本发明公开了一种复方氨基酸(8)维生素(11)胶囊的质量检测方法，该质量检测方法主要包括性状、鉴别、检查、含量测定，其中的性状为：本品为胶囊剂，内容物为黄色至橘红色的粉末或颗粒；检查包括干燥失重检查，含量测定是照高效液相色谱法对胶囊制剂中氨基酸和维生素C、烟酰胺、维生素B1、维生素B6，以及维生素B2，泛酸钙，叶酸和维生素A、维生素D2、维生素E及5-羟基邻氨苯甲酸的含量测定。本发明科学合理、准确度高、重现性好，能全面有效地控制复方氨基酸(8)维生素(11)胶囊的质量，从而确保了该制剂的临床疗效。
1.一种复方氨基酸维生素胶囊的检测方法，其特征在于：所述复方氨基酸维生素胶囊由8种人体必需氨基酸和11种维生素组成；所述的检测方法主要包括性状、鉴别、检查和含量测定，其中性状为：胶囊剂，内容物为黄色至橘红色的粉末或颗粒；鉴别：包括对维生素B1和维生素 B2的鉴别；检查：包括干燥失重检查；含量测定：照高效液相色谱法对胶囊制剂中氨基酸和维生素C、烟酰胺、维生素B1、维生素B6，以及维生素B2，泛酸钙，叶酸和维生素A、维生素D2、维生素E及5-羟基邻氨苯甲酸的含量测定；所述含量测定包括以下步骤：氨基酸 取装量差异项下的复方氨基酸维生素胶囊内容物，混匀，研细，精密称取适量，用水溶解并稀释一定浓度，滤过，取续滤液作为供试品溶液，用适当的氨基酸分析仪或高效液相色谱仪分离测定；另取相应的氨基酸对照品，制成相应浓度的对照品溶液，同法测定；按外标法以峰面积计算各氨基酸的含量； 维生素C、烟酰胺、维生素B1、维生素B6 照中国药典2010年版二部附录V D高效液相色谱法测定；
色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，0.04%的戊烷磺酸钠溶液为流动相B，其中戊烷磺酸钠溶液含0.4%的冰醋酸，按下表中的规定进行梯度洗脱；流速1.0ml/min，检测波长为275nm，柱温25℃；理论板数按维生素C峰计算应不低于2000；
测定法 取装量差异项下的复方氨基酸维生素胶囊内容物，研细，精密称取相当于1粒的量，置100ml量瓶中，加入0.01mol/L盐酸溶液80ml，其中盐酸溶液含0.1%的偏磷酸，超声处理30分钟，放冷，稀释至刻度，摇匀，滤过；精密量取续滤液10μl注入液相色谱仪，记录色谱图；另取维生素C、维生素B1、维生素B6与烟酰胺对照品适量，精密称定，用
0.01mol/L盐酸溶液溶解，其中盐酸溶液含0.1%的偏磷酸，并定量稀释制成每1ml中分别含0.2mg、0.05mg、0.025mg与0.02mg的混合溶液，作为对照品溶液，同法测定；按外标法以峰面积计算，即得；
维生素B2 照中国药典2010年版二部附录V D高效液相色谱法测定；
色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以13∶87的乙腈-0.04%的戊烷磺酸钠溶液为流动相，其中戊烷磺酸钠溶液含0.4%的冰醋酸；流速
1.0ml/min，检测波长为267nm，柱温25℃；理论板数按维生素B2峰计算应不低于2000；
测定法 避光操作；取装量差异项下的复方氨基酸维生素胶囊内容物，研细，精密称取相当于1粒的量，置100ml量瓶中，加入0.01mol/L盐酸溶液80ml，其中盐酸溶液含0.1%的偏磷酸，超声处理10分钟，置水浴中加热30分钟，并时时振摇，放冷，稀释至刻度，滤过；精密量取续滤液10μl注入液相色谱仪，记录色谱图；另取维生素B2对照品适量，精密称定，用0.01mol/L盐酸溶液水浴加热使溶解，其中盐酸溶液含0.1%的偏磷酸，放冷，并定量稀释制成每1ml中含0.03mg的溶液，作为对照品溶液，同法测定；按外标法以峰面积计算，即得；
泛酸钙 照中国药典2010年版二部附录V D高效液相色谱法测定；
色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A, 体积分数为0.1%的磷酸溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；流速1.0ml/min，检测波长为210nm，柱温为25℃；理论板数按泛酸钙峰计算应不低于5000；
测定法 取装量差异项下的复方氨基酸维生素胶囊内容物，研细，精密称取相当于泛酸钙12.5mg的量，置50ml量瓶中，加入体积分数为0.1%的磷酸溶液40ml，超声处理20分钟，放冷，稀释至刻度，摇匀，滤过；精密量取续滤液10μl注入液相色谱仪，记录色谱图；另取泛酸钙对照品适量，精密称定，用体积分数为0.1%的磷酸溶液溶解，并定量稀释制成每
1ml中含0.25mg的溶液，作为对照品溶液，同法测定；按外标法以峰面积计算，即得；
叶酸 照中国药典2010年版二部附录V D高效液相色谱法测定；
色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A,0.05mol/L磷酸二氢钾溶液为流动相B，其中磷酸二氢钾溶液用磷酸调pH至3.0±0.2，按下表中的规定进行梯度洗脱；流速1.0ml/min，检测波长为280nm，柱温为35℃，理论板数按叶酸峰计算应不低于5000；
测定法 避光操作；取装量差异项下的复方氨基酸维生素胶囊内容物，研细，精密称取相当于叶酸0.5mg的量，置25ml量瓶中，加入0.2%碳酸钠溶液20ml，振摇，使分散均匀，放置30分钟，超声处理30分钟，放冷，稀释至刻度，摇匀，滤过；精密量取续滤液10μl注入液相色谱仪，记录色谱图；另取叶酸对照品10mg，精密称定，置50ml量瓶中，加入0.2%碳酸钠溶液10ml使溶解，用水稀释至刻度，作为对照品浓配液；精密量取对照品浓配液1.0ml，置
10ml量瓶中，用水稀释至刻度，制成每1ml中含0.02mg的溶液，作为对照品溶液，同法测定；
维生素A、维生素D2、维生素E 照中国药典2010年版二部附录V D高效液相色谱法测定；
色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以98:2的甲醇-水为流动相；流速为0.6ml/min，检测波长为265nm，柱温为25℃；理论板数分别按维生素A、维生素D2、维生素E峰计算应不低于2000；
测定法 避光操作；取装量差异项下的复方氨基酸维生素胶囊内容物，研细，精密称取相当于维生素A 20000IU、维生素D2 2000IU、维生素E 10.0mg的量，置100ml具塞锥形瓶中，精密加入25ml正己烷，称定重量，置冰浴中超声处理30分钟，取出，再称定重量，用正己烷补足减失重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10ml，用氮气吹干，残渣用异丙醇溶解并定容至10ml，摇匀，滤过，精密量取续滤液10μl注入液相色谱仪，记录色谱图；另取维生素A醋酸酯、维生素D2与维生素E对照品适量，精密称定，用异丙醇溶解并定量稀释制成每1ml中分别含0.3mg、2μg与0.5mg的混合溶液，作为对照品溶液，同法测定；按外标法以峰面积计算，即得；
