诊断胃改道手术及其相关状况的工具和方法

摘要

本发明涉及诊断测量领域。具体地，其涉及评估胃改道手术疗法在受试者中是否成功的方法，预测胃改道手术疗法对于有需要的受试者是否有益的方法，以及诊断伴胃改道手术的支持疗法对于有需要的受试者是否具有有益效果的方法。还提供了用于糖尿病和瘦体重的诊断方法。此外，本发明涉及鉴定针对糖尿病和/或肥胖症的治疗的方法。

权利要求

1.选自表1A、1B、3和5中任一所示的生物标记组的至少一种生物标记在制备用于评估胃改道手术疗法对于受试者是否成功的指示剂中的用途。

2.选自表2和3中任一所示的生物标记组的至少一种生物标记在制备用于预测胃改道手术疗法对于受试者的糖尿病是否成功的指示剂中的用途。

3.选自表4和5中任一所示的生物标记组的至少一种生物标记在制备用于预测胃改道手术疗法对于受试者的肥胖症是否成功的指示剂中的用途。

4.选自表6和7中所示的生物标记组的至少一种生物标记在制备用于预测胃改道手术疗法对于有需要的受试者是否有益的的指示剂中的用途。

5.选自表8中所示的生物标记组的至少一种生物标记在制备用于诊断伴胃改道手术疗法的支持疗法对于有需要的受试者是否具有有益效果的指示剂中的用途。

6.权利要求5的用途，其中所述支持疗法选自营养疗法、膳食补充物、药物及其组合组成的组。

7.权利要求1-6中任一项的用途，其中所述胃改道手术疗法是“Roux-en-Y”肥胖症治疗手术。

8.选自表9和10中所示的生物标记组的至少一种生物标记或表15中记载的生物标记组合在制备用于诊断受试者的糖尿病的指示剂中的用途。

9.选自表12中所示的生物标记组的至少一种生物标记在制备用于诊断受试者的瘦体重的指示剂中的用途。

10.选自表11中所示的生物标记组的至少一种生物标记在制备用于诊断受试者能量状态的指示剂中的用途。

11.选自表1A、1B、3和5任一中所示的生物标记组的至少一种生物标记在制备用于鉴定针对糖尿病和／或肥胖症的治疗的指示剂中的用途。

12.选自表2和3任一中所示生物标记组的至少一种生物标记在制备用于鉴定针对糖尿病和／或肥胖症的治疗的指示剂中的用途。

13.选自表4和5任一中所示生物标记组的至少一种生物标记在制备用于鉴定针对糖尿病和／或肥胖症的治疗的指示剂中的用途。

14.权利要求11-13中任一项的用途，其中所述治疗选自由药物给予、营养膳食、膳食补充物、手术、支持身体活动、生活方式推荐及其组合组成的组。

15.权利要求14的用途，其中手术是肥胖症治疗手术。

16.一种诊断组合物，包含选自表1A、1B、2-15中所示的任一生物标记组的至少一种生物标记或者检测其的工具。

17.选自1A、1B、2-15中所示的任一生物标记组的至少一种生物标记或者用于测定其的工具在制备用于评估胃改道手术疗法对于受试者是否成功的诊断装置或者组合物中的用途。

18.权利要求17的用途，其中所述评估也包含预测胃改道手术疗法对于糖尿病是否成功。

19.权利要求17的用途，其中所述评估也包含预测胃改道手术疗法对于肥胖症是否成功。

说明书

诊断胃改道手术及其相关状况的工具和方法

[0001] 本发明涉及诊断测量领域。具体地，其涉及评估胃改道手术疗法在受试者中是否成功的方法，预测胃改道手术疗法对于有需要的受试者是否有益的方法，以及诊断伴胃改道手术的支持疗法对于有需要的受试者是否具有有益效果的方法。还提供了用于糖尿病和瘦体重的诊断方法。此外，本发明涉及鉴定针对糖尿病和/或肥胖症的治疗的方法。

[0002] 肥胖症表征为过量的体脂积累至健康受到负面影响的程度(即，通过多种疾病的2
发展)。肥胖症通常被定义为体重指数(BMI，体重除以身高的平方)为30kg/m 或更高，而超重通常被认为是BMI介于25-30之间。在2005年，世界卫生组织(WHO)推测全球约有16亿人超重并且有4亿成人被临床定义为肥胖(http://www.who.int/en/)。WHO预测到2015年这些数量将增至23亿超重成人和7亿肥胖成人。由于社会意识到肥胖症已给医疗保健体系带来了重大的负担，存在几种手段(不包括饮食改变和体育运动)来有效地改善超重和肥胖个体的健康状况。已证明通过胃改道手术来治疗肥胖症和糖尿病是非常成功的干预。
事实上，在2007年单独美国就在超过12万人中进行了最常见的Roux-en-Y形式(Couzin
2008，Bypassing medicine to treat diabetes.Science 320，438-440)。胃改道手术的总体目标是体重的减轻，特别是体脂重的减轻，以及通过提高胰岛素敏感性的糖尿病逆转。
胃改道手术目前可能是对于2型糖尿病的唯一治疗法并且可以使80-100％的严重肥胖患者的血糖水平正常化。2型是最普遍的糖尿病形式。推测2007年美国各年龄被诊断和未被诊断的糖尿病的普遍性为2360万人或人口的7.8％。他们之中，1790万人被诊断为糖尿病而570万人尚未被诊断出来(National Diabetes Statistics 2007，US Department ofHealth and Human Services，diabetes.niddk.nih.gov/dm/pubs/statistics/)。在严重超重的那些人中，糖尿病的可能性高出达40倍。

[0003] 胃改道手术，一种肥胖症治疗手术，是越来越多地应用于病态肥胖个体以改善肥胖症和糖尿病，同时降低并存病风险的严重干预(Moo &Rubino 2008.Gastrointestinal surgery as treatment for type 2 diabetes.Curr Opin Endocrinol Diabetes Obes.15：153-8.Gumbs 等 人 .2005.Changes in insulin resistance following bariatric surgery：role of caloricrestriction and weight loss.Obes Surg.15：462-73)。国立卫生研究院(NIH)的Consensus Panel推荐了考虑肥胖症治疗手术的标准。如果其他减重疗法仍旧不成功，那么推荐具有BMI为40或更高的人或者BMI为35或更高且具有一或多种相关并存病的人进行胃改道手术。通过开放式或者腹腔镜检查的Roux-en-Y胃改道手术所实现的典型减重为过体重的50-80％；然而，可以预计到相当大的个体间差异。胃改道手术广泛地在病态肥胖症患者中进行并且显示出对所有成因的死亡率降低高达40％(Adams等人，2007.Long-term mortality after gastric bypass surgery.N.Engl.J.Med.357，
753-61)。

[0004] 在多数患者中，胃改道手术导致代谢改变和正常化的血糖及胰岛素水平，胰岛素敏感性和激素反应；然而，与糖尿病端点相关的代谢改善代表，但仅仅是所观察的许多改变中的一部分。例如，炎性标记如C反应性蛋白(CRP)、血清淀粉样蛋白A(SAA)、IL-6、IL-18、唾液酸和TNF-α都在旁路手术后减少，而脂连蛋白增加(Holdstock等人，2005.CRP reductionfollowing gastric bypass surgery is most pronounced in insulin-sensitivesubiects.Int J Obes(Lond)29：1275-80.Catalan 等 人，2007.Proinflammatory cytokines in obesity：impact of type 2 diabetes mellitusand gastric bypass.Obes Surg 17：1464-1474.Vilarrasa 等 人，2007.Effectof weight loss induced by gastric bypass on proinfiammatoryinterleukin-18，soluble tumour necrosis factor-alpha receptors，C-reactiveprotein and adiponectin in morbidly obese patients.Clin Endocrinol(Oxf)67：679-686)。此外，脂代谢在胃改道手术后改变并且发现它与旁路的物理长度相关，例如游离脂肪酸和β-羟基丁酸酯水平增加(Johansson等人，2008.Lipid Mobilization Following Roux-en-Y Gastric Bypass Examined byMagnetic Resonance Imaging and Spectroscopy.Obes Surg.2008Apr.8)。然而，对这些其他改变的生理和代谢起点以及结果仍旧理解不深。

[0005] 现有的证据清楚地证明了脂肪细胞在脂质储存和影响饲食行为、胰岛素敏感性和免疫功能的激素分泌中起主要作用。虽然在人类患者中对脂肪基因表达(转录组的)研究进行到一定程度，但是蛋白质(蛋白质组)和代谢物(代谢物组)的总体分析尚未被探究。

[0006] 重度肥胖症与若干并存病相关。结果是，胃改道手术患者在手术前后需要综合的生化和临床评估并且获得对于最佳结果的多学科支持。通常的生物临床评估包括生理测量(体重、体重指数、体脂重和瘦体重)、血液生化(血浆三酰甘油、胆固醇、脂蛋白、葡萄糖、胰岛素、清蛋白、维生素和矿物状态)、膳食和药物评估、以及对于特定并存病的风险控制。为了改善下面的胃改道手术，已经证明了多种并存病。

