海藻酸钠组合物及其应用

摘要

本发明涉及海藻酸钠以及海藻酸钠添加钙盐或者锌盐组合物的止血材料在创面止血中的应用。本发明的海藻酸钠组合物包括50-100重量份的海藻酸钠以及0.5-50重量份的钙盐。本发明还提供了由海藻酸钠组合物和至少一种药学可接受的溶剂、载体和/或赋形剂制成的止血材料。本发明的海藻酸钠组合物和止血材料具有止血迅速、生物相容性好、可生物降解吸收性、处理简单、无需清创和价格低廉等特点，适合用于创伤创面止血，尤其是战伤创面止血。

权利要求

1.一种可直接用于创伤止血的快速止血材料，其特征为，为黏度范围在500～

730MPas、M/G值为0.4的海藻酸钠粉末；所述海藻酸钠粉末为纳米级平均直径为40-80nm的超细海藻酸钠粉末，是经气雾化制粉技术制成的。

2.一种用于各种创面快速止血组合物，其特征为，为以下组合方式中的一种：方式一：海藻酸钠和钙盐；

方式二：海藻酸钠和锌盐；

方式三：海藻酸钠、钙盐和锌盐；

所述海藻酸钠为黏度范围在500～730MPas、M/G值为0.4、纳米级平均直径为40-80nm的超细海藻酸钠粉末，是经气雾化制粉技术制成的。

3.根据权利要求2所述组合物，其特征为，所述方式一的组合物中，海藻酸钠的用量为

90-99重量份，钙盐的用量为1-10重量份；钙盐为选自氯化钙、葡萄糖酸钙、硫酸钙和磷酸钙中的至少一种或两种的混合。

4.根据权利要求3所述组合物，其特征为，海藻酸钠的用量为99重量份，钙盐的用量为

1重量份；钙盐为氯化钙。

5.根据权利要求2所述组合物，其特征为，所述方式二的组合物中，海藻酸钠的用量为

99-99.99重量份，锌盐的用量为0.01-1重量份；锌盐为选自氯化锌、硫酸锌、碳酸锌中的一种或几种的混合。

6.根据权利要求2所述组合物，其特征为：所述方式三的组合物中，海藻酸钠的用量为

99重量份，钙盐的用量为0.99重量份，锌盐0.01份重量份；锌盐为氯化锌。

7.根据权利要求2所述组合物，其特征为，所述方式三的组合物中，海藻酸钠的用量为

89-99重量份，钙盐的用量为0.9-10重量份，锌盐的用量为0.01-1重量份。

8.根据权利要求7所述组合物，其特征为，海藻酸钠的用量为99重量份，钙盐的用量为

0.9-0.99重量份，锌盐的用量为0.01-0.1重量份。

9.根据权利要求2至8任一所述组合物，其特征为，所述海藻酸钠对应分子量范围为

90,000-120,000。

10.权利要求1中所述海藻酸钠粉末或权利要求2-9任意一项所述的海藻酸钠组合物在制备止血材料中的应用，该止血材料为粉末剂、喷雾剂或止血敷料。

11.一种制备海藻酸钠组合物粉末的方法，包括以下步骤：将权利要求2中所述海藻酸钠和钙盐和/或锌盐粉末混合，通过搅拌均匀后，Co60照射20min灭菌，得到海藻酸钠组合物粉末。

12.一种海藻酸钠组合物止血敷料的制备方法，将权利要求2中所述的海藻酸钠配制成10%溶液，钙盐和/或锌盐配制成20%溶液，将海藻酸钠溶液和钙盐和/或锌盐溶液按设计比例混合，加入适量2-10%甘油，所得溶液去除水分，冷冻干燥后得到海藻酸钠组合物粉末。

说明书

海藻酸钠组合物及其应用

技术领域：

[0001] 本发明涉及海藻酸钠直接作为止血材料的新应用，以及添加钙盐和/或锌盐的海藻酸钠组合物、含有该海藻酸钠组合物的止血材料以及它们在创面止血中的应用。背景技术：