5-羟基邻氨苯甲酸 照中国药典2010年版二部附录V D高效液相色谱法测定；
色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A,0.05mol/L磷酸二氢钾溶液为流动相B，其中的磷酸二氢钾溶液含0.04%戊烷磺酸钠，按下表中的规定进行梯度洗脱；流速1.0ml/min，检测波长为240nm，柱温为25℃；理论板数按
测定法 取装量差异项下的复方氨基酸维生素胶囊内容物，研细，精密称取相当于
5-羟基邻氨苯甲酸0.5mg的量，置25ml量瓶中，加入0.01mol/L盐酸溶液20ml，超声处理
30分钟，放冷，稀释至刻度，摇匀，滤过；精密量取续滤液10μl注入液相色谱仪，记录色谱图；另取5-羟基邻氨苯甲酸对照品适量，精密称定，用0.01mol/L盐酸溶液使溶解，并定量稀释制成每1ml中含0.02mg的溶液，作为对照品溶液，同法测定；按外标法以峰面积计算，即得。
2.根据权利要求1所述的复方氨基酸维生素胶囊的检测方法，其特征在于：所述检测方法中的鉴别包括以下步骤：（1）取复方氨基酸维生素胶囊1粒，加水10ml，使溶解，滤过，滤液加茚三酮试液2ml，水浴加热，溶液显紫色；
（2）在含量测定项下记录的色谱中，各种氨基酸峰的保留时间应与各相应对照品的保留时间一致；
（3）在含量测定项下记录的色谱中，各种维生素峰的保留时间应与各相应对照品的保留时间一致；
（4）取相当于维生素B1 5mg的复方氨基酸维生素胶囊细粉，加氢氧化钠试液2.5ml、铁氰化钾试液0.5ml与正丁醇5ml，强力振摇2分钟，放置使分层，上层醇液显强烈的蓝色荧光，加酸使成酸性，荧光即消失，再加碱使成碱性，荧光又显出；
（5）取相当于维生素B2 1mg的复方氨基酸维生素胶囊细粉，加水100ml，振摇，溶液在透射光下观察显淡黄绿色并有黄绿色荧光，加矿酸或碱溶液，荧光即消失。
3.根据权利要求1所述的复方氨基酸维生素胶囊的检测方法，其特征在于：所述检测方法中的检查包括：（1）干燥失重：取复方氨基酸维生素胶囊10粒，倾出内容物，混合均匀后，取1g，在
（2）其他：应符合中国药典2010年版二部附录Ⅰ E胶囊剂项下有关的各项规定。
4.根据权利要求1所述的复方氨基酸维生素胶囊的检测方法，其特征在于：所述的复方氨基酸维生素胶囊是由L-亮氨酸 18.3g、L-异亮氨酸 5.9g、L-盐酸赖氨酸 25g、L-色氨酸5g、DL-蛋氨酸18.4g、L-缬氨酸 6.7g、L-苏氨酸4.2g、L-苯丙氨酸5g、维生素A 200万IU、维生素D2 20万IU、维生素B1 5g、维生素B2 3g、烟酰胺 2g、维生素B6 2.5g、叶酸 0.2g、泛酸钙5g、维生素B12 1mg、维生素C 20g、维生素E1g、5-羟基邻氨苯甲酸盐酸盐
5.根据权利要求4所述的复方氨基酸维生素胶囊的检测方法，其特征在于：所述的复方氨基酸维生素胶囊含各种氨基酸及维生素C、维生素B1、维生素B2、维生素B6、烟酰胺、叶酸、维生素A、维生素D2、维生素E均应为标示量的70.0%～130.0%；含泛酸钙、5-羟基邻氨苯甲酸盐酸盐以5-羟基邻氨苯甲酸计应为标示量的80.0%～120.0%。
6.根据权利要求1-4中任一项所述的复方氨基酸维生素胶囊的检测方法，其特征在于：所述的复方氨基酸维生素胶囊是由L-亮氨酸 18.3g、L-异亮氨酸 5.9g、L-盐酸赖氨酸 25g、L-色氨酸5g、DL-蛋氨酸18.4g、L-缬氨酸 6.7g、L-苏氨酸4.2g、L-苯丙氨酸5g、维生素A 200万IU、维生素D2 20万IU、维生素B1 5g、维生素B2 3g、烟酰胺 2g、维生素B6
2.5g、叶酸 0.2g、泛酸钙5g、维生素B12 1mg、维生素C 20g、维生素E1g、5-羟基邻氨苯甲酸盐酸盐0.2g，制成1000粒；其检测方法主要包括性状、鉴别、检查、含量测定，其中：【性状】本品为胶囊剂，内容物为黄色至橘红色的粉末或颗粒；
【鉴别】（1）取本品1粒，加水10ml，使溶解，滤过，滤液加茚三酮试液2ml，水浴加热，溶液显紫色；
（2）在含量测定项下记录的色谱中，各种氨基酸峰的保留时间应与各相应对照品的保留时间一致；
（3）在含量测定项下记录的色谱中，各种维生素峰的保留时间应与各相应对照品的保留时间一致；
（4）取相当于维生素B1 5mg的本品细粉，加氢氧化钠试液2.5ml、铁氰化钾试液0.5ml与正丁醇5ml，强力振摇2分钟，放置使分层，上层醇液显强烈的蓝色荧光，加酸使成酸性，荧光即消失，再加碱使成碱性，荧光又显出；
（5）取相当于维生素B2 1mg的本品细粉，加水100ml，振摇，溶液在透射光下观察显淡黄绿色并有黄绿色荧光，加矿酸或碱溶液，荧光即消失；
【检查】（1）干燥失重：取本品10粒，倾出内容物，混合均匀后，取1g，在105℃干燥1小时，减失重量不得过4%；
（2）其他：应符合中国药典2010年版二部附录Ⅰ E胶囊剂项下有关的各项规定；
【含量测定】氨基酸 取装量差异项下的本品内容物，混匀，研细，精密称取适量，用水溶解并稀释一定浓度，滤过，取续滤液作为供试品溶液，用适当的氨基酸分析仪或高效液相色谱仪分离测定；另取相应的氨基酸对照品，制成相应浓度的对照品溶液，同法测定；按外标法以峰面积计算各氨基酸的含量；
维生素C、烟酰胺、维生素B1、维生素B6 照中国药典2010年版二部附录V D高效液相色谱法测定；
色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，0.04%的戊烷磺酸钠溶液为流动相B，其中戊烷磺酸钠溶液含0.4%的冰醋酸，按下表中的规定进行梯度洗脱；流速1.0ml/min，检测波长为275nm，柱温25℃；理论板数按维生素C峰计算应不低于2000；
测定法 取装量差异项下的本品内容物，研细，精密称取相当于1粒的量，置100ml量瓶中，加入0.01mol/L盐酸溶液80ml，其中盐酸溶液含0.1%的偏磷酸，超声处理30分钟，放冷，稀释至刻度，摇匀，滤过；精密量取续滤液10μl注入液相色谱仪，记录色谱图；另取维生素C、维生素B1、维生素B6与烟酰胺对照品适量，精密称定，用0.01mol/L盐酸溶液溶解，其中盐酸溶液含0.1%的偏磷酸，并定量稀释制成每1ml中分别含0.2mg、0.05mg、0.025mg与0.02mg的混合溶液，作为对照品溶液，同法测定；按外标法以峰面积计算，即得；
维生素B2 照中国药典2010年版二部附录V D高效液相色谱法测定；
色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以13∶87的乙腈-0.04%的戊烷磺酸钠溶液为流动相，其中戊烷磺酸钠溶液含0.4%的冰醋酸；流速
