一种防治脂代谢紊乱的植物提取物组合物及其制备方法

摘要

本发明公开了一种防治脂代谢紊乱的植物提取物组合物，包括三七总皂苷提取物与黄连总生物碱提取物。本发明还公开了上述组合物的制备方法，是将三七经过C1-3醇提后，合并总提取物，浓缩后得总提取物浓缩液，除去其中非皂苷类成分，得到三七总皂苷提取物；将黄连加C1-3醇回流提取，回收C1-3醇，浓缩，浓缩液再以酸溶解碱沉淀重结晶析出总生物碱提取物，两者混合后得到防治脂代谢紊乱的植物提取物组合物。本发明的防治脂代谢紊乱的植物提取物组合物去除了原复方中药中大量无效的化学成分，减少了无效成分对产品加工和制剂质量及安全性的影响，使有效成分明确，含量增加，制备工艺稳定，产品质量可控，利于工业化生产，并显著提高降脂药效。

权利要求

1.一种防治脂代谢紊乱的植物提取物组合物，其特征在于包括三七总皂苷提取物与黄连总生物碱提取物，两者的重量比为1~9:1~3；所述的组合物中含有三七皂苷R1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rd、人参皂苷Re、人参皂苷Rg1、小檗碱、黄连碱、表小檗碱、巴马汀；各组分的重量比例为三七皂苷R1：人参皂苷Rb1：人参皂苷Rd：人参皂苷Re：人参皂苷Rg1：小檗碱：黄连碱：表小檗碱：巴马汀等于1～4：1～8：1～3：1～2：1～11：1～10：1～3：1～2：

1～3；所述组合物的制备方法，步骤如下：

（1）三七总皂苷提取物的制备：将原料药物三七经过C1-3醇提后，合并总提取物，浓缩总提取物后得到浓缩液，除去浓缩液中非皂苷类成分，得到三七总皂苷提取物；

（2）黄连总生物碱提取物的制备：将原料药物黄连加C1-3醇回流提取，回收C1-3醇，浓缩得浓缩液，再以酸溶解碱沉淀重结晶析出黄连总生物碱提取物；

（3）将三七总皂苷提取物与黄连总生物碱提取物混合，得到防治脂代谢紊乱的植物提取物组合物。

2.根据权利要求1所述防治脂代谢紊乱的植物提取物组合物的制备方法，步骤如下：（1）三七总皂苷提取物的制备：将原料药物三七经过C1-3醇提后，合并总提取物，浓缩总提取物后得到浓缩液，除去浓缩液中非皂苷类成分，得到三七总皂苷提取物；

（2）黄连总生物碱提取物的制备：将原料药物黄连加C1-3醇回流提取，回收C1-3醇，浓缩得浓缩液，再以酸溶解碱沉淀重结晶析出黄连总生物碱提取物；

（3）将三七总皂苷提取物与黄连总生物碱提取物混合，得到防治脂代谢紊乱的植物提取物组合物；

其特征在于步骤（1）C1-3醇提是用30～95体积%的C1-3醇提取1～5次，每次提取的C1-3醇体积为药材质量的1～15倍，每次提取时间为5分钟以上；所述C1-3醇为甲醇、乙醇或丙醇。

3.根据权利要求2所述防治脂代谢紊乱的植物提取物组合物的制备方法，其特征在于步骤（1）中除去浓缩液中非皂苷类成分采用大孔树脂，大孔树脂与浓缩液的用量比是1kg大孔树脂加浓缩液1~5L。

4.根据权利要求3所述防治脂代谢紊乱的植物提取物组合物的制备方法，其特征在于是用大孔树脂柱吸附后用50~95体积%乙醇洗脱，用量为每1kg大孔树脂用5~20 L乙醇，以

1~20 ml/min流速洗脱，洗脱至无色；所述大孔树脂为聚酰胺型树脂或聚苯乙烯弱碱性阴离子交换树脂。

5.根据权利要求2所述防治脂代谢紊乱的植物提取物组合物的制备方法，其特征在于步骤（2）C1-3醇回流提取是用50~70体积%C1-3醇提取1～5次，每次提取的C1-3醇体积为药材质量的1～15倍，每次提取时间为5分钟以上。

