取代四氢异喹啉化合物、其制备方法及用途

摘要

本发明公开了具有抗血栓活性的通式II化合物，其制备方法以及它们作为抗血栓剂的应用。采用大鼠颈动静脉旁路插管血栓模型上评价了通式II化合物的抗血栓活性，实验结果表明，本发明通式II化合物均具有优秀的抗血栓活性，临床上可作为抗血栓剂应用。

权利要求

1.通式II的化合物：

其中AA选自Ser、Val或Phe残基。

2.一种制备权利要求1所述通式II化合物的方法，包括：(1)按照常规方法制备N-端和侧链保护的Arg-Gly-Asp-Ser、Arg-Gly-Asp-Val和Arg-Gly-Asp-Phe 3种短肽；

(2)按照常规方法制备3S-6，7-二羟基-四氢异喹啉-3-羧酸及苄基化制备3S-6，7-二羟基-四氢异喹啉-3-羧酸苄酯；

(3)按照常规方法将N-端和侧链保护的Arg-Gly-Asp-Ser、Arg-Gly-Asp-Val和Arg-Gly-Asp-Phe 3种短肽分别连接到3S-6，7-二羟基-四氢异喹啉-3-羧酸苄酯的2位氮上、脱去所有保护基，得到通式II的化合物。

3.按照权利要求2的方法，其特征在于所述的3S-6，7-二羟基-四氢异喹啉-3-羧酸由左旋多巴与甲醛缩合制备得到。

4.一种治疗抗血栓药物组合物，由有效量的权利要求1所述的化合物和药学上可接受的载体或辅料组成。

5.权利要求1所述的化合物在制备抗血栓药物中的用途。

说明书

取代四氢异喹啉化合物、其制备方法及用途

[0001] 本发明是申请号为“200710100032.9”、申请日期是2007年6月4日、发明名称为“取代四氢异喹啉化合物、其制备方法及用途”的发明申请的分案申请。发明领域

[0002] 本发明涉及四氢异喹啉类化合物，尤其涉及取代的3S-6，7-二羟基-四氢异喹啉-3-羧酸的2位分别用Arg-Gly-Asp-Ser、Arg-Gly-Asp-Val和Arg-Gly-Asp-Phe 3种短肽修饰的化合物及其制备方法，本发明还涉及这些化合物作为抗血栓剂的应用，属于医药领域。

背景技术

[0003] 血管栓塞性疾病对心脑血管疾病的高死亡率负最重要的责任。血栓形成是血管栓塞性疾病发病的最重要的病因。目前临床使用的治疗急性血栓栓塞性疾病的链激酶、尿激酶和重组组织型纤溶酶原激活剂等药物普遍存在全身出血倾向和免疫原性反应，寻找安全有效的溶血栓药物是新药研究的热点之一。

[0004] Arg-Gly-Asp-Ser、Arg-Gly-Asp-Val及Arg-Gly-Asp-Phe是纤维蛋白原与血小板表面GP IIb/IIIa受体结合的关键序列，具有抗血栓活性。血小板聚集与Ca离子浓度有关。胞浆内Ca离子浓度升高，血小板激活并聚集。胞浆内Ca离子浓度降低，血小板抑制。四氢异喹啉类化合物大都具有钙拮抗和抑制血小板聚集活性。此外，四氢异喹啉分子中的苯环紫外发色团，方便药物代谢研究。

[0005] 左旋多巴是人体内合成去甲肾上腺素及多巴胺等的前体物，能透过血脑屏障进入脑内，经多巴脱羧酶转化成重要的神经递质多巴胺。左旋多巴跨过血脑屏障在脑组织中脱羧形成多巴胺，脑组织多巴胺含量增高对治疗帕金森氏病有益。本发明的3S-6，7-二羟基-四氢异喹啉-3-羧酸是左旋多巴与甲醛经Pictet-Spengler环合反应得到。
3S-6，7-二羟基-四氢异喹啉-3-羧酸是四氢异喹啉的衍生物，除保留四氢异喹啉的活性外还应当具备跨过血脑屏障的性能。本发明把Arg-Gly-Asp-Ser、Arg-Gly-Asp-Val及Arg-Gly-Asp-Phe分别通过2位氮与3S-6，7-二羟基-四氢异喹啉-3-羧酸偶联，得到的化合物应当具有抗血栓活性尤其是抗脑血栓活性、GP IIb/IIIa受体定向性和紫外可检测性。

发明内容

[0006] 本发明目的之一是将3S-6，7-二羟基-四氢异喹啉-3-羧酸的2位别用Arg-Gly-Asp-Ser、Arg-Gly-Asp-Val和Arg-Gly-Asp-Phe 3种短肽修饰，得到一类具有优秀的抗脑血栓活性、GP IIb/IIIa受体定向性和紫外可检测性的化合物。

[0007] 本发明目的之一是通过以下技术方案来实现的：

[0008] 具有抗血栓活性的通式II化合物：

[0009]