1.0ml/min，检测波长为267nm，柱温25℃；理论板数按维生素B2峰计算应不低于2000；
测定法 避光操作；取装量差异项下的本品内容物，研细，精密称取相当于1粒的量，置100ml量瓶中，加入0.01mol/L盐酸溶液80ml，其中盐酸溶液含0.1%的偏磷酸，超声处理10分钟，置水浴中加热30分钟，并时时振摇，放冷，稀释至刻度，滤过；精密量取续滤液
10μl注入液相色谱仪，记录色谱图；另取维生素B2对照品适量，精密称定，用0.01mol/L盐酸溶液水浴加热使溶解，其中盐酸溶液含0.1%的偏磷酸，放冷，并定量稀释制成每1ml中含
0.03mg的溶液，作为对照品溶液，同法测定；按外标法以峰面积计算，即得；
泛酸钙 照中国药典2010年版二部附录V D高效液相色谱法测定；
色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A, 体积分数为0.1%的磷酸溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；流速1.0ml/min，检测波长为210nm，柱温为25℃；理论板数按泛酸钙峰计算应不低于5000；
测定法 取装量差异项下的本品内容物，研细，精密称取相当于泛酸钙12.5mg的量，置50ml量瓶中，加入体积分数为0.1%的磷酸溶液40ml，超声处理20分钟，放冷，稀释至刻度，摇匀，滤过；精密量取续滤液10μl注入液相色谱仪，记录色谱图；另取泛酸钙对照品适量，精密称定，用体积分数为0.1%的磷酸溶液溶解，并定量稀释制成每1ml中含0.25mg的溶液，作为对照品溶液，同法测定；按外标法以峰面积计算，即得；
叶酸 照中国药典2010年版二部附录V D高效液相色谱法测定；
色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A,0.05mol/L磷酸二氢钾溶液为流动相B，其中磷酸二氢钾溶液用磷酸调pH至3.0±0.2，按下表中的规定进行梯度洗脱；流速1.0ml/min，检测波长为280nm，柱温为35℃，理论板数按叶酸峰计算应不低于5000；
测定法 避光操作；取装量差异项下的本品内容物，研细，精密称取相当于叶酸0.5mg的量，置25ml量瓶中，加入0.2%碳酸钠溶液20ml，振摇，使分散均匀，放置30分钟，超声处理30分钟，放冷，稀释至刻度，摇匀，滤过；精密量取续滤液10μl注入液相色谱仪，记录色谱图；另取叶酸对照品10mg，精密称定，置50ml量瓶中，加入0.2%碳酸钠溶液10ml使溶解，用水稀释至刻度，作为对照品浓配液；精密量取对照品浓配液1.0ml，置10ml量瓶中，用水稀释至刻度，制成每1ml中含0.02mg的溶液，作为对照品溶液，同法测定；按外标法以峰面积计算，即得；
维生素A、维生素D2、维生素E 照中国药典2010年版二部附录V D高效液相色谱法测定；
色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以98:2的甲醇-水为流动相；流速为0.6ml/min，检测波长为265nm，柱温为25℃；理论板数分别按维生素A、维生素D2、维生素E峰计算应不低于2000；
测定法 避光操作；取装量差异项下的本品内容物，研细，精密称取相当于维生素A
20000IU、维生素D2 2000IU、维生素E 10.0mg的量，置100ml具塞锥形瓶中，精密加入25ml正己烷，称定重量，置冰浴中超声处理30分钟，取出，再称定重量，用正己烷补足减失重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10ml，用氮气吹干，残渣用异丙醇溶解并定容至10ml，摇匀，滤过，精密量取续滤液10μl注入液相色谱仪，记录色谱图；另取维生素A醋酸酯、维生素D2与维生素E对照品适量，精密称定，用异丙醇溶解并定量稀释制成每1ml中分别含0.3mg、2μg与0.5mg的混合溶液，作为对照品溶液，同法测定；按外标法以峰面积计算，即得；
5-羟基邻氨苯甲酸 照中国药典2010年版二部附录V D高效液相色谱法测定；
色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A,0.05mol/L磷酸二氢钾溶液为流动相B，其中的磷酸二氢钾溶液含0.04%戊烷磺酸钠，按下表中的规定进行梯度洗脱；流速1.0ml/min，检测波长为240nm，柱温为25℃；理论板数按
测定法 取装量差异项下的本品内容物，研细，精密称取相当于5-羟基邻氨苯甲酸
0.5mg的量，置25ml量瓶中，加入0.01mol/L盐酸溶液20ml，超声处理30分钟，放冷，稀释至刻度，摇匀，滤过；精密量取续滤液10μl注入液相色谱仪，记录色谱图；另取5-羟基邻氨苯甲酸对照品适量，精密称定，用0.01mol/L盐酸溶液使溶解，并定量稀释制成每1ml中含0.02mg的溶液，作为对照品溶液，同法测定；按外标法以峰面积计算，即得。
复方氨基酸（8）维生素（11）胶囊的质量检测方法
技术领域
[0001] 本发明涉及药品的质量检测方法，尤其是一种(神奇)复方氨基酸(8)维生素(11)胶囊的质量检测方法，属于中药技术领域。
背景技术
[0002] 肝硬化患者肝细胞受损，蛋白合成能力下降，使血清蛋白，尤其是白蛋白水平明显下降。临床常用经静脉给予血浆白蛋白，虽然能明显提高白蛋白水平，但费用昂贵，且需要消耗大量血浆资源。随着国内口服复合氨基酸的问世使经口补充氨基酸成为可能。复方氨基酸(8)维生素(11)胶囊由8种人体必需氨基酸和11种维生素组成，能增强人体蛋白质的合成，提高机体免疫力。申请人对该药物进行了研究，以期探索如何有效控制该药物的质量，以确保其临床疗效。
发明内容
[0003] 本发明所要解决的技术问题在于提供一种复方氨基酸(8)维生素(11)胶囊的质量检测方法，全面有效地控制复方氨基酸(8)维生素(11)胶囊的质量，从而确保复方氨基酸(8)维生素(11)胶囊的临床疗效。
[0004] 为解决上述技术问题，本发明采用如下的技术方案：复方氨基酸(8)维生素(11)胶囊的质量检测方法。该复方氨基酸(8)维生素(11)胶囊的质量检测方法主要包括性状、鉴别、检查和含量测定，其中性状：本品为胶囊剂，内容物为黄色至橘红色的粉末或颗粒；鉴 别：包括对维生素B1和维生素B2的鉴别；检查：包括干燥失重检查；含量测定：照高效液相色谱法对胶囊制剂中氨基酸和维生素C、烟酰胺、维生素B1、维生素B6，以及维生素B2，泛酸钙，叶酸和维生素A、维生素D2、维生素E及5-羟基邻氨苯甲酸的含量测定。 [0005] 上述的复方氨基酸(8)维生素(11)胶囊的质量检测方法，具体的说，所述质量检测方法中的鉴别包括以下步骤：
