烟碱性受体部分激动剂和乙酰胆碱酯酶抑制剂的组合、含有所述组合的药物组合物及其在治疗认知障碍中的用途

摘要

本发明涉及α-7烟碱性受体部分激动剂和乙酰胆碱酯酶抑制剂的组合。本发明还涉及包含本发明组合的药物组合物及其在治疗认知障碍中的用途。

权利要求

1.组合物，其包含α-7烟碱性受体部分激动剂和乙酰胆碱酯酶抑制剂的组合，其特征在于所述α-7烟碱性受体部分激动剂为呈碱或酸加成盐形式的通式(I)化合物：其中

X表示氧原子；

n表示数字0；

R1、R2、R4和R5各自表示氢原子，及R3表示卤素原子。

2.权利要求1的组合物，其特征在于所述α-7烟碱性受体部分激动剂为呈碱或酸加成盐形式的1，4-二氮杂二环[3.2.2]壬烷-4-甲酸4-溴苯基酯。

3.权利要求2的组合物，其特征在于所述1，4-二氮杂二环[3.2.2]壬烷-4-甲酸4-溴苯基酯呈(2E)-丁-2-烯二酸盐形式。

4.权利要求1-3中任一项的组合物，其特征在于所述乙酰胆碱酯酶抑制剂选自利凡斯的明和多奈哌齐。

5.权利要求1-3中任一项的组合物，其特征在于所述α-7烟碱性受体部分激动剂为

1，4-二氮杂二环[3.2.2]壬烷-4-甲酸4-溴苯基酯(2E)-丁-2-烯二酸盐，及所述乙酰胆碱酯酶抑制剂为利凡斯的明。

6.权利要求1-3中任一项的组合物，其特征在于所述α-7烟碱性受体部分激动剂为

1，4-二氮杂二环[3.2.2]壬烷-4-甲酸4-溴苯基酯(2E)-丁-2-烯二酸盐，及所述乙酰胆碱酯酶抑制剂为多奈哌齐。

7.一种药物组合物，其包含权利要求1-6中任一项的组合物作为活性成分及至少一种可药用赋形剂。

8.权利要求1-6中任一项的组合物在制备旨在用于治疗认知障碍的药物中的用途。

9.权利要求8的用途，其特征在于所述认知障碍与阿尔茨海默病相关。

说明书

烟碱性受体部分激动剂和乙酰胆碱酯酶抑制剂的组合、含

有所述组合的药物组合物及其在治疗认知障碍中的用途

技术领域

[0001] 本发明涉及α-7烟碱性受体部分激动剂和乙酰胆碱酯酶抑制剂的组合、含有本发明组合的药物组合物及其在治疗认知障碍且更具体为与阿尔茨海默病相关的认知障碍中的用途。

背景技术

[0002] 术语″认知障碍″意在表示高级智力功能缺陷，其尤其涉及短期和长期记忆障碍、工作记忆障碍、注意力和警觉过程障碍、语义记忆障碍、空间记忆障碍和高级执行功能(抽象、规划和判断)障碍。

[0003] 患有与阿尔茨海默病相关的认知障碍的患者目前通过给药乙酰胆碱酯酶抑制剂来治疗。

[0004] 用乙酰胆碱酯酶抑制剂治疗与阿尔茨海默病相关的认知障碍的一个困难在于随着反复给药，许多接受治疗的患者逐渐产生不良的副作用。因此，接受治疗的患者中的10-15％由于胃肠副作用(恶心、呕吐、腹泻)而不得不中断治疗及接受治疗的患者中的
40％因为这些副作用而不能接受最佳治疗剂量。另外，接受治疗的患者中仅30-50％将对所述治疗有响应，及观察到的治疗效果通常仅为症状的简单中度稳定(参见Alzheimer’s disease，Decision Resources，USA，June 2006)。

[0005] 因此，需要开发这样的药物，其在治疗患有认知障碍且更具体为与阿尔茨海默病相关的认知障碍的患者中是较有效的，且还呈现出较少的不良副作用。

[0006] 本发明通过提出α-7烟碱性受体部分激动剂和乙酰胆碱酯酶抑制剂的组合而旨在解决该技术问题。

[0007] α-7烟碱性受体(α7-nAChR)部分激动剂已经在检查各类记忆或认知功能的几个动物模型中被描述为具有促进认知性质(Biton等人，Neuropsychopharmacology，2007，32：1-16和Pichat等人，Ncuropsychopharmacology，2007，32：17-34)。