[0010] 通式II

[0011] 其中AA选自Ser、Val或Phe残基。

[0012] 本发明目的之二是提供一种上述制备通式II化合物的方法。

[0013] 本发明目的之二是通过以下技术方案来实现的：

[0014] 将Arg-Gly-Asp-Ser、Arg-Gly-Asp-Val或Arg-Gly-Asp-Phe分别与3S-6，7-二羟基-四氢异喹啉-3-羧酸的2位氮偶联，得到通式II化合物。

[0015] 优选的，一种制备上述通式II化合物的方法，包括：

[0016] (1)按照常规方法制备N-端和侧链保护的Arg-Gly-Asp-Ser、Arg-Gly-Asp-Val和Arg-Gly-Asp-Phe 3种短肽；

[0017] (2)按照常规方法制备3S-6，7-二羟基-四氢异喹啉-3-羧酸及苄基化制备3S-6，7-二羟基-四氢异喹啉-3-羧酸苄酯

[0018] (3)按照常规方法将N-端和侧链保护的Arg-Gly-Asp-Ser、Arg-Gly-Asp-Val和Arg-Gly-Asp-Phe 3种短肽分别连接到3S-6，7-二羟基-四氢异喹啉-3-羧酸苄酯的2位氮上、脱去所有保护基，得到通式II的化合物IIa-c。

[0019] 上述制备方法中，3S-6，7-二羟基-四氢异喹啉-3-羧酸可通过由左旋多巴与甲醛缩合制备得到。

[0020] 本发明采用大鼠颈动静脉旁路插管血栓模型上评价了通式II的化合物的抗血栓活性，实验结果表明，本发明通式II的化合物具有优秀的抗血栓活性，可作为抗血栓剂应用。

附图说明

[0021] 图1通式II化合物的结构式。

[0022] 图2通式II化合物的制备路线图。

具体实施方式

[0023] 下面通过实施例对本发明作进一步说明。应当指出，这些实施例仅仅是本发明的例证，不应理解为对本发明的限制。

[0024] 实施例1 3S-1，2，3，4-四氢-6，7-二羟基-异喹啉-3-羧酸苄酯的制备[0025] 将0.492g L-多巴(2.5mmol)置50ml圆底烧瓶中，加入0.575g多聚磷酸和10ml苄醇。油浴85℃反应8小时后，TLC(展开剂氯仿∶甲醇＝10∶1)显示L-多巴消失，反应液冷却至室温并加入50ml乙醚，析出大量无色沉淀。倾去乙醚，得到的沉淀用乙醚洗3次。之后，得到的沉淀用10ml饱和碳酸氢钠和30ml乙酸乙酯溶解，分离乙酸乙酯层。水层用
10ml乙酸乙酯萃洗3次。合并的乙酸乙酯层用30ml饱和NaHCO3洗一次。减压浓缩，残留D
物用硅胶柱纯化，得627.9mg(84％)L-多巴苄酯。Mp 82-85℃，[α]20＝-72.6(c＝1.2，+
CH3Cl)；ESI-MS(m/z)289[M]。

[0026] 将0.717g(2.5mmol)多巴苄酯置于25ml圆底烧瓶中并加入0.5ml 30％的甲醛溶液。搅拌均匀之后，加入5ml 1N的盐酸溶液室温反应4小时。TLC(展开剂氯仿∶甲醇＝10∶1)显示多巴苄酯消失。冰浴下滴加饱和碳酸氢钠，当pH约5时有大量无色沉淀析出，过滤，得657mg(88％)3S-1，2，3，4-四氢-6，7-二羟基-异喹啉-3-羧酸苄酯。Mp D +145-148℃；[α]20＝-32.1(c＝1.1，CH3Cl)；ESI-MS(m/z)299[M+H]。

[0027] 实施例2Boc-Arg(Tos)-Gly-Asp(OcHex)-Ser(Bzl)-OBzl的制备

[0028] 1)制备Boc-Ser(Bzl)-OBzl

[0029] 将738mg(2.5mmol)Boc-Ser(Bzl)溶于10ml无水乙醇，加入407mg(1.25mmol)Cs2CO3，室温反应15分钟，TLC显示原料点消失。减压浓缩除去溶剂，得对应的铯盐。将得到的铯盐先溶于2ml无水DMF，再往里加0.3ml(2.5mmol)溴苄。反应混合物于50-55℃搅拌16h，TLC(展开剂氯仿∶甲醇＝10∶1)显示Boc-Ser(Bzl)的铯盐消失。反应混合物减压浓缩至干，残留物用乙酸乙酯溶解，滤除不溶物。滤液依次用饱和碳酸氢钠水溶液和饱和氯化钠水溶液洗。分出的乙酸乙酯层用无水硫酸钠干燥、过滤、滤液37℃减压浓缩，得到+874mg(91％)标题化合物，为无色油状物。ESI-MS(m/e)386[M+H]。

