一种分离加兰他敏的方法转让专利
申请号 : CN201010598261.X
文献号 : CN102050826B
文献日 : 2012-11-14
发明人 : 金志敏 , 王聪
申请人 : 浙江工业大学
摘要 :
本发明公开了一种分离加兰他敏的方法：先检测石蒜总生物碱浸膏中加兰他敏的含量，将石蒜总生物碱浸膏与L-(-)-二苯甲酰酒石酸混合，用75~95%的乙醇作溶剂，在70~100℃下充分反应，得澄清溶液，然后冷却至-10~25℃，静置至析出结晶，过滤取滤饼用重结晶溶剂A重结晶后，得到的晶体粗品加碱水溶液，调pH值为7~9进行分解，加入CHCl3萃取，取有机层蒸除溶剂得到加兰他敏粗品；然后用丙酮溶解，加入HBr水溶液，过滤得到加兰他敏氢溴酸盐，用重结晶溶剂B重结晶，得到加兰他敏纯品。本发明拆分的效率高，只需要一次结晶，加兰他敏的收率可在80-90%之间，纯度在90-99%之间。并且操作简单，重复性好，实施成本低，污染少，利于工业放大。
权利要求 :
1.一种以加兰他敏氢溴酸盐的形式从石蒜总生物碱浸膏中分离加兰他敏的方法，所述方法以含有加兰他敏的石蒜总生物碱浸膏为原料，所述的石蒜总生物碱浸膏是由石蒜鳞茎以酸为提取剂经浸漉法提取得到的浸膏，其特征在于所述的方法为：检测石蒜总生物碱浸膏中加兰他敏的含量，将石蒜总生物碱浸膏与L-(-)-二苯甲酰酒石酸混合，用75～95%的乙醇作溶剂，在70～100℃下充分反应，得澄清溶液，然后冷却至-10～25℃，静置至析出结晶，过滤得到滤饼和滤液，滤饼用重结晶溶剂A重结晶后，得到的晶体粗品加碱水溶液，调pH值为7～9进行分解，再加入CHCl3萃取，取有机层蒸除溶剂得到加兰他敏粗品；将加兰他敏粗品用丙酮溶解，并加入HBr水溶液，过滤得到加兰他敏氢溴酸盐，用重结晶溶剂B重结晶，得到加兰他敏氢溴酸盐纯品；所述重结晶溶剂A或B各自独立为乙醇水溶液、甲醇、无水乙醇或丙酮；
所述石蒜总生物碱浸膏中含有的加兰他敏与L-(-)-二苯甲酰酒石酸、HBr水溶液中HBr的物质的量比为1:1～4：1～2。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述的方法为：检测石蒜总生物碱浸膏中加兰他敏的含量，将石蒜总生物碱浸膏与L-(-)-二苯甲酰酒石酸混合，用75%的乙醇作溶剂，在80℃下充分反应，得澄清溶液，然后冷却至室温，静置至析出结晶，过滤得到滤饼和滤液，滤饼用85%的乙醇重结晶后，得到的晶体粗品加10%NaOH水溶液，调pH值为8进行分解，再加入CHCl3萃取，取有机层蒸除溶剂得到加兰他敏粗品；将加兰他敏粗品用丙酮溶解，并加入HBr水溶液，过滤得到的加兰他敏氢溴酸盐用50%乙醇重结晶，得到加兰他敏氢溴酸盐纯品。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述石蒜总生物碱浸膏中含有的加兰他敏与
75～95%的乙醇溶剂的质量之比为1:10～30。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述碱水溶液为NaOH溶液、KOH溶液、碳酸钠溶液、碳酸钾溶液、碳酸氢钠溶液或碳酸氢钾溶液。
说明书 :
一种分离加兰他敏的方法
(一)技术领域
[0001] 本发明涉及一种分离加兰他敏的方法，尤其是从含石蒜科生物碱的植物提取物中，将加兰他敏与其它众多生物碱分离的方法。(二)背景技术
[0002] 加兰他敏(Galantamine)，又称雪花莲胺碱(Galanthamine)，为带有叔胺的四环生物碱，是一种具有可逆作用的胆碱酯酶抑制剂，可广泛用于老年性痴呆(AD)、重症肌无力、肠麻痹和骨髓灰质炎后遗症等的治疗。加兰他敏常以氢溴酸盐的形式用于临床，并于2003年上市。随着全球老年人口增多，老年痴呆症造成的疾病负担日益增加，加兰他敏作为一种效果温和且不良反应轻微的中枢胆碱酯酶抑制剂，因而重新受到重视。
[0003] 最初从夏雪片莲的干球茎中提取加兰他敏，后来在天山雪莲及同科的水仙属、石蒜属植物中也有发现。野生资源中以忽地笑(又名黄花石蒜、铁色箭)、换锦花及鹿葱等品种中加兰他敏含量较高，其中又以忽地笑球茎的含量最高。但近年因无计划的采挖及栽培技术落后、种球繁殖数低等原因致使石蒜的野生资源逐渐减少。