[0007] 作为胃改道手术的结果，即使不是全部，但糖尿病患者通常不用药物就经历部分的糖尿病减轻，如由正常化的空腹血糖和胰岛素水平所指示，以及经历改善的胰岛素敏感性。效果与体重减轻无关并且在手术后的日子内发生。胃肠激素的分泌类型被胃改道手术以及十二指肠和近端空肠(小肠的上部分)的去除所改变。手术影响胃激素胰高血糖素样肽-1(GLP-1)、生长素释放肽和肽YY的释放和血浆浓度(le Roux等人，2006.Guthormone profiles following bariatric surgery favor an anorectic state，facilitate weight loss，and improve metabolic parameters.Ann Surg.243，108-14；Rodieux 等人，2008.Effects of gastric bypass and gastric bandingon glucose kinetics and gut hormone release.Obesity(Silver Spring).16：298-305；Reinehr 等 人 .2007.Peptide YY and glucagon-like peptide-1 inmorbidly obese patients before and after surgically induced weight loss.Obes Surg.17：1571-7)。胃改道手术后，改善的GLP-1、葡萄糖-依赖的促胰岛素多肽和肠降血糖素的可利用性以及效力部分地负责改善的糖尿病状态(Laferrère等人，2008，Effect of weight loss by gastric bypass surgeryversus hypocaloric diet on glucose and incretin levels in patients with type2 diabetes.J Clin Endocrinol Metab.2008 Apr.22)。糖尿病与一系列的其他疾病相关，包括心血管病、肾衰竭、失明和可以迫使肢体截肢的神经损伤。

[0008] 胃改道手术后被改善的其他并存病包括：原发性高血压、胃食管反流疾病、静脉血栓栓塞疾病、非酒精性脂肪肝疾病(非酒精性肝性脂肪变性)和肝的慢性炎症(脂肪性肝炎)、影响软骨盘和承重关节的变性、或影响臀部、膝盖、脚踝和足部的骨关节炎。例如，肝性脂肪变性和纤维变性在胃改道手术后2年显著改善(在NAFLD患者中评估)(Furuya等人，2007.Effects of bariatric surgery on nonalcoholic fatty liver disease：preliminaryfindings after 2 years.J Gastroenterol Hepatol.22：510-4)。

[0009] 通过减少体脂和增加瘦体重分数来实现成功的肥胖症去除。存在成像方法来测量体重组成，其中最常见的是双能X射线吸收仪(DEXA或DXA)(Cunningham 1991.Body composition as a determinant of energyexpenditure：a synthetic review and a proposed general predictionequation.Am J Clin Nutr，54：963-9)。该技术是基于两种类型的X射线身体扫描，一种检测所有组织而另一种检测非脂肪组织，其中通过扫描的差异来计算体脂和瘦体重。通常，DEXA被认为是测量体脂和瘦体重的“金标准”，因为它通常易于使用以及它的高度准确性；然而，DEXA设备昂贵并且通常不适于重量超过150kg的受试者(http://www.postgradmed.com/issues/2003/12_03/1bray.shtml)。然而，已经观察到胃改道手术后的体重减少特异地危及骨骼肌重量。它在有意的减重期间的维持可以通过生理锻炼、高比例的膳食蛋白质以及其他生活方式调整的组合来实现。最成功的疗法取决于个体的诱因。胃改道手术成功部分取决于监控瘦体重保留，这可以通过患者脂肪重量的百分数来评估。

[0010] 胃改道手术干预后需要防止营养不足。手术后患者在仅摄入少量食物后感到饱腹，随后很快感到饱足和没有胃口。手术后，总食物摄入显著降低并且存在缺乏足够的必需微量营养物供给的风险，如维生素、矿物质、类胡萝卜素、必需脂肪酸和蛋白质(Gasteyger等人，2008.Nutritionaldeficiencies after Roux-en-Y gastric bypass for morbid obesity oftencannot be prevented by standard multivitamin supplementation.Am J ClinNutr.2008，87：1128-33)。降低的营养物可利用性的一个原因是减少的肠表面，导致营养物的损失，这不能充足地从膳食吸收。降低的食物摄入要求患者遵循医生或营养学家的对于食物消耗以及微营养物和蛋白质的膳食补充的指导。

[0011] 胃改道手术导致降低的能量摄取以及因此能量限制(热量限制)状态(Ingram等人，2006.Calorie restriction mimetics：an emerging researchfield.Aging Cell，5：97-108)。胃改道手术患者的手术后自发食物限制是罕见的生理状况之一，其中人经历持续的能量缺乏状况和健康益处。当提供足量的必需营养物时，热量限制(CR)目的在于改善健康和延长健康寿命。在所有已经解释过CR效应的动物模型(灵长类、大鼠、小鼠、果蝇、秀丽线虫及其他)都证明了寿命的延长以及改善的健康状态。在人类中，报道了CR降低血浆脂质，空腹血糖和胰岛素以及血压。热量限制导致更好地免于氧化应激、降低的大分子葡糖化、降低的DNA损伤以及增加的修复、降低的炎症和自身免疫、增加的线粒体代谢效力以保护血浆膜、降低的细胞组分(溶酶体、过氧化物酶体)损伤、增强维持的年龄相关的基因表达类型和增强的针对应激的保护(Ingram等人，2006)。能量限制状态的确切监控对于避免胃改道手术患者中不想要的效应是不可避免的，这些效应如贫血、肌消耗、虚弱、头晕、疲劳、恶心、腹泻、便秘、，胆结石、易怒和沮丧。

[0012] 对于膳食能量的受控限制的有益作用机制的理解很少。与CR相关的延长的健康寿命可通过刺激作用，施加给线粒体的慢性低强度生物应激来达到，该刺激作用引发帮助防止衰老成因的防御应答。CR也改善胰岛素信号。在哺乳动物中，SIRT1基因通过CR饮食或通过诸如白藜芦醇的饮食组分所开启，并且保护细胞免于应激诱导的死亡(Guarente2008，Mitochondria--a nexus for aging，calorie restriction，and sirtuins ？Cell.132：171-6)。

[0013] 然而，在胃改道手术后引起的能量缺乏状态也可提供与诸如HIV-Aids和癌症的疾病相关的老年人厌食症和厌食症的良好模型。急需确保给这些患者的更有效的营养供给的新解以及方法的发展。

[0014] 总体讲，已经证明胃改道手术对于降低重度肥胖症受试者的体重和糖尿病症状是非常有效的。由于肥胖症疾病的复杂性，目前对于患者在胃改道手术干预之前和之后的精确生理学的了解不足。肥胖和糖尿病群体将极大地受益于对胃改道手术的生理作用的更好理解，因为这一改进的知识状态将改善对于患者护理所做的决定。此外，这一新知识可朝着胃改道手术“模拟”来发展，其利用能量限制的健康和老化延迟益处。最后，对于与胃改道手术相关的代谢作用的改进的了解将有助于发展抗击厌食消耗疾病(anorectic wasting disease)的有效干预。

[0015] 因此，本发明根本的技术问题可看作是提供符合上述需求的工具和方法。技术问题通过权利要求中表征的和本文下面描述的实施方式得以解决。

[0016] 本发明涉及评估胃改道手术疗法对于受试者是否成功的方法，包括：

[0017] a)测定在所述受试者的样品中选自表1A、1B、3和5中任一所示的生物标记组的至少一种生物标记的量；和

[0018] b)将所述量与参照相比较，由此评估胃改道手术疗法是否成功。

[0019] 根据本发明所提及的方法包括基本上由上述步骤组成的方法或包括另外步骤的方法。然而，应理解的是在优选实施方式中，方法是离体进行的(即不在人或动物身体中实施的)方法。方法优选可以通过自动化来辅助。

[0020] 本文中使用的术语“评估胃改道手术疗法是否成功”指测定经胃改道手术疗法治疗的受试者是否受益于所述疗法。所述受益优选糖尿病和/或肥胖症症状的改善或者关于任何所述医学状况的其它改善。优选地，对于糖尿病的成功伴有胰岛素敏感性的增加(即降低的胰岛素抗性)，对于肥胖症的成功为降低的体脂重百分比。优选地，改善将是统计学上显著程度的改善。如本领域技术人员将理解，这样的评估，尽管是优选，但通常可能并非对于100％的受调查的受试者而言都是正确的。然而，所述术语要求统计学上显著部分的受试者可以被正确评估。一部分是否是统计学上显著的可由本领域技术人员使用熟知的统计评估工具例如置信区间的测定、p-值测定、Student氏t-检验、Mann-Whitney检验等测定而无需过多实验。详细内容见于Dowdy和Wearden，Statistics for Research，John Wiley &Sons，New York 1983。优选置信区间为至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％。p-值优选为0.2、0.1、0.05。

[0021] 根据本发明的评估包括诊断、监控或确认胃改道手术疗法的成功。此外，该术语也包括预测胃改道手术疗法的长期结果是否将成功，例如，在应用该疗法后的早期阶段，当上面提及的症状的改善或医学状况的其他改善尚未是临床上检测到的。

[0022] 本文中使用的术语“胃改道手术疗法”涉及肥胖症治疗手术措施，从而从胃上部产生小囊。然后重新整理小肠。小肠近端部被绕过而远端部直接与胃囊相连。胃改道手术疗法包括开放式与腹腔镜检查Roux en-Y操作。手术技术是临床医生熟知的并且描述于标准的手术教科书中。作为胃改道手术对受试者生理学的结果，可以治疗肥胖症。此外，已经发现胃改道手术也改善受试者的糖尿病。这尤其具有相关性，因为显著部分的罹患肥胖症的患者也有糖尿病。根据本发明前述方法所指的糖尿病是指糖尿病(diabete mellitus)，并且优选2型糖尿病。肥胖症是存储在受试者的脂肪组织中的能量储备超过健康限制的医学2
状况。它优选伴有体重指数(重量除以高度的平方)为至少30kg/m。