[0030] 2)制备HCl·Ser(Bzl)-OBzl

[0031] 将963mg(2.5mmol)Boc-Ser(Bzl)-OBzl与10ml氯化氢-乙酸乙酯液(4N)的混合物室温搅拌3小时，TLC(展开剂氯仿∶甲醇＝10∶)显示Boc-Ser(Bzl)-OBzl消失。用水泵将反应液抽干，加入无水乙醚，再次用水泵将反应液抽干，重复5次。残留物用无水乙醚泡洗，塑料铲磨洗，将无水乙醚倾出，反复5次。得到的标题化合物直接用于下步反应。

[0032] 3)制备Boc-Asp(OcHex)-Ser(Bzl)-OBzl

[0033] 将789mg(2.5mmol)Boc-Asp(OcHex)溶于10ml无水THF，冰浴下往里加10ml含338mg(2.5mmol)HOBt和619mg(3mmol)DCC的无水THF溶液。反应混合物冰浴搅拌20分钟，得对应的活泼酯溶液，待用。

[0034] 将740mg(2.3mmol)HCl·Ser(Bzl)-OBzl和232mg(2.3mmol)N-甲基吗啉先与6ml无水THF混溶，然后与上面待用的活泼酯溶液混溶。得到的反应混合物室温反应24小时。TLC(展开剂氯仿∶甲醇＝10∶1)显示Boc-Asp(OcHex)消失。反应混合物减压浓缩至干，残留物用乙酸乙酯溶解，滤除不溶物。滤液依次用饱和碳酸氢钠水溶液和饱和氯化钠水溶液洗。分出的乙酸乙酯层用无水硫酸钠干燥、过滤、滤液37℃减压浓缩，得1.27g(95％)标题化合物，为无色油状物，ESI-MS(m/e)584[M+H]。

[0035] 4)制备HCl·Asp(OcHex)-Ser(Bzl)-OBzl

[0036] 将 1.457g(2.5mmol)Boc-Asp(OcHex)-Ser(Bzl)-OBzl 与 10ml 氯 化 氢 - 乙酸乙酯液(4N)的混合物室温搅拌3小时，TLC(展开剂氯仿∶甲醇＝10∶1)显示Boc-Asp(OcHex)-Ser(Bzl)-OBzl消失。用水泵将反应液抽干，加入无水乙醚，再次用水泵将反应液抽干，重复5次。残留物用无水乙醚泡洗，塑料铲磨洗，将无水乙醚倾出，反复5次。得到的标题化合物直接用于下步反应。

[0037] 5)制备Boc-Gly-Asp(OcHex)-Ser(Bzl)-OBzl

[0038] 将438mg(2.5mmol)Boc-Gly 溶 于6ml 无 水 THF，冰 浴 下 往 里 加10ml 含338mg(2.5mmol)HOBt和619mg(3mmol)DCC的无水THF溶液。反应混合物冰浴搅拌20分钟，得对应的活泼酯溶液，待用。

[0039] 将1.194g(2.3mmol)HCl·Asp(OBzl)-Ser(Bzl)-OBzl和232mg(2.3mmol)N-甲基吗啉先与6ml无水THF混溶，然后与上面待用的活泼酯溶液混溶。得到的反应混合物室温反应24小时。TLC(展开剂氯仿∶甲醇＝10∶1)显示HCl·Asp(OcHex)-Ser(Bzl)-OBzl消失。反应混合物减压浓缩至干，残留物用乙酸乙酯溶解，滤除不溶物。滤液依次用饱和碳酸氢钠水溶液和饱和氯化钠水溶液洗。分出的乙酸乙酯层用无水硫酸钠干燥、过滤、滤液37℃+减压浓缩，得1.443g(98％)标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/z)641[M+H]。

[0040] 6)制备HCl·Gly-Asp(OcHex)-Ser(Bzl)-OBzl

[0041] 将1.599g(2.5mmol)Boc-Gly-Asp(OcHex)-Ser(Bzl)-OBzl与15ml氯化氢 -乙酸乙酯液(4N)的混合物室温搅拌3小时，TLC(展开剂氯仿∶甲醇＝10∶1)显示Boc-Gly-Asp(OcHex)-Ser(Bzl)-OBzl消失。用水泵将反应液抽干，加入无水乙醚，再次用水泵将反应液抽干，重复5次。残留物用无水乙醚泡洗，塑料铲磨洗，将无水乙醚倾出，反复5次。得到的标题化合物直接用于下步反应。

[0042] 7)制备Boc-Arg(Tos)-Gly-Asp(OcHex)-Ser(Bzl)-OBzl

[0043] 将1.071g(2.5mmol)Boc-Arg(Tos)溶于10ml无水THF，冰浴下往里加10ml含338mg(2.5mmol)HOBt和619mg(3mmol)DCC的无水THF溶液。反应混合物冰浴搅拌20分钟，得对应的活泼酯溶液，待用。