[0002] 战伤救治侧重于战场前沿和后送途中进行早期治疗，延长“黄金小时”救治时限，降低失血阵亡率和伤死率。目前，战伤创面采取的主要救治措施为物理压迫止血(如纱布、止血带等)，但压迫止血的缺点在于若止血带过紧易造成组织缺血坏死，挤压用力过猛可造成肋骨骨折；而且当创伤伤员发生重要脏器损伤(心、脑、肺、肝、脾及颈部脊髓损伤)出血时，物理压迫会造成呼吸或循环功能障碍。因此，对于战伤创面，往往需要快速止血、而且尽可能应用简单以便减少现场急救所需的医疗资源和后勤支援需求。

[0003] 在众多的创面止血物质中，海藻酸是一种非常有潜力的新型止血材料的候选物质。海藻酸是从天然海藻内提取的一种天然线型多糖，广泛存在于褐藻之中，是由1，4糖苷键键合的β-D-甘露糖醛酸(M单元)和α-L-古罗糖醛酸(G单元)残基组成的天然高分子共聚物，在海藻酸大分子长链中可能有-M-M-M-(M段)、-G-G-G-(G段)、-G-M-G-M-(交替段)、-G-G-M-G-(混合段)等片段。在生物特性方面，海藻酸盐无毒，具有可生物降解吸收性，并具有很高的生物活性，非常适合用作生物可吸收材料。

[0004] 海藻酸盐作为止血敷料的成分之一应用广泛。例如，20世纪80年代，英国Courtaulds公司将海藻酸纤维制成的医用纱布应用于伤口止血，此后一系列以海藻酸纤维为主的新型医用敷料应运而生。其机理为：纱布与创面接触时，纱布中海藻酸钙纤维中的钙离子与血液中的钠离子发生离子交换，水不溶性的海藻酸钙慢慢地转换成的海藻酸钠，从而使血液中大量的水份进入纤维内部而形成一种水凝胶体，纱布通过吸水达到止血的目的。该材料的止血作用依赖于离子交换形成水凝胶的速度。目前，以此机理制造的止血材料被广泛应用，例如上述的止血纱布、止血粉以及止血胶条等。此外还有通过海藻酸钙与壳聚糖等其他多糖类物质共混复合形成的止血微球粉、复合敷料等。

[0005] 然而如上所述，由于现有的以海藻酸钠([C5H7O4COONa]n)为主要成分止血材料的止血作用受水凝胶的形成速度所限。而直接本发明使用海藻酸钠时不涉及到海藻酸钠与海藻酸钙之间的转化，使用海藻酸钠用于止血的机理与其他发明并不相同。

[0006] 例如，现有技术中，已有专利(申请号20061024198.2)使用海藻酸钠作为反应成分之一，其终产物为海藻酸钙微球，用于促进轻微创伤时伤口的愈合，但是其成分组要主要为壳聚糖、海藻酸钠与氯化钙，其中海藻酸钠只是作为前体物质，用于与氯化钙合成交联水凝胶微球海藻酸钙，然后再与壳聚糖复合形成的止血微球粉，其药用成分为海藻酸钙，与本发明直接使用海藻酸钠仍然是有本质的区别的，止血时间也同样要受水凝胶形成的限制，因而止血机理并不相同，止血速度也不理想。发明内容：

[0007] 本发明的目的之一在于提供一种可直接用于创伤止血的快速止血材料。

[0008] 该可直接用于创伤止血的快速止血材料，为黏度范围在500～730MPas、M/G值为0.4的海藻酸钠粉末。

[0009] 所述海藻酸钠粉末为纳米级超细海藻酸钠粉末，是经气雾化制粉技术制成的。

[0010] 本发明另一目的在于提供一种广泛用于各种创面能直接发挥止血作用且止血迅速的海藻酸钠组合物。

[0011] 该快速止血组合物包括海藻酸钠、钙盐和/或锌盐。其中：

[0012] 所述海藻酸钠的用量为90-99重量份，钙盐的用量为1-10重量份；优选海藻酸钠的用量为99重量份，钙盐的用量为1重量份；钙盐为选自氯化钙、葡萄糖酸钙、硫酸钙和磷酸钙中的至少一种或两种的混合，优选氯化钙。