[0023] 本文中使用的术语“生物标记”指用作本说明书中提及的医学状况或影响的指示剂的分子种类。所述分子种类可以是在受试者的样品中发现的代谢物本身。此外，生物标记也可是源自所述代谢物的分子种类。此种情形下，实际代谢物将在样品中或者测定过程期间被化学修饰并且，作为所述修饰的结果，化学上不同的分子种类，即分析物将作为被测定的分子种类。应理解的是，在这种情形下，分析物代表实际代谢物并且与用于各医学状况的指示剂具有相同的潜能。

[0024] 优选地，将在本发明的方法中测定前述生物标记组的至少一种代谢物。然而，更优选地，将测定一组生物标记以加强评估的特异性和/或灵敏度。此种组优选包括至少2、至少3、至少4、至少5、至少10或高达所有的所述生物标记。除了本说明书中记载的特异生物标记，优选地，也可在本发明的方法中测定其他生物标记。

[0025] 本文中使用的代谢物是指所述特定代谢物的至少一个分子到至多为所述特定代谢物的许多分子。还应理解，一组代谢物是指其中对于各代谢物可存在至少一个分子到至多为许多分子的多种化学上不同的分子。根据本发明的代谢物包括所有种类的有机或无机化合物(包括由生物材料例如生物体所包含的化合物)。优选，根据本发明的代谢物是小分子化合物。更优选，假设涉及多种代谢物，所述多种代谢物代表代谢物组，即在特定时间和特定条件下由生物体、器官、组织、体液或细胞包含的代谢物的集合。

[0026] 代谢物是小分子化合物，例如代谢途径的酶的底物、此类途径的中间体或通过代谢途径获得的产物。代谢途径在本领域内是熟知的并且可在物种间发生变化。优选，所述途径包括至少柠檬酸循环、呼吸链、光合作用、光呼吸作用、糖酵解、糖异生、磷酸己糖途径、氧化性磷酸戊糖途径、脂肪酸的产生和β-氧化、尿素循环、氨基酸生物合成途径、蛋白质降解途径例如蛋白酶体降解(proteasomal degradation)、氨基酸降解途径、下列物质的生物合成或降解：脂质、聚酮化合物(包括例如黄酮类化合物和异黄酮类化合物)、类异戊二烯(包括例如萜类、固醇类、类固醇类、类胡萝卜素类、叶黄素类)、碳水化合物类、苯丙素类(phenylpropanoids)和衍生物、生物碱类(alcaloids)、苯环型化合物类、吲哚类、吲哚-硫化合物(indole-sulfur compound)、卟啉类(porphyrines)、花色素类、激素类、维生素类、辅助因子例如辅基类或电子载体类、木质素、芥子油苷类、嘌呤类、嘧啶类、核苷类、核苷酸类和相关分子例如tRNA、microRNA(miRNA)或mRNA。因此，小分子化合物代谢物优选由下列种类化合物组成：醇类、烷烃类、烯烃类、炔烃类、芳香族化合物、酮类、醛类、羧酸类、酯类、胺类、亚胺类、酰胺类、氰化物类、氨基酸类、肽类、硫醇类、硫酯类、磷酸酯类、硫酸酯类、硫醚类、亚砜类、醚类或上述化合物的组合或衍生物。代谢物中的小分子可以是正常细胞功能、器官功能或动物生长、发育或健康所需的初级代谢物。此外，小分子代谢物还包含具有必要的生态学功能的次级代谢物，例如允许生物体适应其环境的代谢物。此外，代谢物不限定于所述初级和次级代谢物，其还包括人造小分子化合物。所述人造小分子化合物来源于外源提供的小分子，其为施用于生物体或由生物体吸收的但非如上定义的初级或次级代谢物的小分子。例如，人造小分子化合物可以是通过动物的代谢途径从药物获得的代谢物。此外，代谢物还包括肽类、寡肽类、多肽类、寡核苷酸类和多核苷酸类，例如RNA或DNA。更优选，代谢物具有50Da(道尔顿)至30,000Da，最优选低于30,000Da、低于20,000Da、低于
15,000Da、低于10,000Da、低于8,000Da、低于7,000Da、低于6,000Da、低于5,000Da、低于
4,000Da、低于3,000Da、低于2,000Da、低于1,000Da、低于500Da、低于300Da、低于200Da、低于100Da的分子量。然而，优选，代谢物具有至少50Da的分子量。最优选，根据本发明的代谢物具有50Da到至多1,500Da的分子量。

[0027] 此外，如下面详细说明，一些生物标记尤其优选用于评估胃改道手术疗法是否对糖尿病是成功的，而另一些生物标记尤其优选用于预测或诊断胃改道手术疗法是否对于肥胖症是成功的。

[0028] 因此，在本发明方法的优选实施方式中，所述评估包括根据选自表2和3所示的生物标记组的至少一种生物标记的比较，评估胃改道手术疗法对于糖尿病是否是成功的。

[0029] 此外，在本发明方法的另一优选实施方式中，所述评估包括根据选自表4和5所示的生物标记组的至少一种生物标记的比较，评估胃改道手术疗法对于肥胖症是否是成功的。

[0030] 更优选地，本发明也包括根据选自表1A和/或1B所示的生物标记组的至少一种生物标记的比较，评估胃改道手术疗法对于糖尿病和肥胖症是否是成功的。

[0031] 本文中使用的术语“样品”是指来自体液，优选血液、血浆、血清、唾液、尿液或脑脊液的样品，或通过例如活组织检查从细胞、组织或器官得到的样品。更优选，样品是血液、血浆或血清样品，最优选是血浆样品。生物学样品可以来源于本文中其他地方详述的受试者。获得上述不同类型的生物学样品的技术在本领域内是熟知的。例如，可通过血液采集获得血液样品，而组织或器官样品将通过例如活组织检查获得。

[0032] 优选在将上述样品用于本发明的方法之前对它们进行预处理。如在下面更详细描述的，所述预处理可包括释放或分离化合物或除去过多材料或废物所需要的处理。合适的技术包括化合物的离心、提取、分级分离、超滤、蛋白质沉淀之后过滤和纯化和/或富集。此外，为了提供以适合用于化合物分析的形式或浓度的化合物，进行其他预处理。例如，如果气相色谱联合质谱法用于本发明的方法，需要在进行所述气相色谱之前衍生化该化合物。合适和必需的预处理取决于用于进行本发明方法的方法并且对于本领域技术人员来说是熟知的。之前描述的经预处理的样品也由本发明使用的术语“样品”所包括。

[0033] 在应用胃疗法之前或之后，直接从受试者取根据上述方法的样品。优选地，可以在胃改道手术疗法之前或者3或6个月后取样。

[0034] 本文中使用的术语“受试者”涉及动物，优选涉及哺乳动物。更优选地，受试者是灵长目动物，最优选是人。

[0035] 本文中使用的术语“测定量”是指测定样品中将由本发明方法所测定的生物标记的至少一种特征性质。根据本发明的特征性质是表征生物标记的物理和/或化学性质包括生物化学性质的特征性质。此类性质包括例如，分子量、粘性、密度、电荷、自旋、光学活性、颜色、荧光、化学发光、元素组成、化学结构、与其他化合物反应的能力、在生物学读出系统中引发反应的能力(例如，报告基因的诱导)等。所述性质的值可用作特征性质并且可由本领域内熟知的技术来测定。此外，特征性质可以是通过标准运算例如算术计算(例如乘法、除法或对数运算)从生物标记的物理和/或化学性质的值产生的任何特征性质。最优选，至少一种特征性质允许测定和/或化学鉴定所述至少一种生物标记及其量。因此，特征性质值优选也包括涉及从其产生特征性质值的生物标记丰度的信息。例如，生物标记的特征性质值可以是质谱中的峰值。这样的峰值包含生物标记的特征性质信息，即质荷比(m/z)信息以及与样品中所述生物标记的丰度(即其量)相关的强度值。

[0036] 如之前所描述的，可以优选根据本发明定量或半定量地测定受试样品包含的每种生物标记。关于定量测定，基于就本文上面提及的特征性质的测定值可测定生物标记的绝对量或精确量或可测定生物标记的相对量。可在不能或不会测定生物标记的精确量的情况下测定相对量。在所述情况中，可测定其中存在生物标记的量与第二样品包含的所述生物标记的第二量相比是增大了还是减少了。在优选的实施方案中，包含所述生物标记的所述第二样品是如在本文其它地方说明的经计算的参照。因此定量分析生物标记还包括有时称为生物标记的半定量分析的分析。

[0037] 此外，本发明的方法中所使用的测定优选包括在之前提及的分析步骤之前使用化合物分离步骤。优选，所述化合物分离步骤产生由样品包含的代谢物的时间解析分离(time resolved separation)。因此，优选根据本发明使用的用于分离的合适技术包括所有色谱分离技术，例如液相色谱(LC)、高效液相色谱(HPLC)、气相色谱(GC)、薄层色谱、大小排阻或亲和色谱。这些技术对于本领域内技术人员来说是熟知的且可由本领域技术人员使用而无需另外的实验。最优选，LC和/或GC是本发明方法期望的色谱技术。用于生物标记的此类测定的合适装置在本领域中是熟知的。优选使用质谱，特别是气相色谱质谱联用(GC-MS)、液相色谱法质谱法(LC-MS)、直接输注质谱法或傅里叶变换离子回旋共振质谱(FT-ICR-MS)、毛细管电泳质谱法(CE-MS)、高效液相色谱联合质谱法(HPLC-MS)、四极质谱法、任何顺序联合质谱法，例如MS-MS或MS-MS-MS、电感耦合等离子体质谱法(ICP-MS)、热解质谱法(Py-MS)、离子迁移率质谱法或飞行时间质谱法(TOF)。最优选，如下面详细所述使用LC-MS和/或GC-MS。所述技术公开于例如Nissen，Journal of Chromatography A，703，1995：37-57，US4,540,884或US 5,397,894，其公开内容通过引用合并入本文。作为备选技术或除了质谱技术以外可将下列技术用于化合物的测定：核磁共振(NMR)、磁共振成像(MRI)、傅里叶变换红外分析(FT-IR)、紫外线(UV)光谱法、折光率(RI)、荧光检测、放射性化学检测、电化学检测、光散射(LS)、分散式拉曼光谱术或火焰电离检测(FID)。这些技术对于本领域技术人员来说是熟知的且可使用而无需另外的实验。本发明的方法优选可通过自动化技术辅助。例如，可通过机器人自动进行样品加工或预处理。优选通过合适的计算机程序和数据库辅助数据处理和比较。之前在本文中所述的自动化允许在高通量方法中使用本发明的方法。

