丙酸睾酮作为构建精液异常动物模型的工具药的用途

摘要

本发明公开了丙酸睾酮作为构建精液异常动物模型的工具药的用途。本发明通过动物实验发现，体外注射丙酸睾丸酮可有效抑制实验动物的精子发生并降低精子的质量及活性，停止注射丙酸睾丸酮后，实验动物的精液常规(精子数量、质量及活性)均不能恢复，说明该过程是不可逆转的。实验结果表明，丙酸睾酮能作为构建精液异常动物模型的工具药，用以构建精液异常动物模型。

权利要求

1.丙酸睾酮作为构建精液异常动物模型的工具药的用途。

2.按照权利要求1所述的用途，其特征在于，包括：向怀孕的雌鼠颈背部皮下注射丙酸睾丸酮，每天注射1次，连续注射2-5天；获取子代成年雄鼠，即得精液异常动物模型。

3.按照权利要求2所述的用途，其特征在于：向怀孕16天的雌鼠给予颈背部皮下注射丙酸睾丸酮2.5mg，每天注射1次，连续注射3天；获取子代成年雄鼠，即得精液异常动物模型。

4.按照权利要求1-3任何一项所述的用途，其特征在于：所述的精液异常包括：精子数量、质量或活性相比于正常的精液有明显下降。

说明书

丙酸睾酮作为构建精液异常动物模型的工具药的用途

技术领域

[0001] 本发明涉及丙酸睾酮的一种新用途，尤其涉及丙酸睾酮作为构建精液异常动物模型的工具药的用途，属于丙酸睾酮的医药用途领域。

背景技术

[0002] 睾酮，又称睾丸素、睾丸酮或睾甾酮，是一种类固醇荷尔蒙，由男性的睾丸或女性的卵巢分泌，肾上腺亦分泌少量睾酮。它是主要的男性性激素及同化激素。不论是男性或女性，它对健康及有着重要的影响，包括增强性欲、力量、免疫功能、对抗骨质疏松症等功效。睾酮主要包括环戊丙酸睾酮、庚酸睾酮、乙炔睾酮、癸酸乙酸睾酮、甲基睾酮、苯乙酸睾酮、丙酸睾酮和睾酮环丁酯等种类。

[0003] 引起男子不育症的原因很多，精液异常便是最常见的原因。为了验证临床各种治疗药物的药效，需要构造精液异常的动物模型。

[0004] C F Weinbauer等报道给动物注射睾酮环丁酯能够有效抑制精子的发生，但该过程是可恢复性的，停药后精液常规恢复正常(CF Weinbauer et al.Testosterone-induced inhibiton of spermatogenesis is more closely related to suppression of FSH than to testicular androgen levels in the cynomolgus monkey model(Macaca fascicularis).Journal of Endocrinology(2001)168，25-38.)。崔毓桂等报道体外注射庚酸睾酮能够使男性成为无精子症者或严重少精子症者，但停止注射庚酸睾酮后，受试者能100％恢复精子的产生能力(崔毓桂.男性激素避孕的研究和应用.国际生殖健康/计划生育杂志.2008年7月第27卷第4期)。

[0005] 现有的研究表明睾酮中的庚酸睾酮和睾酮环丁酯虽可抑制精子发生，但这个过程是可恢复性的，停药后精液常规恢复正常，因而不能将其用作构建精液异常的动物模型的工具药。

[0006] 迄今为止，尚无构建精液异常动物模型的相关报道。因此，迫切需要一种用于构建精液异常的动物模型的工具药，以验证临床药物的治疗效果。

发明内容

[0007] 本发明主要目的是提供一种用于构造精液异常的动物模型的工具药；

[0008] 本发明主要目的是通过以下技术方案来实现的：

[0009] 本发明通过动物实验发现，体外注射丙酸睾丸酮可有效抑制实验动物的精子发生及降低精子的质量或活性，停止注射丙酸睾丸酮后，实验动物的精液常规(精子数量、质量及活性)均不能恢复，说明该过程是不可逆转的。

[0010] 本发明中所述的精液异常包括：精子数量、质量或活性相比于正常的精液有明显下降。

[0011] 实验结果表明，丙酸睾酮能作为构建精液异常动物模型的工具药，用以构建稳定的精液异常动物模型。

[0012] 作为参考，所述的精液异常动物模型的构建包括：向怀孕的雌鼠体外注射丙酸睾丸酮，每天注射1次，连续注射2-5天；获取子代成年雄鼠，即得精液异常动物模型。

