本发明公开了一种治疗乳腺增生病的浓缩丸剂的检测方法，包括性状、鉴别、丸剂常规检查、浸出物检查、含量测定5个步骤，所述浓缩丸剂配方为柴胡125g、香附125g、大黄（酒炙）83.4g、青皮83.4g、川芎83.4g、莪术83.4g、土鳖虫83.4g、浙贝母83.4g、当归125g、白芍125g、王不留行83.4g。该检测方法有利于保证成品的质量。
1.一种治疗乳腺增生病的浓缩丸剂的检测方法，包括性状、浸出物检查、鉴别、丸剂常规检查、含量测定五个步骤，
a、性状为：本品为黑色炭衣浓缩丸，丸芯为黑褐色；气芳香，味微咸苦；
b、浸出物检查为：取重量差异项下的本品约4g，研细，精密称定，置锥形瓶中，加甲醇l00ml，密塞，称定重量，置水浴上回流1小时，放置至室温，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液50ml，蒸干，残渣加l0％氢氧化钠溶液5ml使溶解，并转移至分液漏斗中，加水25ml洗涤蒸发皿，洗液并入同一分液漏斗中，摇匀，用水饱和的正丁醇提取4次，每次30ml，合并正丁醇提取液，加水洗涤2次，每次40ml，弃去水液，正丁醇液置已干燥至恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥3小时，置干燥器中冷却30分钟，迅速精密称定重量，计算，即得；本品含正丁醇浸出物不得少于1.2％； c、鉴别为：（1）柴胡的薄层色谱鉴别：取浸出物检查项下的正丁醇浸出物，加甲醇5ml使溶解，作为供试品溶液；另取柴胡对照药材0.5g，加甲醇20ml超声处理20分钟，滤过，滤液浓缩至约5ml，作为对照药材溶液；再取柴胡皂苷a对照品，加甲醇制成每lml含0.5 mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法；试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-乙醇-水8:2:1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％对二甲氨基苯甲醛的40％硫酸溶液，在60℃加热至斑点显色清晰，置日光及紫外光灯365 nm下检视供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点或荧光斑点；
（2）香附的薄层色谱鉴别：取本品10g，研细，置园底烧瓶中，加水250ml，连接挥发油测定器与回流冷凝管，再加入2ml乙酸乙酯，回流10分钟，放置至室温，取乙酸乙酯层作为供试品溶液另取α-香附酮，加乙酸乙酯制成每1m1含lmg的溶液作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-冰醋酸92:5:5为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯254 nm下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；喷以二硝基苯肼试液，放置片刻，斑点渐变为橙红色；
（3）大黄的薄层色谱鉴别：取本品0.3g，研细，加甲醇20m1，超声处理15分钟，滤过，取滤液5m1，蒸干，残渣加水10ml使溶解，再加盐酸1ml，加热回流30分钟，立即冷却，用乙醚分2次振摇提取，每次20m1，合并乙醚液，蒸干，残渣加三氯甲烷1m1使溶解，作为供试品溶液；另取大黄对照药材0.1g，同法制成对照药材溶液；再取大黄酸对照品，加甲醇制成每
1m1含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以30～60℃石油醚-甲酸乙酯-甲酸15:5:1的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365 nm下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的五个橙黄色荧光主斑点；在与对照品色谱相应的位置上，显相同的橙黄色荧光斑点，置氨蒸气中熏后，斑点变为红色；
