氨基酸阳离子脂质体纳米颗粒的制备方法转让专利
申请号 : CN201010554778.9
文献号 : CN102060723B
文献日 : 2013-03-13
发明人 : 张健 , 曾佑林 , 苏胜培 , 向双林 , 孙玲玲 , 汪涛 , 何芳丽 , 史明明 , 胡翔
申请人 : 湖南师范大学
摘要 :
权利要求 :
1.一种氨基酸阳离子脂质体纳米颗粒的制备方法,其特征在于该制备方法包括如下步骤:
(1)以氨基酸为原料加入月桂醇或正辛醇进行酯化反应,经分离纯化处理得到白色固体或浆状物;
(2)完成步骤(1)所述的酯化反应后,对获得的固体或浆状物缓慢滴加氯乙酰氯,进行氯乙酰化反应,对反应物进行浓缩,然后加入三甲胺,进行三甲胺参与的季铵盐化反应,经相应的分离纯化处理得到白色或无色固体;
(3)步骤(2)得到的固体经超声波振荡水分散后得到相应的氨基酸阳离子脂质体纳米颗粒。
2.根据权利要求1所述氨基酸阳离子脂质体纳米颗粒的制备方法,其特征在于完成步骤(1)所述的酯化反应后,对获得的氨基酸烷基酯缓慢滴加氯乙酰氯,进行氯乙酰化反应,对反应物进行浓缩、分离纯化,然后加入三甲胺,进行三甲胺参与的季铵盐化反应。
3.根据权利要求1所述氨基酸阳离子脂质体纳米颗粒的制备方法,其特征在于所述氨基酸为L-谷氨酸,以甲苯为溶剂,在一水合对甲基苯磺酸催化下L-谷氨酸和月桂醇回流分水反应后,经后处理制得L-谷氨酸月桂醇酯盐酸盐,L-谷氨酸:一水合对甲基苯磺酸:月桂醇:甲苯=1.0:0.5:1.3:1.6,其中L-谷氨酸、一水合对甲基苯磺酸、月桂醇的计量单位为mmol,甲苯的计量单位为ml;L-谷氨酸月桂醇酯盐酸盐用蒸馏水经超声波分散得到阳离子脂质体Glu-C12纳米颗粒,所述阳离子脂质体Glu-C12的化学结构为:
4.根据权利要求2所述氨基酸阳离子脂质体纳米颗粒的制备方法,其特征在于所述L-谷氨酸月桂醇酯盐酸盐,以三乙胺为缚酸剂、二氯甲烷为反应溶剂与氯乙酰氯反应,再经柱层析分离纯化得白色固体N-氯乙酰基-L-谷氨酸酸月桂醇酯;L-谷氨酸双月桂醇酯盐酸盐:三乙胺:氯乙酰氯:二氯甲烷=1.0:2.1:2.1:20.0,其中L-谷氨酸双月桂醇酯盐酸盐、三乙胺、氯乙酰氯的计量单位为mmol,二氯甲烷的计量单位为ml;以四氢呋喃为反应溶剂,N-氯乙酰基-L-谷氨酸双月桂醇酯与三甲胺常温搅拌反应,其配比为N-氯乙酰基-L-谷氨酸双月桂醇酯:三甲胺:四氢呋喃=1.0:6.0:30.0,其中N-氯乙酰基-L-谷氨酸双月桂醇酯、三甲胺的计量单位为mmol,四氢呋喃的计量单位为ml,经柱层析分离得白色固体L-谷氨酸月桂醇酯季铵盐,经超声波振荡水分散后得到阳离子脂质体TMA-C2-Glu-C12纳米颗粒,所述阳离子脂质体TMA-C2-Glu-C12的化学结构为:
5.根据权利要求2所述氨基酸阳离子脂质体纳米颗粒的制备方法,其特征在于所述氨基酸为L-谷氨酸,所述酯化反应:L-谷氨酸:一水合对甲基苯磺酸:正辛醇:甲苯=1.0:1.0:1.6:1.0;其中L-谷氨酸、一水合对甲基苯磺酸、正辛醇的计量单位为mmol,甲苯的计量单位为ml;所述氯乙酰化反应:L-谷氨酸双正辛醇酯盐酸盐:三乙胺:氯乙酰氯:二氯甲烷=1.0:2.1:1.3:3.2;L-谷氨酸双正辛醇酯盐酸盐、三乙胺、氯乙酰氯的计量单位为mmol,二氯甲烷的计量单位为ml;所述季铵盐化反应:N-氯乙酰基-L-谷氨酸双正辛醇酯:三甲胺:四氢呋喃=1.0:4.3:7.0,其中N-氯乙酰基-L-谷氨酸双正辛醇酯、三甲胺的计量单位为mmol,四氢呋喃的计量单位为ml;经超声波振荡水分散后得到阳离子脂质体TMA-C2-Glu-C8纳米颗粒,所述阳离子脂质体TMA-C2-Glu-C8的化学结构为:
6.根据权利要求2所述氨基酸阳离子脂质体纳米颗粒的制备方法,其特征在于所述氨基酸为β-丙氨酸,所述酯化反应:β-丙氨酸:月桂醇=1.0:3.0;所述氯乙酰化反应:β-丙氨酸月桂醇酯:三乙胺:氯乙酰氯:DMF=1.0:2.0:1.2:10.0,其中β-丙氨酸月桂醇酯、三乙胺、氯乙酰氯的计量单位为mmol,DMF的计量单位为ml;所述季铵盐化反应:N-氯乙酰基-β-丙氨酸月桂醇酯:三甲胺:四氢呋喃=1.0:6.0:11.0,其中N-氯乙酰基-β-丙氨酸月桂醇酯、三甲胺的计量单位为mmol,四氢呋喃计量单位为ml;经超声波振荡水分散后得到阳离子脂质体TMA-C2-β-Ala-C12纳米颗粒,所述阳离子脂质体TMA-C2-β-Ala-C12的化学结构为:
7.根据权利要求2所述氨基酸阳离子脂质体纳米颗粒的制备方法,其特征在于所述氨基酸为L-缬氨酸,所述酯化反应:L-缬氨酸:一水合对甲基苯磺酸:月桂醇:甲苯=1.0:0.5:3.0:1.1,其中L-缬氨酸、一水合对甲基苯磺酸、月桂醇的计量单位为mmol,甲苯的计量单位为ml;所述氯乙酰化反应:L-缬氨酸月桂醇酯:三乙胺:氯乙酰氯:二氯甲烷=1.0:2.0:1.2:4.0,其中L-缬氨酸月桂醇酯、三乙胺、氯乙酰氯的计量单位为mmol,二氯甲烷的计量单位为ml;所述季铵盐化反应:N-氯乙酰基-L-缬氨酸月桂醇酯:三甲胺:四氢呋喃=1:4.0:15.0,其中N-氯乙酰基-L-缬氨酸月桂醇酯、三甲胺的计量单位为mmol,四氢呋喃的计量单位为ml;经超声波振荡水分散后得到阳离子脂质体TMA-C2-Val-C12纳米颗粒,所述阳离子脂质体TMA-C2-Val-C12的化学结构为:
8.根据权利要求2所述氨基酸阳离子脂质体纳米颗粒的制备方法,其特征在于所述氨基酸为L-甲硫氨酸,所述酯化反应:L-甲硫氨酸:一水合对甲基苯磺酸:月桂醇:
甲苯=1.0:1.0:3.0:1.3,其中L-甲硫氨酸、一水合对甲基苯磺酸、月桂醇的计量单位为mmol,甲苯的计量单位为ml;所述氯乙酰化反应:L-甲硫氨酸月桂醇酯:三乙胺:氯乙酰氯:二氯甲烷=1.0:1.9:1.1:9.8,L-甲硫氨酸月桂醇酯、三乙胺、氯乙酰氯的计量单位为mmol,二氯甲烷的计量单位为ml;所述季铵盐化反应:N-氯乙酰基-L-甲硫氨酸月桂醇酯:三甲胺:四氢呋喃(ml)=1.0:6.0:28.0,N-氯乙酰基-L-甲硫氨酸月桂醇酯、三甲胺的计量单位为mmol,四氢呋喃的计量单位为ml,经超声波振荡水分散后得到阳离子脂质体TMA-C2-Met-C12纳米颗粒,阳离子脂质体TMA-C2-Met-C12的化学结构为:
9.根据权利要求2所述氨基酸阳离子脂质体纳米颗粒的制备方法,其特征在于所述氨基酸为甘氨酸,所述酯化反应:甘氨酸:月桂醇=1.0:3.0;所述氯乙酰化反应:甘氨酸月桂醇酯:三乙胺:氯乙酰氯:DMF(ml)=1.0:2.0:1.2:1.6,其中甘氨酸月桂醇酯、三乙胺、氯乙酰氯的计量单位为mmol,DMF的计量单位为ml;所述季铵盐化反应:N-氯乙酰基甘氨酸月桂醇酯:三甲胺:四氢呋喃=1.0:4.0:3.1,其中N-氯乙酰基甘氨酸月桂醇酯、三甲胺的计量单位为mmol,四氢呋喃的计量单位为ml,经超声波振荡水分散后得到阳离子脂质体TMA-C2-Gly-C12纳米颗粒,所述阳离子脂质体TMA-C2-Gly-C12的化学结构为:
10.根据权利要求2所述氨基酸阳离子脂质体纳米颗粒的制备方法,其特征在于所述氨基酸为L-天冬氨酸,所述酯化反应:L-天冬氨酸:一水合对甲基苯磺酸:月桂醇:甲苯=1.0:0.5:3.4:1.5,其中L-天冬氨酸、一水合对甲基苯磺酸、月桂醇的计量单位为mmol,甲苯的计量单位为ml;所述氯乙酰化反应:L-天冬氨酸双月桂醇酯:三乙胺:氯乙酰氯:二氯甲烷=1.0:1.9:1.2:15.1,其中L-天冬氨酸双月桂醇酯、三乙胺、氯乙酰氯的计量单位为mmol,二氯甲烷的计量单位为ml;所述季铵盐化反应:N-氯乙酰基-L-天冬氨酸双月桂醇酯:三甲胺:四氢呋喃=1.0:6.0:29.0,其中N-氯乙酰基-L-天冬氨酸双月桂醇酯、三甲胺的计量单位为mmol,四氢呋喃计量单位为ml,经超声波振荡水分散后得到阳离子脂质体TMA-C2-Asp-C12纳米颗粒,所述阳离子脂质体TMA-C2-Asp-C12的化学结构为:
说明书 :
氨基酸阳离子脂质体纳米颗粒的制备方法
技术领域
背景技术
发明内容
四氢呋喃(ml)=1.0:6.0:30.0,经柱层析分离得白色固体L-谷氨酸月桂醇酯季铵盐,经超声波振荡水分散后得到阳离子脂质体TMA-C2-Glu-C12纳米颗粒。
三甲胺(mmol):四氢呋喃(ml)=1.0:4.3:7.0,经超声波振荡水分散后得到阳离子脂质体TMA-C2-Glu-C8纳米颗粒。
附图说明
具体实施方式
氨酸双月桂醇酯盐酸盐(3.94g,8.1mmol,81.9%)。H NMR(500MHz,CDCl3),δ(ppm):8.89(s+ + -
,3H,-NH3),4.28-4.00(m,5H,2-COOCH2(CH2)10CH3,-CH(NH3Cl)COOCH2(CH2)10CH3),2.74-2.6+ - + - -
0(m,2H,-OOCCH2CH2CH(NH3Cl)COO-),2.44-2.37(m,2H,-OOCCH2CH2CH(NH3Cl)COO),1.69-1.61(m,4H,2-COOCH2CH2(CH2)9CH3),1.32-1.28(m,36H,2-COOCH2CH2(CH2)9CH3),0.90(t,6H,J=
7.0Hz,2-CH3)。
1
(0.35g,0.6mmol,62.5%)。H NMR(500MHz,CDCl3),δ(ppm):7.24(d,1H,J=7.5Hz,-NHCOCH2Cl),4.64-4.05(m,7H,-CHNHCOCH2Cl,2-COOCH2(CH2)10CH3,-NHCOCH2Cl),2.44-2.33(m,2H,-OO+ - + -
CCH2CH2CH(NH3Cl)COO-),2.32-2.04(m,2H,-OOCCH2CH2CH(NH3Cl)COO-),1.64-1.58(m,4H,
2-OCH2CH2(CH2)9CH3),1.42-1.20(m,36H,2-COOCH2CH2(CH2)9CH3),0.90(t,6H,J=6.5Hz,2-CH3)
13
. C NMR(125MHz,CDCl3),δ(ppm):172.6,171.1,165.9(3C,-CH2CH2COOCH2(CH2)10CH3,-CH(-NH)COOCH2(CH2)10CH3,-NHCOCH2Cl),66.0,65.0(2C,-CH2CH2COOCH2(CH2)10CH3,-CH(-NH)COOCH2(CH2)10CH3),52.1(1C,-CH(-NH)COOCH2(CH2)10CH3),42.3(1C,-NHCOCH2Cl),31.8,30.1,29.66,29.61,29.59,29.53,29.49,29.46,29.3,29.2,29.1,28.5,28.4,27.1,22.7(22C,-CH2CH2COOCH2(CH2)10CH3,2-COOCH2(CH2)10CH3,some signals were overlapped),14.1(2C,2-CH3)。