[0004] 目前已有多种得到加兰他敏的方法，石蒜中含加兰他敏约0.1‰，我国技术人员通过大量实验，小试、中试，成功地从石蒜中提取单体加兰他敏，然后加入氢溴酸合成加兰他敏氢溴酸盐，最后用无水乙醇重结晶得到精品的氢溴酸加兰他敏，所以从植物材料分离加兰他敏仍是其大规模制造的有效替代途径，但传统的分离纯化方法操作复杂，成本高。
[0005] 专利200910027243.3描述的从石蒜鳞茎粗粉加入到CO2超临界萃取器中，用HCl-CHCl3萃取，再通过氧化铝色谱柱分离，洗脱，收集，浓缩，重结晶，洗涤，干燥。专利200910232806.2提供了对这个方法的改进，以萃取物调pH9-10，加入乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠脱水，滤过，析晶来代替色谱柱分离，尽管如此，但超临界流体CO2萃取法只是减少粗提中的杂质，并不能细分各石蒜生物碱成分，如果用超临界分离纯化，工序繁琐，所用的设备仪器，使得成本更高。
[0006] 专利03142010.9描述了用高速逆流色谱法分离石蒜粗提物，虽可避免被载体吸附、损耗和变性等问题，但只适用于实验室少量分离。
[0007] 化学合成法(例如Kametani al.，J.Chem.Soc.C，1971，6，1043-1047；Shimizu al.，Heterocycles，1977，8，277-282；ZL200810020491.0；CN201010129674.3)虽然可以不依靠植物资源来得到加兰他敏，但该法合成路线长，同时耗费大量的有机试剂，对环境造成污染，得到的只是外消旋体，并且还须拆分来得到左旋对映体，耗时，耗成本。氧化铝层析或硅酸盐层析法，程序繁琐，耗时长，溶剂消耗大，成本高，且载体会吸附一部分有效成分；碱浓度梯度法，程序繁琐，耗时长，溶剂消耗大，成本高；液-液萃取法，纯度虽高，但耗时长，溶剂消耗大，程序繁琐。
[0008] 制约加兰他敏进一步开发利用的关键在于从总提取物中分离单一的有效成份。目前，已报道的鳞茎含总生物碱0.21％，其中石蒜碱(lycorine)占0.1％，其次有高石蒜碱(homolycorine)、(多花)水仙碱(tazettine)，加兰他敏占0.035％，石蒜胺碱(lycoramine)、石蒜宁碱(lycorenine)、伪石蒜碱(pseudolycorine)和小星蒜碱(hippeastrine)，茎的髓部含加兰他敏、多花水仙碱和微量石蒜胺碱。采用传统的分离工艺，去除类似生物碱杂质困难，不适应目前世界各国对加兰他敏的高质量要求，因此高效率、高纯度、低成本来分离纯化加兰他敏的生产工艺具有深远的意义。(三)发明内容
[0009] 本发明的目的是针对现有技术的不足，提供一种利用包结法对石蒜科总生物碱提取物进行分离的方法。
[0010] 本发明的研究思路为：由于加兰他敏具有高位阻(不共面的苯基)、以及易形成氢键基团(羟基、氨基)，因而存在着很多特有分子能够识别加兰他敏。加兰他敏显碱性，可与+ - - +L-(-)-二苯甲酰酒石酸结合成盐，氨基与羧基对接，形成N-H---O、O-H---N 这样的氢键形式。此处L-(-)-二苯甲酰酒石酸与加兰他敏的分子对接是关键，然后进行重新排序，形成紧密堆积而从溶液中结晶析出。把酒石酸酯化成L-(-)-二苯甲酰酒石酸，来增大其空间位阻，从而增强主体分子对客体分子的选择性。
[0011] 为解决本发明技术问题，本发明采用如下技术方案：
[0012] 一种分离加兰他敏的方法，所述方法以含有加兰他敏的石蒜总生物碱浸膏为原料，所述的石蒜总生物碱浸膏是由石蒜鳞茎以酸为提取剂经浸漉法提取得到的浸膏，所述的方法为：检测石蒜总生物碱浸膏中加兰他敏的含量，将石蒜总生物碱浸膏与L-(-)-二苯甲酰酒石酸混合，用75～95％的乙醇作溶剂，在70～100℃下充分反应，得澄清溶液，然后冷却至-10～25℃，静置至析出结晶，过滤得到滤饼和滤液，滤饼用重结晶溶剂A重结晶后，得到的晶体粗品加碱水溶液，调pH值为7～9进行分解，再加入CHCl3萃取，取有机层蒸除溶剂得到加兰他敏粗品；将加兰他敏粗品用丙酮溶解，并加入HBr水溶液，过滤得到加兰他敏氢溴酸盐，用重结晶溶剂B重结晶，得到加兰他敏纯品；所述重结晶溶剂A或B各自独立为乙醇水溶液、甲醇、无水乙醇或丙酮；
[0013] 所述石蒜总生物碱浸膏中含有的加兰他敏与L-(-)-二苯甲酰酒石酸、HBr水溶液中HBr的物质的量比为1∶1～4∶1～2。