[0006] (1)取复方氨基酸(8)维生素(11)胶囊1粒，加水10ml，使溶解，滤过，滤液加茚三酮试液2ml，水浴加热，溶液显紫色；
[0007] (2)在含量测定项下记录的色谱中，各种氨基酸峰的保留时间应与各相应对照品的保留时间一致；
[0008] (3)在含量测定项下记录的色谱中，各种维生素峰的保留时间应与各相应对照品的保留时间一致；
[0009] (4)取相当于维生素B1 5mg的复方氨基酸(8)维生素(11)胶囊细粉，加氢氧化钠试液2.5ml、铁氰化钾试液0.5ml与正丁醇5ml，强力振摇2分钟，放置使分层，上层醇液显强烈的蓝色荧光，加酸使成酸性，荧光即消失，再加碱使成碱性，荧光又显出； [0010] (5)取相当于维生素B2 1mg的复方氨基酸(8)维生素(11)胶囊细粉，加水100ml，振摇，溶液在透射光下观察显淡黄绿色并有黄绿色荧光，加矿酸或碱溶液，荧光即消失。 [0011] 前述的复方氨基酸(8)维生素(11)胶囊的质量检测方法，具体的说，所述质量检测方法中的检查包括：
[0012] (1)干燥失重：取复方氨基酸(8)维生素(11)胶囊10粒，倾出内容物，混合均匀后，取1g，在105℃干燥1小时，减失重量不得过4％；
[0013] (2)其他：应符合中国药典2010年版二部附录I E胶囊剂项下有关的各项规定。 [0014] 前述的复方氨基酸(8)维生素(11)胶囊的质量检测方法，具体的说，所述质量检测方法中的含量测定包括以下步骤：
[0015] 氨基酸取装量差异项下的复方氨基酸(8)维生素(11)胶囊内容物，混匀，研细，精密称取适量，用水溶解并稀释一定浓度，滤过，取续滤液作为供试品溶液，用适当的氨基酸分析仪或高效液相色谱仪分离测定；另取相应的氨基酸对照品，制成相应浓度的对照品溶液，同法测定；按外标法以峰面积计算各氨基酸的含量；
[0016] 维生素C、烟酰胺、维生素B1、维生素B6照中国药典2010年版二部附录V D高效液相色谱法测定；
[0017] 色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，0.04％的戊烷磺酸钠溶液为流动相B，其中戊烷磺酸钠溶液含0.4％的冰醋酸，按下表中的规定进行梯度洗脱；流速1.0ml/min，检测波长为275nm，柱温25℃；理论板数按维生素C峰计算应不低于2000；
[0018]时间(分钟) 流动相A(％) 流动相B(％)
-10～0 4 96
0～8 4 96
9～15 10 90
16～27 13 87
[0019] 测定法 取装量差异项下的复方氨基酸(8)维生素(11)胶囊内容物，研细，精密称取相当于1粒的量，置100ml量瓶中，加入0.01mol/L盐酸溶液80ml，其中盐酸溶液含0.1％的偏磷酸，超声处理30分钟，放冷，稀释至刻度，摇匀，滤过；精密量取续滤液10μl 注入液相色谱仪，记录色谱图；另取维生素C、维生素B1、维生素B6与烟酰胺对照品适量，精密称定，用0.01mol/L盐酸溶液溶解，其中盐酸溶液含0.1％的偏磷酸，并定量稀释制成每
1ml中分别含0.2mg、0.05mg、0.025mg与0.02mg的混合溶液，作为对照品溶液，同法测定；
按外标法以峰面积计算，即得；
[0020] 维生素B2照中国药典2010年版二部附录V D高效液相色谱法测定；
[0021] 色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以13∶87的乙腈-0.04％的戊烷磺酸钠溶液为流动相，其中戊烷磺酸钠溶液含0.4％的冰醋酸；流速1.0ml/min，检测波长为267nm，柱温25℃；理论板数按维生素B2峰计算应不低于2000； [0022] 测定法避光操作；取装量差异项下的复方氨基酸(8)维生素(11)胶囊内容物，研细，精密称取相当于1粒的量，置100ml量瓶中，加入0.01mol/L盐酸溶液80ml，其中盐酸溶液含0.1％的偏磷酸，超声处理10分钟，置水浴中加热30分钟，并时时振摇，放冷，稀释至刻度，滤过；精密量取续滤液10μl注入液相色谱仪，记录色谱图；另取维生素B2对照品适量，精密称定，用0.01mol/L盐酸溶液水浴加热使溶解，其中盐酸溶液含0.1％的偏磷酸，放冷，并定量稀释制成每1ml中含0.03mg的溶液，作为对照品溶液，同法测定；按外标法以峰面积计算，即得；
[0023] 泛酸钙照中国药典2010年版二部附录V D高效液相色谱法测定；
[0024] 色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充 剂；以乙腈为流动相A，体积分数为0.1％的磷酸溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；流速1.0ml/min，检测波长为210nm，柱温为25℃；理论板数按泛酸钙峰计算应不低于5000； [0025]时间(分钟) 流动相A(％) 流动相B(％)
-10～0 3 97
0～22 3 97
23～36 15 85
[0026] 测定法 取装量差异项下的复方氨基酸(8)维生素(11)胶囊内容物，研细，精密称取相当于泛酸钙12.5mg的量，置50ml量瓶中，加入体积分数为0.1％的磷酸溶液40ml，超声处理20分钟，放冷，稀释至刻度，摇匀，滤过；精密量取续滤液10μl注入液相色谱仪，记录色谱图；另取泛酸钙对照品适量，精密称定，用体积分数为0.1％的磷酸溶液溶解，并定量稀释制成每1ml中含0.25mg的溶液，作为对照品溶液，同法测定；按外标法以峰面积计算，即得；
[0027] 叶酸照中国药典2010年版二部附录V D高效液相色谱法测定；
[0028] 色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，0.05mol/L磷酸二氢钾溶液为流动相B，其中磷酸二氢钾溶液用磷酸调pH至3.0±0.2，按下表中的规定进行梯度洗脱；流速1.0ml/min，检测波长为280nm，柱温为35℃，理论板数按叶酸峰计算应不低于5000；
[0029]时间(分钟) 流动相A(％) 流动相B(％)
0～17 9 91
18～25 15 85
26～30 9 91
[0030] 测定法 避光操作；取装量差异项下的复方氨基酸(8)维生素(11)胶囊内容物，研细，精密称取相当于叶酸0.5mg的量，置25ml 量瓶中，加入0.2％碳酸钠溶液20ml，振摇，使分散均匀，放置30分钟，超声处理30分钟，放冷，稀释至刻度，摇匀，滤过；精密量取续滤液10μl注入液相色谱仪，记录色谱图；另取叶酸对照品10mg，精密称定，置50ml量瓶中，加入0.2％碳酸钠溶液10ml使溶解，用水稀释至刻度，作为对照品浓配液；精密量取对照品浓配液1.0ml，置10ml量瓶中，用水稀释至刻度，制成每1ml中含0.02mg的溶液，作为对照品溶液，同法测定；按外标法以峰面积计算，即得；