[0038] 此外，该至少一种生物标记还可以通过特定的化学或生物学测定法来测定。所述测定法应包括允许特异性检测样品中至少一种生物标记的工具。优选，所述工具能够特异性识别该生物标记的化学结构或能够基于其与其他化合物反应的能力或其在生物学读出系统中引发反应(例如，报告基因的诱导)的能力特异性鉴定生物标记。能够特异性识别生物标记的化学结构的工具优选是抗体或与化学结构特异性相互作用的其他蛋白质，例如受体或酶。例如，可通过本领域技术人员熟知的方法将生物标记用作抗原来获得特异性抗体。本文中提及的抗体包括多克隆和单克隆抗体以及其能够结合抗原或半抗原的片段，例如Fv、Fab和F(ab)2片段。本发明还包括人源化杂合体抗体，其中将展示期望的抗原特异性的非人供体抗体的氨基酸序列与人受体抗体的序列组合。此外，包括单链抗体。供体序列通常将至少包含供体的结合抗原的氨基酸残基，但同样也可包含供体抗体的其他结构性和/或功能性相关氨基酸残基。可通过本领域熟知的几种方法制备此类杂合体。能够特异性识别生物标记的合适蛋白质优选是参与所述生物标记的代谢转化的酶。所述酶可以使用该生物标记作为底物或可以将底物转化成该生物标记。此外，所述抗体可以用作产生特异性识别生物标记的寡肽的基础。这些寡肽将例如包括用于所述生物标记的酶的结合结构域或口袋。合适的基于抗体和/或酶的测定法可以是RIA(放射免疫测定法)、ELISA(酶联免疫吸附测定法)、夹心酶免疫检测、电化学发光夹心免疫测定法(ECLIA)、解离增强镧系荧光免疫分析(DELFIA)或固相免疫检测。此外，还可基于其与其他化合物反应的能力(即通过特定的化学反应)而鉴定生物标记。此外，由于生物标记在生物学读出系统中引发反应的能力，可在样品中测定它。生物反应应当检测为表示由样品包含的生物标记的存在和/或量的读出值。生物反应可以是例如基因表达的诱导或细胞或生物体的表型反应。在优选的实施方式中，至少一种生物标记的测定是定量过程，例如，也允许测定样品中至少一种生物标记的量。

[0039] 如上所述，测定所述至少一种生物标记包括质谱法(MS)。如本文中使用的质谱法包括允许测定对应于根据本发明待测定的化合物(即生物标记)的分子量(即质量)或质量变量的所有技术。优选地，本文中使用的质谱法涉及GC-MS、LC-MS、直接输注质谱、FT-ICR-MS、CE-MS、HPLC-MS、四极质谱、任何连续联合质谱如MS-MS或MS-MS-MS，ICP-MS，Py-MS，TOF，或者使用前述技术的任何组合的方法。如何应用这些技术是本领域技术人员熟知的。此外，适当的装置是市售可得的。更优选地，本文中使用的质谱涉及LC-MS和/或GC-MS，即可操作地关联至前面的色谱分离步骤的质谱法。更优选地，本文中使用的质谱法包括四极质谱MS。最优选地，所述四极MS按下面进行：a)选择在质谱仪的第一分析四极中通过离子化产生的离子的质荷比(m/z)，b)在填有碰撞气体且用作碰撞腔室的其他的后续四极中通过施加加速电压使步骤a)中选择的离子裂解，c)在其他的后续四极中对通过步骤b)中的裂解过程产生的离子的质荷比的选择，从而至少进行该方法的步骤a)-c)一次以及作为离子化过程的结果存在于物质混合物中的所有离子的质荷比的分析，从而在分析期间四极填有碰撞气体但没有加速电压。根据本发明要使用的所述最优选的质谱的详情可以见于WO 03/073464。

[0040] 更优选地，所述质谱法是液相色谱(LC)MS和/或气相色谱(GC)MS。

[0041] 如本文中使用的液相色谱指允许分离液相或超临界相中化合物(即代谢物)的所有技术。液相色谱表征为流动相中的化合物流经静止相。当化合物以不同速率流经静止相时，它们由于每个个体化合物具有其特异的滞留时间(即该化合物流经体系所需的时间)而适时分离。本文中使用的液相色谱也包括HPLC。用于液相色谱的装置是市售可得的，例如从AgilentTechnologies，USA。根据本发明所应用的气相色谱原则上可比拟液相色谱来操作。然而，并不是使流经静止相的液体流动相中含有化合物(即代谢物)，该化合物将存在于气体体积。化合物经过可能含有作为静止相的固体支撑材料的柱或者可能用作或包覆有静止相的壁。再者，每种化合物具有流经柱所需的特定时间。此外，在气相色谱的情形下，优选设计该化合物在气相色谱之前被衍生化。用于衍生化的适当技术是本领域熟知的。优选地，根据本发明的衍生化涉及优选，极性化合物的甲氧化(methoxymation)和三甲基硅烷化，以及优选非极性(即亲脂)化合物的转甲基化，甲氧化和三甲基硅烷化。

[0042] 术语“参照”指可以与本文提及的医学状况或影响相关的生物标记中每种的特征性质的数值。优选地，参照是生物标记的阈值量，从而在被调查的样品中发现的比阈值高或与阈值相同的量指示存在医学状况而那些比阈值低的指示不存在医学状况。应理解的是，也优选地，参照可为生物标记的阈值量，从而在被调查的样品中发现的比阈值低或与阈值相同的量指示存在医学状况而那些比阈值高的指示不存在医学状况。

[0043] 根据本发明的前述方法，参照优选为从已知成功通过胃改道手术疗法治疗的受试者样品获得的参照量；此种情形下，在检测样品中发现的至少一种生物标记的量是相同或相似的，则指示通过胃改道手术疗法的成功治疗，或来自关于肥胖症和/或糖尿病的健康受试者。此外，参照也优选地可以是经计算的参照，最优选，从个体的群体(包括待调查的受试者)的至少一种生物标记的相对或绝对量的平均值或中位数。可如本文中其他地方所指出的测量所述群体中个体的至少一种生物标记的绝对或相对量。计算合适的参照值，优选平均值或中位数的方法在本领域内是熟知的。之前提及的受试者群体将包括多个受试者，优选至少5、10、50、100、1,000或10,000个受试者。应理解，通过本发明方法评估的受试者和所述多个受试者的受试者是相同的物种。也在后一情形下，检测样品中至少一种生物标记的量与参照是相同的或相似的，则指示通过胃改道手术疗法的成功治疗。在定量测定的情形下，如果特征性质的值相同，并且强度值是相同的，则检测样品的量和参照量是相同的。如果特征性质的值相同而强度值不同，则所述量是相似的。这样的差异优选是不显著的并且特征在于强度值在参照值的至少第1到99百分位数、第5到95百分位数、第10到90百分位数、第20到80百分位数、第30到70百分位数、第40到60百分位数的区间内，优选参照值的第50、60、70、80、90或95的百分位数。

[0044] 备选地，不过也是优选地，参照量可获自已知没有通过胃改道手术疗法被成功治疗的受试者的样品。在所述情形下，在检测样品中与参照不同的至少一种生物标记的量指示胃改道手术疗法是成功的。此外，参照也优选在应用胃改道手术疗法之前，受试者，即罹患肥胖症和/或糖尿病的受试者的样品中待检测的至少一种生物标记的量。此种情形下，在应用治疗之前(即参照)和之后(即检测样品量)所获得的样品之间的至少一种生物标记的量的差别将指示由本发明上述方法鉴定的有效治疗。优选地，观察到的差异将是统计学上显著的。优选地，相对量或绝对量的差异显著地在参照值的第45和55百分位数之间、第40和60百分位数之间、第30和70百分位数之间、第20和80百分位数之间、第10和90百分位数之间、第5和95百分位数之间、第1和99百分位数之间的区间之外。优选的改变和成倍调控描述于所附表1A、1B、3和5以及实施例中。

[0045] 优选地，参照，即至少一种生物标记的至少一个性质特征值将存储在适当的数据存储介质中，如数据库，并且因此可用于未来的评估。

[0046] 术语“比较”指测定所测定的生物标记的量是否与参照相同或相似或者与之不同。优选地，如果观察到的差异是可以通过本说明书中其他地方提及的统计学技术所测定的统计学上显著的，则认为生物标记与参照不同。特别地，在定量测定的情形下，如果特征性质的值以及强度值是相同的，则检测样品和参照的量是相同的。如果特征性质的值相同而强度值不同，则所述量是相似的。这样的差异优选是不显著的并且特征在于强度值在参照值的至少第1到99百分位数、第5到95百分位数、第10到90百分位数、第20到80百分位数、第30到70百分位数、第40到60百分位数的区间内，优选参照值的第50、60、70、80、90或95的百分位数。根据上面提及的比较，受试者可以被分配或不被分配到通过胃改道手术疗法成功治疗的受试者组。