6.根据权利要求2所述防治脂代谢紊乱的植物提取物组合物的制备方法，其特征在于步骤（2）所述酸溶解是用醋酸溶解，用1~30质量%HCl调pH为0.1~5。

7.权利要求1所述防治脂代谢紊乱的植物提取物组合物在制备预防或治疗脂代谢紊乱疾病药物或保健品中的应用。

说明书

一种防治脂代谢紊乱的植物提取物组合物及其制备方法

技术领域

[0001] 本发明涉及中药提取物组合物，具体涉及一种防治脂代谢紊乱的植物提取物组合物及其制备方法。

背景技术

[0002] “复方贞术调脂方”（FTZ），是一种中药组合物，用于治疗高脂血症，取得理想疗效，临床总有效率达91%。全方由女贞子、白术、佛手、杜仲、大蓟、丹参、黄连、三七8味中药组成。该组方FTZ已获国家发明专利授权，专利号： 200410051250.4。

[0003] 虽然不少复方中药具有良好的血脂调节功能和临床疗效，但是由于是中药复方制剂，还有许多不足之处：（1）其成分较复杂，其有效成分还不清楚，不易量化，最终将影响产品的临床疗效的稳定性，（2）相对简单的制备工艺，方中有效成分得不到应有的纯化，杂质成分多，服用剂量大，病人服用顺应性不够理想，（3）由于方剂提取物量大，应用范围受到各种限制。

发明内容

[0004] 本发明的目的在于克服已有技术的不足，提供一种疗效更显著确切，有效成份含量高，易于量化，质量易于控制的防治脂代谢紊乱的植物提取物组合物。

[0005] 本发明的另一目的是提供一种工艺稳定，重现性好的上述防治脂代谢紊乱的植物提取物组合物的制备方法。

[0006] 本发明的又一目的是提供上述防治脂代谢紊乱的植物提取物组合物在制备预防或治疗脂代谢紊乱相关疾病药物和或保健品中的应用。

[0007] 本发明通过以下技术方案实现上述目的：

[0008] 一种防治脂代谢紊乱的植物提取物组合物，包括三七总皂苷提取物与黄连总生物碱提取物。

[0009] 三七总皂苷提取物与黄连总生物碱提取物的重量比优选为1~9:1~3。

[0010] 一种防治脂代谢紊乱的植物提取物组合物的制备方法，步骤如下：

[0011] （1）三七总皂苷提取物的制备：将原料药物三七经过C1-3醇提后，合并总提取物，浓缩总提取物后得到浓缩液，除去浓缩液中非皂苷类成分，得到三七总皂苷提取物；

[0012] （2）黄连总生物碱提取物的制备：将原料药物黄连加C1-3醇回流提取，回收C1-3醇，浓缩得浓缩液，再以酸溶解碱沉淀重结晶析出黄连总生物碱提取物；

[0013] （3）将三七总皂苷提取物与黄连总生物碱提取物混合，得到防治脂代谢紊乱的植物提取物组合物。

[0014] 上述制备方法步骤（1）C1-3醇提是用30～95体积%的C1-3醇提取1～5次，优选用65～75体积%的C1-3醇提取2～3次，每次提取的C1-3醇体积为药材质量的1～15倍，优选为5～10倍，每次提取时间为5分钟以上，优选为60~120分钟；所述C1-3醇为甲醇、乙醇或丙醇，优选为乙醇，因为乙醇安全性比甲醇更高，也更易获得，提取效果也比丙醇好。

[0015] 步骤（1）中除去浓缩液中非皂苷类成分采用大孔树脂，大孔树脂与浓缩液的用量比是1kg树脂加浓缩液0.5~5L，优选为1~1.5L。用大孔树脂柱吸附后洗脱用50~95体积%乙醇，优选为75~85体积%乙醇，用量为每1kg大孔树脂用3~20 L乙醇，优选4~6 L乙醇，以1~20 ml/min，优选5~12 ml/min流速洗脱、洗脱至无色；所述大孔树脂为聚酰胺型树脂或聚苯乙烯弱碱性阴离子交换树脂。

[0016] 步骤（2）C1-3醇回流提取是用50~95体积%，优选为65~75体积% C1-3醇提取1～5次，优选为2～3次，每次提取的C1-3醇体积为药材质量的1～15倍，优选为5～10倍，每次提取时间为5分钟以上，优选为60~120分钟。所述C1-3醇为甲醇、乙醇或丙醇，优选为乙醇，因为乙醇安全性比甲醇更高，也更易获得，提取效果也比丙醇好。

[0017] 酸溶解是用醋酸溶解，醋酸用量为C1-3醇提物的3～10倍，优选为3～5倍；加1~30质量%，优选为10质量%HCl调pH为0.2~4，优选pH为1.5~2.5。加入NaCl重结晶，溶液NaCl浓度约为5～12质量%，优选为6～8质量%；碱沉淀是用1~30质量%，优选为
10质量%NaOH溶液，pH为9~13，优选pH为11~12.5，重结晶体积为黄连重量的1~5倍，优选为2~3倍。