[0014] 进一步，所述的方法优选为：检测石蒜总生物碱浸膏中加兰他敏的含量，将石蒜总生物碱浸膏与L-(-)-二苯甲酰酒石酸混合，用75％的乙醇作溶剂，在80℃下充分反应，得澄清溶液，然后冷却至室温，静置至析出结晶，过滤得到滤饼和滤液，滤饼用85％的乙醇重结晶后，得到的晶体粗品加10％NaOH水溶液，调pH值为8进行分解，再加入CHCl3萃取，取有机层蒸除溶剂得到加兰他敏粗品；将加兰他敏粗品用丙酮溶解，并加入HBr水溶液，过滤得到的加兰他敏氢溴酸盐用50％乙醇重结晶，得到加兰他敏纯品。
[0015] 所述方法中，所述石蒜总生物碱浸膏中含有的加兰他敏与75～95％的乙醇溶剂的质量之比为1∶10～30。
[0016] 所述碱水溶液为NaOH溶液、KOH溶液、碳酸钠溶液、碳酸钾溶液、碳酸氢钠溶液或碳酸氢钾溶液，优选10％NaOH溶液。
[0017] 所述重结晶溶剂A优选50～85％的乙醇，所述重结晶溶剂B优选35～65％的乙醇。
[0018] 本发明所述的石蒜总生物碱浸膏为市售或由石蒜鳞茎以酸为提取剂经浸漉法提取得到，通常按照以下方法制得：取石蒜鳞茎，不加筛粉碎，装入渗漉筒中，加入2‰盐酸，完全浸没石蒜鳞茎，随时添加盐酸溶液以保证石蒜鳞茎充分浸泡，浸泡8～12小时后开始收集渗漉液，并不断补充盐酸溶液以保证石蒜鳞茎充分浸泡，至渗漉液由黄褐色转为暗绿色，停止渗漉。合并所有渗漉液，调pH至6～7，过滤得到沉淀，即得到石蒜总生物碱浸膏。
[0019] 本发明所述在70～100℃温度的条件下充分反应，反应时间一般在30分钟～1小时，得到澄清溶液；然后冷却至-10～25℃，静置至析出结晶，析晶时间一般在6-8小时。
[0020] 与现有技术相比，本方法基于超分子组装的基本原理，利用主体分子与客体分子之间拓扑学上的相匹配，使得显碱性的加兰他敏在总生物碱液中选择性地与L-(-)-二苯甲酰酒石酸形成稳定的分子晶体，从而实现高效、迅速的分离作用，其优点主要在于：
[0021] a)拆分的效率比较高。由于分子识别的高度选择性，只需要一次结晶，加兰他敏的收率可在80％-90％之间，纯度在90％-99％之间。
[0022] b)操作简单，重复性好，实施成本低，污染少，利于工业放大。(四)具体实施方式
[0023] 下面以具体实施例来进一步说明本发明的技术方案，但本发明的保护范围不限于此。
[0024] 石蒜总生物碱浸膏的制备：取石蒜鳞茎8kg，不加筛粉碎，用2‰HCl润湿，装入预先垫有脱脂棉的渗漉筒中，边装边倒盐酸，待石蒜鳞茎装到渗漉筒的一半时，即停止装筒。继续加入2‰HCl，直到石蒜鳞茎完全浸没，反复振摇，随时添加盐酸溶液以保证石蒜鳞茎充分浸泡，浸泡过夜。第2天开始收集渗漉液，并不断补充盐酸溶液，至渗漉液由黄褐色转为暗绿色，停止渗漉。合并所有渗漉液，调pH至7，过滤得到沉淀，即得到石蒜总生物碱浸膏
1.2kg。
1.2kg。
[0025] 实施例1
[0026] 将石蒜总生物碱浸膏(含加兰他敏10％，其他生物碱20％，HPLC测定)5.0g与0.6g L-(-)-二苯甲酰酒石酸(购于济南比优特化工有限公司)混合，用15.0ml 75％的乙醇作溶剂，加热至80℃，加热30min得澄清溶液。然后将其冷却至25℃，析出结晶[结-1
晶 I：IR(KBr，cm )3418，3068，3056，2960，1731，1635，1602，1586，1335，1318，1266，1179，
1
1026，1003，937，890，710，684，650，617。H NMR(DMSO-d6)δ8.046(d，1H)，7.742(d，1H)，
7.619(d，1H)，6.85(AB，2H，J＝9.6Hz)，6.15(d，1H，J＝7.9Hz)，5.95(dd，1H，J＝7.9Hz，J ＝ 3.2Hz)，5.922(d，1H)，4.85(d，1H，J ＝ 16.0Hz)，4.60(s，1H)，4.47(bs，1H)，4.35(d，
1H，J ＝ 16.0Hz)，4.10(bs，1H)，3.70-3.90(s+m，4H)，3.50(d，1H，J ＝ 12.8Hz)，2.85(bs，
3H)，2.40-2.00(m，3H)，1.90(d，1H，J＝16.0Hz)]。过滤，同时回收溶剂及识别试剂、副产混生物碱滤液。晶体I 0.46g再加入15.0ml85％的乙醇重结晶，再过滤，同时回收乙醇溶剂，然后滴加10％的NaOH调pH至8进行分解，加入100mLCHCl3萃取，取有机层蒸除溶剂，最终得到加兰他敏粗品0.44g。将粗品加入15.0ml丙酮溶解，并加入0.7ml40％的HBr溶液，过滤得到的加兰他敏氢溴酸盐，用10.0ml 50％乙醇重结晶，最后干燥，得到其成品-1