[0013] 或者，海藻酸钠的用量为99-99.99重量份，锌盐的用量为0.01-1重量份；优选：海藻酸钠的用量为99重量份，钙盐的用量为0.99重量份，锌盐0.01份重量份；锌盐为选自氯化锌、硫酸锌、碳酸锌中的一种或几种的混合，优选氯化锌。

[0014] 或者，海藻酸钠的用量为89-99重量份，钙盐的用量为0.9-10重量份，锌盐的用量为0.01-1重量份；优选海藻酸钠的用量为99重量份，钙盐的用量为0.9-0.99重量份，锌盐的用量为0.01-0.1重量份。

[0015] 以上所述组合物中，所述海藻酸钠的黏度范围为15-800MPas，优选100～730MPas，更 优选500～730MPas；对 应分 子量 范围 为70,000-150,000，优 选为
80,000-130,000，更优选90,000-120,000；所述海藻酸钠的M/G值为0.4。其中海藻酸钠铅含量小于0.0005％，砷含量小于0.0002％，重金属含量小于0.001％。

[0016] 所述海藻酸钠粉末或纳米级超细海藻酸钠粉末、或海藻酸钠组合物在制备止血材料中的应用也属于本发明内容，该止血材料为粉末剂、喷雾剂或止血敷料。

[0017] 本发明还涉及一种制备海藻酸钠组合物粉末的方法，包括以下步骤：将海藻酸钠和钙盐和/或锌盐粉末混合，通过搅拌均匀后，Co60照射20min灭菌，得到海藻酸钠组合物粉末。

[0018] 本发明还涉及一种海藻酸钠组合物止血敷料的制备方法，将海藻酸钠配制成10％溶液，钙盐和/或锌盐配制成20％溶液，将海藻酸钠溶液和钙盐和/或锌盐溶液按设计比例(如以99∶1的体积比)混合，加入适量2-10％甘油，所得溶液去除水分，冷冻干燥后得到海藻酸钠组合物粉末。

[0019] 在另一方面，本发明还提供了纳米级超细海藻酸钠粉末或海藻酸钠组合物粉末作为止血材料的应用形式，该止血材料包括本发明的纳米级超细海藻酸钠粉末或海藻酸钠组合物(称为止血活性组分)以及可能的和必要的药学可接受的溶剂、载体和/或赋形剂，一种使用方式为该止血材料可以是粉末剂、纳米级超细粉末或喷雾剂的形式直接应用于创面上，另一种使用方式利用该止血活性组分制成止血敷料(例如结合使用在止血纱布)等形式覆盖创面。上述各种形式的止血材料可根据制药工业领域所公知的方法进行制备。

[0020] 本发明的纳米级超细海藻酸钠粉末、海藻酸钠组合物和止血材料可用于创面止血。可根据创面的具体情况(诸如创面大小、部位、出血情况等因素)结合本领域已知的给2
药方式或治疗方式来使用。通常，可以3～10g本发明的止血活性组分/cm 创面来制备止血材料。

[0021] 本发明的海藻酸钠组合物和止血材料具有以下的优点：

[0022] 1.本发明的海藻酸钠组合物的组成不同于现有的海藻酸或海藻酸盐止血材料，现有的止血材料多为海藻酸钙，而本发明为海藻酸钠或者是海藻酸钠与钙盐的物理混合物，在使用中海藻酸钠直接发挥作用而不涉及离子交换，而且制备工艺简单。