[0018] 防治脂代谢紊乱的植物提取物组合物在制备预防或治疗脂代谢紊乱疾病药物或保健品中的应用，所述脂代谢紊乱疾病为高脂血症、代谢综合症等。

[0019] 本发明中所述防治脂代谢紊乱的植物提取物组合物简称为SHCE。

[0020] 所述药物为将SHCE按照药剂学上可以接受的载体和/或辅料，使用一般制剂方法，加工成为口服制剂或注射制剂等形式。常规辅料有润滑剂、填充剂、粘合剂、崩解剂等。口服制剂有片剂、胶囊、散剂、丸剂、粉末、颗粒、晶体、溶液、浸出物、悬剂、汤、糖浆、酏剂、茶、油等形式。

[0021] 本发明的SHCE有效成分为三七皂苷R1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rd、人参皂苷Re、人参皂苷Rg1、小檗碱、黄连碱、表小檗碱、巴马汀。其中重量比例比为三七皂苷R1：人参皂苷Rb1：人参皂苷Rd：人参皂苷Re：人参皂苷Rg1：小檗碱：黄连碱：表小檗碱：巴马汀等于1～4：1～8：1～3：1～2：1～11：1～10：1～3：1～2：1～3。

[0022] 当三七总皂苷提取物和黄总生物碱提取物的配比为7：3时，SHCE有效成分及重量百分含量比分别为：三七皂苷R1：人参皂苷Rg1：人参皂苷Re：人参皂苷Rb1：人参皂苷Rd：小檗碱：黄连碱：表小檗碱：巴马汀等于2.3～2.8：10～12：0.95～1.1：7.6～9.0：1.6～1.9：9.5～11.5：2.4～2.8：1.1～1.3：2.1～2.4。

[0023] 经药理研究，（1）动物体内试验表明，本发明SHCE对实验性高脂血症，有明显降低胆固醇的作用，能够改善脂质代谢；（2）本发明SHCE能作用于脂代谢的胆固醇吸收、转运、转化、排泄和体内胆固醇合成等环节，从而调节脂质代谢紊乱；（3）临床研究结果表明，本发明SHCE具有显著的降脂作用，治疗高血脂症和代谢综合征临床疗效确切，并且没有观察到明显副作用。

[0024] 与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：

[0025] 本发明SHCE是在中国发明专利ZL200410051250.4基础上，选取其中的两味中药三七和黄连，用其提取物组成的组合物，该组合物是在进行活性成分群（有效部位）及其组分配伍的活性筛选而获得的最佳配伍。通过本发明制备方法，可以去除复方中药中大量无效的化学成分，得到更有效的中药有效提取部位，既保留了中药特色，又使传统中药中的有效成分含量大大提高，减少了无效成分对产品加工和制剂质量及安全性的影响，使该复方中药有效成分明确，制备工艺稳定，产品质量可控，有利于大量生产。动物体内试验表明，该植物提取物组合物对实验性高脂血症有明显降脂作用，能降低胆固醇，改善脂质代谢，并且没有观察到明显副作用，增加了用药的安全性。

[0026] 本发明的优点在于为预防和/或治疗脂质代谢紊乱相关疾病提供了一种新产品。本发明与同类防治脂代谢脂紊乱相关疾病的药品比较，疗效确切，安全无明显毒副作用，单独使用或与其它药物复配都有良好的应用前景。

[0027] 本发明的防治脂代谢紊乱的植物提取物组合物与复方贞术调脂方（原方，FTZ）相比较：

[0028] （1）服用量由原来的6g提取物缩减为600mg，缩减为原来的1/10；

[0029] （2）药物有效成分的含量提高约10倍；

[0030] （3）动物体内试验表明，SHCE对实验性高脂血症有明显降脂作用，并能降低胆固醇的作用，改善脂质代谢，并且没有观察到明显副作用，增加了用药的安全性。对于高脂饮食性高脂血症的降血胆固醇的药效，SHCE部分指标优于原方，达到了减少服用量而不降低药效的目的。