[0047] 关于本说明书中提及的特定生物标记，在下列表1-5中和下面的实施例中显示了相对量的变化(即“倍数”变化)的优选值或变化的类型(即导致更高或更低的相对和/或绝对量的“上”或“下”调)。如果在所述表中指出给定的生物标记在受试者中“上调”，那么相对和/或绝对量将增加，如果其“下调”，那么生物标记的相对量和/或绝对量将减少。此外，“倍数”变化表示增加或减少的程度，例如，2倍增加是指与参照相比生物标记的量是
2倍。

[0048] 优选通过自动化技术辅助比较。例如，可使用包括用于两个不同数据集(例如包括特征性质的值的数据集)比较的算法的合适计算机程序。此类计算机程序和算法在本领域内是熟知的。虽然如上，但还可手工进行比较。

[0049] 有利地，在本发明基本的研究中发现，上面提及的特定生物标记的量是胃改道手术疗法成功的指示剂。因此，在样品中，上面详述的至少一种生物标记原则上可以用于评估胃改道手术疗法对于有需要的受试者是否是成功的。此外，生物标记甚至允许进一步总结，尤其是评估对于糖尿病和/或肥胖症的胃改道手术疗法的成功。归功于本发明，可以以可靠且有效的结果参数，即上面提及的生物标记来评估肥胖症治疗手术并且尤其是胃改道手术疗法的效力。此外，生物标记也允许预测对于糖尿病和/或肥胖症的疗法的长期结果。这尤其有助于对受试者的未来负面事件或疾病复发的个体风险分层，以及因此，对受试者关于进一步诊断和治疗措施的个体推荐。此外，如下面详细提出，本发明基本的发现也将有利于发展针对糖尿病和/或肥胖症的进一步的基于肥胖症治疗手术或药物的疗法。

[0050] 除了在下面另外指出，上面对术语的所有定义和解释加上必要的变更用于下面进一步描述的所有其他实施方案。

[0051] 本发明还涉及预测胃改道手术疗法对于有需要的受试者是否有益的方法，包括：

[0052] a)测定在所述受试者的样品中选自表6和7中所示的生物标记组的至少一种生物标记的量；和与参照相比较，从而预测胃改道手术疗法是否是有益的。

[0053] 本文中使用的术语“预测”指测定受试者将受益于未来的胃改道手术疗法的可能性。应理解的是，此种预测不是对于所有(100％)被调查受试者都必然是正确的。然而，设想该预测对于受试者群体中统计学上显著的部分受试者是正确的(例如，研究组的受试者)。一部分是否是统计学上显著的可以通过本文其它地方提出的统计技术来测定。

[0054] 此外，应理解如果按本文其它地方所述的胃改道手术疗法是成功的，至少成功的可能性比失败或者由于胃改道手术疗法而发展不良并发症的可能性要高，那么胃改道手术疗法对于受试者将是有益的。

[0055] 应理解的是，如本文所指，需要胃改道手术疗法的受试者优选罹患肥胖症的受试者，优选，与糖尿病组合。此外，根据前述方法，所述样品是获自尚未进行胃改道手术疗法的受试者。

[0056] 此外，根据前述方法的参照优选为在已知由胃改道手术疗法成功治疗的受试者样品中测定的至少一种生物标记的参照量，其中该样品在所述治疗之前获得。此种情形下，在被调查样品中测定的至少一种生物标记的量与参照量是相同的或相似的则指示胃改道手术疗法是对受试者是有益的。备选地，但也优选地，参照可以是在已知由胃改道手术疗法治疗但未成功的受试者样品中测定的至少一种生物标记的参照量，其中在所述疗法之前获得样品。在所述情形下，在被调查样品中测定的至少一种生物标记的量与参照量不同则指示胃改道手术疗法对受试者有益，而对于至少一种生物标记与参照量是相同或相似量则指示该受试者将不会受益于胃改道手术疗法。在至少一种生物标记的优选调控的改变示出于下面表6和7以及实施例中。

[0057] 有益地，本发明的前述方法允许对胃改道手术疗法的风险评估。特别地，根据这一方法的结果，如果受试者处于未从该疗法获益的风险，那么可以将该受试者从该疗法排除。因此，可以避免负面并发症并且胃改道手术疗法可以更加成本有效地被应用。原则上发现生物样品中包含的根据本发明方法提及的生物标记对预测胃改道手术疗法是否有益于有需要的受试者将是有用的。

[0058] 本发明也考虑测定伴胃改道手术的支持疗法对于有需要的受试者是否具有有益效果的方法，包括：

[0059] a)测定在所述受试者的样品中选自表8中所示的生物标记组的至少一种生物标记的量；和

[0060] b)将所述量与参照相比较，测定补充膳食是否具有有益效果。

[0061] 本文中使用的术语“支持疗法”指应用于受试者以便增加胃改道手术疗法成功的可能性的治疗措施。该术语包括基于药物的或者物理疗法以及营养和补充物推荐。优选地，所述支持疗法选自营养疗法、膳食补充物、药物及其组合所组成的组。

[0062] 如果支持疗法增加胃改道手术疗法成功的可能性，减少发展副并发症的风险或至少改善受试者的全面体质，那么所述支持疗法被认为对于受试者具有有益效果。

[0063] 可在下面所附表8和实施例中找到对于至少一种生物标记的参照的变化的优选值。优选值指示相比于参照，在胃改道手术疗法后受试者关于某些代谢物的缺陷。优选地，支持疗法是在上述方法中用作生物标记的代谢物的补充。

[0064] 根据本发明，原则上已经发现，受试者样品中的前述代谢物可以用于诊断伴胃改道手术的支持疗法是否具有有益效果。归功于本发明的前述方法，可以容易地且可靠地测定支持疗法对于已经由胃改道手术疗法所治疗的受试者是否有益。该方法因此允许避免对于受试者没有有益效果的支持疗法以及甚至关注确实具有有益作用的那些。

[0065] 本发明也涉及诊断受试者的糖尿病的方法，包括：

[0066] a)测定在所述受试者的样品中选自表9和10中所示的生物标记组的至少一种生物标记或表15中记载的生物标记组合的量；和

[0067] b)将所述量与参照相比较，从而诊断糖尿病。

[0068] 本文中使用的诊断指评估患者罹患疾病的可能性。如本领域技术人员将理解，此种评估，尽管优选，但通常对于被诊断的受试者可以不是100％正确的。然而，所述术语要求统计学上显著部分的受试者可以被鉴定为罹患疾病或者因此具有该诱因。一部分是否是统计学上显著的可由本领域技术人员使用本说明书其他地方提出的多种熟知的统计评估工具来测定而无需过多实验。

[0069] 根据本发明的诊断包括监控、确认和分类相关疾病或其症状。监控涉及追踪已经被诊断的疾病或并发症，例如分析疾病的进展或减轻，特定治疗对于疾病进展或者在疾病周期或疾病成功治疗后引起的并发症的影响。确认涉及强化或维持已经通过使用其他指示剂或标记而进行的诊断。分类涉及根据症状强度或种类将诊断分配到不同种类，例如按本说明书其他地方提出的糖尿病类型。

[0070] 一些前述生物标记优选是疾病存在、不存在或强度的指示剂，即常规诊断指示剂(优选参见，表9)，而其他生物标记是疾病发展或减轻的指示剂(优选参见，表10)。

[0071] 用于诊断糖尿病的生物标记的优选组合是下面表15中记载的组合1至20。

[0072] 根据上述本发明的方法所使用的术语“糖尿病”通常指葡萄糖代谢受损的疾病状况。所述受损导致高血糖症。根据世界卫生组织(WHO)，可以将糖尿病再分成四类。1型糖尿病是由缺乏胰岛素造成的。胰岛素由所谓的胰岛细胞所产生。所述细胞可被1型糖尿病(1a型)中的自身免疫反应所破坏。此外，I型糖尿病也包含原发性变体(1b型)。2型糖尿病是由胰岛素抗性造成的。3型糖尿病根据目前的分类包括所有其他特定类型的糖尿病。例如，β细胞可能具有影响胰岛素产生的遗传缺陷，胰岛素抗性可能由于遗传造成的或者胰脏本身可能被损害或受损。此外，激素失调或药物也可能造成3型糖尿病。4型糖尿病可能在妊娠期发生。优选地，本文中使用的糖尿病指2型糖尿病。根据German Society for Diabetes，通过空腹状态下血糖水平高于110mg/dl或者餐后血糖水平高于220mg/dl来诊断糖尿病。进一步优选的诊断技术公开于本说明书中的其他地方。糖尿病的其它症状是本领域已知的并且描述于标准医药教科书，如Stedman或Pschyrembl。

[0073] 在本发明上述方法的上下文中的术语“参照”指可以与糖尿病相关的至少一种生物标记的参照量。此参照量优选获自已知罹患糖尿病的受试者的样品。可通过应用本发明的方法获得参照量。备选地，但也优选，参照量可获自已知未罹患糖尿病的受试者的样品，即关于糖尿病为健康的受试者，并且更有选关于其他疾病也是健康的受试者。此外，参照也优选地可以是经计算的参照，最优选，从包括待调查的受试者的个体的群体产生的至少一种生物标记的相对或绝对量的平均值或中位数。可如本文中其他地方所指出的测量所述群体中个体的至少一种生物标记的绝对或相对量。计算合适的参照值，优选平均值或中位数的方法在本领域内是熟知的。之前提及的受试者群体将包括多个受试者，优选至少5、10、50、100、1,000或10,000个受试者。应理解，通过本发明方法诊断的受试者和所述多个受试者的受试者是相同的物种。

