对虾的溶菌酶活力、超氧化物歧化酶活力、酚氧化酶活力等免疫指标，在水中和饲料中同时添加，效果更佳。5-30天之间换水，对溶菌酶活力、超氧化物歧化酶活力、酚氧化酶活力均无明显影响。

[0080] 表五免疫指标的测定结果

[0081]

[0082] 表六免疫指标的测定结果

[0083]

[0084]

[0085] 表七免疫指标的测定结果

[0086]

[0087] 表八免疫指标的测定结果

[0088]

[0089] (3)、水质检测

[0090] 1、氨态氮用次溴酸纳氧化法测定(GB12763.4-91)；

[0091] 2、亚硝酸盐氮用重氮-偶氮光度法测定(GB12763.4-91)

[0092] 3、H2S用对二甲氨基苯胺分光光度法测定(GB16489-1996)

[0093] 经过测定，A组水池中的各项水质测定值均高于试验组B、C、D的。其中，A组氨态氮的检测结果为0.506mg/L，高于B组的0.431-0.456mg/L，C组的0.467-0.492mg/L，D组的0.403-0.441mg/L；A组亚硝酸盐氮检测结果为0.015mg/L，高于B组的0.008-0.009mg/L，C组的0.011-0.013mg/L，D组的0.007-0.008mg/L；A组H2S检测结果为0.2mg/L，高于B组的0.056-0.137mg/L，C组的0.114-0.179mg/L，D组的0.024-0.106mg/L；由以上结果1 7
分析可知，应用浓度为10-10pfu/mL蛭弧菌蛭质体与游泳体混合菌剂可有效改善养殖水体环境，调节水中氨态氮、亚硝酸盐氮、H2S的含量，从而提供有利于斑节对虾生存的水体环境，并且同时在水体和饲料中添加混合菌剂的效果最佳。

[0094] (4)、细菌数检测

[0095] 1、菌落总数用营养琼脂培养基检测(GB4789.2-2010)

[0096] 2、弧菌总数用TCBS培养基检测(SN/T 0173-2010)

[0097] 3、pH用PHB-3便携式pH计测定

[0098] 工厂养殖对照组A组水体中的总细菌数和总弧菌数分别高达4.21×103cfu/mL2 2 2
和5.73×10cfu/mL。B、C、D组的总细菌数分别为4.74×10cfu/mL、4.56×10cfu/mL、
2
4.21×10cfu/mL；总弧菌数7.8×10cfu/mL、7.1×10cfu/mL、6.3×10cfu/mL，与A组比明显都降低了1个数量级。说明蛭弧菌蛭质体与游泳体混合菌剂能有效控制水体的细菌数，改善水质。综合来看，添加蛭弧菌蛭质体与游泳体混合菌剂，能明显的提高对虾的体质，增强斑节对虾的免疫力，而且能够改善水质，达到节水节能、提高成活率的良好效果。

[0099] 同时，由实验数据可知无论在水中添加蛭弧菌蛭质体与游泳体混合菌剂，使水体1 7
蛭弧菌蛭质体与游泳体混合菌剂菌体浓度为10-10pfu/mL，或者是在饲料中添加浓度为
1 7
10-10pfu/mL蛭弧菌蛭质体与游泳体混合菌剂，或是两者兼用，虽长达30天不换水，但也可促进对虾养殖成活，增强免疫力，提高养殖期抗病能力，并且在水体和饲料中同时添加蛭弧菌蛭质体与游泳体混合菌剂效果最好。

[0100] (5)宿主感染实验

[0101] 感染试验于预先消毒的盛有5L砂滤海水(盐度10‰)的水池中进行。从实验A组、B1-1、B1-2...D6-3、D6-4共73组中每个组随机取对虾50只，规格体长20～25cm。向各组水体中添加副溶血弧菌(Vibrioparahaemolyticus ATCC 17802，购于美国典型物种保8
藏中心American TypeCulture Collection)使水体中副溶血弧菌浓度达到10cfu/mL；A组为该实验的对照组。实验期间正常投饵，连续充气培养。人工感染后，连续观察7天，最终计算成活率，采用相对存活率(Relative Percentage Survival，RPS)计算式：