附图说明

[0031] 图1：实施例1 SHCE的制备（6）片剂的制备项下SHCE经HPLC分析得到的指纹图谱中三七总皂苷成分的色谱峰图。

[0032] 图2：实施例1 SHCE的制备（6）片剂的制备项下SHCE经HPLC分析得到的指纹图谱中黄连总生物碱成分的色谱峰图。

[0033] 图3：实施例2中SHCE促进L-O2肝细胞胆固醇7α羟化酶（CYP7A1）基因mRNA表达的试验结果图，其中1为空白对照， 2为FTZ组，3为SHCE低剂量组，4为SHCE中剂量组，5为SHCE高剂量组。

[0034] 图4：实施例2中SHCE对HMG-CoA还原酶活性的抑制作用，图中C为空白对照；FTZ为FTZ组；SHCE小为SHCE小剂量组；SHCE大为SHCE大剂量组；辛伐他汀为辛伐他汀组。

具体实施方式

[0035] 实施例1 SHCE的制备

[0036] 一、三七总皂苷提取物的制备

[0037] （1）三七总皂苷提取物

[0038] 称取10 kg三七药材，粉碎，以药材量的8倍、8倍和6倍的75体积%乙醇分别回流提取3次，每次2h，合并提取液用200目滤布过滤，合并滤液。回收乙醇并使醇提部分浓度为1ml相当于1g生药的浓缩液（1.9 L）；上大孔树脂柱吸附，大孔树脂为聚苯乙烯弱碱性阴离子交换树脂系列的HPD-100，按1 kg树脂加浓缩液 1.5L上大孔树脂柱吸附，用水洗至洗脱液近无色，然后用85体积%乙醇4.5 L以10 ml/min流速洗脱，洗脱至流出液无色，合并洗脱液，真空减压回收乙醇并浓缩至为1ml约相当于2 g生药浓缩液（相对密度为1.08～1.10，60℃)，60℃以下干燥得总皂苷提取物0.65 kg。

[0039] 干燥的方法很多，可用减压干燥，也可用薄膜蒸发干燥等。本发明优选采用喷雾干燥法，其进风口温度80~108℃，出口温度55~60℃，风速5~10m/s，压力0.02~0.1kPa，1~2次干燥。

[0040] 三七总皂苷提取物用HPLC方法测定含三七总皂苷含量为73.8%，人参皂苷Rb1、人参皂苷Rd、人参皂苷Re、人参皂苷Rg1、三七皂苷R1的含量分别为提取物总重量的25.6%、5.2%、3.1%、32.1%、7.5%。

[0041] （2）三七总皂苷提取物

[0042] 称取10 kg三七药材，粉碎，以药材量的8倍、7倍和5倍的65体积%甲醇分别回流提取3次，每次2h，合并提取液用200目滤布过滤，合并滤液。回收甲醇并使醇提部分浓度为1ml相当于1g生药的浓缩液（2.0 L）；上大孔树脂柱吸附，大孔树脂为聚苯乙烯弱碱性阴离子交换树脂系列的HPD-600，按1 kg树脂加浓缩液 1.2 L上大孔树脂柱吸附, 用水洗至洗脱液近无色，然后用90体积%乙醇3.5 L以10 ml/min流速洗脱，洗脱至流出液无色，合并洗脱液，真空减压回收乙醇并浓缩至为1ml约相当于2 g生药浓缩液（相对密度为1.08～1.10，60℃)，60℃以下减压干燥得总皂苷提取物0.64 kg。

[0043] 三七总皂苷提取物用HPLC方法测定含三七总皂苷含量为75.2%，人参皂苷Rb1、人参皂苷Rd、人参皂苷Re、人参皂苷Rg1、三七皂苷R1的含量分别为提取物总重量的26.1%、5.3%、3.2%、32.8%、7.6%。

[0044] （3）三七总皂苷提取物

[0045] 称取10 kg三七药材，粉碎，以药材量的8倍、7倍的70体积%正丙醇分别回流提取2次，每次2h，合并提取液用200目滤布过滤，合并滤液。回收正丙醇并使醇提部分浓度为1ml相当于1g生药的浓缩液（1.7 L）；上大孔树脂柱吸附，大孔树脂优选为聚酰胺型AB-8。
按1 kg树脂加浓缩液1.3L上大孔树脂柱吸附，用水洗至洗脱液近无色，后用80%乙醇6 L以9 ml/min流速洗脱、洗脱至流出液无色、合并洗脱液，真空减压回收乙醇并浓缩至为1ml约相当于2 g生药浓缩液（相对密度为1.08～1.10，60℃)，60℃以下减压干燥得总皂苷提取物0.62 kg。