0.43g：IR(KBr，cm )3520，2582，2522，1618，1510，1418，1286，1048，1020，810，719，613，
1
428。HNMR(DMSO-d6)δ6.85(AB，2H，J＝9.6Hz)，6.15(d，1H，J＝ 7.9Hz)，5.95(dd，1H，J＝ 7.9Hz，J ＝ 3.2Hz)，4.85(d，1H，J ＝ 16.0Hz)，4.60(s，1H)，4.47(bs，1H)，4.35(d，1H，J＝ 16.0Hz)，4.10(bs，1H)，3.70-3.90(s+m，4H)，3.50(d，1H，J＝ 12.8Hz)，2.85(bs，3H)，
2.40-2.00(m，3H)，1.90(d，1H，J＝16.0Hz)。采用HPLC测定加兰他敏的含量。色谱条件：
色谱柱ZorbaxC18(250mm×0.46mm，0.5μm)；流动相V(水)∶V(甲醇)∶V(冰乙酸)＝-1
91∶8∶1；流速1mL·min ；柱温30℃；压力126bar；进样量1μL；检测波长280nm。纯度98.3％，收率86.0％。
晶 I：IR(KBr，cm )3418，3068，3056，2960，1731，1635，1602，1586，1335，1318，1266，1179，
1
1026，1003，937，890，710，684，650，617。H NMR(DMSO-d6)δ8.046(d，1H)，7.742(d，1H)，
7.619(d，1H)，6.85(AB，2H，J＝9.6Hz)，6.15(d，1H，J＝7.9Hz)，5.95(dd，1H，J＝7.9Hz，J ＝ 3.2Hz)，5.922(d，1H)，4.85(d，1H，J ＝ 16.0Hz)，4.60(s，1H)，4.47(bs，1H)，4.35(d，
1H，J ＝ 16.0Hz)，4.10(bs，1H)，3.70-3.90(s+m，4H)，3.50(d，1H，J ＝ 12.8Hz)，2.85(bs，
3H)，2.40-2.00(m，3H)，1.90(d，1H，J＝16.0Hz)]。过滤，同时回收溶剂及识别试剂、副产混生物碱滤液。晶体I 0.46g再加入15.0ml85％的乙醇重结晶，再过滤，同时回收乙醇溶剂，然后滴加10％的NaOH调pH至8进行分解，加入100mLCHCl3萃取，取有机层蒸除溶剂，最终得到加兰他敏粗品0.44g。将粗品加入15.0ml丙酮溶解，并加入0.7ml40％的HBr溶液，过滤得到的加兰他敏氢溴酸盐，用10.0ml 50％乙醇重结晶，最后干燥，得到其成品-1
0.43g：IR(KBr，cm )3520，2582，2522，1618，1510，1418，1286，1048，1020，810，719，613，
1
428。HNMR(DMSO-d6)δ6.85(AB，2H，J＝9.6Hz)，6.15(d，1H，J＝ 7.9Hz)，5.95(dd，1H，J＝ 7.9Hz，J ＝ 3.2Hz)，4.85(d，1H，J ＝ 16.0Hz)，4.60(s，1H)，4.47(bs，1H)，4.35(d，1H，J＝ 16.0Hz)，4.10(bs，1H)，3.70-3.90(s+m，4H)，3.50(d，1H，J＝ 12.8Hz)，2.85(bs，3H)，
2.40-2.00(m，3H)，1.90(d，1H，J＝16.0Hz)。采用HPLC测定加兰他敏的含量。色谱条件：
色谱柱ZorbaxC18(250mm×0.46mm，0.5μm)；流动相V(水)∶V(甲醇)∶V(冰乙酸)＝-1
91∶8∶1；流速1mL·min ；柱温30℃；压力126bar；进样量1μL；检测波长280nm。纯度98.3％，收率86.0％。
[0027] 实施例2
[0028] 将总生物碱(含加兰他敏13％，其他生物碱18％)6.4g与3.0gL-(-)-二苯甲酰酒石酸混合，用19.2ml 85％的乙醇作溶剂，加热至100℃，加热1h得澄清溶液。然后将其冷-1却至10℃，析出结晶[结晶I：IR(KBr，cm )3418，3068，3056，2960，1731，1635，1602，1586，
1
1335，1318，1266，1179，1026，1003，937，890，710，684，650，617。HNMR(DMSO-d6)δ8.046(d，