[0102] RPS(％)＝(1-免疫组死亡率/对照组死亡率)×100％

[0103] 表九攻毒感染实验相对存活率

[0104]

[0105] 感染实验的结果显示，A组的相对存活率(Relative Percent Survival，RPS)为0，与A组相比，B、C、D组的相对存活率均有明显提高，B、C、D组相对存活率的增加值分别≥90.2％、85.6％、95.4％。

[0106] 从表可以看出，在对虾感染实验过程中，在相同的换水周期下，随着蛭弧菌蛭质体与游泳体混合菌剂的浓度升高，相对存活率逐渐升高，且都明显高于工厂生产对照A组，说明采用新型的添加蛭弧菌蛭质体与游泳体混合菌剂的方法，能明显提高斑节对虾的相对存活率，即提高对虾免疫抵抗力；从不同换水周期来看，相同浓度下的各组对虾相对存活率没有显著的变化。说明新型养殖方法下，5-30天不换水蛭弧菌蛭质体与游泳体混合菌剂都能增强对虾的免疫能力。就B、C、D三组不同处理方式而言，均提高对虾的相对存活率，但同时在水体与饲料中添加蛭弧菌蛭质体与游泳体混合菌剂效果最佳。

[0107] 因此，无论在水中添加蛭弧菌蛭质体与游泳体混合菌剂，使水体蛭弧菌蛭质体与1 7 1 7
游泳体混合菌剂菌体浓度为10-10pfu/mL，或者是在饲料中添加浓度为10-10pfu/mL蛭弧菌蛭质体与游泳体混合菌剂，或是两者兼用，虽长达30天不换水，均可提高斑节对虾免疫抵抗力，并且同时在水中与饲料中添加菌液的效果最好。从而进一步表明蛭弧菌蛭质体与游泳体混合菌剂具有潜在的疫苗作用，能够刺激对虾产生免疫应答反应，抵御副溶血弧菌的侵害，有助于提高对虾的成活率。

[0108] 实施例3混合菌剂在斑节对虾主高位池养殖中的应用实验

[0109] (1)虾池结构为88m×83m×2.2m，四角为圆角，每个虾池面积为10亩，呈东西方向水平一字型排列。虾池之间距离为5m，海拔高度为10m，虾池四周采用水泥混凝土护坡，池底铺设塑料薄膜，然后在膜上再覆盖沙35cm。

[0110] 海区最低低潮线挖井，铺设管道至泵，房距离为72m，采用100cm混凝土管；泵房采用3台型号为8BA18、功率为22kW/台的抽水泵，抽水至虾池，距离为110m，采用60cm×70cm明渠，再通过40cm×60cm明渠引水进入各个虾池。采用水车式增氧机，功率为1·1kW/台，每亩水面放置1台。

[0111] (2)放苗前1个月，用高压水枪冲洗塘底淤泥，并进行清理，然后干塘晒池15d后，每亩泼洒生石灰150kg，进水30cm浸泡消毒，继续加水90cm，并同时进行施肥，主要投放尿素15kg/亩，磷肥10kg/亩，进行肥水，约3d，水体透明度达到35cm便可放苗。

[0112] (3)虾苗选择与放养，虾苗选择个体大小整齐，体长1.0-1.2cm的黑壳虾苗，群体发育整齐，肌肉饱满透明，附肢中色素正常，胃肠充满食物，虾苗活动活泼，对水流刺激反应灵敏，无外部寄生物及附着污物，放苗时水温20℃，养殖池水盐度10‰，放苗时间与普通养殖同步进行。养成池水色为黄绿色、透明度30cm，pH在8.5，投放密度为5.5万只/亩。虾苗运至养殖池边，用充氧气头向苗袋内充氧半小时，同时逐步向袋内加入养殖池水，使逐步缩小温差和醒苗；