[0046] 三七总皂苷提取物用HPLC方法测定含三七总皂苷含量为72.2%，人参皂苷Rb1、人参皂苷Rd、人参皂苷Re、人参皂苷Rg1、三七皂苷R1的含量分别为提取物总重量的25.3%、5.0%、3.2%、31.3%、7.2%。

[0047] 表1 不同制备工艺三七总皂苷提取物得率及HPLC含量测定结果（%）

[0048]样品序号 得率三七总皂苷 人参皂苷Rb1 人参皂苷Rd 人参皂苷Re 人参皂苷Rg1 三七皂苷R1（1） 6.5 73.8 25.6 5.2 3.1 32.1 7.5
（2） 6.4 75.2 26.1 5.3 3.2 32.8 7.6
（3） 6.2 72.2 25.3 5.0 3.2 31.3 7.2

[0049] 二、黄连总生物碱的制备

[0050] （4）黄连总生物碱提取物

[0051] 称取10 kg黄连药材，粗粉碎，以药材量的6倍、5倍和5倍的70%乙醇分别回流提取3次，每次2 h，合并提取液，真空减压回收乙醇浓缩至1.3g药材、ml，得流浸膏2.1kg。加入冰醋酸6 L溶解，充分搅拌，4～10℃放置过夜，离心（5000 r / min，15min），抽滤，弃去沉淀，取上清液，上清液中加10质量%HCl调pH 至2.5，然后加入NaCl，使溶液NaCl浓度约为8质量%，充分搅拌，使NaCl溶解，静置24h，离心（5000 r / min，15min），收集沉淀物；上清液加10质量%NaOH调pH 至12，静置24h，离心（5000 r / min，15min），收集沉淀物，合并2次沉淀物，60℃减压干燥，即得黄连总生物碱提取物1.65 kg。

[0052] 黄连总生物碱提取物用HPLC方法测定含总生物碱含量为57.1%，其中小檗碱35.0%，黄连碱8.6%、表小檗碱4.1%、巴马汀7.6%。

[0053] （5）黄连总生物碱提取物

[0054] 称取10 kg黄连药材，粗粉碎，以药材量的8倍、5倍和4倍的75体积%甲醇分别回流提取3次，每次2 h，合并提取液，真空减压回收甲醇得浸膏2.05kg。加入冰醋酸溶解5.5 L，得酸水提取液，4~10℃放置过夜，离心（5000 r / min，15min），抽滤，弃去沉淀，取上清液，上清液中加10质量%HCl调pH 至3.0，然后加入NaCl，使溶液NaCl浓度约为6质量%，充分搅拌，使NaCl溶解，静置24h，离心（5000 r / min，15min），收集沉淀物；上清液加10质量%NaOH调pH 至12，静置24h，离心（5000 r / min，15min），收集沉淀物，合并2次沉淀物，60℃减压干燥，即得黄连总生物碱提取物1.63 kg。

[0055] 黄连总生物碱提取物用HPLC方法测定含总生物碱含量为55.6%，其中小檗碱34.0%，黄连碱8.4%、表小檗碱4.0%、巴马汀7.5%。

[0056] 三七总皂苷色谱条件：

[0057] 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以水为流动相B，按下表2中的规定进行梯度洗脱；检测波长为203nm；流速：1ml/min；柱温：25℃；检测波长：203nm；自动进样器进样。

[0058] 表2

[0059]时间（min） 流动相A（%） 流动相B（%）
0～12 19 81
12～60 19→36 81→64
60～70 36 64

[0060] 黄连总生物碱色谱条件：

[0061] 乙腈-0.05 mol/L磷酸二氢钾溶液（47:53）；流速：1 mL/min；检测波长：345nm。

[0062] 四、SHCE的制备

[0063] （6）片剂的制备

[0064] 称取按上述（1）法制备三七总皂苷提取物7 kg、（4）法制备的黄连总生物碱提取物3 kg，按等量倍增法混合均匀得SHCE 10 kg。

[0065] 上述SHCE用HPLC进行分析，得附图1、图2指纹图谱。有效成分及重量百分含量比值为：三七皂苷R1：人参皂苷Rg1：人参皂苷Re：人参皂苷Rb1：人参皂苷Rd：小檗碱：黄连碱：表小檗碱：巴马汀等于2.66：11.2：1.05：8.40：1.75: 10.5：2.61：1.26：2.31。

[0066] 取SHCE 20 kg加淀粉4 kg、糊精1 kg、65%糖浆1kg，混匀，加80体积%酒精适量，制成颗粒，干燥，加60 g硬脂酸镁拌匀，压制成20万片，包衣，即得0.125 g/片（每片含SHCE干粉100mg）。