[0008] 使用部分激动剂而不是完全激动剂代表了显著的技术进步。这是因为已知α-7烟碱性受体呈现出快速和显著的脱敏现象。与完全激动剂不同，部分激动剂将仅非常轻微地使受体脱敏，由此当反复进行治疗时使治疗效果得以持久。

发明内容

[0009] 与所述两种活性成分当单独服用时的作用相比，本发明组合呈现出改善的作用。具体地，与所述两种活性成分当单独服用时产生的效果相比，观察到所述组合对促进认知药理学效果程度具有较大影响。

[0010] 所述组合的该较大影响可允许：

[0011] -降低处方剂量，因此对所述治疗具有较好的耐受性(降低胃肠副作用)；

[0012] -患者治疗期由于较好的耐受性而可以是较长的；

[0013] -与单独用乙酰胆碱酯酶抑制剂进行的治疗相比，患者对所述组合治疗的响应百分数是提高的。

[0014] 本发明第一主题涉及α-7烟碱性受体部分激动剂和乙酰胆碱酯酶抑制剂的组合。

[0015] 本发明第二主题涉及包含上述组合作为活性成分的药物组合物。

[0016] 本发明第三主题涉及上述组合在治疗各种起源的认知障碍且更具体为与阿尔茨海默病相关的认知障碍中的用途。

[0017] 因此，本发明第一主题涉及α-7烟碱性受体部分激动剂和乙酰胆碱酯酶抑制剂的组合。

[0018] 在本发明α-7烟碱性受体部分激动剂中，可提及的是呈碱、酸加成盐、水合物或溶剂化物形式的具有通式(I)的α-7烟碱性受体部分激动剂：

[0019]

[0020] 其中

[0021] X表示氧原子或具有式NZ的基团，其中Z表示氢原子或(C1-C6)烷基，

[0022] n表示数字0、1或2，及

[0023] R1、R2、R3、R4和R5各自彼此独立表示氢原子、卤素原子、三氟甲基、三氟甲氧基、氰基、羟基、(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧基、苯氧基或苯基，所述基团任选取代有卤素原子、三氟甲基、氰基、羟基、(C1-C6)烷基或(C1-C6)烷氧基，或R2和R3一起形成具有式-OCH2O-或-CH2CH2CH2CH2-的基团。

[0024] 通式(I)化合物描述在文献WO 00/58311中。

[0025] 在本发明上下文中，

[0026] -表达方式″其中t和z可为1-6的Ct-Cz″意在表示可具有t-z个碳原子的碳链；例如，术语″C1-C3″意在表示可具有1-3个碳原子的碳链；

[0027] -术语″卤素原子″意在表示氟、氯、溴或碘原子；

[0028] -术语″烷基″意在表示直链或支链的饱和脂族基团。例如，可提及的是甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基等基团；

[0029] -术语″烷氧基″意在表示-O-烷基，其中所述烷基如上所定义。

[0030] 上述通式(I)化合物已经在文献WO 00/58311中被描述为α-7烟碱性受体部分激动剂。

[0031] 本发明可使用的通式(I)化合物的盐可用可药用酸制备，但其它酸的例如可用于纯化或分离式(I)化合物的盐也是本发明一部分。

[0032] 通式(I)化合物可按水合物或溶剂化物形式存在，即按与一个或多个水分子或与溶剂组合或缔合的形式存在。上述水合物和溶剂化物也是本发明一部分。

[0033] 通式(I)化合物可包含一个或多个不对称碳原子。因此，它们可按对映异构体或非对映异构体形式存在。这些对映异构体和非对映异构体及其混合物(包括外消旋混合物)是本发明一部分。