[0074] 如果参照是获自已知罹患有糖尿病的受试者或组，所述疾病可以根据在测定的获自检测样品的生物标记和前述参照之间的相同性或相似性程度来被诊断，即，根据相对于至少一种生物标记的相同或相似的定性或定量组成来被诊断。

[0075] 如果参照是获自已知未罹患糖尿病的受试者或组，所述疾病可以根据在检测样品的测定量和前述参照量之间的差异来被诊断，即，根据相对于至少一种生物标记的定性或定量组成的差异来被诊断。这也在使用上面详述的经计算的参照时适用。差异可为至少一种生物标记的绝对或相对量的增加(有时称作上调，也参见实施例)或者所述量的减少或没有可检测量的至少一种生物标记(有时称作下调；也参见实施例)。对于与本发明上述方法相关的特异生物标记，相对量的变化(即，“倍数”变化)的优选值或变化种类(即，导致更高或更低相对和/或绝对量的“上”或“下”调)如下表9-10所示。

[0076] 因此，在优选实施方式中的本发明方法包括源自已知罹患糖尿病的受试者或组的参照。最优选地，在该情形下，对于检测样品和所述参照的相同或相似结果(即，至少一种生物标记的相似的相对或绝对量)指示糖尿病。在本发明方法的另一优选实施方式中，参照是源自已知未罹患糖尿病的受试者或者是经计算的参照，例如从已知未罹患糖尿病的受试者组产生的。最优选地，在此情形下，相比于参照，在检测样品中没有至少一种生物标记或者优选量为显著差异的(即，观察到的绝对或相对量的显著差异)指示糖尿病。

[0077] 有益地，在本发明的基本研究中发现本发明上面提及的方法的上下文中提及的生物标记通常在受试者样品中诊断糖尿病是特别有用的。归功于本发明，可以更可靠且有效地诊断且监控糖尿病并因此可以改善糖尿病护理。

[0078] 此外，本发明涉及诊断受试者的瘦体重的方法，包括：

[0079] a)测定在所述受试者的样品中选自表12中所示的生物标记组的至少一种生物标记的量；和

[0080] b)将所述量与参照相比较，从而诊断瘦体重的量。

[0081] 如本文中使用的术语“瘦体重”指受试者除了贮存脂肪重和骨重以外的体重。瘦体重优选以总体重百分数表示。相比于总体重的瘦体重是与过量体贮存脂肪相关或由其造成的疾病和紊乱的重要指示剂。因此，相对于低瘦体重应优选高瘦体重。低瘦体重优选为用于增加的糖尿病和/或肥胖症诱因的指示剂。此外，瘦体重改变可以用作确定药物或锻炼或生活方式推荐是否对于受试者的总体健康有效的指示剂。瘦体重在现有技术中通过需要特定设备的技术来测定，如水下称重法(流体静力称重)、BOD POD(计算机化腔室)或双能X射线吸收仪。

[0082] 根据本发明，已经发现上面提及的生物标记与瘦体重密切相关。所述相关可以用于测定受试者的瘦体重或者测定改变，即监控受试者的瘦体重。如果要测定受试者的瘦体重，将需要用瘦体重的量来校准至少一种生物标记的量。根据，例如校准曲线，可以从测定的至少一种生物标记的绝对量来计算瘦体重的绝对量。因此，在所述情形中，适当的参照优选为至少一种生物标记的校准值或所述至少一种生物标记的校准曲线。所述校准可以通过本领域技术人员来完成而无需过多实验。如果要测定相对改变，那么可以测定受试者的两或更多样品中的至少一种生物标记的改变，其中所述两或更多样品是在不同时间点获得的。此时间点优选被外部刺激的开始所分开，例如上述药物给予或锻炼的应用或生活方式推荐。

[0083] 归功于本发明，可以容易且可靠地测定瘦体重，尤其是作为临床日常工作的一部分。影响受试者发展与过量身体贮存脂肪相关或者由其造成的疾病和紊乱(例如糖尿病或者肥胖症)的风险的改变可以被密切地监控并且可以评估抵消所述风险的的措施的效力。

[0084] 此外，本发明包含诊断受试者能量状态的方法，包括：

[0085] a)测定在所述受试者的样品中选自表11中所示的生物标记组的至少一种生物标记的量；和

[0086] b)将所述量与参照相比较，从而鉴定能量状态。

[0087] 如本文中使用的术语“能量状态”指能量摄取和能量支出之间的能量平衡。负能量状态的特征性质在于能量支出超过能量摄取。换言之，受试者燃烧比他摄取的更多的能量当量。结果是，受试者将不会存储贮存脂肪形式的能量当量(即，具有负能量状态)。因此，发展伴有平衡的或正能量状态的上述紊乱或疾病的风险将被显著降低。此外，全面体质得以改善，死亡率得以降低并且老化过程将被减慢。

[0088] 根据本发明，已经发现上面提及的生物标记与受试者的能量状态密切相关。所述相关可以用于测定受试者的绝对能量状态或者测定改变，即监控受试者的能量状态。如果要测定受试者的绝对能量状态，将需要用能量状态来校准至少一种生物标记的量。根据，例如校准曲线，可以从测定的至少一种生物标记的绝对量来计算绝对能量状态。因此，在所述情形中，适当的参照优选为至少一种生物标记的校准值或所述至少一种生物标记的校准曲线。所述校准可以通过本领域技术人员来完成而无需过多实验。如果要测定相对改变，那么可以测定受试者的两或更多样品中的至少一种生物标记的改变，其中所述两或更多样品是在不同时间点获得的。此时间点优选被外部刺激的开始所分开，例如上述药物给予或锻炼的应用或生活方式推荐。

[0089] 归功于本发明，可以容易且可靠地测定能量状态。如对本发明前述方法的讨论，影响受试者发展与过量身体贮存脂肪相关或者由其造成的疾病和紊乱的风险的改变可以被密切地监控并且可以评估抵消所述风险的措施的效力。

[0090] 此外，本发明涉及鉴定针对糖尿病和/或肥胖症的治疗的方法，包括：

[0091] a)测定在受试者的样品中选自表1A、1B、3和5中所示的生物标记组的至少一种生物标记的量，该受试者被施用了疑为对糖尿病和/或肥胖症有效的治疗；和

[0092] b)将所述量与参照相比较，从而鉴定该治疗。

[0093] 本文中使用的术语“治疗”指能治疗或改善糖尿病和/或肥胖症或伴随这些疾病症状的治疗措施。优选地，所述治疗选自由药物给予、营养膳食、膳食补充物、手术、肥胖症手术、支持身体活动、生活方式推荐及其组合组成的组。

[0094] 应理解的是，根据上面提及的方法提及的治疗并不必然对待被治疗的所有受试者都是有效的。然而，待由该方法鉴定的治疗应至少对于统计学上显著部分的群体的受试者是有效的。此部分受试者是否是统计学上显著的可以通过本说明书其他地方详细描述的技术来测定。

[0095] 优选地，针对糖尿病的治疗将由选自表2和3所示组的至少一种生物标记所鉴定和/或针对肥胖症的疗法将由选自表4和5所示组的至少一种生物标记所鉴定。

[0096] 此外，根据本发明前述方法所使用的术语“受试者”指在所用治疗之前，罹患糖尿病和/或肥胖症的受试者。

[0097] 在本发明上面提及方法的上下文中的术语“参照”指可指示糖尿病和/或肥胖症的成功治疗的至少一种生物标记的参照量。此参照量优选地获自已知被成功治疗的受试者的样品。优选地，所述受试者已经由本文其他地方所提出的胃改道手术疗法所治疗。参照量可通过应用本发明的方法而获得。备选地，但也优选的，参照量可获自已知未罹患糖尿病和/或肥胖症的受试者的样品，即关于糖尿病和/或肥胖症的健康受试者，并且更优选对其他疾病也为健康的受试者。此外，参照也优选地可以是经计算的参照，最优选，从包括待调查的受试者的个体的群体产生的至少一种生物标记的相对或绝对量的平均值或中位数。可如本文中其他地方所指出的测量所述群体中个体的至少一种生物标记的绝对或相对量。计算合适的参照值，优选平均值或中位数的方法在本领域内是熟知的。之前提及的受试者群体将包括多个受试者，优选至少5、10、50、100、1,000或10,000个受试者。应理解，通过本发明方法诊断的受试者和所述多个受试者的受试者是相同的物种。如果参照是获自已知被成功治疗的受试者或组或已知未罹患糖尿病和/或肥胖症组，那么可以根据测定的获自检测样品的生物标记和上述参照之间的相同或相似程度来鉴定治疗，即根据关于至少一种生物标记的相同或相似的定性或定量组成。在定量测定的情形下，如果特征性质的值相同，并且强度值是相同的，则检测样品的量和参照量是相同的。如果特征性质的值相同而强度值不同，则所述量是相似的。这样的差异优选是不显著的并且特征在于强度值在参照值的至少第1到99百分位数、第5到95百分位数、第10到90百分位数、第20到80百分位数、第30到70百分位数、第40到60百分位数的区间内，优选参照值的第50、60、70、80、90或95的百分位数。

[0098] 然而，“参照”也可以是在应用治疗之前，受试者的样品中待测定的至少一种生物标记的量，即罹患肥胖症和/或糖尿病的受试者。此种情形下，在应用治疗之前(即参照)和之后(即检测样品量)所获得的样品之间的至少一种生物标记的量的差别将指示由本发明上述方法鉴定的有效治疗。优选地，观察到的差异将是如本说明书中其他地方提出的统计学上显著的。优选的改变和成倍调控描述于所附表1A、1B、3和5以及实施例中。