[0044] 将 1.325g(2.3mmol)HCl·Gly-Asp(OcHex)-Ser(Bzl)-OBzl 和 232mg(2.3mmol)N-甲基吗啉先与6ml无水THF混溶，然后与上面待用的活泼酯溶液混溶。得到的反应混合物室温反应24小时。TLC(氯仿∶甲醇＝10∶1)显示HCl·Gly-Asp(OcHex)-Ser(Bzl)-OBzl消失。反应混合物减压浓缩至干，残留物用乙酸乙酯溶解，滤除不溶物。滤液依次用饱和碳酸氢钠水溶液和饱和氯化钠水溶液洗。分出的乙酸乙酯层用无水硫酸钠干燥、过滤、滤液D37℃减压浓缩，得2.144g(98％)标题化合物，为无色固体。Mp 87-89℃；[α] ＝-11.01(c+
＝0.1，CH3Cl)；ESI-MS(m/z)951[M+H]。

[0045] 实施例3Boc-Arg(Tos)-Gly-Asp(OcHex)-Val-OBzl的制备

[0046] 1)制备HCl·Val-OBzl

[0047] 将5.855g(50mmol)Val、55ml苯甲醇和11.5g多聚磷酸的悬浮液于90-95℃搅拌8h，使变澄清。将反应混合液倒入300ml(5％)硫酸液中，用乙醚萃取5次，分出水层。乙醚层用2％盐酸洗涤3次，合并的水相用NaHCO3固体调节pH 9。水相用乙醚萃取3次(100ml×3)，合并的乙醚层用无水Na2SO4干燥。过滤，往滤液里通HCl气体约20分钟。混+
浊的乙醚层过虑，滤集到3.034g(25％)标题化合物。ESI-MS(m/e)208[M+H]。

[0048] 2)制备Boc-Asp(OcHex)-Val-OBzl

[0049] 将789mg(2.5mmol)Boc-Asp(OcHex)溶于10ml无水THF，冰浴下往里加10ml含338mg(2.5mmol)HOBt和619mg(3mmol)DCC的无水THF溶液。反应混合物冰浴搅拌20分钟，得对应的活泼酯溶液，待用。

[0050] 将558mg(2.3mmol)HCl·Val-OBzl和232mg(2.3mmol)N-甲基吗啉先与10ml无水THF混溶，然后与上面待用的活泼酯溶液混溶。得到的反应混合物室温反应24小时。TLC(展开剂氯仿∶甲醇＝10∶1)显示HCl·Val-OBzl消失。反应混合物减压浓缩至干，残留物用乙酸乙酯溶解，滤除不溶物。滤液依次用饱和碳酸氢钠水溶液和饱和氯化钠水溶液洗。分出的乙酸乙酯层用无水硫酸钠干燥、过滤、滤液37℃减压浓缩，得1.11g(96％)标题化合物，为无色固体。

[0051] 3)制备HCl·Asp(OcHex)-Val-OBzl

[0052] 将 1.261g(2.5mmol)Boc-Asp(OcHex)-Val-OBzl 与 10ml 氯 化 氢 - 乙 酸乙酯液(4N)的混合物室温搅拌3小时，TLC(展开剂氯仿∶甲醇＝10∶1)显示Boc-Asp(OcHex)-Val-OBzl消失。用水泵将反应液抽干，加入无水乙醚，再次用水泵将反应液抽干，重复5次。残留物用无水乙醚泡洗，塑料铲磨洗，将无水乙醚倾出，反复5次。得到的标题化合物直接用于下步反应。

[0053] 4)制备Boc-Gly-Asp(OcHex)-Val-OBzl

[0054] 将438mg(2.5mmol)Boc-Gly 溶 于6ml 无 水 THF，冰 浴 下 往 里 加10ml 含338mg(2.5mmol)HOBt和619mg(3mmol)DCC的无水THF溶液。反应混合物冰浴搅拌20分钟，得对应的活泼酯溶液，待用。

[0055] 将1.014g(2.3mmol)HCl·Asp(OBzl)-Val-OBzl和232mg(2.3mmol)N-甲基吗啉先与10ml无水THF混溶，然后与上面待用的活泼酯溶液混溶。得到的反应混合物室温反应24小时。TLC(氯仿∶甲醇＝10∶1)显示HCl·Asp(OBzl)-Val-OBzl消失。反应混合物减压浓缩至干，残留物用乙酸乙酯溶解，滤除不溶物。滤液依次用饱和碳酸氢钠水溶液和饱和氯化钠水溶液洗。分出的乙酸乙酯层用无水硫酸钠干燥、过滤、滤液37℃减压浓缩，得+1.242g(95％)标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/z)584[M+Na]。