[0034] 本发明可使用的第一组式(I)化合物是其中X表示氧原子的式(I)化合物。

[0035] 本发明可使用的第二组式(I)化合物是其中n表示数字0的式(I)化合物。

[0036] 本发明可使用的第三组式(I)化合物是其中R1、R2、R3、R4和R5各自彼此独立表示氢原子或卤素原子的式(I)化合物。

[0037] 本发明可使用的第四组式(I)化合物是其中R1、R2、R4和R5各自表示氢原子及R3表示卤素原子的式(I)化合物。

[0038] 本发明可使用的第五组式(I)化合物是这样的式(I)化合物，其中

[0039] X表示氧原子；

[0040] n表示数字0；

[0041] R1、R2、R4和R5各自表示氢原子，及

[0042] R3表示卤素原子。

[0043] 在本发明可使用的式(I)化合物中，可特别提及的是呈碱、酸加成盐、水合物或溶剂化物形式的1，4-二氮杂二环[3.2.2]壬烷-4-甲酸4-溴苯基酯。

[0044] 本发明可使用的1，4-二氮杂二环[3.2.2]壬烷-4-甲酸4-溴苯基酯的盐的实例是富马酸((2E)-丁-2-烯二酸)盐。

[0045] 本发明通式(I)化合物可根据申请WO 00/58311中所述的方法来制备。

[0046] 实施例：1，4-二氮杂二环[3.2.2]壬烷-4-甲酸4-溴苯基酯(2E)-丁-2-烯二酸盐的制备

[0047] 在6L夹套反应器中将232.45g 1，4-二氮杂二环[3.2.2]壬烷-4-甲酸4-溴苯基酯(WO 00/58311)置于2331ml乙醇中。使反应介质达到60℃。然后加入87.17g富马酸在1000ml乙醇和97ml水中的溶液(预加热至60℃)。随后蒸馏掉1900ml溶剂，然后历时2.5小时将反应介质冷却至20℃。在20℃接触2.5小时后，将1，4-二氮杂二环[3.2.2]壬烷-4-甲酸4-溴苯基酯(2E)-丁-2-烯二酸盐过滤，用400ml乙醇洗涤两次，然后在50℃真空干燥。

[0048] 熔点(DSC)：175℃。

[0049] 1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ(ppm)：1.80(bs(a)，2H)，2.10(bs，2H)，3.10(bs，6H)，3.71(bs，1H)，3.84(bs，1H)，4.25(bs，0.5H)，4.40(bs，0.5H)，6.58(s，2H )，7.14(m，2H)，
7.57(m，2H)，11(bs，2H)。(a)bs＝宽单峰。

[0050] 出于本发明目的，所述乙酰胆碱酯酶抑制剂可选自文献中已知的所有乙酰胆碱酯酶抑制剂。例如，可特别提及的是利凡斯的明(rivastigmine)(Exelon )和多奈哌齐(donepezil)(Aricept )。

[0051] 因此，本发明组合的实例是由1，4-二氮杂二环[3.2.2]壬烷-4-甲酸4-溴苯基酯(2E)-丁-2-烯二酸盐和利凡斯的明构成的组合。

[0052] 本发明组合的另一实例是由1，4-二氮杂二环[3.2.2]壬烷-4-甲酸4-溴苯基酯(2E)-丁-2-烯二酸盐和多奈哌齐构成的组合。

[0053] 本发明第二主题涉及包含上述组合作为活性成分和一种或多种可药用赋形剂的药物组合物。

[0054] 所述药物组合物含有最小活性剂量的存在于本发明组合中的每一活性成分。

[0055] 本发明还涉及含有亚活性剂量的存在于本发明组合中的每一活性成分的药物组合物。使用上述亚活性剂量可避免存在于本发明组合中的一种或多种活性成分的副作用。

[0056] 赋形剂根据药物形式和所需给药模式而选自本领域技术人员已知的普通赋形剂。

[0057] 所述组合物可口服给药、胃肠外给药或直肠给药。

[0058] 适合的单位给药形式包括口服给药形式(例如片剂、软胶囊剂、硬胶囊剂、粉末剂、颗粒剂和口服溶液剂或混悬剂)、舌下给药形式、含服给药形式、气管内给药形式、眼内给药形式、鼻内给药形式、吸入给药形式、局部给药形式、经皮给药形式、皮下给药形式、肌内给药形式、静脉内给药形式、直肠给药形式和植入剂。对于局部施用，本发明活性成分可按乳膏剂、凝胶剂、软膏剂或洗剂形式来使用。

[0059] 根据本发明，所述两种活性成分以相同途径(例如口服途径)来给药，或一种活性成分以第一途径(例如口服途径)来给药，而另一种活性成分以不同途径(例如胃肠外途径)来给药。