（4）青皮的薄层色谱鉴别：取本品2g，研细，加甲醇20ml，加热回流20分钟，滤过，取滤液10ml，蒸干，残渣加水2ml使溶解，通过D10l大孔吸附树脂柱内径1.5cm，长9cm，柱上端加1g中性氧化铝，先以水100m1洗脱，弃去，再以2％吡啶甲醇50m1洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取橙皮苷对照品，加甲醇制成饱和溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法；试验，吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一用硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-水100:27:13为展开剂，展至约3cm，取出，晾干，再以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水20:10:1:1的上层溶液为展开剂，展至约8cm，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
（5）浙贝母的薄层色谱鉴别：取本品10g，研细，加浓氨试液2ml与三氯甲烷50m1，放置过夜，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇lml使溶解，拌入少许中性氧化铝，水浴上拌匀干燥，加于中性氧化铝柱上，100-200目，2g，内径约15mm，用乙醇50ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加乙醇lml使溶解，作为供试品溶液；另取贝母素甲对照品，加乙醇制成每lml含2mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法；试验，吸取对照品溶液2μl、供试品溶液10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液17:2:1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
（6）白芍的薄层色谱鉴别：取本品2g，研细，加甲醇20ml，加热回流20分钟，滤过，取滤液l0ml，蒸干，残渣加水2ml使溶解，通过D101大孔吸附树脂柱内径1.5cm，长9cm，柱上端加lg中性氧化铝，先以水l00ml洗脱，弃去，再以2％吡啶甲醇50ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇lml使溶解，作为供试品溶液；另取芍药苷对照品，加乙醇制成每lml含lmg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸40:5:10:0.2为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
d、丸剂常规检查为：应符合中国药典丸剂项下有关的各项规定；
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水-冰醋酸75:25:1为流动相；检测波长254nm；理论板数按大黄素峰计算应不低于3000； 对照品溶液的制备：精密称取芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚对照品适量，加甲醇分别制成每lml含大黄酸、大黄素、大黄酚各150μg，芦荟大黄素、大黄素甲醚各75μg的溶液；分别精密量取上述对照品溶液各2ml，混匀，即得每lml含大黄酸、大黄素、大黄酚各30μg，芦荟大黄素、大黄素甲醚各15μg；
供试品溶液的制备：取重量差异项下的本品，研细，取约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，称定重量，加热回流30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10ml，置50ml烧瓶中，挥去甲醇，加水10ml，盐酸lml，加热回流30分钟，立即冷却，并转移至分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗涤容器，并入分液漏斗中，以三氯甲烷提取5次，每次30ml，合并三氯甲烷液，以水50ml洗涤一次，弃去水液，三氯甲烷液蒸干，残渣加甲醇定量转移至10ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，滤过，即得；
测定法：分别精密吸取上述对照品溶液与供试品溶液各5μ1，注入液相色谱仪，测定，即得；
本品每丸含酒大黄以芦荟大黄素C15H10O5、大黄酸C15H806、大黄素C15H1005、大黄酚C15H10O4和大黄素甲醚C16H12O5的总量计，不得少于0.6mg；
其中所述治疗乳腺增生病的浓缩丸剂是由11味中药组成，具体组方为：
柴胡125g、香附125g、酒炙大黄83.4g、青皮83.4g、川芎83.4g、莪术83.4g、土鳖虫
83.4g、浙贝母83.4g、当归125g、白芍125g、王不留行83.4g，制成1000丸。