[0031] 维生素A、维生素D2、维生素E照中国药典2010年版二部附录V D高效液相色谱法测定；
[0032] 色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以98∶2的甲醇-水为流动相；流速为0.6ml/min，检测波长为265nm，柱温为25℃；理论板数分别按维生素A、维生素D2、维生素E峰计算应不低于2000；
[0033] 测定法 避光操作；取装量差异项下的复方氨基酸(8)维生素(11)胶囊内容物，研细，精密称取相当于维生素A 20000IU、维生素D2 2000IU、维生素E 10.0mg的量，置100ml具塞锥形瓶中，精密加入25ml正己烷，称定重量，置冰浴中超声处理30分钟，取出，再称定重量，用正己烷补足减失重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10ml，用氮气吹干，残渣用异丙醇溶解并定容至10ml，摇匀，滤过，精密量取续滤液10μl注入液相色谱仪，记录色谱图；另取维生素A醋酸酯、维生素D2与维生素E对照品适量，精密称定，用异丙醇溶解并定量稀释制成每1ml中分别含0.3mg、2μg与0.5mg的混合溶液，作为对照品溶液，同法测定；
按外标法以峰面积计算，即得；
[0034] 5-羟基邻氨苯甲酸照中国药典2010年版二部附录V D高效液 相色谱法测定； [0035] 色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，0.05mol/L磷酸二氢钾溶液为流动相B，其中的磷酸二氢钾溶液含0.04％戊烷磺酸钠，按下表中的规定进行梯度洗脱；流速1.0ml/min，检测波长为240nm，柱温为25℃；理论板数按5-羟基邻氨苯甲酸峰计算应不低于5000；
[0036]时间(分钟) 流动相A(％) 流动相B(％)
0～10 0 100
10～20 20 80
21～30 0 100
[0037] 测定法 取装量差异项下的复方氨基酸(8)维生素(11)胶囊内容物，研细，精密称取相当于5-羟基邻氨苯甲酸0.5mg的量，置25ml量瓶中，加入0.01mol/L盐酸溶液20ml，超声处理30分钟，放冷，稀释至刻度，摇匀，滤过；精密量取续滤液10μl注入液相色谱仪，记录色谱图；另取5-羟基邻氨苯甲酸对照品适量，精密称定，用0.01mol/L盐酸溶液使溶解，并定量稀释制成每1ml中含0.02mg的溶液，作为对照品溶液，同法测定；按外标法以峰面积计算，即得。
[0038] 前述的复方氨基酸(8)维生素(11)胶囊的质量检测方法，所述的复方氨基酸(8)维生素(11)胶囊是由L-亮氨酸18.3g、L-异亮氨酸5.9g、L-盐酸赖氨酸25g、L-色氨酸5g、DL-蛋氨酸18.4g、L-缬氨酸6.7g、L-苏氨酸4.2g、L-苯丙氨酸5g、维生素A 200万IU、维生素D2 20万IU、维生素B1 5g、维生素B2 3g、烟酰胺2g、维生素B6 2.5g、叶酸0.2g、泛酸钙5g、维生素B12 1mg、维生素C 20g、维生素E 1g、5-羟基邻氨苯甲酸盐酸盐0.2g，制成1000粒。
[0039] 前述的复方氨基酸(8)维生素(11)胶囊的质量检测方法，所述的复方氨基酸(8)维生素(11)胶囊含各种氨基酸及维生素C、维生素B1、维生素B2、维生素B6、烟酰胺、叶酸、维生素A、维生素D2、维生素E均应为标示量的70.0％～130.0％；含泛酸钙、5-羟基邻氨苯甲酸盐酸盐以5-羟基邻氨苯甲酸计应为标示量的80.0％～120.0％。
[0040] 前述的复方氨基酸(8)维生素(11)胶囊的质量检测方法，准确的说，所述的复方氨基酸(8)维生素(11)胶囊是由L-亮氨酸18.3g、L-异亮氨酸5.9g、L-盐酸赖氨酸25g、L-色氨酸5g、DL-蛋氨酸18.4g、L-缬氨酸6.7g、L-苏氨酸4.2g、L-苯丙氨酸5g、维生素A 200万IU、维生素D2 20万IU、维生素B1 5g、维生素B2 3g、烟酰胺2g、维生素B6 2.5g、叶酸0.2g、泛酸钙5g、维生素B121mg、维生素C 20g、维生素E 1g、5-羟基邻氨苯甲酸盐酸盐0.2g，制成1000粒；其质量检测方法主要包括性状、鉴别、检查、含量测定，其中： [0041] 【性状】本品为胶囊剂，内容物为黄色至橘红色的粉末或颗粒；
[0042] 【鉴别】(1)取本品1粒，加水10ml，使溶解，滤过，滤液加茚三酮试液2ml，水浴加热，溶液显紫色；
[0043] (2)在含量测定项下记录的色谱中，各种氨基酸峰的保留时间应与各相应对照品的保留时间一致；
[0044] (3)在含量测定项下记录的色谱中，各种维生素峰的保留时间应与各相应对照品的保留时间一致；
[0045] (4)取相当于维生素B1 5mg的本品细粉，加氢氧化钠试液2.5ml、铁氰化钾试液0.5ml与正丁醇5ml，强力振摇2分钟，放置使分层， 上层醇液显强烈的蓝色荧光，加酸使成酸性，荧光即消失，再加碱使成碱性，荧光又显出；
[0046] (5)取相当于维生素B2 1mg的本品细粉，加水100ml，振摇，溶液在透射光下观察显淡黄绿色并有黄绿色荧光，加矿酸或碱溶液，荧光即消失；
[0047] 【检查】(1)干燥失重：取本品10粒，倾出内容物，混合均匀后，取1g，在105℃干燥1小时，减失重量不得过4％；
[0048] (2)其他：应符合中国药典2010年版二部附录I E胶囊剂项下有关的各项规定； [0049] 【含量测定】氨基酸取装量差异项下的本品内容物，混匀，研细，精密称取适量，用水溶解并稀释一定浓度，滤过，取续滤液作为供试品溶液，用适当的氨基酸分析仪或高效液相色谱仪分离测定；另取相应的氨基酸对照品，制成相应浓度的对照品溶液，同法测定；按外标法以峰面积计算各氨基酸的含量；
[0050] 维生素C、烟酰胺、维生素B1、维生素B6照中国药典2010年版二部附录V D高效液相色谱法测定；
[0051] 色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，0.04％的戊烷磺酸钠溶液为流动相B，其中戊烷磺酸钠溶液含0.4％的冰醋酸，按下表中的规定进行梯度洗脱；流速1.0ml/min，检测波长为275nm，柱温25℃；理论板数按维生素C峰计算应不低于2000；
[0052]时间(分钟) 流动相A(％) 流动相B(％)
-10～0 4 96
0～8 4 96
9～15 10 90
16～27 13 87