[0013] 更优选的，将怀孕16天的雌鼠给予颈背部皮下注射丙酸睾丸酮2.5mg，每天注射1次，连续注射3天；获取子代成年雄鼠，即得精液异常动物模型。

[0014] 本发明的一个构建稳定的精液异常动物模型的整体技术方案：

[0015] 将孕16天的雌鼠随机分为A组和B组；A组的雌鼠给予颈背部皮下注射丙酸睾丸酮2.5mg，连续注射3天；B组的雌鼠给予颈背部皮下注射中性茶油2.5mg，连续注射3天；观察两组的产仔情况，A组产下的雄鼠为模型组，B组产下的雄鼠为对照组。分别饲养两组产下的雄鼠，待其生长至成年为实验对象。对两组实验对象的精液常规进行分析或观察，实验结果发现：相比于对照组实验对象，模型组实验对象的精子密度、精子活率、a级运动、直线速度、直线运动精子活率均有明显下降；模型组实验对象的睾丸形态与对照组实验对象相比无明显变化。

[0016] 上述结果表明，用丙酸睾丸酮注射怀孕的雌鼠，所得到的成年子代雄鼠精液质量出现异常或下降，且精液质量异常或下降的现象稳定、持续的显现，符合精液异常动物模型的各项要求。

附图说明

[0017] 图1模型组雄性大鼠与对照组雄性大鼠睾丸形态学观察；ABC为模型组睾丸形态，分别在10×，20×，40×光镜下观察；DEF为对照组睾丸形态，分别在10×，20×，40×光镜下观察。

具体实施方式

[0018] 下面结合具体实施例来进一步描述本发明，本发明的优点和特点将会随着描述而更为清楚。但这些实施例仅是范例性的，并不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本发明的保护范围内。

[0019] 实验例

[0020] 1、实验材料

[0021] 1.1实验动物

[0022] Wistar大鼠，雌性10只，体重(250±20)g，雄性5只，体重(300±20)g，购自黑龙江中医药大学动物实验中心。

[0023] 1.2药物与试剂

[0024] 丙酸睾丸酮(购自天津金耀氨基酸有限公司)；吐温80(天津博迪化工有限公司)；山羊抗鼠P450c17抗体，(美国SAN2TA CRUZ公司)；辣根酶标记兔抗羊IgG(北京博奥森生物技术有限公司)。

[0025] 1.3主要仪器

[0026] 组织切片机，上海徕卡仪器设备公司产品；普通光学显微镜(CK2Z型)，日本OLYM2PUS公司产品；电子精密天平(L Ibror AEL2200型)，日本Shimadzu产品。

[0027] 2、实验方法

[0028] 2.1模型的建立

[0029] 将雌雄大鼠按2∶1合笼，阴道涂片查找精子，找到精子则视为孕0天，对达到孕16天的雌鼠给予颈背部皮下注射丙酸睾丸酮2.5mg或等剂量的中性茶油对照。连续注射3天，观察产仔情况，最后取所产下的雄鼠，生长至成年则为实验对象。

[0030] 2.2动物分组

[0031] 从注射丙酸睾丸酮者所生子代雄鼠中随机选出10只为模型组，从注射中性茶油者所生雄鼠中随机取10只为对照组。

[0032] 2.3标本采集

[0033] 模型组与对照组大鼠长至成年后，禁食水12h，乙醚麻醉，眶静脉丛取血，室温放置30分后，以10000r/min离心20min，分离血清，-70℃保存待测。断颈处死，取一侧睾丸、附睾称重，放入-70℃冻存，另一侧睾丸放入Bouin氏液中固定，附睾尾剪碎用以评估精子质量。

[0034] 2.4观察指标及检测方法

[0035] 2.4.1精子质量评估

[0036] 取一侧附睾尾用眼科小剪剪碎，用3mlPBS液稀释(无钙离子和镁离子的PBS液)，使精子自由扩散，37℃孵育30min，用计算机辅助精子分析系统观察精子密度、精子活率、运动质量等。

[0037] 2.4.2睾丸组织学切片

[0038] 睾丸放入Bouin氏液中固定16h以上，睾丸组织脱水，透明，浸蜡，包埋，切片厚度为0.7mm，HE染色，在×10、×20、×40光镜下观察睾丸组织形态学变化。

[0039] 2.4.3统计学方法

[0040] 所有数据均运用SPSS 13.0统计软件进行分析，采用两样本等方差t检验，以P＜0.05为有统计学意义。

[0041] 3实验结果

[0042] 3.1精子质量评估

[0043] 模型组的精子密度、精子活率、精子a级运动、精子直线运动速度以及直线运动精子活力均较对照组显著降低，有统计学意义。见表1。

[0044] 表1PNA雄性大鼠与对照组精子质量分析(n＝10， )

[0045]

[0046] 注：与对照组相比a P＜0.01

[0047] 3.2睾丸形态学观察

[0048] 模型组雄性大鼠与对照组雄性大鼠睾丸组织结构层次清晰，生精上皮结构完整，各级生精细胞排列有序，生精小管管腔为圆形，从基膜向管腔方向依次为精原细胞、精母细胞、精子细胞，管腔内均可见到精子，生精小管间的结缔组织较少，间质中可见间质细胞，模型组生精小管未见管径缩小、上皮变薄或实性生精小管。