一种治疗乳腺增生病的浓缩丸剂的检测方法
技术领域
[0001] 本发明属于中药技术领域，具体是涉及一种治疗乳腺增生病的浓缩丸剂的检测方法。
背景技术
[0002] 乳腺增生病是常见的妇女外科疾病，其发病率高，严重影响广大妇女的身心健康，该病具有发展成乳腺癌的危险性。因而积极治疗乳腺增生病，提高妇女健康水平，降低癌变率有非常重大的意义。现代医学认为，乳腺增生病的发生是因内分泌功能紊乱、卵巢功能失调，致使体内雌激素水平增高或活性增强，孕激素水平下降所致。对于乳腺增生疼痛较重或局部结节明显，压痛明显的患者，临床多用性激素疗法和内分泌疗法。如黄体酮，丹那唑、三苯氧胺、溴隐亭等。用上述方法治疗，疗效虽好，但副作用较大，价格较昂贵，不能长期坚持治疗，而停药后疼痛复发，肿块增大，最终仍需继续治疗---手术切除。尤其是性激素应用后可能会进一步干扰人体激素间的平衡，增加癌变的可能性。综上所述，现代医学治疗此病目前以手术为主，药物为辅。无论是手术切除、药物治疗，都存在费用高、副作用明显、创伤面大、手术或停药后易复发等缺点。因此西医对该病尚无理想的解决途径和治疗方法。
[0003] 子宫肌瘤也为妇科常见疾病，西医常采用手术治疗，肌瘤患者在绝经前切除子宫。即使保留卵巢，常引起更年期综合症、冠心病及骨质疏松症的提早出现，而绝大部分进行肌瘤剔除术患者会在短期内复发。目前治疗子宫肌瘤常用的化学药物虽能在短时期内缩小肌瘤体积，抑制子宫出血，却不能控制肌瘤的增长和新的肌瘤出现，且应用这些拮抗雌激素和孕激素的药物后，容易产生低雌激素水平，从而诱发闭经、更年期综合症和骨质疏松等。
[0004] 子宫肌瘤在中医学属于癥瘕、积聚、石癥范畴。《血证论》云：“子宫肌瘤乃离经之血与好血不相合是谓瘀血。日久则结为癥"。本病由于气血失调、郁怒伤肝、肝郁气滞，痰湿内蕴，瘀滞而成积块，肝肾两虚，冲任失调所致；阴阳失调、肝气不舒，肾气不化，遂致气机不畅，气滞血瘀，积而成徵癥。子宫肌瘤主要是脏腑功能失调、气血不和、以致血瘀阻滞、留而结聚而成，总病机与瘀血分不开。
[0005] 中医药治疗本病多以疏肝理气、行气活血、破瘀化痰散结的方法。临床上应用行气药以川芎、香附、枳壳等为多；活血化瘀药多用桃仁、红花、王不留行等；疏肝理气药多用柴胡、郁金等；化痰药则以浙贝母、海藻、昆布为主。中药在治疗子宫肌瘤方面不仅能控制并缩小肌瘤组织，综合调节人体激素水平，并且能改善月经不调、白带、腰酸等临床症状，远期疗效显著。其作用多与改善微循环、调整机体性激素水平等有关。目前，主要有桂枝茯苓丸／胶囊、宫瘤消胶囊、大黄蛰虫丸用于治疗子宫肌瘤，但仍缺少抗子宫肌瘤疗效确切、安全系数高的中成药。
发明内容
[0006] 本发明目的是提供一种治疗乳腺增生病的浓缩丸剂的检测方法，有利于保证成品的质量。
[0007] 本发明治疗乳腺增生病的浓缩丸剂是由11味中药组成，具体组方为：
[0008] 柴胡125g、香附125g、大黄（酒炙）83.4g、青皮83.4g、川芎83.4g、莪术83.4g、土鳖虫83.4g、浙贝母83.4g、当归125g、白芍125g、王不留行83.4g，制成1000丸。
[0009] 具体制备方法：
[0010] 取处方量二分之一量的酒大黄粉碎成细粉，备用。
[0011] 浙贝母、王不留行加70％乙醇5倍量，回流提取2次，每次2小时，滤过，合并滤液，静置16小时，滤过，滤液回收乙醇并浓缩成清膏，备用。
[0012] 香附、青皮、川芎、莪术和当归水蒸汽蒸馏6小时，提取挥发油，蒸馏后的水溶液滤过，备用，挥发油用β-环糊精包结，包结物低温干燥。
[0013] 剩余的酒大黄等其余四味，分别加水10倍量，煎煮3次，每次1小时，滤过，合并滤液和上述蒸馏后的水溶液，浓缩至相对密度为1.05～1.10（50℃），静置16小时，离心（2500转／分），取上清液浓缩成清膏，和上述醇提清膏混合后继续浓缩至相对密度为1.15～1.20（50℃）的清膏，取90%左右的清膏喷雾干燥，其余清膏继续浓缩至1.35～
1.38（50℃）的稠膏，将喷雾干燥粉和适量酒大黄细粉、β-环糊精包结物混合后，加入适量糊精混匀，用9～12%混合粉量的55%～75%浓度的乙醇合坨、塑制成丸粒，再取剩余酒大黄细粉、适量稠膏将丸滚圆，干燥，用剩余稠膏、适量滑石粉和活性炭包衣，虫白蜡打光，制成1000丸，即得。
[0014] 该药为中药复方制剂，其处方与制备方法在此之前未有公开，其质量的控制方法未见报道。
[0015] 本发明的技术方案是：
[0016] 本发明治疗乳腺增生病的浓缩丸剂的检测方法：包括性状、浸出物检查、鉴别、丸剂常规检查、含量测定5个步骤，具体为：
[0017] a、性状为：本品为黑色炭衣浓缩丸，丸芯为黑褐色；气芳香，味微咸苦。