[0056] 5)制备HCl·Gly-Asp(OcHex)-Val-OBzl

[0057] 将 1.404g(2.5mmol)Boc-Gly-Asp(OcHex)-Val-OBzl 与 10ml 氯 化 氢 - 乙酸乙酯液(4N)的混合物室温搅拌3小时，TLC(展开剂氯仿∶甲醇＝10∶1)显示Boc-Gly-Asp(OcHex)-Val-OBzl消失。用水泵将反应液抽干，加入无水乙醚，再次用水泵将反应液抽干，重复5次。残留物用无水乙醚泡洗，塑料铲磨洗，将无水乙醚倾出，反复5次。得到的标题化合物直接用于下步反应。

[0058] 6)制备Boc-Arg(Tos)-Gly-Asp(OcHex)-Val-OBzl

[0059] 将1.071g(2.5mmol)Boc-Arg(Tos)溶于10ml无水THF，冰浴下往里加10ml含338mg(2.5mmol)HOBt和619mg(3mmol)DCC的无水THF溶液。反应混合物冰浴搅拌20分钟，得对应的活泼酯溶液，待用。

[0060] 将1.145g(2.3mmol)HCl·Gly-Asp(OcHex)-Val-OBzl和232mg(2.3mmol)N-甲基吗啉先与10ml无水THF混溶，然后与上面待用的活泼酯溶液混溶。得到的反应混合物室温反应24小时。TLC(氯仿∶甲醇＝10∶1)显示HCl·Gly-Asp(OcHex)-Val-OBzl消失。反应混合物减压浓缩至干，残留物用乙酸乙酯溶解，滤除不溶物。滤液依次用饱和碳酸氢钠水溶液和饱和氯化钠水溶液洗。分出的乙酸乙酯层用无水硫酸钠干燥、过滤、滤液37℃减压25
浓缩，得1.725g(86％)标题化合物，为无色固体。Mp 78-79℃；[α] D＝-16.1(c＝0.11，+
CHCl3)；ESI-MS(m/z)895[M+Na]。

[0061] 实施例4Boc-Arg(Tos)-Gly-Asp(OcHex)-Phe-OBzl的制备

[0062] 1)制备HCl·Phe-OBzl

[0063] 将10.85g(66mmol)Phe、74.6ml苯甲醇和14.93g多聚磷酸的悬浮液于90-95℃搅拌8h，使变澄清。将反应混合液倒入600ml(5％)硫酸液中，用乙醚萃取5次，分出水层。乙醚层用2％盐酸洗涤3次，合并的水相用NaHCO3固体调节pH 9。水相用乙醚萃取3次(100ml×3)，合并的乙醚层用无水Na2SO4干燥。过滤，往滤液里通HCl气体约20分钟。混+
浊的乙醚层过滤，滤集到5.641g(30％)标题化合物。ESI-MS(m/e)256[M+H]。

[0064] 2)制备Boc-Asp(OcHex)-Phe-OBzl

[0065] 将789mg(2.5mmol)Boc-Asp(OcHex)溶于10ml无水THF，冰浴下往里加10ml含338mg(2.5mmol)HOBt和619mg(3mmol)DCC的无水THF溶液。反应混合物冰浴搅拌20分钟，得对应的活泼酯溶液，待用。

[0066] 将668mg(2.3mmol)HCl·Phe-OBzl和232mg(2.3mmol)N-甲基吗啉先与6ml无水THF混溶，然后与上面待用的活泼酯溶液混溶。得到的反应混合物室温反应24小时。TLC(展开剂氯仿∶甲醇＝10∶1)显示HCl·Phe-OBzl消失。反应混合物减压浓缩至干，残留物用乙酸乙酯溶解，滤除不溶物。滤液依次用饱和碳酸氢钠水溶液和饱和氯化钠水溶液洗。分出的乙酸乙酯层用无水硫酸钠干燥、过滤、滤液37℃减压浓缩，得1.242g(98％)标题化合+物，为无色固体。ESI-MS(m/z)553[M+H]。

[0067] 3)制备HCl·Asp(OcHex)-Phe-OBzl

[0068] 将 1.381g(2.5mmol)Boc-Asp(OcHex)-Phe-OBzl 与 15ml 氯 化 氢 - 乙 酸乙酯液(4N)的混合物室温搅拌3小时，TLC(展开剂氯仿∶甲醇＝10∶1)显示Boc-Asp(OcHex)-Phe-OBzl消失。用水泵将反应液抽干，加入无水乙醚，再次用水泵将反应液抽干，重复5次。残留物用无水乙醚泡洗，塑料铲磨洗，将无水乙醚倾出，反复5次。得到的标题化合物直接用于下步反应。

[0069] 4)制备Boc-Gly-Asp(OcHex)-Phe-OBzl

[0070] 将438mg(2.5mmol)Boc-Gly 溶 于5ml 无 水 THF，冰 浴 下 往 里 加10ml 含338mg(2.5mmol)HOBt和619mg(3mmol)DCC的无水THF溶液。反应混合物冰浴搅拌20分钟，得对应的活泼酯溶液，待用。