1H)，7.742(d，1H)，7.619(d，1H)，6.85(AB，2H，J ＝ 9.6Hz)，6.15(d，1H，J ＝ 7.9Hz)，
5.95(dd，1H，J＝7.9Hz，J＝3.2Hz)，5.922(d，1H)，4.85(d，1H，J＝16.0Hz)，4.60(s，1H)，
4.47(bs，1H)，4.35(d，1H，J ＝ 16.0Hz)，4.10(bs，1H)，3.70-3.90(s+m，4H)，3.50(d，1H，J＝12.8Hz)，2.85(bs，3H)，2.40-2.00(m，3H)，1.90(d，1H，J＝16.0Hz)]。过滤，同时回收溶剂及识别试剂、副产混生物碱滤液。晶体I 0.78g再加入19.2ml 75％的乙醇重结晶，再过滤，同时回收乙醇溶剂，然后滴加10％的NaOH调pH至7.5进行分解，加入100mLCHCl3萃取，取有机层蒸除溶剂，最终得到加兰他敏粗品0.73g。将粗品加入19.2ml丙酮溶解，并加入0.6ml 40％的HBr溶液，过滤得到的加兰他敏氢溴酸盐，用12.8ml 65％乙醇重结-1
晶，最后干燥，得到其成品0.69g：IR(KBr，cm )3520，2582，2522，1618，1510，1418，1286，
1
1048，1020，810，719，613，428。H NMR(DMSO-d6)δ6.85(AB，2H，J ＝ 9.6Hz)，6.15(d，1H，J＝7.9Hz)，5.95(dd，1H，J＝7.9Hz，J＝3.2Hz)，4.85(d，1H，J＝16.0Hz)，4.60(s，1H)，
4.47(bs，1H)，4.35(d，1H，J＝16.0Hz)，4.10(bs，1H)，3.70-3.90(s+m，4H)，3.50(d，1H，J＝
12.8Hz)，2.85(bs，3H)，2.40-2.00(m，3H)，1.90(d，1H，J＝16.0Hz)。采用HPLC测定加兰他敏的含量。色谱条件：色谱柱ZorbaxC18(250mm×0.46mm，0.5μm)；流动相V(水)∶V(甲-1
醇)∶V(冰乙酸)＝91∶8∶1；流速1mL·min ；柱温30℃；压力126bar；进样量1μL；
检测波长280nm。纯度98.8％，收率82.9％。
1
1335，1318，1266，1179，1026，1003，937，890，710，684，650，617。HNMR(DMSO-d6)δ8.046(d，
1H)，7.742(d，1H)，7.619(d，1H)，6.85(AB，2H，J ＝ 9.6Hz)，6.15(d，1H，J ＝ 7.9Hz)，
5.95(dd，1H，J＝7.9Hz，J＝3.2Hz)，5.922(d，1H)，4.85(d，1H，J＝16.0Hz)，4.60(s，1H)，
4.47(bs，1H)，4.35(d，1H，J ＝ 16.0Hz)，4.10(bs，1H)，3.70-3.90(s+m，4H)，3.50(d，1H，J＝12.8Hz)，2.85(bs，3H)，2.40-2.00(m，3H)，1.90(d，1H，J＝16.0Hz)]。过滤，同时回收溶剂及识别试剂、副产混生物碱滤液。晶体I 0.78g再加入19.2ml 75％的乙醇重结晶，再过滤，同时回收乙醇溶剂，然后滴加10％的NaOH调pH至7.5进行分解，加入100mLCHCl3萃取，取有机层蒸除溶剂，最终得到加兰他敏粗品0.73g。将粗品加入19.2ml丙酮溶解，并加入0.6ml 40％的HBr溶液，过滤得到的加兰他敏氢溴酸盐，用12.8ml 65％乙醇重结-1
晶，最后干燥，得到其成品0.69g：IR(KBr，cm )3520，2582，2522，1618，1510，1418，1286，
1
1048，1020，810，719，613，428。H NMR(DMSO-d6)δ6.85(AB，2H，J ＝ 9.6Hz)，6.15(d，1H，J＝7.9Hz)，5.95(dd，1H，J＝7.9Hz，J＝3.2Hz)，4.85(d，1H，J＝16.0Hz)，4.60(s，1H)，
4.47(bs，1H)，4.35(d，1H，J＝16.0Hz)，4.10(bs，1H)，3.70-3.90(s+m，4H)，3.50(d，1H，J＝
12.8Hz)，2.85(bs，3H)，2.40-2.00(m，3H)，1.90(d，1H，J＝16.0Hz)。采用HPLC测定加兰他敏的含量。色谱条件：色谱柱ZorbaxC18(250mm×0.46mm，0.5μm)；流动相V(水)∶V(甲-1