0.5mmol,45.5%)。H NMR(500MHz,CD3OD),δ(ppm):8.47(s,1H,-NHCOCH2N(CH3)3),4.84+ -
-4.47(m,1H,-CHNHCOCH2N(CH3)3Cl),4.21-4.06(m,6H,2-COOCH2(CH2)10CH3,-NHCOCH2N(C+ - + -
H3)3Cl),3.35-3.30(m,9H,-N(CH3)3Cl),2.49-2.46(m,2H,-OOCCH2CH2CH(NHCOCH2N(CH3+ -
)3Cl),1.69-1.61(m,4H,2-COOCH2CH2(CH2)9CH3),1.39-1.22(m,36H,2-COOCH2CH2(CH2)9C
13
H3),0.90(t,6H,J=6.5Hz,2-CH3). C NMR(125MHz,CD3OD),δ(ppm):174.0,172.6,165.0(3C+ - + - + -
,-COCH2CH2CHNHCOCH2N(CH3)3Cl,-COCH2CH2CH(NHCOCH2N(CH3)3Cl,-COCH2N(CH3)3Cl),66.+ - +
7(1C,-COCH2N(CH3)3Cl),65.9(1C,-COOCH2(CH2)10CH3),54.9,53.4(4C,-CHNHCOCH2N(CH3)3- + -
Cl,-N(CH3)3Cl),33.0,31.3,30.7,30.6,30.5,30.4,30.3,29.8,29.7,27.4(22C,2-CH2(CH2)10CH3,some signals were overlapped),14.1(2C,2-CH3)。
1 +
(0.92g,1.5mmol,34.6%)。H NMR(500MHz,CDCl3),δ(ppm):10.98(s,1H,-NHCOCH2N(CH3)3- + -
Cl),5.13(t,1H,J=12.0Hz,-CHNHCOCH2N(CH3)3Cl),4.91-4.86(m,2H,-CH2N(CH3)3),4.40-4.20(m,4H,2-COOCH2(CH2)6CH3),3.42(s,9H,-N(CH3)3),2.51-2.47(m,2H,-CH2COO(CH2)7CH3),
2.27-2.10(m,2H,-CHCH2CH2COO(CH2)7CH3),1.65-1.40(m,4H,2-COOCH2CH2(CH2)5CH3),1.36-1-.18(m,20H,2-COOCH2CH2(CH2)5CH3),0.91(t,6H,J=5.0Hz,2-COOCH2(CH2)6CH3)。
1
基-β-丙氨酸月桂醇酯(0.89g,2.6mmol,78.1%)。HNMR(500MHz,CDCl3),δ(ppm):7.14(s,1H,-NHCOCH2Cl),4.11(t,2H,J=7.0Hz,-COOCH2(CH2)10CH3),4.02(s,2H,-NHCOCH2Cl),3.58(q,2H,-NHCH2CH2COO-),2.56(t,2H,J=6.0Hz,-NHCH2CH2COO-),1.66-1.60(m,2H,-COOCH2CH2(CH2)9CH3),1.37-1.22(m,18H,-COOCH2CH2(CH2)9CH3),0.88(t,3H,J=6.5Hz,-CH3)。