[0071] 将1.124g(2.3mmol)HCl·Asp(OcHex)-Phe-OBzl和232mg(2.3mmol)N-甲基吗啉先与10ml无水THF混溶，然后与上面待用的活泼酯溶液混溶。得到的反应混合物室温反应24小时。TLC(展开剂氯仿∶甲醇＝10∶1)显示HCl·Asp(OcHex)-Phe-OBzl消失。反应混合物减压浓缩至干，残留物用乙酸乙酯溶解，滤除不溶物。滤液依次用饱和碳酸氢钠水溶液和饱和氯化钠水溶液洗。分出的乙酸乙酯层用无水硫酸钠干燥、过滤、滤液37℃减压浓+
缩，得1.275g(91％)标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/z)632[M+Na]。

[0072] 5)制备HCl·Gly-Asp(OcHex)-Phe-OBzl

[0073] 将 1.524g(2.5mmol)Boc-Gly-Asp(OcHex)-Phe-OBzl 与 15ml 氯 化 氢 - 乙酸乙酯液(4N)的混合物室温搅拌3小时，TLC(展开剂氯仿∶甲醇＝10∶1)显示Boc-Gly-Asp(OcHex)-Phe-OBzl消失。用水泵将反应液抽干，加入无水乙醚，再次用水泵将反应液抽干，重复5次。残留物用无水乙醚泡洗，塑料铲磨洗，将无水乙醚倾出，反复5次。得到的标题化合物直接用于下步反应。

[0074] 6)制备Boc-Arg(Tos)-Gly-Asp(OcHex)-Phe-OBzl

[0075] 将1.071g(2.5mmol)Boc Arg(Tos)溶于10ml无水THF，冰浴下往里加10ml含338mg(2.5mmol)HOBt和619mg(3mmol)DCC的无水THF溶液。反应混合物冰浴搅拌20分钟，得对应的活泼酯溶液，待用。

[0076] 将1.256g(2.3mmol)HCl·Gly-Asp(OcHex)-Phe-OBzl和232mg(2.3mmol)N-甲基吗啉先与10ml无水THF混溶，然后与上面待用的活泼酯溶液混溶。得到的反应混合物室温反应24小时。TLC(展开剂氯仿∶甲醇＝10∶1)显示HCl·Gly-Asp(OcHex)-Phe-OBzl消失。反应混合物减压浓缩至干，残留物用乙酸乙酯溶解，滤除不溶物。滤液依次用饱和碳酸氢钠水溶液和饱和氯化钠水溶液洗。分出的乙酸乙酯层用无水硫酸钠干燥、过滤、滤液37℃25
减压浓缩，得1.925g(91％)标题化合物，为无色固体。Mp 88-89℃；[α] D＝-10.8(c＝+
0.10，CHCl3)；ESI-MS(m/z)943[M+Na]。

[0077] 实施例53S-2-(Arg-Gly-Asp-Ser)-6，7-二羟基-1，2，3，4-四氢异喹啉-3-羧酸(IIa)的制备

[0078] 1)制备Boc-Arg(Tos)-Gly-Asp(OcHex)-Ser(Bzl)

[0079] 将2.375g(2.5mmol)Boc-Arg(Tos)-Gly-Asp(OcHex)-Ser(Bzl)-OBzl溶于20ml水和乙醇的混合液，再加入300mg Pd/C(5％)，减压排出反应瓶中的空气，通入氢气置换，反复置换5次后，通氢气室温搅拌24小时，TLC(展开剂氯仿∶甲醇＝1∶1)显示Boc-Arg(Tos)-Gly-Asp(OcHex)-Ser(Bzl)-OBzl消失。停止反应，滤除Pd/C，滤液减压浓缩除去溶剂。得1.892g(88％)标题化合物，为淡黄色固体。

[0080] 2)制备3S-2-[(Boc-Arg(Tos)-Gly-Asp(OcHex)-Ser(Bzl)]-6，7-二羟基-1，2，3，4-四氢异喹啉-3-羧酸苄酯

[0081] 将2.152g(2.5mmol)Boc-Arg(Tos)-Gly-Asp(OcHex)-Ser(Bzl)溶 于15ml 无 水THF，冰浴下往里加10ml含338mg(2.5mmol)HOBt和619mg(3mmol)DCC的无水THF溶液。

[0082] 反应混合物冰浴搅拌20分钟，得对应的活泼酯溶液，待用。

[0083] 将687.7mg(2.3mmol)3S-6，7-二羟基-1，2，3，4-四氢异喹啉-3-羧酸苄酯和232mg(2.3mmol)N-甲基吗啉先与10ml无水THF混溶，然后与上面待用的活泼酯溶液混溶。
得到的反应混合物室温反应24小时。TLC(展开剂氯仿∶甲醇＝10∶1)显示3S-6，7-二羟基-1，2，3，4-四氢异喹啉-3-羧酸苄酯消失。反应混合物减压浓缩至干，残留物用氯仿溶解，滤除不溶物。滤液依次用饱和碳酸氢钠水溶液和饱和氯化钠水溶液洗。分出的氯仿层用无水硫酸钠干燥、过滤、滤液37℃减压浓缩，硅胶柱纯化，得1.682g(59％)标题化合物，
25 +
为无色固体。Mp 101-103℃；[α] D＝-5.7(c＝0.12，CH3Cl)；ESI-MS(m/z)1140[M+H]。