[0113] (4)投饲管理，饲料(配合饲料1号)为常规的对虾养殖饲料，符合中华人民共和国农业行业标准《无公害食品渔用配合饲料安全限量》(NY5072-2002)的规定。每次投饵前，将饲料(配合饲料1号)用蛭弧菌蛭质体与游泳体混合菌剂浸泡30min，菌剂中的蛭弧1 3 5 7
菌蛭质体与游泳体混合菌剂的浓度达到10、10、10、10pfu/mL，养殖前期和中期，虾平均体长6cm以下时，日投2次，日投放量控制在虾重的15％；养殖后期，体平均长达到6cm时，日投5次，日投放量控制在虾重的8％；

[0114] (5)养殖期的水环境管理，养殖期间正常曝气，使水中溶解氧达到5mg/L。采取不同换水周期，5、10、15、20、25、30天换水一次，每次换掉25cm深的水(量)，透明度保持在1 3
30cm，每次换水后加蛭弧菌蛭质体与游泳体混合菌剂，使水体中的菌体浓度达到10、10、
5 7
10、10pfu/mL，加菌方法为：用相应的池水稀释菌液后，均匀泼洒全池，并加大曝气，从而使菌液混合均匀。

[0115] 实验分组

[0116] 采用随机区组试验设计，平均分为A-D 4个试验组，B、C、D每个试验组有6个小组，分别为B1、C1、D1；B2、C2、D2；B3、C3、D3、；B4、C4、D4；B5、C5、D5；B6、C6、D6；B1-D6每小组再分为4组，即B1-1-B1-4...D6-1-D6-4，每组2个重复。对4组试验对虾初始体重进行方差检验，组间差异不显著(P＞0.05)。四组试验组的处理如下：

[0117] A组：工厂生产的养殖方式，饲养前期，每7d排污一次，饲养中期每2d排污一次，饲养后期增加排污次数，水色加深变为深褐色时便排污。为补足因蒸发及排污损失的水量，向试验池添加淡水。投放颗粒饲料(配合饲料1号)

[0118] B组：在水中泼洒蛭弧菌蛭质体与游泳体混合菌剂，使水体中蛭弧菌蛭质体与游1 3 5 7
泳体混合菌剂菌体浓度分别达到10、10、10、10pfu/mL，投放颗粒饲料(配合饲料1号)[0119] C组：投喂浓度为101、103、105、107pfu/mL的蛭弧菌蛭质体与游泳体混合菌剂浸泡后的颗粒饲料(配合饲料1号)

[0120] D组：在水中加入蛭弧菌蛭质体与游泳体混合菌剂，使菌体浓度分别达到101、103、5 7 1 3 5 7
10、10pfu/mL，同时分别投喂浓度为10、10、10、10pfu/mL的蛭弧菌蛭质体与游泳体混合菌剂浸泡后的颗粒饲料(配合饲料1号)；

[0121] B1、C1、D1组每5天换水一次，换掉20-30cm深的水(量)

[0122] B2、C2、D2组每10天换水一次，换掉20-30cm深的水(量)

[0123] B3、C3、D3组每15天换水一次，换掉20-30cm深的水(量)

[0124] B4、C4、D4组每20天换水一次，换掉20-30cm深的水(量)

[0125] B5、C5、D5组每25天换水一次，换掉20-30cm深的水(量)

[0126] B6、C6、D6组每30天换水一次，换掉20-30cm深的水(量)

[0127] B1-1、C1-1、D1-1...D6-1换水后加入蛭弧菌蛭质体与游泳体混合菌剂使水体中菌1
体浓度为10pfu/mL

[0128] B1-2、C1-2、D1-2...D6-2换水后加入蛭弧菌蛭质体与游泳体混合菌剂使水体中菌3
体浓度为10pfu/mL

[0129] B1-3、C1-3、D1-3...D6-3换水后加入蛭弧菌蛭质体与游泳体混合菌剂使水体中菌5
体浓度为10pfu/mL

[0130] B1-4、C1-4、D1-4...D6-4换水后加入蛭弧菌蛭质体与游泳体混合菌剂使水体中菌7
体浓度为10pfu/mL

[0131] 斑节对虾实验效果检测

[0132] (1)生长指标的测定

[0133] 每组随机抽取50尾对虾检测生长情况，对虾长度测定采用精度为0.1mm的游标卡尺度量，体重采用电子天平称量。试验生长指标按如下公式计算：

[0134] 成活率(％)＝Nt/No×100％；

[0135] 增重率(％)＝(Wt-Wo)/Wo×100％；

[0136] 体长增长率(％)＝(Lt-Lo)/Lo×100％；

[0137] 式中No为试验开始时斑节对虾总尾数；Nt为试验结束时斑节对虾总尾数；Wo为试验开始时斑节对虾体重；Wt为试验结束时斑节对虾体重；Lo为试验开始时斑节对虾体长；Lt为试验结束时斑节对虾体长；