[0023] 2.当与创面血液接触时，现有的止血材料需要海藻酸钙与血液发生离子交换，形成水凝胶后才能发生止血作用，实际上其机理仍然主要是加压止血。而本发明中海藻酸钠和钙离子对创面分别起止血作用，一方面海藻酸钠吸水，增加局部血液粘度，并使血小板和红细胞发生聚集，造成血液流速变慢，从而促进凝血块的形成；另一方面，钙离子可激活外源性凝血途径，促进凝血；锌离子可诱导血小板聚集及增强其他诱聚剂的聚集作用，在凝血及止血过程具有一定作用；锌离子对于创口愈合具有促进作用，参与纤维细胞、胶原蛋白等修复细胞的生成，并且可作为多种酶的辅助因子参与组织再生与修复。

[0024] 3.如上所述，现有的止血材料的止血效果取决于海藻酸钙纤维的离子交换速度，因此选择范围窄，且不能广泛应用。而对于本发明的海藻酸钠组合物涉及两方面的止血机制，因此海藻酸钠的选择限制较少，范围很宽且适用于各种创面。

[0025] 4.现有的海藻酸盐止血材料基本上为敷料形式。而本发明的海藻酸钠组合物制成粉末剂、纳米级超细粉末、喷雾剂或凝胶剂的形式通过洒、喷、涂等方式直接应用在创面上。应用的灵活性很高，具有非敷料形式创面无需清创的优点。

[0026] 5.有效成分包埋性，速溶性，渗透性和密封性好，可长期保存，不挥发；生物活性和特殊功能成分在干燥过程中保持原有特性；产品纯度高，分散性好，全吸收。

[0027] 6.本发明的海藻酸钠组合物和止血材料止血迅速、来源广泛、价格低廉、无需清创，适合用于各种创伤以及弥漫性出血创面的止血。

[0028] 本发明药物可有效止血、应用简便、制备工艺简单且成本低廉的止血材料，具有大规模装备部队的可能。附图说明：

[0029] 图1为切变率为10S-1时海藻酸钠溶液的粘度-浓度曲线。

[0030] 图2为切变率为60S-1时海藻酸钠溶液的粘度-浓度曲线。

[0031] 图3为切变率为150S-1时海藻酸钠溶液的粘度-浓度曲线。

[0032] 图4为3种溶液浓度下G7(800Mpas)的流变函数曲线。

[0033] 图5为PRP溶液的光镜照片(放大倍数40×10)。

[0034] 图6为730MPas海藻酸钠+PRP光镜照片(放大倍数40×10)。

[0035] 图7为730MPas海藻酸钠+氯化钙+PRP光镜照片(放大倍数40×10)。

[0036] 图8为红细胞(RBC)光镜照片(放大倍数40×10)。

[0037] 图9为15MPas海藻酸钠+RBC光镜照片(放大倍数40×10)。

[0038] 图10为15MPas海藻酸钠+氯化钙+RBC光镜照片(放大倍数40×10)。

[0039] 图11为气雾化系统设备流程图。具体实施方式：

[0040] 水溶性的海藻酸钠形成海藻酸钙，以海藻酸钙形式而止血，这在止血材料的研究中已为共识。由于海藻酸钠为多分子材料，结构组成复杂多样，组成疏松不定型，因此性质多变。在不同的黏度、M/G值下，海藻酸钠表现出对于止血的不同的特性。仅随意选择直接用于创面难以正确发挥其止血作用。

[0041] 发明人因此而致力于从体外与动物实验不同角度，考虑不同特性的海藻酸钠在止血中存在的差异；并通过细胞实验，显示了海藻酸钠止血机理；通过多种复合手段对应用方式进行深入研究，从而得到本发明海藻酸钠可直接用于创面止血的形式，对海藻酸钠的直接应用从技术上获得了重大突破。

[0042] 以下具体描述本发明的研究成果，应该理解，实际的研究工作要克服很多技术上的难关，包括研究方向的确定，实验方案的设计，数据的筛选、比较与分析，结论的慎重做出等等，下面列出的是经过整理和确证的内容，是为清楚公开本发明的研究成果，断不可作为反向推断其为不具创造性的证据。