[0084] 3)制备3S-2-(Arg-Gly-Asp-Ser)-6，7-二羟基-1，2，3，4-四氢异喹啉-3-羧酸[0085] 将 0.305g(0.25mmol)3S-2-[(Boc-Arg(Tos)-Gly-Asp(OcHex)-Ser(Bzl))-6，7-二羟基-1，2，3，4-四氢异喹啉-3-羧酸苄酯置于100ml圆底烧瓶，冰浴下加入2ml三氟乙酸后，滴加6ml三氟乙酸/三氟甲磺酸＝3∶1的混合液，冰浴下搅拌2小时后，加入
50ml无水乙醚，有无色沉淀析出，将乙醚溶液倾出，沉淀用无水乙醚洗10次，G-10柱纯化，D
得150mg(96％)标题化合物。Mp 150-154℃；[α] ＝-13.3(c＝0.10，CH3OH)；ESI-MS(m/+
z)626[M+H]。

[0086] 实施例63S-2-(Arg-Gly-Asp-Val)-6，7-二羟基-1，2，3，4-四氢异喹啉-3-羧酸(IIb)的制备

[0087] 1)制备Boc-Arg(Tos)-Gly-Asp(OcHex)-Val

[0088] 将2.180g(2.5mmol)Boc-Arg(Tos)-Gly-Asp(OcHex)-Val-OBzl溶于20ml水和乙醇的混合液，再加入300mg Pd/C(5％)，减压排出反应瓶中的空气，通入氢气置换，反复置换5次后，通氢气室温搅拌24小时，TLC(展开剂氯仿∶甲醇＝10∶1)显示Boc-Arg(Tos)-Gly-Asp(OcHex)-Val-OBzl消失。停止反应，滤除Pd/C，滤液减压浓缩除去溶剂。得1.642g(84％)标题化合物，为淡黄色固体。

[0089] 2)制备3S-2-[Boc-Arg(Tos)-Gly-Asp(OcHex)-Val]-6，7-二羟基-1，2，3，4-四氢异喹啉-3-羧酸苄酯

[0090] 将2.205g(2.5mmol)Boc-Arg(Tos)-Gly-Asp(OcHex)-Val溶于15ml无水THF，冰浴下往里加10ml含338mg(2.5mmol)HOBt和619mg(3.0mmol)DCC的无水THF溶液。反应混合物冰浴搅拌20分钟，得对应的活泼酯溶液，待用。

[0091] 将687.7mg(2.3mmol)3S-6，7-二羟基-1，2，3，4-四氢异喹啉-3-羧酸苄酯和232mg(2.3mmol)N-甲基吗啉先与10ml无水THF混溶，然后与上面待用的活泼酯溶液混溶。
得到的反应混合物室温反应24小时。TLC(展开剂氯仿∶甲醇＝10∶1)显示3S-6，7-二羟基-1，2，3，4-四氢异喹啉-3-羧酸苄酯消失。反应混合物减压浓缩至干，残留物用氯仿溶解，滤除不溶物。滤液依次用饱和碳酸氢钠水溶液和饱和氯化钠水溶液洗。分出的氯仿层用无水硫酸钠干燥、过滤、滤液37℃减压浓缩，硅胶柱纯化，得1.53g(53％)标题化合物，
25 +
为无色固体。Mp 123-125℃；[α] D＝-26.0(c＝0.11，CHCl3)；ESI-MS(m/z)1063[M+H]。

[0092] 3)备3S-2-(Arg-Gly-Asp-Val)-6，7-二羟基-1，2，3，4-四氢异喹啉-3-羧酸[0093] 将 0.2657g(2.5mmol)3S-2-[Boc-Arg(Tos)-Gly-Asp(OcHex)-Val]-6，7- 二 羟基-1，2，3，4-四氢异喹啉-3-羧酸苄酯置于100ml圆底烧瓶，冰浴下加入2ml三氟乙酸后，滴加6ml三氟乙酸/三氟甲磺酸＝3∶1的混合液，冰浴下搅拌2小时后，加入50ml无水乙醚，有无色沉淀析出，将乙醚溶液倾出，沉淀用无水乙醚洗10次，G-10柱纯化，得D +140.14mg(88％)。Mp 190-192℃；[α] ＝-5.2(c＝0.11，CH3OH)；ESI-MS(m/z)637[M+H]。