[0060] 当制备片剂形式的组合物时，将所述活性成分与一种或多种药物赋形剂混合，所述药物赋形剂为例如明胶、淀粉、乳糖、硬脂酸镁、滑石、二氧化硅、阿拉伯树胶、甘露醇、微晶纤维素、羟丙基甲基纤维素等。

[0061] 片剂可包覆有蔗糖、纤维素衍生物或适于包覆的其它物质。片剂可通过各种技术(例如直接压片、干法制粒、湿法制粒或热熔融)来制备。

[0062] 胶囊形式的药物组合物可如下得到：将所述活性成分与稀释剂混合并将所得混合物倒入软胶囊或硬胶囊中。

[0063] 对于胃肠外给药，使用含水混悬液、等渗盐水溶液或无菌注射溶液，其含有药理学上可相容的物质，例如丙二醇或丁二醇。

[0064] 根据常规实践，适于每位患者的剂量由医师根据给药模式及所述患者的年龄、体重和响应来确定。

[0065] 剂量取决于所需效果、治疗持续时间和所用给药途径。

[0066] 例如，对于口服给药，本发明组合中每种活性成分的日剂量如下：

[0067] -α-7烟碱性受体部分激动剂：每人每天0.5-500mg，特别是每人每天1-100mg；

[0068] -乙酰胆碱酯酶抑制剂：每人每天3-200mg，特别是每人每天5-100mg。

[0069] 可存在需要较高或较低剂量的特殊情况。这些剂量不偏离本发明。

[0070] α-7烟碱性受体部分激动剂和乙酰胆碱酯酶抑制剂的各自剂量通常是彼此近似相同的，或可以是彼此不同的。

[0071] 例如，呈片剂形式的α-7烟碱性受体部分激动剂的单位给药形式包含下列成分：

[0072] 化合物 4mg

[0073] 甘露醇 174mg

[0074] 交联羧甲基纤维素钠 6mg

[0075] 玉米淀粉 15mg

[0076] 羟丙基甲基纤维素 2mg

[0077] 硬脂酸镁 3mg

[0078] 例如，呈片剂形式的乙酰胆碱酯酶抑制剂的单位给药形式可包含10mg乙酰胆碱酯酶抑制剂和可能的赋形剂(例如微晶纤维素、胶体二氧化硅、滑石、交联羧甲基纤维素钠和硬脂酸镁)。

[0079] 每种活性成分的给药也可同时进行、单独进行或随时间分开进行(相继给药)。

[0080] 当同时给药时，可将所述两种活性成分组合在包含所述两种活性成分的单一药物组合物(例如片剂或胶囊剂)中。

[0081] 无论所述两种活性成分是否同时给药，所述两种活性成分也可存在于分开的药物组合物中。因此，本发明组合可呈试剂盒形式，所述试剂盒首先包含至少一种上述α-7烟碱性受体部分激动剂，及其次包含至少一种上述乙酰胆碱酯酶抑制剂，所述α-7烟碱性受体部分激动剂和所述乙酰胆碱酯酶抑制剂处于分开的隔室中，及旨在同时给药、单独给药或随时间分开给药(相继给药)。

[0082] 本发明另一主题涉及上述组合在制备旨在用于治疗认知障碍且更具体为与阿尔茨海默病相关的认知障碍的药物中的用途。

[0083] 本发明另一主题为治疗认知障碍且更具体为与阿尔茨海默病相关的认知障碍的方法，所述方法包括向患者给药活性最小剂量或亚活性最小剂量的上述α-7烟碱性受体部分激动剂和活性最小剂量或亚活性最小剂量的上述乙酰胆碱酯酶抑制剂，所述两种活性成分的所述剂量如上所述来同时给药、单独给药或相继给药。