1 + -
H NMR(500MHz,D2O),δ(ppm):4.12(s,2H,-COCH2N(CH3)3Cl),4.06(t,2H,-COOCH2(CH2)10CH
3),3.50(t,2H,J=7.0Hz,-NHCH2CH2COO-),3.38(s,9H,-N(CH3)3),2.59(t,2H,J=7.0Hz,-NHCH
2CH2COO-),1.63-1.60(m,2H,-COOCH2CH2(CH2)9CH3),1.37-1.22(m,18H,-COOCH2CH2(CH2)9CH3)
13
,0.85(t,3H,J=13.5Hz,-CH3). C NMR(125MHz,D2O),δ(ppm):172.5,163.9(2C,-COOCH2(CH2+ - + -
)10CH3,-COCH2N(CH3)3Cl),65.0(1C,-COCH2N(CH3)3Cl),64.9(-COOCH2(CH2)10CH3),54.2(3C,+ -
-N(CH3)3Cl),35.2(1C,-NHCH2CH2COO-),33.3,32.0,29.99,29.92,29.8,29.5,28.5,25.9,
22.6(11C,-NHCH2CH2COO-,-COOCH2(CH2)10CH3,some signals were overlapped),13.8(1C,–CH3)。
酮,有固体析出,抽滤,真空干燥,即L-缬氨酸月桂醇酯(6.43g,22.5mmol,62.3%)。H NMR(500MHz,CDCl3),δ(ppm):4.14-4.05(m,2H,-COOCH2(CH2)10CH3),3.29(d,1H,J=4.5Hz,(CH3)
2CHCH(NH2)-),2.06-2.00(m,1H,(CH3)2CHCH(NH2)-),1.65-1.60(m,2H,-COOCH2CH2(CH2)9CH3),1.38-1.20(m,18H,-COOCH2CH2(CH2)9CH3),0.90(dd,6H,(CH3)2CHCH(NH2)-),0.85(t,3H,-COOCH2(CH2)10CH3)。
基-L-缬氨酸月桂醇酯(0.89g,2.4mmol,45.3%)。H NMR(500MHz,CDCl3),δ(ppm):7.05(d,1H,-NHCOCH2Cl),4.56(m,1H,-CONHCH(CH(CH3)2)-),4.20-4.12(m,2H,-COOCH2(CH2)10CH3),
4.09(s,2H,-NHCOCH2Cl),2.26-2.22(m,1H,(CH3)2CHCH(NH2)-),1.67-1.63(m,2H,-COOCH2CH
2(CH2)9CH3),1.40-1.25(m,18H,-COOCH2CH2(CH2)9CH3),1.00-0.91(m,6H,(CH3)2CHCH(NH2)-),
0.87(t,3H,-CH3)。
1
(0.42g,1.0mmol,50.0%)。HNMR(500MHz,CDCl3),δ(ppm):9.35(d,1H,J=7.0Hz,-CONHCH(CH(CH3)2)-),5.16(d,1H,J=13.5Hz,-NHCH(CH(CH3)2)-),4.38-4.27(m,2H,-COCH2N(CH3)3),4.
