一种查耳酮衍生物及其制备方法和应用

摘要

一种查耳酮衍生物及其制备方法和应用。涉及查耳酮，提供一种查耳酮衍生物，其为黄色油状液体，化学名为3，3′-二烯丙基-4，4′-二羟基查耳酮，分子量为320.1。利用克莱森重排反应，可方便、快速地制备出一种查耳酮衍生物，制备方法简单，所用原料价格价廉，可广泛应用于工业生产中。3，3′-二烯丙基-4，4′-二羟基查耳酮具有与4，4′-二羟基查耳酮相似的结构特征，但其抗肿瘤活性与4，4′-二羟基查耳酮相比明显的提高。可显著地抑制肿瘤细胞的生长，可在制备抗肿瘤药物上具有广泛的应用。

权利要求

1.一种查耳酮衍生物，其特征在于其化学名为3,3'-二烯丙基-4,4'-二羟基查耳酮，分子量为320.1，结构式为：

2.如权利要求1所述的一种查耳酮衍生物的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

1）氮气保护下，将4,4'-二羟基查耳酮和无水碳酸钾加入到有机溶剂中得溶液A；将烯丙基溴加入有机溶剂中得溶液B，再将溶液B加入溶液A中进行反应，反应结束即得混合溶液；

2）将步骤1）所得混合溶液过滤，滤液减压浓缩，将浓缩的剩余物进行硅胶柱层析分离，即得中间产物（2E）-1，3-二（4-烯丙氧基）苯基-1-氧代-丙烯；

3）将步骤2）所得的（2E）-1，3-二（4-烯丙氧基）苯基-1-氧代-丙烯进行重排反应，将反应产物进行柱层析分离，即得3,3'-二烯丙基-4,4'-二羟基查耳酮。

3.如权利要求2所述的一种查耳酮衍生物的制备方法，其特征在于在步骤1）中，所述有机溶剂为二甲基甲酰胺或丙酮。

4.如权利要求2所述的一种查耳酮衍生物的制备方法，其特征在于在步骤1）中，所述溶液A中4,4'-二羟基查耳酮的摩尔浓度为0.01～0.10mmol/L，无水碳酸钾的摩尔浓度为

0.04～0.40mmol/L，所述溶液B中烯丙基溴的摩尔浓度为0.04～0.40mmol/L。

5.如权利要求2所述的一种查耳酮衍生物的制备方法，其特征在于在步骤1）中，所述反应的条件：温度为20～28℃，时间为16～20h，搅拌速率为50～100rpm。

6.如权利要求2所述的一种查耳酮衍生物的制备方法，其特征在于在步骤2）中，所述硅胶柱层析的硅胶为200～400目。

7.如权利要求2所述的一种查耳酮衍生物的制备方法，其特征在于在步骤3）中，所述重排反应的条件为：温度160～200℃，时间4～6h。

8.如权利要求1所述的一种查耳酮衍生物在制备抗肿瘤药物中的应用，所述肿瘤为鼻咽癌、人纤维肉瘤、人宫颈癌、人肝癌。

说明书

一种查耳酮衍生物及其制备方法和应用

技术领域

[0001] 本发明涉及一种化合物，特别涉及一种查耳酮衍生物及其制备方法和应用。

背景技术

[0002] 4，4′-二羟基查耳酮的化学结构如下：

[0003]

[0004] 4，4′-二羟基查耳酮是查耳酮类化合物的一种常见形式，Hideo Ohashi等(1、Hideo Ohashi，Yoshimi Ido，Takanori Imai，et al.Phytochemistry(1988)27：3993-3994)首次在日本扁柏中被分离出4，4′-二羟基查耳酮。

[0005] 近年来的文献报道它具有抗炎、抑制肿瘤细胞增长的活性，例如在研究4，4′-二羟基查耳酮对二甲苯诱导的小鼠耳水肿的作用时，Xue-Wu Zhang等(2、Xue-Wu Zhang，Dong-Hai Zhao，Ying-Chun Quan，et al.Med Chem Res(2010)19：403-412)发现4，4′-二羟基查耳酮具有一定的抗炎活性，同时，4，4′-二羟基查耳酮也具有抑制肿瘤细胞增长的活性(3、Mohammad Shawkat ALI，Arjun H. BANSKOTA，Yasuhiro TEZUKA，et al.Biol.Pharm.Bull(2001)24：525-528)。

发明内容

[0006] 本发明的第一目的在于提供一种查耳酮衍生物。

[0007] 本发明的第二目的在于提供一种查耳酮衍生物的制备方法。

[0008] 本发明的第三目的在于提供一种查耳酮衍生物在制备抗肿瘤药物中的应用。

[0009] 所述一种查耳酮衍生物的化学名为3，3′-二烯丙基-4，4′-二羟基查耳酮，分子量为320.1，结构式为：

[0010]