[0018] b、浸出物检查为：取重量差异项下的本品约4g，研细，精密称定，置锥形瓶中，加甲醇l00ml，密塞，称定重量，置水浴上回流1小时，放置至室温，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液50ml，蒸干，残渣加l0％氢氧化钠溶液5ml使溶解，并转移至分液漏斗中，加水25ml洗涤蒸发皿，洗液并入同一分液漏斗中，摇匀，用水饱和的正丁醇提取4次，每次30ml，合并正丁醇提取液，加水洗涤2次，每次40ml，弃去水液，正丁醇液置已干燥至恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥3小时，置干燥器中冷却30分钟，迅速精密称定重量，计算，即得；本品含正丁醇浸出物不得少于1.2％； [0019] c、鉴别为：
[0020] （1）柴胡的薄层色谱鉴别：取浸出物检查项下的正丁醇浸出物，加甲醇5ml使溶解，作为供试品溶液；另取柴胡对照药材0.5g，加甲醇20ml超声处理20分钟，滤过，滤液浓缩至约5ml，作为对照药材溶液。再取柴胡皂苷a对照品，加甲醇制成每lml含0.5 mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法；试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-乙醇-水8:2:1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％对二甲氨基苯甲醛的40％硫酸溶液，在60℃加热至斑点显色清晰，置日光及紫外光灯365 nm下检视供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点或荧光斑点[0021] （2）香附的薄层色谱鉴别：取本品10g，研细，置园底烧瓶中，加水250ml，连接挥发油测定器与回流冷凝管，再加入2ml乙酸乙酯，回流10分钟，放置至室温，取乙酸乙酯层作为供试品溶液另取α-香附酮，加乙酸乙酯制成每1m1含lmg的溶液作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-冰醋酸92:5:5为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯254 nm下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；喷以二硝基苯肼试液，放置片刻，斑点渐变为橙红色；
[0022] （3）大黄的薄层色谱鉴别：取本品0.3g，研细，加甲醇20m1，超声处理15分钟，滤过，取滤液5m1，蒸干，残渣加水10ml使溶解，再加盐酸1ml，加热回流30分钟，立即冷却，用乙醚分2次振摇提取，每次20m1，合并乙醚液，蒸干，残渣加三氯甲烷1m1使溶解，作为供试品溶液；另取大黄对照药材0.1g，同法制成对照药材溶液；再取大黄酸对照品，加甲醇制成每1m1含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（30～60℃）-甲酸乙酯-甲酸15:5:1的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365 nm下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的五个橙黄色荧光主斑点；在与对照品色谱相应的位置上，显相同的橙黄色荧光斑点，置氨蒸气中熏后，斑点变为红色；
[0023] （4）青皮的薄层色谱鉴别：取本品2g，研细，加甲醇20ml，加热回流20分钟，滤过，取滤液10ml，蒸干，残渣加水2ml使溶解，通过D10l大孔吸附树脂柱内径1.5cm，长9cm，柱上端加1g中性氧化铝，先以水100m1洗脱，弃去，再以2％吡啶甲醇50m1洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取橙皮苷对照品，加甲醇制成饱和溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法；试验，吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一用硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-水100:27:13为展开剂，展至约3cm，取出，晾干，再以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水20:10:1:1的上层溶液为展开剂，展至约8cm，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
