一种肉苁蓉提取物提取方法及其应用

摘要

本发明公开了属于药用植物应用研究技术领域的一种肉苁蓉提取物提取方法及其应用。该提取物来源于列当科肉苁蓉属的荒漠肉苁蓉或管花肉苁蓉。将肉苁蓉的干燥肉质茎磨成粉末，通过回流提取、过滤、药渣再回流提取、冰冻干燥仪干燥得到棕色粉末，即为肉苁蓉提取物。本发明的肉苁蓉提取物可激活免疫系统，增加免疫器官脾脏的重量，治疗肠癌，减少肠道增生的发生，保护正常的肠道表皮细胞，减少肠道幽门杆菌感染。

权利要求

1.一种肉苁蓉提取物在制备治疗肠癌药物上的应用，其特征在于，所述肉苁蓉提取物提取方法如下：将干燥的肉苁蓉肉质茎磨成粉末，加水，回流提取2小时，过滤，药渣再加水回流提取2次，每次回流提取1小时，合并3次提取液，冰冻干燥仪干燥提取液，干燥后得到棕色粉末，即为肉苁蓉提取物；所述粉末与所加水的质量比为3∶5，药渣与所加水的质量比为3∶10；所述肉苁蓉提取物来源于列当科肉苁蓉属的荒漠肉苁蓉或管花肉苁蓉。

说明书

一种肉苁蓉提取物提取方法及其应用

技术领域

[0001] 本发明属于药用植物应用研究技术领域，具体涉及一种肉苁蓉提取物、提取方法及其在制备治疗肠癌药物方面的应用。

背景技术

[0002] 肉苁蓉具有补肝肾，益精血，润肠通便的功效，归肾、大肠经。从归经上看，肉苁蓉对治疗大肠病变具有事半功倍的效果，但现代药理药效的研究主要集中在肉苁蓉的润肠通便作用上，而对其他大肠病变的影响研究的很少，如肉苁蓉水提物可显著提高小鼠肠推进度，缩短小鼠通便时间，抑制大肠对水分的吸收。

[0003] 关于肉苁蓉的药理药效文章很多，但均未涉及肉苁蓉的抗肠癌作用及其机制。肠癌是大肠粘膜上皮起源的恶性肿瘤，是最常见的消化道恶性肿瘤之一，死亡率较高。手术切除是肠癌最主要的治疗手段，然而术后肿瘤易复发和转移，因此选择合理有效的药物抑制肿瘤细胞的增生、转移，对提高肠癌患者生存率极为有益。

[0004] 肠癌的动物模型有很多，其中以TGF-β1-缺陷小鼠较为常见。TGF-β1-缺陷小鼠的Rag2基因敲除(Tgfb1±Rag2-/-)，且缺少T细胞和B细胞，小鼠生长过程中盲肠和结肠部位会发生炎症，引起细胞增生及不同程度的癌变。

发明内容

[0005] 本发明目的在于提供一种肉苁蓉提取物。

[0006] 本发明目的还在于提供上述肉苁蓉提取物的提取方法。

[0007] 本发明目的还在于提供上述肉苁蓉提取物的用途。

[0008] 一种肉苁蓉提取物提取方法，其特征在于，将干燥的肉苁蓉肉质茎磨成粉末，加水，回流提取2小时，过滤，药渣再加水回流提取2次，每次回流提取1小时，合并3次提取液，冰冻干燥仪干燥提取液，干燥后得到棕色粉末，即为肉苁蓉提取物。

[0009] 所述粉末与所加水的质量比为3∶5，药渣与所加水的质量比为3∶10。

[0010] 所述肉苁蓉提取物来源于列当科肉苁蓉属的荒漠肉苁蓉或管花肉苁蓉。

[0011] 所述的肉苁蓉提取物在制备治疗肠癌药物上的应用。

[0012] 所述的肉苁蓉提取物在制备治疗肠炎药物上的应用。

[0013] 所述的肉苁蓉提取物的肠道保健品。

[0014] 本发明的有益效果：本发明的肉苁蓉提取物可激活免疫系统，增加免疫器官脾脏的重量，治疗肠癌，减少肠道增生的发生，保护正常的肠道表皮细胞，减少肠道幽门杆菌感染。

附图说明

[0015] 图1 Western blot检测iNOS表达电泳图谱。

[0016] 图2组织切片中增生的数目图。

[0017] 图3肉苁蓉提取物保护正常肠道表皮细胞柱形图。

[0018] 图4 RAW264.7细胞24小时一氧化氮生成量柱形图。

具体实施方式

[0019] 下面结合附图和具体实施例对本发明做进一步说明。

[0020] 实施例1：肉苁蓉提取物的制备

[0021] 将干燥的肉苁蓉肉质茎磨成粉末，称取该粉末300g，加水500g，回流提取2小时，过滤，药渣再加500g水，回流提取2次，每次提取1小时，合并3次提取液，冰冻干燥仪干燥提取液，干燥后得到棕色粉末，即为肉苁蓉提取物，用蒸馏水将其配制成300ug/ml的水溶液，备用。