[0043] 实验1：海藻酸钠的黏度、浓度与凝血的关系

[0044] 称取黏度分别为15、50、100、300、500、730Mpas、800Mpas(牙科专用)的海藻酸钠(分别对应G1～G7)加入250ml锥形瓶中，加入100ml三蒸水至终浓度(质量浓度)分别为0.01、0.1、1.0、2.0、2.5％，于120MPa下处理2.5小时，然后磁力搅拌溶解，稀释，分别于LBY-N6B型自动血液流变仪上测定各种浓度的海藻酸钠溶液在不同切变率下的黏度。结果参见表1和图1至图3。

[0045] 表1.切变率为10(1/s)时海藻酸钠的黏度变化

[0046]

[0047] 从表1中横向看数据，可以确定随着各个海藻酸钠(海藻酸钠)浓度的增加，对溶液粘度是不断增加的。从图1-3各个海藻酸钠的增加趋势比较可以看出，黏度(Mpas)越高的海藻酸钠，除了个别黏度下的海藻酸钠(G3，G5)外，其余海藻酸钠随着溶液中的浓度越高时，对于溶液粘度的增加也更显著。且数据规律在不同剪切率下基本一致。说明海藻酸钠对溶液增加的粘度值受外界影响较低，从图4看出，图形中的函数关系是非线性的，该流体为非牛顿流体。从图形确定η＞1，该液体为膨胀塑性或剪切增稠流体，因此由于絮凝性强易形成网络结构，可促进凝血。

[0048] 而海藻酸钠在与血液接触时，促进凝血的最大作用之一，即引起创伤部位局部血浆浓度增加，造成血小板与血细胞的聚集，促进凝血级联瀑布反应的发生，使创伤部位的血液流速减缓，利于伤口的凝血块形成。

[0049] 在本发明中使用的海藻酸钠的粘度在应用中其范围一般为15-1000MPas。本发明发现不同黏度的海藻酸钠在不同切变率(10，60，150[1/s])、同等接触时间下，不同黏度的海藻酸钠均对血流粘度有明显影响。高黏度的海藻酸钠对组织渗血模型具有较好的止血效果。由此本发明得出重要实验结果：海藻酸钠的黏度应选择500Mpas＜黏度＜730Mpas。

[0050] 海藻酸钠分子量与黏度直接相关，当黏度确定后，海藻酸钠的分子量基本固定。

[0051] 实验2：海藻酸钠吸水速度和吸液率的影响因素确定

[0052] 吸水性能的好坏对材料的止血效果有重要的影响。为此，本发明研究了吸水速率在海藻酸钠不同黏度和组成差异条件下的变化。针对海藻酸钠，其结构差异可用M/G值显示，M/G值是指海藻酸钠结构中1，4糖苷键键合的β-D-甘露糖醛酸(M单元)和α-L-古罗糖醛酸(G单元)残基的比值。实验根据材料的特点选择漩涡法。实验结果见表2和表3。

[0053] 表2漩涡法吸水速度

[0054]

[0055] 表3漩涡法吸水速度

[0056]

[0057] 实验结果表明，海藻酸钠M/G越小，其吸水速度越快；而黏度为730MPas的海藻酸钠的吸水速度明显快于其他黏度的海藻酸钠，黏度值为800Mpas时，明显溶解最慢，溶解速率与海藻酸钠黏度值之间不称线性关系，为二元抛物线型。

[0058] 另一方面，海藻酸钠M/G越小，表现出其吸液率也越好(吸液率可定义为1g吸水材料在单位时间内吸收的液体体积或重量)。因此，要希望海藻酸钠快速发挥止血功能，应尽可能制备M/G值小的材料，M/G值优选为0.4。另一方面，本实验进一步确证了黏度为730MPas的海藻酸钠具有最快的吸水速度和最优的吸液率。