[0067] 用HPLC方法测定SHCE片各有效成分含量结果如表3。

[0068] 表3 SHCE片HPLC含量测定结果

[0069]检测项目 含量（mg/片） 检测项目 含量（mg/片）
人参皂苷Rb1 8.40 小檗碱 10.5
人参皂苷Rd 1.75 黄连碱 2.61
人参皂苷Re 1.05 表小檗碱 1.26
人参皂苷Rg1 11.2 巴马汀 2.31
三七皂苷R1 2.66

[0070] （7）注射液的制备

[0071] 称取按上述（2）法制备三七总皂苷提取物3 kg、（4）法制备的黄连总生物碱提取物1 kg，按等量倍增法混合均匀得SHCE 5 kg。

[0072] 取SHCE按常规方法除热源，制成粉针剂。

[0073] （8）胶囊剂的制备

[0074] 称取按上述（1）法制备三七总皂苷提取物6 kg、（5）法制备的黄连总生物碱提取物4 kg，按等量倍增法混合均匀得SHCE 10 kg。

[0075] 加工方法：取上述SHCE干粉10.0 k g加糊精5.0 kg，混匀，灌装胶囊10万粒，即得0.15g/粒，每粒含SHCE干粉100mg。

[0076] （9）颗粒剂的制备

[0077] 称取按上述（2）法制备三七总皂苷提取物2 kg、（5）法制备的黄连总生物碱提取物0.5 kg，按等量倍增法混合均匀得SHCE 2.5 kg。

[0078] 取SHCE 1 kg，加白糖粉18.75 kg，25%糊精浆1 kg，混匀，加80体积%酒精适量，制成颗粒，干燥、上机包装成1万小包，即得2.0g/包（每包含SHCE干粉100mg）。

[0079] （10）丸剂的制备

[0080] 称取按上述（3）法制备三七总皂苷提取物1 kg、（4）法制备的黄连总生物碱提取物1 kg，按等量倍增法混合均匀得SHCE 2kg。

[0081] 加淀粉2 kg，混匀，加蜂蜜2.0kg泛丸成水泛丸，干燥得5kg干燥丸，包装成2万小包，即得0.25g/包（每包含SHCE 100mg）。口服，一次1小袋，一日3次。

[0082] 本发明优选SHCE配方：重量份数为三七总皂苷提取物9~7份，黄连总生物碱提取物1~3份。上述实施例只是药物组分配比有所不同，可按常规制剂方法制成各种剂型，且均具有本发明所述效果。

[0083] 实施例2 SHCE对血脂代谢关键酶基因表达和活性的影响

[0084] 1.1 对肝细胞中肝脂酶（HL）酶和胆固醇7-α-羟化酶（CYP7A1）的基因表达和活性的的影响

[0085] 按常规培养L-O2人正常肝细胞，待细胞融合后分别加入各种不同浓度的SHCE和FTZ，继续培养一定时间后，收集细胞制成细胞匀浆，用HL检测试剂盒，采用比色法检测HL和CYP7A1酶活性，研究上述不同浓度SHCE对HL和CYP7A1酶活性的影响，比较不同浓度SHCE作用下的肝细胞中HL 和CYP7A1酶活性。另用Trizol试剂提取肝细胞中总RNA，RT-PCR法测定肝细胞中CYP7A1及HL酶基因表达情况，观察SHCE对肝细胞中CYP7A1/HL酶基因表达的影响。

[0086] 数据以均值±标准差表示，用方差分析方法进行显著性检验。

[0087] 1.2 实验结果

[0088] （1）SHCE对肝细胞肝脂酶的影响

[0089] 不同剂量SHCE和FTZ处理后肝细胞肝脂酶活性显著增加(P<0.01)，且有明显剂量依赖性的增强，结果见表4。说明SHCE对肝细胞肝脂酶活性具有显著提高作用，有利于加强脂蛋白的清降而降低血甘油三酯和胆固醇。

[0090] （2）SHCE对肝细胞CYP7A1的影响

[0091] 不同剂量SHCE和FTZ处理后CYP7A1活性显著增加(P<0.01)，且有明显剂量依赖性的增强，结果见表4。说明本发明的SHCE对肝细胞CYP7A1活性具有显著提高作用，有利于促进胆固醇转化成胆汁酸而排泄，从而降低血胆固醇。

[0092] 表4 不同药物对L-O2细胞CYP7A1和HL活性的影响

[0093]