[0094] 实施例73S-2-(Arg-Gly-Asp-Phe)-6，7-二羟基-1，2，3，4-四氢异喹啉-3-羧酸(IIc)的制备

[0095] 1)制备Boc-Arg(Tos)-Gly-Asp(OcHex)-Phe

[0096] 将2.299g(2.5mmol)Boc-Arg(Tos)-Gly-Asp(OcHex)-Phe-OBzl溶 于20ml 水 和乙醇的混合液，再加入300mg Pd/C(5％)，减压排出反应瓶中的空气，通入氢气置换，反复置换5次后，通氢气室温搅拌24小时，TLC(展开剂氯仿∶甲醇＝1∶1)显示Boc-Arg(Tos)-Gly-Asp(OcHex)-Phe-OBzl消失。停止反应，滤除Pd/C，滤液减压浓缩除去溶剂。得1.847g(89％)标题化合物，为淡黄色固体。

[0097] 2)制备3S-2-[Boc-Arg(Tos)-Gly-Asp(OcHex)-Phe]-6，7-二羟基-1，2，3，4-四氢异喹啉-3-羧酸苄酯

[0098] 将2.050g(2.5mmol)Boc-Arg(Tos)-Gly-Asp(OcHex)-Phe溶于15ml无水THF，冰浴下往里加10ml含338mg(2.5mmol)HOBt和619mg(3mmol)DCC的无水THF溶液。反应混合物冰浴搅拌20分钟，得对应的活泼酯溶液，待用。

[0099] 将687.7mg(2.3mmol)3S-6，7-二羟基-1，2，3，4-四氢异喹啉-3-羧酸苄酯和232mg(2.3mmol)N-甲基吗啉先与10ml无水THF混溶，然后与上面待用的活泼酯溶液混溶。
得到的反应混合物室温反应24小时。TLC(展开剂氯仿∶甲醇＝10∶1)显示3S-6，7-二羟基-1，2，3，4-四氢异喹啉-3-羧酸苄酯消失。反应混合物减压浓缩至干，残留物用氯仿溶解，滤除不溶物。滤液依次用饱和碳酸氢钠水溶液和饱和氯化钠水溶液洗。分出的氯仿层用无水硫酸钠干燥、过滤、滤液37℃减压浓缩，硅胶柱纯化，得1.26g(46％)标题化合物，
25 +
为无色固体。Mp 110-112℃；[α] D＝-14.9(c＝0.12，CHCl3)；ESI-MS(m/z)1112[M+H]。

[0100] 3)制备3S-2-(Arg-Gly-Asp-Phe)-6，7-二羟基-1，2，3，4-四氢异喹啉-3-羧酸[0101] 将 0.2778g(2.5mmol)3S-2-[Boc-Arg(Tos)-Gly-Asp(OcHex)-Phe]-6，7- 二 羟基-1，2，3，4-四氢异喹啉-3-羧酸苄酯置于100ml圆底烧瓶，冰浴下加入2ml三氟乙酸后，滴加6ml三氟乙酸/三氟甲磺酸＝3∶1的混合液，冰浴下搅拌2小时后，加入50ml无水乙醚，有无色沉淀析出，将乙醚溶液倾出，沉淀用无水乙醚洗10次，G-10柱纯化，得25
0.1428g(84％)标题化合物。Mp 174-176℃；[α] D＝-4.0(c＝0.10，CH3OH)；ESI-MS(m/+
z)685[M+H]。

[0102] 试验例1本发明通式IIa-c的抗血栓活性测定

[0103] 雄性SD大鼠(体重200g至260g)腹腔注射戊巴比妥钠溶液进行麻醉，分离出右颈总动脉和左颈外静脉，在聚乙烯管的中段放入事先称重的6cm长的丝线，以肝素生理盐水(50IU/kg)充满聚乙烯管，将一端插入左颈外静脉，用注射器将生理盐水(3ml/kg)，阿司匹林的生理盐水溶液(20mg/kg)，分别将本发明实施例所制备的IIa、IIb和IIc(5μmol/kg)的生理盐水溶液从另一端缓慢注入聚乙烯管中，此时管中原有的肝素已被推入左颈外静脉中，管内大部分为被测化合物溶液，然后将注射药物端插入右颈总动脉。血液从右颈总动脉经聚乙烯管流向左颈外静脉，15min后中断血流，取出丝线称重，总重量减去丝线重量即为血栓湿重，统计各组的血栓湿重的均值和标准差(X±S)，并作t检验。

[0104] 结果表明，6，7-二羟基-1，2，3，4-四氢异喹啉羧酸的3位引入RGD肽明显增强抗血栓活性(表1)。

[0105] 表1IIa-c的抗血栓活性

[0106]

[0107] n＝10，阿司匹林的剂量＝20mg/kg；RGDS，RGDV，RGDF，异喹啉羧酸和IIa-c的剂量＝5μmol/kg；a)与生理盐水组比p＜0.01；b)与生理盐水，异喹啉羧酸，RGDS，RGDV和RGDF组比p＜0.01。