[0084] 所述组合对认知障碍的影响通过啮齿类动物(大鼠和小鼠)中的两种行为精神药理学测试来评价。

[0085] 这些测试的目的在于一种主要类型的认知障碍即记忆障碍，且更具体为视觉情景记忆障碍。

[0086] 目的是证实在治疗这些认知障碍中，与所述两种活性成分当单独服用时产生的效果相比，所述组合对促进认知药理学效果程度具有较大影响。

[0087] 1.测试无缺陷大鼠中的自发忘记

[0088] 第一研究目的在于证实就成年大鼠而言本发明组合在物体识别测试中在使用自发忘记规程的视觉情景记忆任务中的促进认知协同作用。

[0089] 1.)适应阶段：在该规程中，首先使动物适应环境(65×45×45cm的木室)2分钟。有效运动所花费的时间使用计时器来测量。

[0090] 2.)学习阶段：24小时后，将两个完全相同的物体(金属三角体或由Lego制成的椎体)置于实验装置中。将每只大鼠置于室的中央，使鼻部朝向与物体/刺激物所处室壁相反的室壁。使所提供的物体对在每组大鼠中均匀改变。将动物留在室中，直到它们在3分钟的最大时限内达到对两个物体的20秒探索时限。一旦达到20秒的探索时限，就将大鼠放回到其居住笼中。该程序可均化动物对熟悉的物体的灌输程度，因此可在动物之间得到相当的学习程度。

[0091] 3.)回忆阶段：对于所有组，回忆阶段在24小时的忘记时限后进行。使大鼠面对由在学习阶段遇到的物体和未知的物体构成的物体对。大鼠以与学习阶段相同的方式来放置。

[0092] 该测试持续3分钟，在此期间测量探索2个物体中的每个所花费的时间。

[0093] 如果动物明显回忆起先前记忆的物体，则它将主要探索新的物体。相反地，如果动物已经忘记熟悉的物体，则探索新的物体和熟悉的物体所花费的时间将是相似的。

[0094] 对于学习阶段和回忆阶段，如果动物使其鼻部朝向物体即在所述物体周围2厘米的范围内，或如果它用其鼻部或足部接触物体，则计数为对物体的探索。如果大鼠围绕物体移动或伏在物体上，则不认为这些行为是探索性的。

[0095] 原始数据以秒表示。

[0096] 测试化合物在规程的三个阶段中的每个阶段前60分钟(大鼠研究)来口服给药。

[0097] 建立四个实验组，所述组分别接受：

[0098] 1-媒介物(仅为甲基纤维素+Tween)

[0099] 2-α-7烟碱性受体部分激动剂(无活性剂量)

[0100] 3-乙酰胆碱酯酶抑制剂(无活性剂量)

[0101] 4-α-7烟碱性受体部分激动剂(无活性剂量)+乙酰胆碱酯酶抑制剂(无活性剂量)。

[0102] 在回忆阶段即在学习阶段后24小时，测量探索两个物体所花费的时间(以秒表示)和识别指数(探索新的物体所花费的时间/探索新的物体和熟悉的物体所花费的总时间)。

[0103] -就熟悉的物体和新的物体而言，相似的探索时间反映熟悉的物体已经被忘记，因此存在视觉情景记忆缺陷。

[0104] 相反地，与熟悉的物体相比，对新的物体的较长探索时间反映明显回忆起熟悉的物体，因此表明视觉情景记忆的改善。

[0105] -相对低的识别指数反映熟悉的物体已经被忘记，因此存在视觉情景记忆缺陷。

[0106] 相反地，高的识别指数反映明显回忆起熟悉的物体，因此表明视觉情景记忆的改善。

[0107] 以下结果通过建立下列四个实验组来得到，所述组分别接受：

[0108] -组1：媒介物(仅为甲基纤维素+Tween)

[0109] -组2：1，4-二氮杂二环[3.2.2]壬烷-4-甲酸4-溴苯基酯(2E)-丁-2-烯二酸盐[0.1mg/kg，口服(无活性剂量)]

[0110] -组3：利凡斯的明[0.03mg/kg，口服(无活性剂量)]

[0111] -组4：1，4-二氮杂二环[3.2.2]壬烷-4-甲酸4-溴苯基酯(2E)-丁-2-烯二酸盐[0.01mg/kg，口服]+利凡斯的明[0.03mg/kg，口服(无活性剂量)]。

[0112] 以上剂量以碱等价物表示。

[0113] 图1和表1显示了每个实验组在最初适应阶段运动所花费的时间。

[0114] 表1

[0115]实验组 运动(秒)
1 24.80±1.38
2 21.15±1.14
3 24.94±2.38
4 23.31±1.40

[0116] 在单次给药所述两种化合物中的每种或所述两种化合物的组合后，在适应环境阶段没有观察到运动的改变。

[0117] 表2及图2和图3显示了每个实验组在回忆阶段：

[0118] -对两个物体(即新的物体和熟悉的物体)的探索时间(秒)；和

[0119] -如上定义的识别指数。

[0120] 在回忆阶段即在学习阶段后24小时，仅用媒介物治疗的动物或用无活性剂量的所述两种化合物(1，4-二氮杂二环[3.2.2]壬烷-4-甲酸4-溴苯基酯(2E)-丁-2-烯二酸盐或利凡斯的明)中的每种治疗的动物在熟悉的物体和新的物体之间没有显示出显著差异。这反映熟悉的物体已经被忘记。