[0099] 有益地，在本发明基本研究中发现了本发明上面提及的方法的上下文中提及的生物标记尤其对于鉴定针对糖尿病和/或肥胖症是否有效的治疗来讲是有用的。归功于本发明，可以容易且有效地鉴定糖尿病和肥胖症治疗。此外，它甚至可以在个体基础上评估治疗是否有效。

[0100] 用于所述至少一种生物标记测定的上述方法可在装置中实施。本文中使用的装置将包括至少上述工具。此外，装置优选还包括用于该至少一种生物标记经检测的特征性质且也优选经测定的信号强度的比较和评估的工具。装置的工具优选相互有效连接。如何以有效方式连接工具将取决于装置所包括的工具的类型。例如，当使用用于自动地定性或定量测定生物标记的工具时，通过所述自动操作工具获得的数据可通过例如计算机程序处理以帮助评估。优选在该情况下工具包含在单个装置中。所述装置因此可包括用于生物标记的分析单元和用于处理所获得数据以进行评估的计算机单元。备选地，当工具例如测试条用于测定生物标记时，用于比较的工具可包括对照条或表，其将测定的结果数据分配为已知指示上述医学状况的结果数据。优选装置是可使用而无需专科临床医师的特殊知识的装置，例如只需要装载样品的测试条或电子装置。

[0101] 备选地，用于测定至少一种生物标记的方法可以落实到包含若干装置的系统中，优选地所述装置彼此间有效连接。特别地，必须以允许进行如上详述的本发明方法的方式连接工具。因此，本文中使用的有效连接优选指功能性连接。取决于待用于本发明的系统的工具，所述工具通过允许数据在所述工具之间传送的方式(例如玻璃纤维电缆和用于高通量数据传送的其他线缆)将每一个工具与另一个工具连接来进行功能性连接。然而，本发明也考虑工具之间的无线数据传送，例如通过LAN(包括无线LAN、W-LAN)。优选系统包括用于测定生物标记的工具。本文中使用的测定生物标记的工具包括用于分离生物标记的工具(例如色谱装置)和用于代谢物测定的工具(例如质谱装置)。合适的装置已在上面进行了详细描述。本发明系统中使用的用于化合物分离的优选工具包括色谱装置，更优选用于液相色谱、HPLC和/或气相色谱的装置。用于化合物测定的优选装置包括质谱装置，更优选GC-MS、LC-MS、直接输注质谱装置、FT-ICR-MS、CE-MS、HPLC-MS、四极质谱装置、连续联合质谱装置(包括MS-MS或MS-MS-MS)、ICP-MS、Py-MS或TOF。分离和测定工具优选相互联合。最优选，LC-MS和/或GC-MS用于在本说明书的其他部分详细描述的本发明的系统中。进一步包括的是用于比较和/或分析从生物标记测定的工具所获得结果的工具。用于比较和/或分析结果的工具可包括至少一个数据库和用于执行结果比较的计算机程序。上述系统和装置的优选实施方案也在下面进行了详细描述。

[0102] 此外，本发明涉及数据集合，包括指示上面提出的医学状况或影响(即，评估胃改道手术是否成功，预测胃改道手术是否有益，测定伴胃改道手术的支持疗法是否具有有益效果，诊断糖尿病，诊断瘦体重，诊断能量状态或鉴定治疗)的至少一种生物标记的特征性质值。

[0103] 术语“数据集合”是指可以通过物理上和/或逻辑上分组在一起的数据的集合。因此，可在单个数据存储介质中或在物理分离的彼此有效连接的数据存储介质中落实数据集合。优选，通过数据库的方式落实数据集合。因此，本文中使用的数据库包括在合适的存储介质上的数据集合。此外，数据库优选进一步包括数据库管理系统。数据库管理系统优选是基于网络的分级的或面对对象的数据库管理系统。此外，数据库可以是联合的或集成的数据库。更优选，数据库将以分布式(联合式)系统例如Client-Server-系统的形式执行。更优选，这样构建数据库以允许搜索算法将试验数据集与数据集合包括的数据集进行比较。具体地，通过使用算法可以搜索数据库(例如查询搜索)得到与上述指示医学状况或影响相似或相同的数据组。因此，如果在数据集合中鉴定到相同或相似数据集，那么所述试验数据集与所述医学状况或影响相关联。因此，可以将从数据集获得信息用作例如，针对上述的本发明方法的参照。更又选，数据集合包括上述任何一组中所包括的所有代谢物的特征性质值。

[0104] 有鉴于前文，本发明涵盖包括上述数据集合的数据存储介质。

[0105] 本文中使用的术语“数据存储介质”包括基于单个物理实体例如CD、CD-ROM、硬盘、光学存储介质或磁盘的数据存储介质。此外，所述术语还包括由物理分离的实体组成的数据存储介质，所述实体相互之间以提供上述数据集合的方式，优选以进行查询搜索的合适方式有效连接。

[0106] 本发明还涉及系统，所述系统包括：

[0107] (a)用于比较样品的至少一种生物标记的特征性质值的工具，其有效连接到[0108] (b)如上定义的数据存储介质。

[0109] 本文中使用的术语“系统”涉及相互之间有效连接的不同工具。所述工具可以在单个装置中行使功能或可在物理分离的相互之间有效连接的装置中行使功能。用于比较生物标记的特征性质值的工具优选基于用于上述比较的算法而进行运作。数据存储介质优选包括上述数据集合或数据库，其中各存储的数据集预示着上面提及的医学状况或影响。因此，本发明的系统允许鉴定试验数据集是否包括在存储于数据存储介质的数据集合中。因此，本发明的方法可通过本发明的系统来实施。

[0110] 在系统的优选的实施方式中，包括用于测定样品的生物标记的特征性质值的工具。术语“用于测定生物标记的特征性质值的工具”优选涉及用于代谢物测定的上述装置，例如质谱装置、NMR装置或用于进行生物标记的化学或生物学测定的装置。

[0111] 此外，本发明涉及诊断工具，包括用于测定选自上面提及的任一组的至少一种生物标记的工具。

[0112] 术语“诊断工具”优选涉及本说明书其他地方详细说明的诊断装置、系统或生物学或化学测定。

[0113] 表述“用于测定至少一种生物标记的工具”指能够特异性识别生物标记的装置或试剂。合适的装置可以是光谱测定装置例如质谱、NMR装置或用于进行生物标记的化学或生物学测定的装置。合适的试剂可以是特异性检测生物标记的化合物。本文中使用的检测可以是两步法，即化合物可首先与待检测生物标记特异性结合，其后产生可检测的信号，例如荧光信号、化学发光信号、放射性信号等。对于可检测信号的产生，可能需要其他化合物，其都包括在术语“用于测定至少一种生物标记的工具”中。与生物标记特异性结合的化合物详细地描述于本说明书中其他地方，优选，包括酶、抗体、配体、受体或与生物标记特异性结合的其他生物分子或化学物质。

[0114] 此外，本发明涉及诊断组合物，包括选自上面提及的任一组中至少一种生物标记。

[0115] 选自任何上述组的至少一种生物标记将用作生物标记，即用于受试者中本文其他地方所提出的医学状况或影响的指示剂分子。因此，代谢物分子本身可用作诊断组合物，优选在用本文提及的工具可视化或检测时。因此，根据本发明指示生物标记存在的诊断组合物也可包括生理上的所述生物标记，例如抗体和待检测的代谢物的复合物可用作诊断组合物。因此，诊断组合物还可包括检测如本说明书中其他地方所详述的代谢物的工具。备选地，如果使用诸如MS或NMR类技术的检测工具，那么用作风险状况的指示剂的分子种类将为待被检查的检测样品所包含的至少一种生物标记。因此，根据本发明提及的至少一种生物标记本身将由于它作为生物标记的身份而用作诊断组合物。

[0116] 在下面的表中列出根据本发明方法要测定的生物标记。进一步在表13和14中表征未用其名称准确定义的生物标记。

[0117] 表1A：在糖尿病/肥胖症(n＝5)或非糖尿病/肥胖症亚组(n＝9)中，手术后3个月对0(手术前)或者手术后6个月对0(手术前)，代谢物显著改变。

[0118]

[0119]

[0120]

[0121] (*1)游离的和来自鞘脂类的

[0122] 表1B：在所有14位患者中，手术后3个月时0(手术前)或者手术后6个月对0(手术前)，代谢物显著改变。

[0123]

[0124]

[0125] 表2：在糖尿病/肥胖症亚组(n＝5)中，手术后3个月对手术前，代谢物改变。

[0126]

[0127]

[0128] (*1)游离的和来自鞘脂类的

[0129] 表3：在所有三个时间点(手术前，手术后3个月和6个月)，代谢物与胰岛素敏感性显著相关(由QUICKI，Yokoyama H等人，Diabetes Care，2003测定)。与胰岛素敏感性的负相关表明上调的(增加的)代谢物量(相比于对照组)与糖尿病或糖尿病风险相关。与胰岛素敏感性的正相关表明下调的代谢物量(相比于对照组)与糖尿病或糖尿病风险相关。手术后代谢物水平朝正常值的改变表明成功的胃旁路疗法。

[0130]

[0131]

[0132] (*1)游离的和来自鞘脂类的

[0133] 表4：在非糖尿病/肥胖症亚组(n＝9)中，手术后3个月对0(手术前)或者手术后6个月对手术前，代谢物显著改变。

[0134]