[0138] 试验测得的斑节对虾各项生长指标见表十-表十三：从表中可以看出，与A组相比，B、C、D组的成活率、增重率、体长增长率均有明显提高，B、C、D组成活率的增加值分别≥43.58％、44.58％、48.55％；增重率的增加值分别≥55.54％、80.62％、101.3％；体长增长率增加值分别≥5.04％、4.99％、5.03％。

[0139] 从表十-表十三可以看出，在对虾高位池养殖过程中，在相同的换水周期下，随着蛭弧菌蛭质体与游泳体混合菌剂的浓度升高，成活率、增重率、体长增长率都明显升高，且都明显高于工厂生产对照A组，说明采用新型的添加蛭弧菌蛭质体与游泳体混合菌剂的方法，能明显提高斑节对虾的成活率、增重率、体长增长率，这在实际生产过程中，不仅大大节约了用水量，而且节省了大量的人力，物力资源，节约了养殖成本；从不同换水周期来看，相同浓度下的各组对虾成活率、增重率、体长增长率没有显著的变化。说明新型养殖方法下，5-30天不换水蛭弧菌蛭质体与游泳体混合菌剂均能促进对虾的生长。就B、C、D三组不同处理方式而言，均提高对虾的养殖成活率、增重率和体长增长率，但同时在水体与饲料中添加蛭弧菌蛭质体与游泳体混合菌剂效果最佳。

[0140] 因此，无论在水中添加蛭弧菌蛭质体与游泳体混合菌剂，使水体蛭弧菌蛭质体与1 7 1 7
游泳体混合菌剂浓度为10-10pfu/mL，或者是在饲料中添加浓度为10-10pfu/mL蛭弧菌蛭质体与游泳体混合菌剂，或是两者兼用，虽长达30天不换水，都会促进斑节对虾的摄食和快速生长，并且同时在水中与饲料中添加菌液的效果最好。

[0141] 表十斑节对虾生长指标的检测

[0142]

[0143] 表十一斑节对虾生长指标的检测

[0144]

[0145] 表十二斑节对虾生长指标的检测

[0146]

[0147]

[0148] 表十三斑节对虾生长指标的检测

[0149]

[0150] (2)、免疫指标的检测

[0151] 用1mL的无菌注射器自对虾心脏抽取血液，每组抽取50尾对虾血液合并置于无菌离心管中4℃静置过夜后，3000r/min离心10min，取上层血清置于-80℃超低温冰箱保存待测。

[0152] 1、溶菌酶活力测定血清溶菌酶活性通过浊度比色法测定(Ellis A E.Lysozyme assays.[M]//Stolen J S，Fletcher T C，Anderson D P，etal.Techniques in Fish Immunology I.USA：SOS Publications，1990：101-103.)实验条件下，每mL血清每min吸光值减少0.001为1个酶活性单位(U)。

[0153] 2、酚氧化酶(PO)活力的测定

[0154] 酚氧化酶活性测定采用Hernández-López等(Hernández-López J，Gollas-Galvan T.Vargas-Albores F.Activation of the prophenoloxidase systemof the brown Penaeus californiensis Holmes[J].Comp Biochem Physiol，1996.113C：61-66.)的方法。以实验条件下，每mL血清每min吸光增加0.001，定义为1个酶活性单位(U)。

[0155] 3、超氧化物歧化酶(SOD)活力

[0156] 超氧化物歧化酶(SOD)活力测定采用YI Sun等(A Simple Method for Clinical Assay ofSuperoxide Dismutase[J].Clin.Chem.1988：497-500)的方法。一个酶活力单位定义为：在试验条件下，硝基四氮唑溶液(NBT)被SOD抑制50％所需的酶蛋白量。