[0024] （5）浙贝母的薄层色谱鉴别：取本品10g，研细，加浓氨试液2ml与三氯甲烷50m1，放置过夜，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇lml使溶解，拌入少许中性氧化铝，水浴上拌匀干燥，加于中性氧化铝柱（100-200目，2g，内径约15mm）上，用乙醇50ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加乙醇lml使溶解，作为供试品溶液。另取贝母素甲对照品，加乙醇制成每lml含2mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2005年版一部附录ⅥB）；试验，吸取对照品溶液2μl、供试品溶液10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液17:2:1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
[0025] （6）白芍的薄层色谱鉴别：取本品2g，研细，加甲醇20ml，加热回流20分钟，滤过，取滤液l0ml，蒸干，残渣加水2ml使溶解，通过D101大孔吸附树脂柱内径1.5cm，长9cm，柱上端加lg中性氧化铝，先以水l00ml洗脱，弃去，再以2％吡啶甲醇50ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇lml使溶解，作为供试品溶液。另取芍药苷对照品，加乙醇制成每lml含lmg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法（中国药典2005年版一部附录ⅥB）试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸40:5:10:0.2为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰。
供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
[0026] d、丸剂常规检查为：应符合中国药典丸剂项下有关的各项规定；
[0027] e、含量测定
[0028] 色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水-冰醋酸75:25:1为流动相；检测波长254nm；理论板数按大黄素峰计算应不低于3000；
[0029] 对照品溶液的制备：精密称取芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚对照品适量，加甲醇分别制成每lml含大黄酸、大黄素、大黄酚各150μg，芦荟大黄素、大黄素甲醚各75μg的溶液；分别精密量取上述对照品溶液各2ml，混匀，即得每lml含大黄酸、大黄素、大黄酚各30μg，芦荟大黄素、大黄素甲醚各15μg；
[0030] 供试品溶液的制备：取重量差异项下的本品，研细，取约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，称定重量，加热回流30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10ml，置50ml烧瓶中，挥去甲醇，加水10ml，盐酸lml，加热回流30分钟，立即冷却，并转移至分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗涤容器，并入分液漏斗中，以三氯甲烷提取5次，每次30ml，合并三氯甲烷液，以水50ml洗涤一次，弃去水液，三氯甲烷液蒸干，残渣加甲醇定量转移至10ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，滤过，即得；
[0031] 测定法：分别精密吸取上述对照品溶液与供试品溶液各5μ1，注入液相色谱仪，测定，即得；
[0032] 本品每丸含酒大黄以芦荟大黄素C15H10O5、大黄酸C15H806、大黄素C15H1005、大黄酚C15H10O4和大黄素甲醚C16H12O5的总量计，不得少于0.6mg。
[0033] 本发明的优点是对该药建立了较高的能保证成品的质量的检测方法。由于本品所含药味较多，成分复杂，检测方法是经过多次试验摸索才建立起来的，除丸剂的常规检验项外，建立了君药柴胡的浸出物含量测定、臣药大黄的高效液相含量测定，建立了柴胡、香附、大黄、青皮、浙贝母、芍药6味中药的薄层色谱鉴别，鉴别药味占全部中药的50%以上。该检测方法标准较高，其各个步骤密不可分，可完全保证成品质量的目的。