[0053] 测定法 取装量差异项下的本品内容物，研细，精密称取相当于1粒的量，置100ml量瓶中，加入0.01mol/L盐酸溶液80ml，其中盐酸溶液含0.1％的偏磷酸，超声处理30分钟，放冷，稀释至刻度，摇匀，滤过；精密量取续滤液10μl注入液相色谱仪，记录色谱图；另取维生素C、维生素B1、维生素B6与烟酰胺对照品适量，精密称定，用0.01mol/L盐酸溶液溶解，其中盐酸溶液含0.1％的偏磷酸，并定量稀释制成每1ml中分别含0.2mg、
0.05mg、0.025mg与0.02mg的混合溶液，作为对照品溶液，同法测定；按外标法以峰面积计算，即得；
[0054] 维生素B2照中国药典2010年版二部附录V D高效液相色谱法测定；
[0055] 色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以13∶87的乙腈-0.04％的戊烷磺酸钠溶液为流动相，其中戊烷磺酸钠溶液含0.4％的冰醋酸；流速1.0ml/min，检测波长为267nm，柱温25℃；理论板数按维生素B2峰计算应不低于2000； [0056] 测定法 避光操作；取装量差异项下的本品内容物，研细，精密称取相当于1粒的量，置100ml量瓶中，加入0.01mol/L盐酸溶液80ml，其中盐酸溶液含0.1％的偏磷酸，超声处理10分钟，置水浴中加热30分钟，并时时振摇，放冷，稀释至刻度，滤过；精密量取续滤液10μl注入液相色谱仪，记录色谱图；另取维生素B2对照品适量，精密称定，用0.01mol/L盐酸溶液水浴加热使溶解，其中盐酸溶液含0.1％的偏磷酸，放冷，并定量稀释制成每1ml中含0.03mg的溶 液，作为对照品溶液，同法测定；按外标法以峰面积计算，即得； [0057] 泛酸钙照中国药典2010年版二部附录V D高效液相色谱法测定；
[0058] 色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，体积分数为0.1％的磷酸溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；流速1.0ml/min，检测波长为210nm，柱温为25℃；理论板数按泛酸钙峰计算应不低于5000； [0059]时间(分钟) 流动相A(％) 流动相B(％)
-10～0 3 97
0～22 3 97
23～36 15 85
[0060] 测定法 取装量差异项下的本品内容物，研细，精密称取相当于泛酸钙12.5mg的量，置50ml量瓶中，加入体积分数为0.1％的磷酸溶液40ml，超声处理20分钟，放冷，稀释至刻度，摇匀，滤过；精密量取续滤液10μl注入液相色谱仪，记录色谱图；另取泛酸钙对照品适量，精密称定，用体积分数为0.1％的磷酸溶液溶解，并定量稀释制成每1ml中含0.25mg的溶液，作为对照品溶液，同法测定；按外标法以峰面积计算，即得； [0061] 叶酸照中国药典2010年版二部附录V D高效液相色谱法测定；
[0062] 色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，0.05mol/L磷酸二氢钾溶液为流动相B，其中磷酸二氢钾溶液用磷酸调pH至3.0±0.2，按下表中的规定进行梯度洗脱；流速1.0ml/min，检测波长为280nm，柱温为35℃，理论板数按叶酸峰计算应不低于5000；
[0063]时间(分钟) 流动相A(％) 流动相B(％)
0～17 9 91
18～25 15 85
26～30 9 91
[0064] 测定法 避光操作；取装量差异项下的本品内容物，研细，精密称取相当于叶酸0.5mg的量，置25ml量瓶中，加入0.2％碳酸钠溶液20ml，振摇，使分散均匀，放置30分钟，超声处理30分钟，放冷，稀释至刻度，摇匀，滤过；精密量取续滤液10μl注入液相色谱仪，记录色谱图；另取叶酸对照品10mg，精密称定，置50ml量瓶中，加入0.2％碳酸钠溶液10ml使溶解，用水稀释至刻度，作为对照品浓配液；精密量取对照品浓配液1.0ml，置10ml量瓶中，用水稀释至刻度，制成每1ml中含0.02mg的溶液，作为对照品溶液，同法测定；按外标法以峰面积计算，即得；
[0065] 维生素A、维生素D2、维生素E照中国药典2010年版二部附录V D高效液相色谱法测定；
[0066] 色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以98∶2的甲醇-水为流动相；流速为0.6ml/min，检测波长为265nm，柱温为25℃；理论板数分别按维生素A、维生素D2、维生素E峰计算应不低于2000；
[0067] 测定法 避光操作；取装量差异项下的本品内容物，研细，精密称取相当于维生素A 20000IU、维生素D2 2000IU、维生素E 10.0mg的量，置100ml具塞锥形瓶中，精密加入25ml正己烷，称定重量，置冰浴中超声处理30分钟，取出，再称定重量，用正己烷补足减失重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10ml，用氮气吹干，残渣用异丙醇溶解并定容至10ml，摇匀，滤过，精密量取续滤液10μl注入液相色谱仪，记录色谱图；另取维生素A醋酸酯、维生素D2与维生 素E对照品适量，精密称定，用异丙醇溶解并定量稀释制成每1ml中分别含0.3mg、2μg与0.5mg的混合溶液，作为对照品溶液，同法测定；按外标法以峰面积计算，即得；
[0068] 5-羟基邻氨苯甲酸照中国药典2010年版二部附录V D高效液相色谱法测定； [0069] 色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，0.05mol/L磷酸二氢钾溶液为流动相B，其中的磷酸二氢钾溶液含0.04％戊烷磺酸钠，按下表中的规定进行梯度洗脱；流速1.0ml/min，检测波长为240nm，柱温为25℃；理论板数按5-羟基邻氨苯甲酸峰计算应不低于5000；
[0070]时间(分钟) 流动相A(％) 流动相B(％)
0～10 0 100
10～20 20 80
21～30 0 100
[0071] 测定法 取装量差异项下的本品内容物，研细，精密称取相当于5-羟基邻氨苯甲酸0.5mg的量，置25ml量瓶中，加入0.01mol/L盐酸溶液20ml，超声处理30分钟，放冷，稀释至刻度，摇匀，滤过；精密量取续滤液10μl注入液相色谱仪，记录色谱图；另取5-羟基邻氨苯甲酸对照品适量，精密称定，用0.01mol/L盐酸溶液使溶解，并定量稀释制成每1ml中含0.02mg的溶液，作为对照品溶液，同法测定；按外标法以峰面积计算，即得。 [0072] 本发明建立了5-羟基邻氨基苯甲酸盐酸盐的含量测定方法。
[0073] 1、仪器与试药
[0074] 仪器：岛津LC-20AT高效液相色谱仪，SIL-20A液相色谱仪全自动进样器，AgilentTC-C18(2)5μm4.6mm×250mm柱号：588925-902， 岛津UV1700紫外分光光度计；赛多利斯CPA225D电子天平(十万分之一)。