[0121] 相反地，与熟悉的物体相比，用无活性剂量的测试化合物中的每种的组合治疗的动物对新的物体进行了相当多的探索，这反映明显回忆起熟悉的物体。通过对两个物体的探索时间(以秒表示)和识别指数，观察到该效果(表2及图2和图3)。

[0122] 表2

[0123]

[0124] 以上结果表明在视觉情景记忆测试中，与所述两种活性成分当单独服用时产生的促进认知效果相比，本发明组合明显具有较大的促进认知效果。

[0125] 2.对在小鼠中通过脑室内(ICV)注射β-淀粉样蛋白25-35诱发的短期视觉情景记忆缺陷进行测试

[0126] β-淀粉样肽是在阿尔茨海默病中观察到的老年斑的主要成分。Aβ25-35肽片段含有诱导神经毒性所需要和足够的11个氨基酸。出于该原因，脑室内(ICV)注射该肽被认为是阿尔茨海默病的预测可靠性很强的病生理模型。

[0127] 将Aβ25-35淀粉样肽以3mg/ml的最终浓度溶解在蒸馏水中。然后将其在37℃孵育4天，从而形成毒性肽的聚集物。对照动物接受乱序肽，所述乱序肽由相同的氨基酸构成但按照随机序列来组织。该乱序肽没有呈现出神经元毒性(无毒性)。

[0128] 将所述肽脑室内注射到用异氟烷麻醉的CD1品系小鼠中。使用配有28号针头(3mm长)的微量注射器。在与每只眼睛等距离的中心线右侧1mm处且在眼睛轴线和耳朵轴线之间的等距离处将针头单侧插入。历时1分钟注射3μl上述聚集的肽。小鼠在脑内注射后6至14天用于行为测试。

[0129] 所使用的行为实验规程与上述大鼠自发忘记测试所使用的行为实验规程相当。

[0130] 1.)适应阶段：在该规程中，首先使小鼠适应环境(52×52×40cm的浅灰色PVC室且以6Lux照明)10分钟。有效运动所花费的时间使用计时器来测量。

[0131] 2.)学习阶段：24小时后，将两个完全相同的物体(金属三角体(5.5×3.3cm)或正方形红色Lego积木(3.0×3.0×3.0cm))置于实验装置中。将每只小鼠置于室的中央，使鼻部朝向与物体/刺激物所处室壁相反的室壁。使所提供的物体对在每组小鼠中均匀改变。将动物留在室中，直到它们在3分钟的最大时限内达到对两个物体的10秒探索时限。一旦达到10秒的探索时限，就将小鼠放回到其居住笼中。该程序可均化动物对熟悉的物体的灌输程度，因此可在动物之间得到相当的学习程度。

[0132] 3.)回忆阶段：对于所有组，回忆阶段在1小时的忘记时限后进行。该短的忘记时限在对照动物中引起良好的回忆执行水平，且可在其它动物中证实注射毒性肽所导致的缺陷。使小鼠面对由在学习阶段遇到的物体和未知的物体构成的物体对。小鼠以与学习阶段相同的方式来置于室中。

[0133] 该测试持续5分钟，在此期间测量探索2个物体中的每个所花费的时间。

[0134] 对于该短的忘记时限，对照动物将呈现出对新的物体的较多探索，这反映明显回忆起熟悉的物体。相反地，具有缺陷的动物将呈现出对两个物体的探索时间没有统计学差异。

[0135] 对于学习阶段和回忆阶段，如果动物使其鼻部朝向物体即在所述物体周围2厘米的范围内，或如果它用其鼻部或足部接触物体，则计数为对物体的探索。如果小鼠围绕物体移动或伏在物体上，则不认为这些行为是探索性的。