醇)∶V(冰乙酸)＝91∶8∶1；流速1mL·min ；柱温30℃；压力126bar；进样量1μL；
检测波长280nm。纯度98.8％，收率82.9％。
[0029] 实施例3
[0030] 将总生物碱(含加兰他敏8％，其他生物碱19％)7.3g与0.8g L-(-)-二苯甲酰酒石酸混合，用17ml 95％的乙醇作溶剂，加热至70℃，加热50min得澄清溶液。然后将其冷-1却至-10℃，析出结晶[结晶I：IR(KBr，cm )3418，3068，3056，2960，1731，1635，1602，1586，
1
1335，1318，1266，1179，1026，1003，937，890，710，684，650，617。HNMR(DMSO-d6)δ8.046(d，
1H)，7.742(d，1H)，7.619(d，1H)，6.85(AB，2H，J ＝ 9.6Hz)，6.15(d，1H，J ＝ 7.9Hz)，
5.95(dd，1H，J＝7.9Hz，J＝3.2Hz)，5.922(d，1H)，4.85(d，1H，J＝16.0Hz)，4.60(s，1H)，
4.47(bs，1H)，4.35(d，1H，J ＝ 16.0Hz)，4.10(bs，1H)，3.70-3.90(s+m，4H)，3.50(d，1H，J＝12.8Hz)，2.85(bs，3H)，2.40-2.00(m，3H)，1.90(d，1H，J＝16.0Hz)]。过滤，同时回收溶剂及识别试剂、副产混生物碱滤液。晶体I 0.48g再加入21.9ml 55％的乙醇重结晶，再过滤，同时回收乙醇溶剂，然后滴加10％的NaOH调pH至7进行分解，加入100mLCHCl3萃取，取有机层蒸除溶剂，最终得到加兰他敏粗品0.45g。将粗品加入21.9ml丙酮溶解，并加入
0.6ml40％的HBr溶液，过滤得到的加兰他敏氢溴酸盐，用14.6ml 35％乙醇重结晶，最后干-1
燥，得到其成品0.44g：IR(KBr，cm )3520，2582，2522，1618，1510，1418，1286，1048，1020，
1
810，719，613，428。H NMR(DMSO-d6)δ6.85(AB，2H，J＝9.6Hz)，6.15(d，1H，J＝7.9Hz)，
5.95(dd，1H，J＝7.9Hz，J＝3.2Hz)，4.85(d，1H，J＝16.0Hz)，4.60(s，1H)，4.47(bs，1H)，
4.35(d，1H，J ＝ 16.0Hz)，4.10(bs，1H)，3.70-3.90(s+m，4H)，3.50(d，1H，J ＝ 12.8Hz)，
2.85(bs，3H)，2.40-2.00(m，3H)，1.90(d，1H，J＝16.0Hz)。采用HPLC测定加兰他敏的含量。
色谱条件：色谱柱ZorbaxC18(250mm×0.46mm，0.5μm)；流动相V(水)∶V(甲醇)∶V(冰-1
乙酸)＝91∶8∶1；流速1mL·min ；柱温30℃；压力126bar；进样量1μL；检测波长
280nm。纯度99.3％，收率75.3％。
1
1335，1318，1266，1179，1026，1003，937，890，710，684，650，617。HNMR(DMSO-d6)δ8.046(d，
1H)，7.742(d，1H)，7.619(d，1H)，6.85(AB，2H，J ＝ 9.6Hz)，6.15(d，1H，J ＝ 7.9Hz)，
5.95(dd，1H，J＝7.9Hz，J＝3.2Hz)，5.922(d，1H)，4.85(d，1H，J＝16.0Hz)，4.60(s，1H)，
4.47(bs，1H)，4.35(d，1H，J ＝ 16.0Hz)，4.10(bs，1H)，3.70-3.90(s+m，4H)，3.50(d，1H，J＝12.8Hz)，2.85(bs，3H)，2.40-2.00(m，3H)，1.90(d，1H，J＝16.0Hz)]。过滤，同时回收溶剂及识别试剂、副产混生物碱滤液。晶体I 0.48g再加入21.9ml 55％的乙醇重结晶，再过滤，同时回收乙醇溶剂，然后滴加10％的NaOH调pH至7进行分解，加入100mLCHCl3萃取，取有机层蒸除溶剂，最终得到加兰他敏粗品0.45g。将粗品加入21.9ml丙酮溶解，并加入
0.6ml40％的HBr溶液，过滤得到的加兰他敏氢溴酸盐，用14.6ml 35％乙醇重结晶，最后干-1