14-4.03(m,2H,-COOCH2(CH2)10CH3),3.48(s,9H,-N(CH3)3),2.32-2.26(m,1H,-NHCH(CH(CH3)
2)-),1.64-1.60(m,2H,-COOCH2CH2(CH2)9CH3),1.38-1.22(m,18H,-COOCH2CH2(CH2)9CH3),1.0-
5(dd,6H,-NHCH(CH(CH3)2)-),0.85(t,3H,-COOCH2(CH2)10CH3)。
(1.18g,3.0mmol,95.6%)。H NMR(500MHz,CDCl3),δ(ppm):7.26(s,1H,-NH-),4.74-4.70(m,1H,-SCH2CH2CH-),4.16(t,2H,J=6.5Hz,-OCH2CH2(CH2)9CH3),4.07(s,2H,-COCH2Cl),2.56-
2.51(m,2H,-SCH2CH2CH-),2.24-2.17(m,1H,-SCH2CHHCH-),2.11(s,3H,-SCH3),2.08-2.03(m,1H,-SCH2CHHCH-),1.68-1.63(m,2H,-OCH2CH2(CH2)9CH3),1.39-1.20(m,18H,-OCH2CH2(CH2)9CH3),0.85(t,3H,J=6.5Hz,-OCH2CH2(CH2)9CH3)。
1
(0.49g,1.1mmol,42.7%)。H NMR(500MHz,CDCl3),δ(ppm):9.40(d,1H,J=6.0Hz,-NH-),4.
64-4.56(m,1H,-SCH2CH2CH-),4.55-4.52(m,1H,-NHCH-),4.34-4.31(m,2H,-COCH2Cl),3.45(s,9H,-N(CH3)3),2.64(t,2H,-SCH2CH2CH-),1.63-1.60(m,2H,-OCH2CH2(CH2)9CH3),1.29-1.2
5(m,18H,-OCH2CH2(CH2)9CH3),0.87(t,3H,J=6.5Hz,-OCH2CH2(CH2)9CH3)。
酰基甘氨酸月桂醇酯(3.11g,9.7mmol,52.7%)。H NMR(500MHz,CDCl3),δ(ppm):7.08(s,1H,-NHCOCH2Cl),4.18(t,2H,J=6.5Hz,-COOCH2(CH2)10CH3),4.11(s,2H,-NHCOCH2Cl),4.09(d,
2H,J=5.0Hz,-NHCH2COO-),1.66(m,2H,-COOCH2CH2(CH2)9CH3),1.33-1.26(m,18H,-COOCH2CH2
13
(CH2)9CH3),0.88(t,3H,J=7.0Hz,-COOCH2(CH2)10CH3). C NMR(125MHz,CDCl3),δ(ppm):169.
2,166.1(2C,-NHCH2COO-,-NHCOCH2Cl),65.9(1C,-COOCH2(CH2)10CH3),42.3,41.5(2C,-NHCOCH2Cl,-NHCH2COO-),31.8,29.61,29.60,29.5,29.4,29.3,29.128.4,25.7,22.6(10C,-COOCH
2(CH2)10CH3),14.1(1C,-CH3)。
1
H NMR(500MHz,CDCl3),δ(ppm):9.98(d,1H,-NH-),4.85(s,2H,-COCH2N(CH3)3),4.51(s,1H,-OCOCH2CH-),4.09(s,4H,2-OCH2CH2(CH2)9CH3),3.49(s,9H,-N(CH3)3),2.98(s,2H,-OCOCH2CH-),1.64-1.58(m,4H,2-OCH2CH2(CH2)9CH3),1.29-1.26(m,36H,2-OCH2CH2(CH2)9CH3),0.88(s,6H,2-OCH2CH2(CH2)9CH3)。