[0022] 实施例2：肉苁蓉的药理实验

[0023] 用300ug/ml的肉苁蓉提取物水溶液饲喂肠癌模型小鼠3个月。实验结束后观察脾脏变化，取小肠和大肠组织，10％福尔马林固定，石蜡包埋组织，H&E染色，显微镜下观察组织癌变类型和数目。

[0024] 根据癌变的组织、形态及浸润程度分为3类：增生，腺瘤，癌。增生的典型特征为黏膜增厚，肠腺伸长，但上表皮细胞正常，并且有正常的杯状细胞结构。腺瘤的特征为肌层增厚，杯状细胞减少，黏膜下层出现分化的肠腺。肠癌的特征为明显的肌层组织结构破坏，并且肠腺上表皮细胞异常，出现核异型。

[0025] 实施例3：肉苁蓉提取物：激活免疫系统实验

[0026] 用300ug/ml的肉苁蓉提取物水溶液饲喂肠癌模型小鼠3个月。比较喂药组和对照组小鼠免疫器官变化并分离脾细胞；采用CD49和F4/80抗体分别标记脾细胞中的NK细胞和巨噬细胞。

[0027] 结果显示，喂药组小鼠的脾重量高于对照组，脾细胞数量也高于对照组，并且有显著差异(见表1)；喂药组小鼠的NK细胞比例显著高于对照组，巨噬细胞的比例高于对照组，但没有显著差异(见表2)。

[0028] 表1肉苁蓉提取物对肠癌模型小鼠脾器官的影响

[0029]

[0030] 注：*表示显著性差异P＜0.05

[0031] 表2肉苁蓉提取物对脾细胞组成的影响

[0032]

[0033] 注：*表示显著性差异P＜0.05

[0034] 实施例4：肉苁蓉提取物减少肠道增生的发生实验

[0035] 用300ug/ml的肉苁蓉提取物水溶液饲喂肠癌模型小鼠3个月。通过组织学分析喂药组和对照组肠道组织切片的癌变类型和数目。10倍视野下统计每只小鼠各种癌变类型和数目。

[0036] 结果显示，喂药组小鼠的增生数目明显低于对照组(见图2)，并有显著差异，对腺瘤和肠癌的发生也有抑制作用，但未见显著差异，可能与实验动物数量较小有关。

[0037] 实施例5：肉苁蓉提取物保护正常的肠道表皮细胞实验

[0038] 选用小鼠正常的表皮细胞MODE-K细胞系，用细胞因子模拟肠道中的损伤，FACS检测加入肉苁蓉提取物后细胞的凋亡比例。

[0039] 结果表明，肉苁蓉可以保护正常的肠道表皮细胞生长(见图3)，并且在模拟的受损环境下，肉苁蓉提取物可以保护细胞免于受损，在模拟的55％细胞受损的情况下，同时加入肉苁蓉提取物时，可以将死亡细胞数减少到35％左右。这对于细胞修复和维持肠道的稳态具有十分重要的意义。

[0040] 实施例6：肉苁蓉提取物减少肠道幽门杆菌感染实验

[0041] 用300ug/ml的肉苁蓉提取物水溶液饲喂肠癌模型小鼠6个星期。实验过程中间隔5次收集喂药组和对照组小鼠粪便，应用16SrRNA寡核苷酸探针原位杂交法，检测粪便中幽门杆菌的感染。

[0042] 结果显示在5次检测中，喂药组仅出现1次感染，对照组出现3次感染(见表3)。表明肉苁蓉提取物可以有效减少肠道中幽门杆菌的感染，减少肠炎的发生。

[0043] 表3 16SrRNA检测小鼠模型肠道幽门杆菌感染

[0044]

[0045] 注：+表示粪便被幽门杆菌感染；-表示未被感染。

[0046] 实施例7：肉苁蓉提取物：激活小鼠巨噬细胞实验

[0047] 应用小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞系，用0ng/mL(对照)、50μg/mL、100μg/mL、200μg/mL的肉苁蓉提取物处理24小时后收集上清夜，阳性对照用10ng/mL的Lps处理
24小时后收集上清夜，检测该细胞一氧化氮(Nitric Oxide)的生成，收集细胞用Western blot检测一氧化氮合成酶(iNOS)的表达。

[0048] 结果表明该提取物可以激活巨噬细胞，可诱导一氧化氮合成酶的表达(见图1)，促进一氧化氮生成(见图4)。

[0049] 实施例8：肉苁蓉提取物对小鼠的急性毒性试验

[0050] 用300ug/ml肉苁蓉提取物水溶液饲喂肠癌模型小鼠3个月。未出现服用肉苁蓉后出现严重副作用的个例，受试小鼠生长良好，无一死亡。另外细胞实验也表明，提取物浓度在200ug/ml～400ug/ml时没有任何刺激或抑制作用。本实验中饲喂小鼠的提取物浓度为安全浓度。