具体实施方式
[0034] 下面结合实施例对本发明作进一步描述：
[0035] 实施例一：浓缩丸剂的制备
[0036] 浓缩丸剂配方为：柴胡125g、香附125g、大黄（酒炙）83.4g、青皮83.4g、川芎83.4g、莪术83.4g、土鳖虫83.4g、浙贝母83.4g、当归125g、白芍125g、王不留行83.4g，制成1000丸。
[0037] 取处方量二分之一量的酒大黄粉碎成细粉，备用。
[0038] 浙贝母、王不留行加70％乙醇5倍量，回流提取2次，每次2小时，滤过，合并滤液，静置16小时，滤过，滤液回收乙醇并浓缩成清膏，备用。
[0039] 香附、青皮、川芎、莪术和当归水蒸汽蒸馏6小时，提取挥发油，蒸馏后的水溶液滤过，备用，挥发油用β-环糊精包结，包结物低温干燥。
[0040] 剩余的酒大黄等其余四味，分别加水10倍量，煎煮3次，每次1小时，滤过，合并滤液和上述蒸馏后的水溶液，浓缩至相对密度为1.05～1.10（50℃），静置16小时，离心（2500转／分），取上清液浓缩成清膏，和上述醇提清膏混合后继续浓缩至相对密度为1.15～1.20（50℃）的清膏，取90%左右的清膏喷雾干燥，其余清膏继续浓缩至1.35～
1.38（50℃）的稠膏，将喷雾干燥粉和适量酒大黄细粉、β-环糊精包结物混合后，加入适量糊精混匀，用9～12%混合粉量的55%～75%浓度的乙醇合坨、塑制成丸粒，再取剩余酒大黄细粉、适量稠膏将丸滚圆，干燥，用剩余稠膏、适量滑石粉和活性炭包衣，虫白蜡打光，制成1000丸，即得。
[0041] 上述方法制得的浓缩丸（以下称浓缩丸）对乳腺体积和乳腺重量的影响(结果见表1)
[0042] 由表1可见，模型组家兔乳腺增生，乳腺体积明显增大，乳腺重量明显增加：与模型组比较，浓缩丸4g生药／kg、2g生药／kg剂量组家兔乳腺体积均明显减小(P
[0043] 表 1． 浓 缩 丸 对 乳 腺 体 积 和 乳 腺 重 量 的 影 响（±SD，n=8)
[0044]
[0045] 注：与模型组比较*p
[0046] 1．浓缩丸对乳腺组织影响的镜下观察
[0047] 家兔乳腺组织镜下观察：正常对照组家兔乳腺无增生性病变，小叶不明显，腺泡极少，脂肪和结缔组织较多，腺导管腔无扩张，处于静息期状态；模型组家兔乳腺增生呈弥漫性，乳腺腺泡和小叶数目显著增加，腺泡腔和腺导管腔明显扩张，腺泡腔内含分泌物及脱落的细胞，间质减少(见表2)。浓缩丸4g生药／kg、2g生药／kg剂量组及乳疾灵颗粒组乳腺组织上述变化均有明显改善，浓缩丸lg生药／kg剂量组乳腺组织上述变化无明显改善(见表3)。与模型组比较，浓缩丸4g生药／kg、2g生药／kg剂量组乳腺小叶数、乳腺腺泡数均明显减少(P
[0049]
[0050] 注：与模型组比较*p<0.05，**p<0.01
[0051] 实施例二：治疗乳腺增生病的浓缩丸剂的检测方法包括以下步骤，具体为：
[0052] a、性状 ：按大生产样品的实际状态描述为本品为黑色炭衣浓缩丸，丸芯为黑褐色；气芳香，味微咸苦。
[0053] 、浸出物检查为：取重量差异项下的本品约4g，研细，精密称定，置锥形瓶中，加甲醇l00ml，密塞，称定重量，置水浴上回流1小时，放置至室温，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液50ml，蒸干，残渣加l0％氢氧化钠溶液5ml使溶解，并转移至分液漏斗中，加水25ml洗涤蒸发皿，洗液并入同一分液漏斗中，摇匀，用水饱和的正丁醇提取4次，每次30ml，合并正丁醇提取液，加水洗涤2次，每次40ml，弃去水液，正丁醇液置已干燥至恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥3小时，置干燥器中冷却30分钟，迅速精密称定重量，计算，即得。本品含正丁醇浸出物均大于1.2％。
[0054] 、鉴别（1）柴胡的薄层色谱鉴别
[0055] 对照品的制备：取柴胡皂苷a对照品（购自中国药品生物制品鉴定所，批号为：110777-200406），加甲醇制成每lml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。取柴胡对照药材
0.5g（购自中国药品生物制品鉴定所，批号为：120992-200705），加甲醇20ml超声处理20分钟，滤过，滤液浓缩至约5ml，作为对照药材溶液。
[0056] 供试品的制备：取浸出物检查项下的正丁醇浸出物，加甲醇5ml使溶解，作为供试品溶液。