[0011] 所述查耳酮衍生物为黄色油状液体。

[0012] 所述一种查耳酮衍生物的制备方法包括以下步骤：

[0013] 1)氮气保护下，将4，4′-二羟基查耳酮和无水碳酸钾加入到有机溶剂中得溶液A；将烯丙基溴加入有机溶剂中得溶液B，再将溶液B加入溶液A中进行反应，反应结束即得混合溶液；

[0014] 2)将步骤1)所得混合溶液过滤，滤液减压浓缩，将浓缩的剩余物进行硅胶柱层析分离，即得中间产物(2E)-1，3-二(4-烯丙氧基)苯基-1-氧代-丙烯；

[0015] 3)将步骤2所得的(2E)-1，3-二(4-烯丙氧基)苯基-1-氧代-丙烯进行重排反应，将反应产物进行柱层析分离，即得3，3′-二烯丙基-4，4′-二羟基查耳酮。

[0016] 在步骤1)中，所述有机溶剂可为二甲基甲酰胺或丙酮等，所述溶液A中4，4′-二羟基查耳酮的摩尔浓度可为0.01～0.10mmol/L，无水碳酸钾的摩尔浓度可为0.04～0.40mmol/L，所述溶液B中烯丙基溴的摩尔浓度可为0.04～0.40mmol/L；所述反应的条件：温度可为20～28℃，时间可为16～20h，搅拌速率可为50～100rpm。

[0017] 在步骤2)中，所述硅胶柱层析的硅胶可为200～400目。

[0018] 在步骤3)中，所述重排反应的条件：温度可为160～200℃，时间可为4～6h。

[0019] 本发明利用克莱森重排反应，方便、快速地制备出一种查耳酮衍生物，制备方法简单，所用原料价格价廉，可广泛应用于工业生产中。本发明中的3，3′-二烯丙基-4，4′-二羟基查耳酮具有与4，4′-二羟基查耳酮相似的结构特征，但其抗肿瘤活性与4，
4′-二羟基查耳酮相比明显的提高。可显著地抑制鼻咽癌CNE2细胞、人宫颈癌细HeLa细胞、人纤维肉瘤HT1080细胞和人肝癌Bel-7402细胞等的生长，可在制备抗肿瘤药物上具有广泛的应用。

附图说明

[0020] 图1为4，4′-二羟基查耳酮和3，3′-二烯丙基-4，4′-二羟基查耳酮的对鼻咽癌CNE2细胞抑制活性对比图。在图1中，横坐标为药物浓度(μmol/L)，纵坐标为抑制率(％)，其中a为4，4′-二羟基查耳酮，b为3，3′-二烯丙基-4，4′-二羟基查耳酮。

[0021] 图2为4，4′-二羟基查耳酮和3，3′-二烯丙基-4，4′-二羟基查耳酮的抗人纤维肉瘤HT 1080细胞增殖活性对比图。在图2中，横坐标为药物浓度(μmol/L)，纵坐标为抑制率(％)，其中a为4，4′-二羟基查耳酮，b为3，3′-二烯丙基-4，4′-二羟基查耳酮。

[0022] 图3为4，4′-二羟基查耳酮和3，3′-二烯丙基-4，4′-二羟基查耳酮的抗人宫颈癌HeLa细胞增殖活性对比图。在图3中，横坐标为药物浓度(μmol/L)，纵坐标为抑制率(％)，其中a为4，4′-二羟基查耳酮，b为3，3′-二烯丙基-4，4′-二羟基查耳酮。

[0023] 图4为4，4′-二羟基查耳酮和3，3′-二烯丙基-4，4′-二羟基查耳酮的抗人肝癌Bel-7402细胞增殖活性对比图。在图4中，横坐标为药物浓度(μmol/L)，纵坐标为抑制率(％)，其中a为4，4′-二羟基查耳酮，b为3，3′-二烯丙基-4，4′-二羟基查耳酮。

具体实施方式

[0024] 实施例1

[0025] 1)在氮气保护下，将4，4′-二羟基查耳酮104mg和无水碳酸钾240mg加入到7mL基本上无水的丙酮中，搅拌0.5h得淡黄色浑浊液；

[0026] 2)将7mL含有210mg烯丙基溴的无水丙酮溶液慢慢滴加至上述反应液，0.5h加完，氮气保护下搅拌过夜。

[0027] 3)过滤除去不溶物，减压除去滤液，将浓缩剩余物用400目硅胶进行柱层析分离，V(正己烷)∶V(乙酸乙酯)＝7∶3作为洗脱剂，得到中间产物(2E)-1，3-二(4-烯丙氧基)苯基-1-氧代-丙烯119mg，黄色粘稠油状物，产率85.5％。

[0028] 4)将该中间产物装入圆底烧瓶，200℃下重排，空气冷凝回流，硅胶薄层板监测反应，5h后监测不到原料点，停止反应。圆底烧瓶冷却至室温后，将瓶底残留物用400目硅胶进行柱层析分离，V(石油醚)∶V(乙酸乙酯)＝3∶1做洗脱剂，得到目标产物3，3′-二烯丙基-4，4′-二羟基查耳酮66mg，黄色油状液体，产率55.4％。