[0094] 注：同正常对照组相比，*P<0.05；**P<0.01。

[0095] （3）SHCE对肝细胞CYP7A1基因表达的影响

[0096] 正常组肝细胞肝脂酶基因表达正常，不同剂量SHCE处理后肝细胞胆固醇7-α-羟化酶基因表达显著增加(P<0.01)，说明SHCE对CYP7A1基因表达有明显促进作用(P<0.01)，从而提高肝组织细胞胆固醇7-α-羟化酶活性，试验结果见图3。图3显示SHCE对L-O2肝细胞胆固醇7-α-羟化酶基因表达有明显促进作用，从而提高肝组织细胞胆固醇
7-α-羟化酶活性。

[0097] （4）SHCE对HMG-CoA还原酶活性的抑制作用

[0098] 对HMG-CoA还原酶活性的抑制作用见表5和图4。图4中C为空白对照；FTZ为FTZ组；SHCE小为SHCE小剂量组；SHCE大为SHCE大剂量组；辛伐他汀为辛伐他汀组。图4显示SHCE对HMG-CoA还原酶活性有抑制作用，可进而抑制胆固醇从头生物合成，抑制作用强度与辛伐他汀相当。

[0099] 表5 SHCE对-HMG-CoA还原酶活性的IC50 (μg/ml)

[0100]药 物 IC50(μg/ml)
SHCE-1 1.50±0.14
SHCE-2 1.48±0.15
辛伐他汀 1.80±0.16
FTZ 11.76±0.43

[0101] 实施例3 SHCE对实验性大鼠高脂血症的作用

[0102] 实验动物：SD大鼠，SPF级，雄性，体重200±20 g。

[0103] 实验方法：适应性饲养一周后，将大鼠按体重随机分为正常对照组和造模组，其中正常对照组10只，喂基础饲料；造模组80只，高脂饲料饲养周2后，眼眶取血测定血脂，选取显著升高的作为高脂血症造模成功的大鼠。

[0104] 将血TC值高于2.5mmol/L者纳入实验，根据血脂水平将高血脂大鼠分为高血脂模型组、各提取物组及阳性药辛伐他汀（20mg/kg体重·d）组，每组10只。正常对照组及高血脂模型组给予等体积生理盐水，实验处理：正常对照组和模型组大鼠分别按照10ml/kg体重灌胃给予生理盐水，阳性对照药辛伐他汀按20 mg/kg体重给药，FTZ组按500mg/kg体重给药，SHCE组分别按10、30、50mg/kg；三七总皂苷提取物（PSE）50 mg/kg、黄连总生物碱提取物（HAE）50 mg/kg体重，均配成给药体积为10 ml/kg体重的适宜浓度给药。均为灌胃给药，每天1次，连续14天，于末次给药60分钟后，眼静脉丛取血测定及血脂。实验结果见表6。

[0105] 表6 SHCE对饮食性大鼠高脂血症血脂谱的作用（n=10，均数x ±标准差s，单位：mmol/L）

[0106]组别 剂量 TC TG LDL-C HDL-C
正常对照组 / 1.26±0.21** 0.98±0.16** 0.67±0.25** 1.31±0.43**
高血脂模型组 / 2.86±0.27 1.84±0.28 1.26±0.38 1.51±0.42
辛伐他汀 20mg/kg 1.72±0.32* 1.47±0.23 0.86±0.26* 2.01±0.50**
FTZ 500mg/kg 1.64±0.25* 1.23±0.16* 0.78±0.18* 2.15±0.46**
SHCE 10mg/kg 1.66±0.22** 1.29±0.21* 0.81±0.21* 2.13±0.51**
SHCE 30mg/kg 1.62±0.31** 1.20±0.19** 0.76±0.18** 2.24±0.64**
SHCE 50mg/kg 1.57±0.26** 1.11±0.23** 0.73±0.20** 2.48±0.61**
PSE 50mg/kg 1.83±0.35** 1.40±0.29** 0.86±0.21** 2.11±0.56**
HAE 50mg/kg 1.79±0.33** 1.36±0.25** 0.83±0.20** 2.19±0.54**

[0107] 注：与高血脂模型组比，* P ＜0.05，** P ＜0.01。

[0108] 表6表明，本发明的SHCE对高脂喂养导致的实验性大鼠的血脂代谢异常均有显著的调节作用，而且对模型动物的TG异常，SHCE比化学降脂药物辛伐他汀的降脂作用更好。