[0075] 试剂与试药：5-羟基邻氨苯甲酸(SIGMA-ALDRICH，含量98％，批号：100986585)、复方氨基酸(8)维生素(11)胶囊样品为本公司自制产品。乙腈(色谱纯)，磷酸二氢钾(分析纯)，戊烷磺酸钠(分析纯)。
[0076] 2、色谱条件的选择，
[0077] 采用C18 4.6×250mm色谱柱，经过试验以乙腈(A)和0.05mol/L磷酸二氢钾(含0.04％戊烷磺酸钠)(B)为流动相；梯度洗脱(0.0～10.0分钟，100％B；11.0～20.0分钟，流动相80％B，21.0～30.0分钟，100％B)，流速1.0ml/min，检测波长为240nm，柱温为
25℃，测定效果较好。5-羟基邻氨苯甲酸在200nm附近有最大吸收，为排除其它维生素的干扰，选定240nm为检测波长。
[0078] 3、专属性试验
[0079] 标准制备工艺条件下，制备缺5-羟基邻氨苯甲酸的阴性样品，按上述色谱条件检测，阴性样品未见吸收峰；测定样品中5-羟基邻氨苯甲酸的保留时间，与对照溶液中5-羟基邻氨苯甲酸的保留时间一致。
[0080] 4、系统适用性试验
[0081] 按上述色谱条件测定制剂中5-羟基邻氨苯甲酸的含量，5-羟基邻氨苯甲酸分离度、拖尾因子符合色谱要求。将理论板数定为不得低于5000。
[0082] 5、线性关系的考察
[0083] 精密称取5-羟基邻氨苯甲酸对照品10.41mg，置100ml容量瓶中， 用0.01mol/L盐酸溶液使溶解并稀释至刻度，制成0.102018mg/ml的对照品浓配液。分别精密量取上述对照品浓配液各0.5ml、1.0ml、2.0ml、3.0ml、5.0ml置10ml量瓶中，用0.01mol/L盐酸溶液稀释至刻度，分别进样，记录色谱图，以浓度x(mg/ml)为横坐标，峰面积Y(mAU)为纵坐标，作图，得到基本过原点的直线方程，回归方程Y＝2E+07x-18438，相关系数r＝0.9996，以对照品测定所得峰面积代入前述回归方程计算含量，所得结果与真实含量平均偏差小于1％，故可认为标准曲线近似过原点。由此含量测定可采用外标一点法计算(见表1)。 [0084] 表1 5-羟基邻氨苯甲酸线性关系考察
[0085]
[0086] 试验结果表明：5-羟基邻氨苯甲酸在0.0051009mg/ml～0.051009mg/ml范围内有良好的线性关系。
[0087] 检测限和定量限：用0.0051009mg/ml的对照品溶液用0.01mol/L盐酸溶液逐级稀释至信噪比为10∶1和3∶1作为5-羟基邻氨苯甲酸的定量限和检测限，定量限和检测限分别为0.2μg/ml、0.04μg/ml。
[0088] 6、精密度试验
[0089] 精密量取同一5-羟基邻氨苯甲酸对照品溶液10μl，进样6次，记录色谱图，峰面积相对标准偏差(RSD)为0.38％，试验结果表明精密度良好(见表2)。
[0090] 表2 5-羟基邻氨苯甲酸精密度试验结果
[0091]试验次数 1 2 3 4 5 6 平均值 RSD％
峰面积 313012 311537 312061 314060 313692 311163 312583 0.38[0092] [0094] 7、稳定性试验
[0093] 取同一供试品溶液，分别于0h、2h、4h、6h、10h，连续进样5次，峰面积相对标准偏差(RSD)为0.91％。试验结果表明，供试品溶液在8小时内稳定性良好(见表3)。 [0094] 表3 5-羟基邻氨苯甲酸稳定性试验结果
[0095]测定时间 0小时 2小时 4小时 6小时 10小时 平均值 RSD(％)
峰面积 291159 289167 287712 285948 284458 287688.8 0.91[0096] 8、重复性试验
[0097] 取同一批号(20101001)样品6份，每份约0.5g，精密称定，依法处理，进样10μl，记录色谱图，计算5-羟基邻氨苯甲酸含量：平均含量为0.93mg/g，RSD为0.69％；试验结果表明，重复性良好(见表4)。
[0098] 表4 5-羟基邻氨苯甲酸重复性试验结果
[0099]
[0100] 9、加样回收率试验
[0101] 取同一批号(20101002)的样品9份，每份约0.25g，精密称定，置25ml量瓶中，按样品含量与加入对照品的量比例为1∶0.8、1∶1、1∶1.2，精密加入0.051009mg/ml的对照品溶液，按含量测定项下的方法测定，记录色谱图，计算回收率。试验结果表明，回收率良好(见 表5)。
[0102] 表5 5-羟基邻氨苯甲酸加样回收试验结果
[0103]
[0104] 10、耐用性试验
[0105] ①不同品牌的色谱柱对分离度的影响
[0106] 取同一批号的供试品分别用Agilent TC-C18(2)5μm 4.6mm×250mm和Diamonsil C18(2)5μm250×4.6mm的色谱柱进行测定，计算含量，两种仪器测得的含量分为0.91mg/g、0.98mg/g。试验结果表明：不同仪器不同品牌的色谱柱对5-羟基邻氨苯甲酸含量测定无显著差异。
[0107] ②提取时间考察
[0108] 对同一批号(20101002)的样品进行不同提取时间(20、30、45分钟)考察，结果表明，超声30分钟就能提取完全，选30分钟为提取时间(见表6)。
[0109] 表6 提取时间考察结果
[0110]提取时间(min) 5-羟基邻氨苯甲酸(mg/g)
20 0.95
30 0.97
45 0.98
[0111] 11、10个批号含量测定
[0112] 采用本发明的方法测定的10个批号含量测定结果(见表7)。
[0113] 表7 5-羟基邻氨苯甲酸含量测定结果
[0114]
[0115] 以上实验研究结果表明，本发明的方法合理、可行，是控制复方氨基酸(8)维生素(11)胶囊质量较好的方法。
[0116] 本发明的有益效果：与现有技术相比，本发明建立了复方氨基酸(8)维生素(11)胶囊的质量检测方法，对复方氨基酸(8)维生素(11)胶囊的性状、鉴别、检查和含量测定进行了研究和筛选，所采用的质量检测方法科学合理，准确度高，重现性好，能全面有效地控制复方氨基酸(8)维生素(11)胶囊的质量，达到了有效控制药物质量的目的，从而确保了该制剂的临床疗效。
[0117] 下面结合具体实施方式对本发明作进一步的说明。
具体实施方式