[0029] 4，4′-二羟基查耳酮购买自百灵威科技公司。1H-NMR，13C-NMR由Bruker av400超导核磁共振仪上测定，以TMS为内标在氘代有机溶剂中测得。质谱系使用Applied Biosystems 3200QTRAP LC/MS/MS System四极杆质谱仪测得。红外在红外吸收光谱仪Nicolet Avatar 360上测得。酶标仪使用Bio-Rad公司的产品。以下给出测试结果：

[0030] 3，3′-二烯丙基-4，4′-二羟基查耳酮的波谱数据为：IR(film)：3265(br，OH)，-13078，2924，1641，1597，1564，502，1452，1342，1250，1119，981，916，816，658，633cm .1H NMR(DMSO-d6)：δ3.26(d，J＝6.6Hz，2H)，3.29(d，J＝7.6Hz，2H)，4.96(dd，J＝16.0Hz，
2.2Hz，2H)，5.02(dd，J＝8.3Hz，2.2Hz，2H)，5.94(m，2H)，6.80(d，J＝8.3Hz，1H)，6.86(d，J ＝ 8.6Hz，1H)，7.49(dd，J ＝ 8.3Hz，2.2Hz，1H)，7.51(d，J ＝ 2.0Hz，1H)，7.55(d，J ＝
16.9H，1H)，7.59(d，J＝15.4Hz，1H)，7.80(d，J＝2.2Hz，1H)，7.86(dd，J＝8.5Hz，2.2Hz，
1H)，9.97(s，1H)，10.30(s，1H).13C NMR(DMSO-d6)：33.68，33.75，114.58，115.25，115.44，
115.67，118.31，125.92，126.35，126.66，128.73，128.86，129.37，130.60，130.62，136.62，-
136.73，143.21，157.56，159.64，187.00.MS-ESI，m/z 319.1[M-H]。

[0031] 所制得的产物为一种查耳酮衍生物，化学名为3，3′-二烯丙基-4，4′-二羟基查耳酮，分子量为320.1，结构式为：

[0032]

[0033] 实施例2

[0034] 本发明对3，3′-二烯丙基-4，4′-二羟基查耳酮的抗肿瘤活性进行了研究，发现具有明显的抗肿瘤活性。所测试的肿瘤细胞株包括鼻咽癌CNE2细胞、人纤维肉瘤HT1080细胞、人宫颈癌HeLa细胞和人肝癌Bel-7402细胞。

[0035] 取对数生长期的肿瘤细胞制成单细胞悬液，按每孔1×104个细胞接种于3个96孔板中，置于37℃、含5％CO2饱和湿度的细胞培养箱中培养24h，待细胞贴壁生长融合至80％时，分别加入终浓度为6.25、12.5、25、50、100、200μmol/L的2-烯丙基-5-[(E)-2-(3-烯丙基-4-羟基苯基)乙烯基]苯-1，3-二酚，以不含2-烯丙基-5-[(E)-2-(3-烯丙基-4-羟基苯基)乙烯基]苯-1，3-二酚培养基的细胞作为阴性对照，为空白孔调零。细胞放置于37℃，含1％O2、5％CO2和95％N2的饱和湿度培养箱中，持续培养48h。再在酶标仪475nm处测定各孔的吸光值(A)。按以下公式计算抑制率：抑制率(％)＝[1-(实验组平均吸光值-调零组平均吸光值)]/(对照组平均吸光值-调零组平均吸光值)×100％。

[0036] 1)3，3′-二烯丙基-4，4′-二羟基查耳酮对鼻咽癌CNE2细胞的抑制作用[0037] 实验结果显示：3，3′-二烯丙基-4，4′-二羟基查耳酮在不同浓度下对鼻咽癌CNE2细胞的增殖均具有比4，4′-二羟基查耳酮强的抑制作用，且呈明显的浓度依赖性(参见图1)。

[0038] 2)3，3′-二烯丙基-4，4′-二羟基查耳酮对人纤维肉瘤HT 1080细胞的抑制作用

[0039] 从活性对比图可以看出，在低浓度作用时(≤50μmol/L)，3，3′-二烯丙基-4，4′-二羟基查耳酮对人纤维肉瘤HT 1080细胞无明显的抑制活性；在高浓度作用时(≥100μmol/L)，3，3′-二烯丙基-4，4′-二羟基查耳酮对抗人纤维肉瘤HT 1080细胞具有明显的抑制作用，且表现出比4，4′-二羟基查耳酮更强的活性(参见图2)。

[0040] 3)3，3′-二烯丙基-4，4′-二羟基查耳酮对人宫颈癌HeLa细胞和人肝癌Bel-7402细胞的抑制作用

[0041] 从活性对比图中可以看出，在不同浓度下，3，3′-二烯丙基-4，4′-二羟基查耳酮表现出比4，4′-二羟基查耳酮更强的抑制人宫颈癌HeLa细胞和人肝癌Bel-7402细胞增殖的活性，而且显示出明显的浓度依赖性(参见图3和4)。