燥，得到其成品0.44g：IR(KBr，cm )3520，2582，2522，1618，1510，1418，1286，1048，1020，
1
810，719，613，428。H NMR(DMSO-d6)δ6.85(AB，2H，J＝9.6Hz)，6.15(d，1H，J＝7.9Hz)，
5.95(dd，1H，J＝7.9Hz，J＝3.2Hz)，4.85(d，1H，J＝16.0Hz)，4.60(s，1H)，4.47(bs，1H)，
4.35(d，1H，J ＝ 16.0Hz)，4.10(bs，1H)，3.70-3.90(s+m，4H)，3.50(d，1H，J ＝ 12.8Hz)，
2.85(bs，3H)，2.40-2.00(m，3H)，1.90(d，1H，J＝16.0Hz)。采用HPLC测定加兰他敏的含量。
色谱条件：色谱柱ZorbaxC18(250mm×0.46mm，0.5μm)；流动相V(水)∶V(甲醇)∶V(冰-1
乙酸)＝91∶8∶1；流速1mL·min ；柱温30℃；压力126bar；进样量1μL；检测波长
280nm。纯度99.3％，收率75.3％。
[0031] 实施例4
[0032] 将总生物碱(含加兰他敏15％，其他生物碱22％)8.2g与4.9g L-(-)-二苯甲酰酒石酸混合，用24.6ml90％的乙醇作溶剂，加热至80℃，加热45min得澄清溶液。然-1后将其冷却至0℃，析出结晶[结晶I：IR(KBr，cm )3418，3068，3056，2960，1731，1635，
1
1602，1586，1335，1318，1266，1179，1026，1003，937，890，710，684，650，617。HNMR(DMSO-d6)δ8.046(d，1H)，7.742(d，1H)，7.619(d，1H)，6.85(AB，2H，J ＝ 9.6Hz)，6.15(d，1H，J ＝
7.9Hz)，5.95(dd，1H，J ＝ 7.9Hz，J ＝ 3.2Hz)，5.922(d，1H)，4.85(d，1H，J ＝ 16.0Hz)，
4.60(s，1H)，4.47(bs，1H)，4.35(d，1H，J ＝ 16.0Hz)，4.10(bs，1H)，3.70-3.90(s+m，4H)，
3.50(d，1H，J＝12.8Hz)，2.85(bs，3H)，2.40-2.00(m，3H)，1.90(d，1H，J＝16.0Hz)]。过滤，同时回收溶剂及识别试剂、副产混生物碱滤液。晶体I1.12g再加入24.6ml 85％的乙醇重结晶，再过滤，同时回收乙醇溶剂，然后滴加10％的NaOH调pH至9进行分解，加入
100mLCHCl3萃取，取有机层蒸除溶剂，最终得到加兰他敏粗品1.05g。将粗品加入24.6ml丙酮溶解，并加入1.5ml 40％的HBr溶液，过滤得到的加兰他敏氢溴酸盐，用16.4ml 50％乙-1
醇重结晶，最后干燥，得到其成品0.97g：IR(KBr，cm )3520，2582，2522，1618，1510，1418，
1
1286，1048，1020，810，719，613，428。H NMR(DMSO-d6)δ6.85(AB，2H，J＝9.6Hz)，6.15(d，
1H，J＝7.9Hz)，5.95(dd，1H，J＝7.9Hz，J＝3.2Hz)，4.85(d，1H，J＝16.0Hz)，4.60(s，1H)，
4.47(bs，1H)，4.35(d，1H，J＝16.0Hz)，4.10(bs，1H)，3.70-3.90(s+m，4H)，3.50(d，1H，J＝
12.8Hz)，2.85(bs，3H)，2.40-2.00(m，3H)，1.90(d，1H，J＝16.0Hz)。采用HPLC测定加兰他敏的含量。色谱条件：色谱柱ZorbaxC18(250mm×0.46mm，0.5μm)；流动相V(水)∶V(甲-1
醇)∶V(冰乙酸)＝91∶8∶1；流速1mL·min ；柱温30℃；压力126bar；进样量1μL；
检测波长280nm。纯度99.1％，收率78.9％。
1
1602，1586，1335，1318，1266，1179，1026，1003，937，890，710，684，650，617。HNMR(DMSO-d6)δ8.046(d，1H)，7.742(d，1H)，7.619(d，1H)，6.85(AB，2H，J ＝ 9.6Hz)，6.15(d，1H，J ＝