[0157] 斑节对虾各项免疫指标的测定结果见表十四～表十七：

[0158] 从表中可以看出，与A组相比，B、C、D组的溶菌酶活力、超氧化物歧化酶活力、酚氧化酶活力均有明显提高。B、C、D组溶菌酶活力增加值分别≥11.09U/mL、12.18U/mL、12.8U/mL；超氧化物歧化酶活力增加值分别≥53.58U/mL、79.98U/mL、97.48U/mL；酚氧化酶活力增加值分别≥12.1U/mL、11.8U/mL、12U/mL。

[0159] 在斑节对虾高位池养殖过程中，在相同的换水周期下，随着蛭弧菌蛭质体与游泳体混合菌剂的浓度升高，成活率都明显升高，且都明显高于工厂生产对照A组，说明采用新型的添加蛭弧菌蛭质体与游泳体混合菌剂的方法，能明显提高斑节对的免疫力，增强酶的活力，这在实际生产过程中，不仅节约了养殖成本，而且增强对虾的免疫能力，促进生长；从不同换水周期来看，相同浓度下的各组对虾酶活力没有显著差异，说明新型对虾养殖方法下，5-30天不换水蛭弧菌蛭质体与游泳体混合菌剂都能提高对虾免疫力。就B、C、D三组不同处理方式而言，均提高免疫力，但同时在水体与饲料中添加蛭弧菌蛭质体与游泳体混合菌剂效果最佳。

[0160] 因此，无论在水中添加蛭弧菌蛭质体与游泳体混合菌剂，使水体蛭弧菌蛭质体与1 7 1 7
游泳体混合菌剂浓度为10-10pfu/mL，或者是在饲料中添加浓度为10-10pfu/mL蛭弧菌蛭质体与游泳体混合菌剂，或是两者兼用，虽长达30天不换水，都能够显著提高斑节对虾的溶菌酶活力、超氧化物歧化酶活力、酚氧化酶活力等免疫指标，在水中和饲料中同时添加，效果更佳。5-30天之间换水，对溶菌酶活力、超氧化物歧化酶活力、酚氧化酶活力均无明显影响。

[0161] 表十四免疫指标的测定结果

[0162]

[0163]

[0164] 表十五免疫指标的测定结果

[0165]

[0166] 表十六免疫指标的测定结果

[0167]

[0168] 表十七免疫指标的测定结果

[0169]

[0170]

[0171] (3)、水质检测

[0172] 1、氨态氮用次溴酸纳氧化法测定(GB12763.4-91)；

[0173] 2、亚硝酸盐氮用重氮-偶氮光度法测定(GB12763.4-91)

[0174] 3、H2S用对二甲氨基苯胺分光光度法测定(GB16489-1996)

[0175] 经过测定，A组水池中的各项水质测定值均高于试验组B、C、D的。其中，A组氨态氮的检测结果为0.516mg/L，高于B组的0.441-0.466mg/L，C组的0.47-0.502mg/L，D组的0.413-0.451mg/L；A组亚硝酸盐氮检测结果为0.016mg/L，高于B组的0.009-0.01mg/L，C组的0.012-0.014mg/L，D组的0.008-0.009mg/L；A组H2S检测结果为0.21mg/L，高于B组的0.066-0.147mg/L，C组的0.124-0.189mg/L，D组的0.034-0.116mg/L；由以上结果分析
1 7
可知，应用浓度为10-10pfu/mL蛭弧菌蛭质体与游泳体混合菌剂可有效改善养殖水体环境，调节水中氨态氮、亚硝酸盐氮、H2S的含量，从而提供有利于斑节对虾生存的水体环境，并且同时在水体和饲料中添加混合菌剂的效果最佳。

[0176] (4)、细菌数检测：

[0177] 1、菌落总数用营养琼脂培养基检测(GB4789.2-2010)

[0178] 2、弧菌总数用TCBS培养基检测(SN/T 0173-2010)