[0059] 实验3：海藻酸钠以及海藻酸钠与CaCl2混合促进血小板凝聚作用

[0060] 将730MPas海藻酸钠粉末和730MPas海藻酸钠与CaCl2混合粉末(按重量9∶1混合)，分别溶解在生理盐水中制成1％溶液，与人富血小板血浆(PRP)等量混合均匀，涂片，干燥后在光学倒置显微镜下观察血小板聚集情况。结果见图5-7。其中图5为正常PRP照片，其中可见血小板散在地均匀分布在视野中。从图7、图6中可见，海藻酸钠具有促进血小板凝聚作用，而血小板的凝聚是促进凝血机制中级联瀑布反应发生的必要环节之一。在2+
加入Ca 后，血小板的聚集时间缩短，观察2min后出现血小板聚集现象，较单使用海藻酸钠
2+
的血小板聚集时间快了1min。说明加入Ca 后更有利于凝血块的形成。

[0061] 实验4：海藻酸钠以及海藻酸钠与CaCl2混合促进红细胞聚集作用

[0062] 试验为四组，分别为单用海藻酸钠(15Mpas、730Mpas)与海藻酸钠与Ca2+联用2+
(15Mpas、730Mpas)(海藻酸钠与Ca 按重量9∶1混合)，分别溶解在生理盐水中制成1％溶液，与大鼠红细胞(RBC)溶液等量混合均匀，涂片，干燥后在光学倒置显微镜(400N)下观察血小板聚集情况。结果见图8-10。图8为正常RBC照片，其中可见椭圆形红细胞散在地均匀分布在视野中。从图9可见，海藻酸钠可促进溶液中红细胞高度聚集，红细胞可促使全血黏度增加，加快血小板向血管壁运送速度。当加入海藻酸钠后，其含有的大量羧基破换了
2+
其平衡的静电斥力，红细胞聚集后凝血速度加快，起到协同止血的效果。在加入Ca 后，红细胞的聚集时间缩短，镜下观察2min后出现红细胞聚集现象(参见图10)，较单使用海藻酸
2+
钠的红细胞聚集时间快了1min。说明加入Ca 后有利于凝血块的形成。

[0063] 通过以上实验，本发明提供海藻酸钠，是研究了其不同物理特性后的筛选材料，并且，该材料的止血作用通过红细胞与血小板凝聚作用，从细胞水平上确定了其止血作用的机理。

[0064] 实施例1-21：海藻酸钠组合物粉末的制备

[0065] 按照表4的组分配比将海藻酸钠粉末(粒径为60目，除实施例20和21，M/G值为0.4)分别和氯化钙、葡萄糖酸钙或硫酸锌粉末混合，放入研钵中混合均匀。加入无水乙醇浸泡后，然后将产物倾出、用布氏漏斗抽滤、60℃真空干燥后，Co60消毒，由此制成海藻酸钠组合物粉末(粒径为60目)。

[0066] 表4海藻酸钠组合物

[0067]

[0068] 实验5：止血动物实验

[0069] 雄性Wistar大鼠按30mg/Kg腹腔注射3％的戊巴比妥钠进行麻醉，腹股沟部去毛，酒精棉球消毒，剪开股部皮肤，钝性分离股动脉，暴露2-3厘米，在动脉底部放不透水垫布，用动脉夹夹住近心端，用眼科剪将动脉横切约直径的2/3，擦去流出的血，分别撒上实施例1-21中分别用不同黏度海藻酸钠制备的海藻酸钠组合物0.5g，盖上纱布并立即打开动脉夹，按压，观察止血效果并记录止血时间，30秒后停止按压，观察3分钟，以不出血为止血成功，如仍出血，则继续按压，必要时加撒药物，每30秒观察一次，如超过3分钟仍出血，则视为未能止血。实验结果见表5。

[0070] 所有大鼠试验后如果存活，给与伤口缝合处理，并于试验后24小时观察后处死。其中伤口处分级按如下方式：愈合良好：代表没有不良反应的初期愈合；基本愈合：代表切口脂肪液化，有少许分泌物，液体清亮；愈合欠佳，代表缝合针眼处有轻微炎症，如红肿、硬结、血肿；愈合差：是指切口化脓，需切开引流。