[0057] 照薄层色谱法（中国药典2005年版一部附录Ⅵ B）试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-乙醇-水（8:2:1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％对二甲氨基苯甲醛的40％硫酸溶液，在60℃加热至斑点显色清晰，置日光及紫外光灯（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点或荧光斑点。
[0058] （2）香附的薄层色谱鉴别
[0059] 对照品的制备：取α-香附酮对照品（购自中国药品生物制品鉴定所，批号为：110748-200608），加乙酸乙酯制成每1m1含lmg的溶液作为对照品溶液。
[0060] 供试品的制备：取本品l0g，研细，置园底烧瓶中，加水250ml，连接挥发油测定器与回流冷凝管（自测定器上端加水使充满刻度），再加入2ml乙酸乙酯，回流10分钟，放置至室温，取乙酸乙酯层作为供试品溶液。
[0061] 照薄层色谱法（中国药典2005年版一部附录ⅥB）试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-冰醋酸（92:5:5）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（254 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；喷以二硝基苯肼试液，放置片刻，斑点渐变为橙红色。
[0062] （3）大黄的薄层色谱鉴别
[0063] 对照品的制备：取大黄酸对照品（购自中国药品生物制品鉴定所，批号为：110757-200206），加甲醇制成每1m1含1mg的溶液，作为对照品溶液。取大黄对照药材（购自中国药品生物制品鉴定所，批号为：121249-200402）0.1g，加甲醇20m1，超声处理15分钟，滤过，取滤液5m1，蒸干，残渣加水10ml使溶解，再加盐酸1ml，加热回流30分钟，立即冷却，用乙醚分2次振摇提取，每次20m1，合并乙醚液，蒸干，残渣加三氯甲烷1m1使溶解，作为成对照药材溶液。
[0064] 供试品的制备：取本品0.3g，研细，加甲醇20m1，超声处理15分钟，滤过，取滤液5m1，蒸干，残渣加水10ml使溶解，再加盐酸1ml，加热回流30分钟，立即冷却，用乙醚分2次振摇提取，每次20m1，合并乙醚液，蒸干，残渣加三氯甲烷1m1使溶解，作为供试品溶液。
[0065] 照薄层色谱法（中国药典2005年版一部附录ⅥB）试验，吸取上述三种溶液各5μ1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（30～60℃）-甲酸乙酯-甲酸（15:5:1）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的五个橙黄色荧光主斑点；在与对照品色谱相应的位置上，显相同的橙黄色荧光斑点，置氨蒸气中熏后，斑点变为红色。
[0066] （4）青皮的薄层色谱鉴别
[0067] 对照品的制备：取橙皮苷对照品（购自中国药品生物制品鉴定所，批号为：110721-200613），加甲醇制成饱和溶液，作为对照品溶液。
[0068] 供试品的制备：取本品2g，研细，加甲醇20ml，加热回流20分钟，滤过，取滤液10ml，蒸干，残渣加水2ml使溶解，通过D101大孔吸附树脂柱（内径1.5cm，长9cm，柱上端加
1g中性氧化铝），先以水100ml洗脱，弃去，再以2％吡啶甲醇50m1洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。
[0069] 照薄层色谱法（中国药典2005年版一部附录ⅥB）试验，吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一用硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-水（100:27:13）为展开剂，展至约3cm，取出，晾干，再以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水（20:10:1:1）的上层溶液为展开剂，展至约8cm，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
[0070] （5）浙贝母的薄层色谱鉴别
[0071] 对照品的制备：取贝母素甲对照品（购自中国药品生物制品鉴定所，批号为：110750-200608），加乙醇制成每lml含2mg的溶液，作为对照品溶液。