[0109] 实施例4 SHCE防治高血脂的临床验证

[0110] SHCE治疗高脂血30例分析，临床使用实施例1中（6）制得的片剂。

[0111] 试验参照中华人民共和国卫生部《中药新药治疗高脂血症的临床研究指导原则》进行。

[0112] 1.临床资料

[0113] 30例患者均系根据(1985年)诊断标准确诊的高脂血症住院或患者，其中，门诊20例，住院10例。随机分为两组，治疗组15例中，男8例， 女7例，年龄39～65岁，平均年龄(51.3±8.6)岁，高血脂病程3～15年，平均病程(6.8±2.9)年，合并高血脂症者9例，冠心病者5例，高血压者6例；对照组15例中，男8例，女7例，年龄38～65岁，平均年龄(51.5±6.8)岁，高血脂病程2.5～16年，平均病程(6.9±3.1)年，合并高血脂症者10例，冠心病者4例，高血压者5例。两组在性别、年龄、病程、并发症方面经统计学处理，无显著差异(P>0.05)，具有可比性。

[0114] 2.诊断标准

[0115] 西医诊断标准(根据1999年WHO专家咨询报告)：

[0116] 血浆总胆固醇（TC）≥6.0mmol/L、血浆总甘油三酯(TG) ≥0.54mmol/L， 血浆高密度脂蛋白（HDL-C）≤1.04 mmol/L。

[0117] 高压血参照1999年世界卫生组织/国际高血压联盟关于高血压的分类分期方法制定。

[0118] 中医诊断标准参照中华人民共和国卫生部《中医新药治疗高血脂的临床研究指导原则》。凡具有或咽干口燥、倦怠乏力、多食易饥、口渴喜饮、气短懒言、五心烦热、心悸失眠、胸胁疼痛、尿赤便秘、舌质红或黯红、淡紫或有瘀点瘀斑，脉沉细或弦涩，中医辨证为气阴两虚、血瘀脉络证者。

[0119] 3.治疗方法

[0120] 治疗组服用实施例1制得的片剂，每次1片，每天2次，2个月为1疗程，其间停用其它降血脂药和降血压药。对照组采取辛伐他汀钠片治疗，每次1片，每天1次，2个月为1疗程。两组患者均进行高血脂教育、饮食控制、适量运动。全部病例观察2个月。

[0121] 4.观察指标

[0122] 治疗前后测血压和血脂：总胆固醇、甘油三脂、低密度脂蛋白和高密度脂蛋白及血流变(毛细血管全血)、肝肾功能、尿常规，治疗期间2、4、6周同时检测血压。

[0123] 5.临床疗效

[0124] 疗效判定标准参照《中药新药治疗高脂血症临床研究指导原则》制定。

[0125] 血脂疗效判定标准：临床控制，实验室各项检查恢复正常。显效:血脂检测达到以下任一项者：TC下降≥20%，TG下降≥40%，HDL-C上升≥ 0.26mmol/L。有效:血脂检测达到以下任一项者:TC下降≥10%但<20%，TG下降≥20%但<40%，HDL-C上升≥0.104mmol/L但<0.26mmol/L。无效:血脂检测未达到以上标准者。注:混合型高脂血症疗效判定时，若两指标不一致时，以疗效低者为最终判定结果。

[0126] 两组患者治疗后空腹及餐后2小时血脂总胆固醇、甘油三酯在治疗组治疗后有明显下降，与对照组比较有显著差异(P<0.01)对照组治疗后虽有所下降，但无显著差异，说明SHCE治疗高血脂在改善血脂有显著疗效。病人治疗前后血脂变化情况见表:7和表8： [0127] 表7 SHCE片对高血脂病人血脂指标的影响

[0128]

[0129] 注：与治疗前比较，*P<0.05，**P<0.01。

[0130] 表8 SHCE片对高血脂疗效统计

[0131]

[0132] 注：与普伐他汀组比较，*P<0.05。

[0133] 说明本发明SHCE在治疗高血脂、改善高血脂病人血液流变学指标方面有显著疗效。

[0134] 结论：SHCE经现代中药药理研究证实具有降脂、改善脂质代谢的作用，对实验性高脂血症有明显降低甘油三酯和胆固醇的作用，改善脂质代谢，降低LDL-C和升高HDL-C作用，并与普伐他汀和非诺贝特有相似作用；其作用机理 与其能促进肝细胞CYP7A1基因表达、提高CYP7A1活性，抑制HMG-CoA还原酶酶活性、提高肝脂酶活性有关。

[0135] 临床研究结果表明，本发明的SHCE具有显著的降脂、改善脂质代谢的作用。治疗高血脂及脂代谢紊乱相关疾病临床疗效确切。