[0071] 止血时间的计算从止血药物覆盖创面起至创面停止渗出血液或者纱布的外观不再出现血迹为止。空白对照组的失血量＝各动物实验前体重-各动物失血完毕体重；其他各组的失血量为用分析天平预先精确称量试验组和对照组止血前和止血后止血药物和纱布的重量，按照以下公式计算出血量：出血量＝止血后重量-止血前重量。

[0072] 表5

[0073]止血粉末 止血时间(s) 失血量(g) 术后24h观察 备注
实施例1 152.3 0.0859 基本愈合 n＝5
实施例2 65 0.1161 基本愈合 n＝4
实施例3 45.1 0.0542 基本愈合 n＝6
实施例4 40.7 0.0536 基本愈合 n＝6
实施例5 38.7 0.1456 基本愈合 n＝4
实施例6 212.5 0.4316 基本愈合 n＝5
实施例7 34.2 0.503 基本愈合 n＝6
实施例8 26.3 0.0386 基本愈合 n＝6
实施例9 35.6 0.0816 基本愈合 n＝6
实施例10 33.2 0.0521 基本愈合 n＝6
实施例11 40.2 0.1096 愈合良好 n＝6
实施例12 38.4 0.1165 愈合良好 n＝5
实施例13 37.6 0.0596 愈合良好 n＝6
实施例14 38.7 0.1295 愈合良好 n＝5
实施例15 33.3 0.0353 愈合良好 n＝6
实施例16 30.5 0.0491 愈合良好 n＝6
实施例17 28.3 0.105 愈合良好 n＝6
实施例18 26.1 0.1366 愈合良好 n＝5
实施例19 31.7 0.1176 基本愈合 n＝6
实施例20 86.7 0.1022 基本愈合 n＝6
实施例21 96 0.111 基本愈合 n＝6

[0074] 根据以上实验结果：实施例1-6的止血时间的比较，与前期实验海藻酸钠在水中溶解速率相关性大，溶解速率试验结果显示：溶解速率的快慢排序如下：500-730Mpas的海藻酸钠＞黏度小于500Mpas的海藻酸钠＞黏度大于730Mpas的海藻酸钠，而关于止血试验结果的由快至慢顺序如下：500-730Mpas的海藻酸钠＞黏度小于500Mpas的海藻酸钠＞黏度大于730Mpas的海藻酸钠。

[0075] 实施例5与例7-10比较的是加不加钙离子的区别，结果看出：加钙离子的止血速度优于不加钙离子的。而加入钙离子比例为1％的时候，止血速度优于其它的钙离子加入比例；

[0076] 实施例7-10的结果比较说明加入氯化钙优于加入葡萄糖酸钙的止血速度。这是因为加入的钙比例是按照钙离子计算的，而葡萄糖酸钙的分子量大，加入同等钙离子时其在粉末中所占比例大于同等条件下氯化钙所占的比例，导致海藻酸钠在组合物的量减少，有效成分减少，所以止血速度减慢；

[0077] 实施例5、实施例7-10与例11-14的结果可以看出，加入锌离子的组合物在止血时间上没有显著性的变化。但是在大鼠缝合创口后24小时，创面愈合情况要优于未加锌离子的；

[0078] 实施例5与例15-18结果比较看出，在加入钙离子与锌离子后，止血速度有效加快了。例7与例15是在钙离子添加量基本相同的条件下，加入了锌离子，结果比较说明止血时间相差不大，但是伤口愈合情况优于未加锌离子的组别。

[0079] 实施例19-21的结果比较可以看出，在M/G等于0.4，止血起效快；

[0080] 综上所述，选择加入1％左右的钙离子海藻酸钠组合是最优的止血选择，如果考虑伤口愈合情况，最优选择加入0.01％的锌离子与0.99％的钙离子海藻酸钠组合；在其他参数相同时，最优选择M/G等于0.4的海藻酸钠。

[0081] 实施例22：海藻酸钠止血敷料的制备

[0082] 将黏度为300MPas的海藻酸钠配制成10％的溶液，经过高压处理后备用。将海藻酸钠溶液与20％氯化钙溶液按照10∶1的体积比混合后，加入甘油与赖氨酸。去除多余水分后，冷冻干燥形成止血敷料。