[0179] 3、pH用PHB-3便携式pH计测定

[0180] 工厂养殖对照组A组水体中的总细菌数和总弧菌数分别高达5.33×103cfu/mL2 2 2
和7.89×10cfu/mL。B、C、D组的总细菌数分别为4.14×10cfu/mL、3.79×10cfu/mL、
2
4.11×10cfu/mL；总弧菌数6.5×10cfu/mL、6.4×10cfu/mL、6.1×10cfu/mL，与A组比明显都降低了1个数量级。说明蛭弧菌蛭质体与游泳体混合菌剂能有效控制水体的细菌数，改善水质。综合来看，添加蛭弧菌蛭质体与游泳体混合菌剂，能明显的提高对虾的体质，增强斑节对虾的免疫力，而且能够改善水质，达到节水节能、提高成活率的良好效果。

[0181] 同时，由实验数据可知无论在水中添加蛭弧菌蛭质体与游泳体混合菌剂，使水体1 7
蛭弧菌蛭质体与游泳体混合菌剂菌体浓度为10-10pfu/mL，或者是在饲料中添加浓度为
1 7
10-10pfu/mL蛭弧菌蛭质体与游泳体混合菌剂，或是两者兼用，虽长达30天不换水，但也可促进对虾养殖成活，增强免疫力，提高养殖期抗病能力，并且在水体和饲料中同时添加蛭弧菌蛭质体与游泳体混合菌剂效果最好。

[0182] (5)宿主感染实验

[0183] 感染试验于预先消毒的盛有5L砂滤海水(盐度10‰)的水池中进行。从实验A组、B1-1、B1-2...D6-3、D6-4共73组中每个组随机取对虾50只，规格体长20～25cm。向各组水体中添加副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus ATCC 17802，购于美国典型物种8
保藏中心American TypeCulture Collection)使水体中副溶血弧菌浓度达到10cfu/mL；A组为该实验的对照组。实验期间正常投饵，连续充气培养。人工感染后，连续观察7天，最终计算成活率，采用相对存活率(Relative Percentage Survival，RPS)计算式：

[0184] RPS(％)＝(1-免疫组死亡率/对照组死亡率)×100％

[0185] 表十八攻毒感染实验相对存活率

[0186]

[0187] 感染实验的结果显示，A组的相对存活率(Relative Percentage Survival，RPS)为0，与A组相比，B、C、D组的相对存活率均有明显提高，B、C、D组相对存活率的增加值分别≥90.2％、85.6％、95.4％。

[0188] 从表可以看出，在对虾感染实验过程中，在相同的换水周期下，随着蛭弧菌蛭质体与游泳体混合菌剂的浓度升高，相对存活率逐渐升高，且都明显高于工厂生产对照A组，说明采用新型的添加蛭弧菌蛭质体与游泳体混合菌剂的方法，能明显提高斑节对虾的相对存活率，即提高对虾免疫抵抗力；从不同换水周期来看，相同浓度下的各组对虾相对存活率没有明显的变化。说明新型养殖方法下，5-30天不换水蛭弧菌蛭质体与游泳体混合菌剂都能增强对虾的免疫能力。就B、C、D三组不同处理方式而言，均提高对虾的相对存活率，但同时在水体与饲料中添加蛭弧菌蛭质体与游泳体混合菌剂效果最佳。

[0189] 因此，无论在水中添加蛭弧菌蛭质体与游泳体混合菌剂，使水体蛭弧菌蛭质体与1 7 1 7
游泳体混合菌剂浓度为10-10pfu/mL，或者是在饲料中添加浓度为10-10pfu/mL蛭弧菌蛭质体与游泳体混合菌剂，或是两者兼用，虽长达30天不换水，均可提高斑节对虾免疫抵抗力，并且同时在水中与饲料中添加菌液的效果最好。从而进一步表明蛭弧菌蛭质体与游泳体混合菌剂具有潜在的疫苗作用，能够刺激对虾产生免疫应答反应，抵御副溶血弧菌的侵害，有助于提高对虾的成活率。

[0190] 由此可见，无论是普通养殖还是高位池养殖，在水中添加蛭弧菌蛭质体与游泳体1 7
混合菌剂，使水体蛭弧菌蛭质体与游泳体混合菌剂浓度为10-10pfu/mL，还是在饲料中添