7.9Hz)，5.95(dd，1H，J ＝ 7.9Hz，J ＝ 3.2Hz)，5.922(d，1H)，4.85(d，1H，J ＝ 16.0Hz)，
4.60(s，1H)，4.47(bs，1H)，4.35(d，1H，J ＝ 16.0Hz)，4.10(bs，1H)，3.70-3.90(s+m，4H)，
3.50(d，1H，J＝12.8Hz)，2.85(bs，3H)，2.40-2.00(m，3H)，1.90(d，1H，J＝16.0Hz)]。过滤，同时回收溶剂及识别试剂、副产混生物碱滤液。晶体I1.12g再加入24.6ml 85％的乙醇重结晶，再过滤，同时回收乙醇溶剂，然后滴加10％的NaOH调pH至9进行分解，加入
100mLCHCl3萃取，取有机层蒸除溶剂，最终得到加兰他敏粗品1.05g。将粗品加入24.6ml丙酮溶解，并加入1.5ml 40％的HBr溶液，过滤得到的加兰他敏氢溴酸盐，用16.4ml 50％乙-1
醇重结晶，最后干燥，得到其成品0.97g：IR(KBr，cm )3520，2582，2522，1618，1510，1418，
1
1286，1048，1020，810，719，613，428。H NMR(DMSO-d6)δ6.85(AB，2H，J＝9.6Hz)，6.15(d，
1H，J＝7.9Hz)，5.95(dd，1H，J＝7.9Hz，J＝3.2Hz)，4.85(d，1H，J＝16.0Hz)，4.60(s，1H)，
4.47(bs，1H)，4.35(d，1H，J＝16.0Hz)，4.10(bs，1H)，3.70-3.90(s+m，4H)，3.50(d，1H，J＝
12.8Hz)，2.85(bs，3H)，2.40-2.00(m，3H)，1.90(d，1H，J＝16.0Hz)。采用HPLC测定加兰他敏的含量。色谱条件：色谱柱ZorbaxC18(250mm×0.46mm，0.5μm)；流动相V(水)∶V(甲-1
醇)∶V(冰乙酸)＝91∶8∶1；流速1mL·min ；柱温30℃；压力126bar；进样量1μL；
检测波长280nm。纯度99.1％，收率78.9％。
[0033] 实施例5
[0034] 将总生物碱(含加兰他敏12％，其他生物碱20％)9.1g与3.0g L-(-)-二苯甲酰酒石酸混合，用27.3ml 75％的乙醇作溶剂，加热至90℃，加热70min得澄清溶液。然-1后将其冷却至15℃，析出结晶[结晶I：IR(KBr，cm )3418，3068，3056，2960，1731，1635，
1
1602，1586，1335，1318，1266，1179，1026，1003，937，890，710，684，650，617。HNMR(DMSO-d6)δ8.046(d，1H)，7.742(d，1H)，7.619(d，1H)，6.85(AB，2H，J ＝ 9.6Hz)，6.15(d，1H，J ＝
7.9Hz)，5.95(dd，1H，J ＝ 7.9Hz，J ＝ 3.2Hz)，5.922(d，1H)，4.85(d，1H，J ＝ 16.0Hz)，
4.60(s，1H)，4.47(bs，1H)，4.35(d，1H，J ＝ 16.0Hz)，4.10(bs，1H)，3.70-3.90(s+m，4H)，
3.50(d，1H，J＝12.8Hz)，2.85(bs，3H)，2.40-2.00(m，3H)，1.90(d，1H，J＝16.0Hz)]。过滤，同时回收溶剂及识别试剂、副产混生物碱滤液。晶体I 1.04再加入27.3ml 50％的乙
1
1602，1586，1335，1318，1266，1179，1026，1003，937，890，710，684，650，617。HNMR(DMSO-d6)δ8.046(d，1H)，7.742(d，1H)，7.619(d，1H)，6.85(AB，2H，J ＝ 9.6Hz)，6.15(d，1H，J ＝
7.9Hz)，5.95(dd，1H，J ＝ 7.9Hz，J ＝ 3.2Hz)，5.922(d，1H)，4.85(d，1H，J ＝ 16.0Hz)，
4.60(s，1H)，4.47(bs，1H)，4.35(d，1H，J ＝ 16.0Hz)，4.10(bs，1H)，3.70-3.90(s+m，4H)，
3.50(d，1H，J＝12.8Hz)，2.85(bs，3H)，2.40-2.00(m，3H)，1.90(d，1H，J＝16.0Hz)]。过滤，同时回收溶剂及识别试剂、副产混生物碱滤液。晶体I 1.04再加入27.3ml 50％的乙