[0083] 按实验5的方法，测得止血时间为25±1.37s，失血量0.1287±0.2321g(n＝4)，术后24h观察伤口基本愈合，无感染。

[0084] 实施例23：纳米级超细海藻酸钠粉末的制备

[0085] 海藻酸钠纳米级粉末的制备详见图11。选用黏度为730Mpas、M/G值为0.4的海藻酸钠首先进入进料罐1，在172-175℃液化后，海藻酸钠进入雾化塔2。雾化介质为N2，雾化设备塔高11米，塔径2.2米，使用的雾化气流参数为800米/秒的超音速射流，由气源4通过高压气汇流管3提供超音速射流。雾化后颗粒粒径主要由雾化器的喷射雾化角度决定的，本雾化过程采用喷头为限制式喷头，雾化喷枪为环缝式设计，孔径为2.5mm，导液管直径为3.8mm，流量为1500-3000g/min。塔内部海藻酸钠经回旋进行环形成型及雾化过程(在雾化塔2中进行)，海藻酸钠通过塔底的工业用雾化器形成微胶囊雾化物在7米的负压，40-60℃的塔内缓缓漂浮得到干燥的纳米级超细粉体，通过旋风收集器5回收粉末。粉末粒度测量在MASTERSIZER粒度分析仪上进测定。得到海藻酸钠的超细粉末平均直径为40-80nm。

[0086] 对上述海藻酸钠粉末按实验5的方法进行了动物止血药效验证，结果平均止血时间为22±1.53s(n＝3)。

[0087] 实施例24：海藻酸钠纳米级喷雾剂的制备

[0088] 将实施例23得到的纳米级超细级海藻酸钠粉末装入高压喷射瓶内即得到海藻酸钠纳米级喷雾剂。

[0089] 用肝脏失血模型进行止血试验。新西兰大耳白兔4只，2.5kg，雄性，军事医学科学院实验动物中心提供。按40mg/kg剂量用3％的戊巴比妥钠耳静脉注射麻醉，试验手术台固2
定后，在无菌条件下分离暴露肝脏。在肝中叶上造成0.5cm深，1×1cm 的创口，自由出血时间小于5s，擦去血，海藻酸钠纳米级喷雾剂喷撒在创口处，按压两次约喷出量为1g，纱布按压，平均止血时间为60±3.53s(n＝3)。说明藻酸钠纳米级喷雾剂具有很好的止血效果，对腹部开放性失血有较好的止血效果。

[0090] 通过以上的研究和实验，本发明确证了具有一定物理特性的海藻酸钠可以直接施用于创伤发挥止血作用；同时确证了包括海藻酸钠、钙盐和/或锌盐海藻酸钠组合物能很好发挥止血作用，且具有快速止血和促进创伤愈合的功能。其中，钙盐优选是氯化钙，也可是葡萄糖酸钙或磷酸钙，或是氯化钙、硫酸钙和磷酸钙的任意组合的混合物，只要能够在体液中解离出钙离子，其选择不受限制；锌盐可以是氯化锌。

[0091] 在另一方面，本发明提供了一种止血材料，该止血材料包括本发明的海藻酸钠纳米级粉末、海藻酸钠组合物以及至必要的药学可接受的溶剂、载体和/或赋形剂，例如该止血材料可以是粉末剂、纳米级超细粉末或喷雾剂形式直接应用于创面上，也可以是止血敷料等形式覆盖创面。

[0092] 本发明的创新还在于，使用海藻酸钠或者是海藻酸钠与钙离子的混合物止血，均可以在创面形成一层创口保护膜，增加局部血液黏度，促进血栓的生成。通过对目前海藻酸钠不同规格的筛选后，采用的特定规格的海藻酸钠的止血时间较短，失血量减小，有效提高机体存活率。

[0093] 本发明止血材料的制备简单，止血机理明确有效，在日常使用中价格低廉，具有大规模装备部队的可能。