[0135]

[0136] 表5：在所有时间点(手术前，手术后3个月和6个月)，代谢物与体脂重显著相关(以总体重的％计)。与％体脂重的正相关表明上调的代谢物量(相比于对照组)与肥胖症或肥胖症风险相关。与％体脂重的负相关表明下调的(减少的)代谢物量(相比于对照组)与肥胖症或肥胖症风险相关。手术后代谢物水平朝正常值的改变表明成功的胃旁路疗法。

[0137]表5：
代谢物 p-值 R2 相关性
α-酮基异己酸 0.000015 0.38 负
3-甲氧基-酪氨酸 0.000073 0.33 正
甘油，极性成分 0.000076 0.33 正
磷脂酰胆碱(C18:1/C18:2) 0.000399 0.27 负
3-吲哚硫酸 0.000984 0.24 负
辅酶Q9 0.001675 0.22 负
MetID 0389 0.002103 0.21 负
MetID 0449 0.002627 0.20 负
硫酸甲酚 0.003361 0.20 负
溶血磷脂酰胆碱(C16:0) 0.003880 0.19 负
谷氨酸盐 0.005605 0.18 正
5-羟色胺 0.006217 0.17 负
二十三烷酸(C23:0) 0.009303 0.16 负
4-羟基-3-甲氧基-扁桃酸 0.010250 0.15 正

[0138] 表6：将手术后12个月与手术前数值相比，在手术前的时间点的代谢物水平与体脂重％改变相关。与体脂重％改变的正相关表明在手术前的时间点，上调的代谢物量(相比于对照组)预言成功的胃旁路疗法。与体脂重％改变的负相关表明在手术前的时间点，下调的(减少的)代谢物量(相比于对照组)预言成功的胃旁路疗法。

[0139]表6：
代谢物 p-值 R2 相关性
β-氨基异丁酸 0.01537 0.43 正
磷脂酰胆碱缩醛磷脂 0.01993 0.40 正
二氢胆固醇 0.02018 0.40 正
磷脂酰胆碱#10 0.02713 0.37 正
MetID 0430 0.02919 0.36 正
缬氨酸 0.03176 0.35 负
十六烷醇 0.03204 0.35 正
胆固醇酯 0.03319 0.35 负
磷脂酰胆碱#6 0.03521 0.34 正
磷脂酰胆碱#9 0.03732 0.34 正
半胱氨酸 0.03976 0.33 负
溶血磷脂酰乙醇胺 0.04081 0.33 正
丙氨酸 0.04607 0.31 负
鞘磷脂#2 0.04645 0.31 正
乳酸盐 0.04878 0.31 负
酪氨酸 0.05049 0.30 负
色氨酸 0.05073 0.30 负

[0140] 表7：将手术后12个月与手术前数值相比，在手术前的时间点的代谢物水平与胰岛素敏感性的改变相关(由QUICKI测定)。与胰岛素敏感性的改变的正相关表明在手术前的时间点，上调的(增加的)代谢物量(相比于对照组)预言成功的胃旁路疗法。与胰岛素敏感性的改变的负相关表明在手术前的时间点，下调的(减少的)代谢物量(相比于对照组)预言成功的胃旁路疗法。

[0141]

[0142] 表8：相比于手术前，在手术后3个月，代谢物降低，过滤外源的，优选必需的外源营养物。

[0143]

[0144] 表9：在手术前时间点t0或者手术后时间点t3或t6，代谢物在糖尿病/肥胖症和非糖尿病/肥胖症之间不同。

[0145]

[0146]

[0147] (*1)游离的和来自鞘脂类的

[0148] 表10：在所有三个时间点(手术前，手术后3个月和6个月)，代谢物与胰岛素敏感性显著相美(由QUICKI测定)。与胰岛素敏感性的负相关表明上调的(增加的)代谢物量(相比于对照组)与糖尿病或糖尿病风险相关。与胰岛素敏感性的正相关表明下调的(减少的)代谢物量(相比于对照组)与糖尿病或糖尿病风险相关。

[0149]

[0150] (*1)游离的和来自鞘脂类的

[0151] 表11：在所有3个时间点(手术前，手术后3个月和6个月)，代谢物与静息能量消耗相关。与静息能量消耗的负相关表明上调的(增加的)代谢物量(相比于对照组)与负能量状态相关。与静息能量消耗的正相关表明下调的(降低的)代谢物量(相比于对照组)与负能量状态相关。

[0152]

[0153]

[0154] 表12：在所有3个时间点(手术前，手术后3个月和6个月)，代谢物与瘦体重％相关。与瘦体重％的正相关表明上调的(增加的)代谢物量(相比于对照组)与高的瘦体重％相关。与瘦体重％的负相关表明下调的(减少的)代谢物量(相比于对照组)与高的瘦体重％相关。

[0155]表12：
代谢物 p-值 R2 相关性
α-酮基异己酸 0.000016 0.38 正
3-甲氧基-酪氨酸 0.000081 0.33 负
甘油，极性成分 0.000088 0.32 负
磷脂酰胆碱(C18:1/C18:2) 0.000371 0.27 正
3-吲哚酚硫酸 0.001061 0.24 正
辅酶Q9 0.002195 0.21 负
MetID 0389 0.002365 0.21 正
MetID 0449 0.002989 0.20 正
硫酸甲酚 0.004393 0.19 正
溶血磷脂酰胆碱(C16:0) 0.004985 0.18 正
5-羟色胺 0.006188 0.17 正
谷氨酸盐 0.006869 0.17 负
二十三烷酸(C23:0) 0.007988 0.16 正
尿酸 0.010430 0.15 负
4-羟基-3-甲氧基-扁桃酸 0.011260 0.15 负

[0156]

[0157]

[0158]

[0159]

[0160]

[0161]

[0162] 上面提及的所有参考文献以其全部公开内容和上面描述中明确提及的它们的特定公开内容通过引用合并入本文。

[0163] 将通过下列实施例说明本发明，实施例并不旨在限制本发明的范围。实施例

[0164] 实施例1：样品的产生

[0165] 研究包括14位来自 医院营养系(Paris，France)的预期招募的，年2
龄在18-61岁并且分类为重度肥胖(BMI＞35kg/m，中位BMI＝44.6，标准差BMI＝6.8)的女性受试者。5位受试者被分类为糖尿病/肥胖症，并且9位分类为非糖尿病/肥胖症。
手术前的评估包括病史、生理、营养、心肺以及心理评估。所有参数都在早上禁食评估。肥
2
胖受试者在手术前至少3个月体重稳定并且满足肥胖症手术的标准，即BMI≥40kg/m 或
2
≥35kg/m 并具有至少两种显著的并存病(高血压、II型糖尿病或血脂异常)。如果有急性或慢性炎性疾病、感染性疾病、癌症和/或已知的酒精消耗(＞20g每天)，以及肝病的其他成因(病毒性肝炎、血色素沉着病、Wilson氏疾病、自身免疫肝炎、抗胰蛋白酶缺陷(antitrypsine deficit))的证据，那么从该方法中排除她们。 医院的伦理委
员会已批准了临床调查并且所有受试者都做出了知情同意书。

[0166] Roux-en-Y胃改道手术(RGB)手术是最常见且成功的技术，在这一研究中被应用于所有患者。手术产生一个小的胃囊以限制食物摄取。通过将下段空肠与囊连接来产生小肠的Y型切面以使得食物绕过胃下部，十二指肠和空肠的第一段。收集血清样品用于代谢物绘图分析以及用于标准临床参数。对在胃改道手术前(0月)、手术后3个月和6个月获得的样品进行代谢物绘图分析。对于相同的样品，以及对于在胃改道手术后12个月的时间点分析标准临床参数。

[0167] 实施例2：代谢物绘图分析

[0168] 对于基于质谱的代谢物绘图分析，提取血浆样品并获得极性和非极性成分。对于GC-MS分析，用甲醇在酸性条件下处理非极性成分以获得脂肪酸甲基酯。成分都进一步用O-甲基-羟胺氯化氢和吡啶衍生化以将氧代基团转变成O-甲基肟，并且随后用硅烷化试剂，然后分析。在LC-MS分析中，成分都在适当的溶剂混合物中重构。通过在反相分离柱上的梯度洗脱来进行H PLC。对于质谱检测技术，按W02003073464所述来应用，其允许与全屏分析(full screen analysis)平行的进行靶标和高敏感性MRM(多重反应监控(Multiple Reaction Monitoring))图谱分析。通过在线SPE-LC-MS(固相提取-LC-MS)来测量类固醇及它们的代谢物。通过在线SPE-LC-MS(固相提取-LC-MS)来测量儿茶酚胺及它们的代谢物，如Yamada等人(Yamada H.Yamahara A.Yasuda S.Abe M.Oguri K.Fukushima S.lkeda-Wada S.Dansyl chloride derivatization ofmethamphetamine：A method with advantages for screening and analygsof methamphetamine in urine.Journal of Analytical Toxicology.26(1)：17-22，2002Jan-Feb)所述。

[0169] 实施例3：数据分析

[0170] 按照综合的分析验证步骤，将每种分析物的数据针对来自集合样品的数据归一化。这些样品在整个过程平行运行以补偿过程变异性。为了消除次要的，潜在的混淆效应以及为了统计分析，使用混合的线性模型(基于log10-变换的集合归一化的代谢物数据)。因子是治疗(手术前(参照)、手术后3和6个月)，适应症(indication)(糖尿病/肥胖症和非糖尿病/肥胖症)以及治疗和适应症之间的相互作用(任选的，只在对模型质量有