[0118] 实施例。复方氨基酸(8)维生素(11)胶囊的质量检测方法。复方氨基酸(8)维生素(11)胶囊(以下简称本品)是由L-亮氨酸18.3g、L-异亮氨酸5.9g、L-盐酸赖氨酸25g、L-色氨酸5g、DL-蛋氨酸18.4g、L-缬氨酸6.7g、L-苏氨酸4.2g、L-苯丙氨酸5g、维生素A 200万IU、维生素D2 20万IU、维生素B1 5g、维生素B2 3g、烟酰胺2g、维生素B6 2.5g、叶酸0.2g、泛酸钙5g、维生素B12 1mg、维生素C 20g、维生素E 1g、5-羟基邻氨苯甲酸盐酸盐0.2g，制成1000粒。本品含各种氨基酸及维生素C(C6H8O6)、维生素B1(C12H17CLN4OS·HCL)、维生素B2(C17H20N4O6)、维生素B6(C8H11NO3·HCl)、烟酰胺(C6H6N2O)、叶酸(C19H19N7O6)、维生素A、维生素D2(C28H44O)、维生素E(C31H52O3)均应为标示量的70.0％～130.0％；含泛酸钙(C18H32CaN2O10)、5-羟基邻氨苯甲酸盐酸盐以5-羟基邻氨苯甲酸(C7H7NO3)计应为标示量的
80.0％～120.0％。
[0119] 【性状】本品为胶囊剂，内容物为黄色至橘红色的粉末或颗粒。
[0120] 【鉴别】(1)取本品1粒，加水10ml，使溶解，滤过，滤液加茚三酮试液2ml，水浴加热，溶液显紫色。
[0121] (2)在含量测定项下记录的色谱中，各种氨基酸峰的保留时间应与各相应对照品的保留时间一致。
[0122] (3)在含量测定项下记录的色谱中，各种维生素峰的保留时间应与各相应对照品的保留时间一致。
[0123] (4)取本品的细粉适量(约相当于维生素B1 5mg)，加氢氧化钠试液2.5ml、铁氰化钾试液0.5ml与正丁醇5ml，强力振摇2分钟，放置使分层，上层醇液显强烈的蓝色荧光，加酸使成酸性，荧光即消 失，再加碱使成碱性，荧光又显出。
[0124] (5)取本品的细粉适量(约相当于维生素B2 1mg)，加水100ml，振摇，溶液在透射光下观察显淡黄绿色并有黄绿色荧光，加矿酸或碱溶液，荧光即消失。
[0125] 【检查】(1)干燥失重：取本品10粒，倾出内容物，混合均匀后，取约1g，在105℃干燥1小时，减失重量不得过4％。(中国药典2010年版二部附录VIII L)。
[0126] (2)其他：应符合胶囊剂项下有关的各项规定(中国药典2010年版二部附录I E)。
[0127] 【含量测定】氨基酸取装量差异项下的本品内容物，混匀，研细，精密称取适量，用水溶解并稀释一定浓度，滤过，取续滤液作为供试品溶液，用适当的氨基酸分析仪或高效液相色谱仪分离测定；另取相应的氨基酸对照品，制成相应浓度的对照品溶液，同法测定；按外标法以峰面积计算各氨基酸的含量。
[0128] 维生素C、烟酰胺、维生素B1、维生素B6照高效液相色谱法(中国药典2010年版二部附录V D)测定；
[0129] 色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，0.04％的戊烷磺酸钠溶液(含0.4％的冰醋酸)为流动相B，，按下表中的规定进行梯度洗脱；流速1.0ml/min，检测波长为275nm，柱温25℃；理论板数按维生素C峰计算应不低于2000；
[0130]时间(分钟) 流动相A(％) 流动相B(％)
-10～0 4 96
0～8 4 96
9～15 10 90
16～27 13 87
[0131] 测定法取装量差异项下的本品内容物，研细，精密称取适量(约相当于1粒的量)置100ml量瓶中，加入0.01mol/L盐酸溶液(含0.1％的偏磷酸)约80ml，超声处理30分钟，放冷，稀释至刻度，摇匀，滤过；精密量取续滤液10μl注入液相色谱仪，记录色谱图；另取维生素C、维生素B1、维生素B6与烟酰胺对照品适量，精密称定，用0.01mol/L盐酸溶液(含0.1％的偏磷酸)溶解并定量稀释制成每1ml中分别含0.2mg、0.05mg、0.025mg与0.02mg的混合溶液，作为对照品溶液(临时新制)，同法测定；按外标法以峰面积计算，即得。 [0132] 维生素B2照高效液相色谱法(中国药典2010年版二部附录V D)测定。 [0133] 色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.04％的戊烷磺酸钠溶液(含0.4％的冰醋酸)(13∶87)为流动相，流速1.0ml/min，检测波长为
267nm，柱温25℃；理论板数按维生素B2峰计算应不低于2000；
[0134] 测定法避光操作；取装量差异项下的本品内容物，研细，精密称取适量(约相当于1粒的量)置100ml量瓶中，加入0.01mol/L盐酸溶液(含0.1％的偏磷酸)约80ml，超声处理10分钟，置水浴中加热30分钟，并时时振摇，放冷，稀释至刻度，滤过；精密量取续滤液
10μl注入液相色谱仪，记录色谱图；另取维生素B2对照品适量，精密称定，用0.01mol/L盐酸溶液(含0.1％的偏磷酸)水浴加热使溶解，放冷，并定量稀释制成每1ml中约含0.03mg的溶液，作为对照品溶液(临时新制)，同法测定。按外标法以峰面积计算，即得。 [0135] 泛酸钙照高效液相色谱法(中国药典2010年版二部附录V D)测定。
[0136] 色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，0.1％的磷酸溶液(v/v)为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；流速1.0ml/min，检测波长为210nm，柱温为25℃；理论板数按泛酸钙峰计算应不低于5000；
[0137]时间(分钟) 流动相A(％) 流动相B(％)
-10～0 3 97
0～22 3 97
23～36 15 85
[0138] 测定法 取装量差异项下的本品内容物，研细，精密称取适量(约相当于泛酸钙12.5mg的量)置50ml量瓶中，加入0.1％的磷酸溶液(v/v)约40ml，超声处理20分钟，放冷，稀释至刻度，摇匀，滤过；精密量取续滤液10μl注入液相色谱仪，记录色谱图；另取泛酸钙对照品适量，精密称定，用0.1％的磷酸溶液(v/v)溶解，并定量稀释制成每1ml中约含
0.25mg的溶液，作为对照品溶液，同法测定；按外标法以峰面积计算，即得。 [0139] 叶酸照高效液相色谱法(中国药典2010年版二部附录V D)测定。
[0140] 色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，0.05mol/L磷酸二氢钾溶液(用磷酸调pH至3.0±0.2)为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；流速1.0ml/min，检测波长为280nm，柱温为35℃，理论板数按叶酸峰计算应不低于5000。
[0141]时间(分钟) 流动相A(％) 流动相B(％)
0～17 9 91
18～25 15 85
26～30 9 91
[0142] 测定法 避光操作；取装量差异项下的本品内容物，研细，精密称取适量(约相当于叶酸0.5mg的量)置25ml量瓶中，加入0.2％碳酸钠溶液约20ml，振摇，使分散均匀，放