[0136] 原始数据以秒表示。

[0137] 测试化合物在规程的三个阶段中的每个阶段前60分钟来腹膜内给药。

[0138] 建立五个实验组，所述组分别接受：

[0139] 1-对照乱序肽(无毒性)、媒介物

[0140] 2-Aβ25-35肽(有毒性)、媒介物

[0141] 3-Aβ25-35肽、乙酰胆碱酯酶抑制剂(无活性剂量)

[0142] 4-Aβ25-35肽、α-7烟碱性受体部分激动剂(无活性剂量)

[0143] 5-Aβ25-35肽、乙酰胆碱酯酶抑制剂(无活性剂量)+α-7烟碱性受体部分激动剂(无活性剂量)。

[0144] 在回忆阶段即在学习阶段后1小时，测量探索两个物体所花费的时间(以秒表示)。

[0145] -就熟悉的物体和新的物体而言，相似的探索时间反映熟悉的物体已经被忘记，因此存在短期回忆执行水平的完全丧失。

[0146] -相反地，与熟悉的物体相比，对新的物体的较长探索时间反映良好的短期回忆执行水平。

[0147] 也测量了识别指数(探索新的物体所花费的时间/探索新的物体和熟悉的物体所花费的总时间)。

[0148] -相对低的识别指数反映熟悉的物体已经被完全忘记，因此存在短期回忆执行水平的完全丧失。

[0149] -相反地，高的识别指数反映明显回忆起熟悉的物体，因此表明良好的短期回忆执行水平。

[0150] 以下结果通过建立下列五个实验组来得到，所述组分别接受：

[0151] 1-对照乱序肽(无毒性)、媒介物

[0152] 2-Aβ25-35肽(有毒性)、媒介物

[0153] 3-Aβ25-35肽、多奈哌齐[0.1mg/kg(无活性剂量)]

[0154] 4-Aβ25-35肽、1，4-二氮杂二环[3.2.2]壬烷-4-甲酸4-溴苯基酯(2E)-丁-2-烯二酸盐[0.1mg/kg(无活性剂量)]

[0155] 5-Aβ25-35肽、多奈哌齐[0.1mg/kg]+1，4-二氮杂二环[3.2.2]壬烷-4-甲酸4-溴苯基酯(2E)-丁-2-烯二酸盐[0.1mg/kg(无活性剂量)]。

[0156] 以上剂量以碱等价物表示。

[0157] 在单次给药所述两种化合物中的每种或所述两种化合物的组合后，在适应环境阶段没有观察到运动的改变。类似地，在学习阶段没有报告对两个相同物体的探索时间的改变。

[0158] 表3及图4和图5显示了每个实验组在回忆阶段：

[0159] -对两个物体(即新的物体和熟悉的物体)的探索时间(秒)；和

[0160] -如上定义的识别指数。

[0161] 在回忆阶段，用无毒性的对照肽处理的动物呈现出完整的短期回忆执行水平，这导致与熟悉的物体相比，对新的物体的显著较长探索。

[0162] 相反地，已经接受毒性肽的动物显示出短期回忆执行水平的完全丧失，这导致对熟悉的物体和新的物体的相同探索。

[0163] 1，4-二氮杂二环[3.2.2]壬烷-4-甲酸4-溴苯基酯(2E)-丁-2-烯二酸盐的剂量和多奈哌齐的剂量本身均无活性且不引起执行水平的改善。

[0164] 在另一方面，当将这两种产品共同给药时，观察到非常显著的促进记忆效果，这导致短期回忆执行水平的恢复，所述水平类似于或甚至优于用无毒性的肽治疗的动物的短期回忆执行水平(表3及图4和图5)。

[0165] 表3

[0166]

[0167] 以上结果表明在短期视觉情景记忆缺陷测试中，与所述两种活性成分当单独服用时产生的促进记忆效果相比，本发明组合引起显著较大的促进记忆效果。

[0168] 上述两个系列的实验中得到的所有结果表明与以相同剂量单独给药的每种活性成分相比，本发明组合就效力而言在啮齿类动物物体识别任务中对视觉情景记忆障碍具有较大的效果。该较大的效果不但在无缺陷动物中观察到(改善的执行水平)，而且在脑内注射毒性淀粉样肽的阿尔茨海默病病生理模型中观察到。

[0169] 该较大的效果代表了本发明组合对认知障碍且更特别是对与阿尔茨海默病(一种其中已知该类认知功能特别受损的病理状态)相关的认知障碍的效力。