[0072] 供试品的制备：取本品10g，研细，加浓氨试液2ml与三氯甲烷50m1，放置过夜，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇lml使溶解，拌入少许中性氧化铝，水浴上拌匀干燥，加于中性氧化铝柱（100-200目，2g，内径约15mm）上，用乙醇50ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加乙醇lml使溶解，作为供试品溶液。
[0073] 照薄层色谱法（中国药典2005年版一部附录ⅥB）试验，吸取对照品溶液2μ1、供试品溶液10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液（17:2:1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
[0074] （6）白芍的薄层色谱鉴别
[0075] 对照品的制备：取芍药苷对照品（购自中国药品生物制品鉴定所，批号为：110736-200833），加乙醇制成每lml含lmg的溶液，作为对照品溶液。
[0076] 供试品的制备：取本品2g，研细，加甲醇20ml，加热回流20分钟，滤过，取滤液l0ml，蒸干，残渣加水2ml使溶解，通过D101大孔吸附树脂柱（内径1.5cm，长9cm，柱上端加lg中性氧化铝），先以水l00ml洗脱，弃去，再以2％吡啶甲醇50ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇lml使溶解，作为供试品溶液。
[0077] 照薄层色谱法（中国药典2005年版一部附录ⅥB）试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（40:5:10:0.2）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
[0078] d、丸剂常规检查： 本品为浓缩丸，按中国药典附录ⅠA丸剂中的浓缩丸项下的有关规定进行检测，包括重量差异、装量差异、水分、溶散时限、活螨、细菌数、霉菌和酵母菌、大肠埃希菌、大肠菌群、沙门菌等检验，结果各项均符合药典规定。
[0079] 、含量测定
[0080] （1）仪器与试药
[0081] 仪器：岛津高效液相色谱仪（LC-20AT溶剂输送泵、SPD-10A紫外检测器、N-2000色谱工作站；岛津CTO-10ASVP柱温箱）。
[0082] 试药：甲醇为色谱纯，超纯水，其余试剂均为分析纯，对照品（芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚为中国药品生物制品检定所提供，供含量测定用，批号：110795-200806、110757-200206、110756-200110、110796-200716、110758-200611。
[0083] （2）色谱条件
[0084] 色谱柱：Phenomenex Gemini 5μ C18 110A （250×4.60mm 5 micron）；柱温：35℃；流动相：甲醇-水-冰醋酸（75:25:1）；流速：1.0 ml/min；检测波长254nm。进样量
5μ1。在此色谱条件下，对照品色谱峰与相邻峰达到基线分离，分离度大于1.5，理论板数按大黄素峰计算应不低于3000。
[0085] （3）对照品溶液的制备
[0086] 精密称取芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚对照品适量，加甲醇分别制成每lml含大黄酸、大黄素、大黄酚各150μg，芦荟大黄素、大黄素甲醚各75μg的溶液；分别精密量取上述对照品溶液各2ml，混匀，即得（每lml含大黄酸、大黄素、大黄酚各30μg，芦荟大黄素、大黄素甲醚各15μg）。
[0087] （4）供试品溶液的制备
[0088] 取重量差异项下的本品，研细，取约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，称定重量，加热回流30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10ml，置50ml烧瓶中，挥去甲醇，加水10ml，盐酸lml，加热回流30分钟，立即冷却，并转移至分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗涤容器，并入分液漏斗中，以三氯甲烷提取5次，每次30ml，合并三氯甲烷液，以水50ml洗涤一次，弃去水液，三氯甲烷液蒸干，残渣加甲醇定量转移至10ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，滤过，即得。
