一种连翘药材的鉴别方法

摘要

本发明一种药材的质量控制方法公开了一种区分不同炮制方法的连翘药材的鉴别方法，该鉴别方法采用高效液相色谱法测定，以连翘酯苷对照品、芦丁对照品为对照，通过测定连翘酯苷峰面积、芦丁峰面积，计算连翘酯苷峰面积与芦丁峰面积比值R，大于R值的为炮制合格的连翘，小于R值的为炮制不合格的连翘。

权利要求

1.一种连翘药材的鉴别方法，其特征在于该鉴别方法采用特定高效液相色谱法测定，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-0.1％冰醋酸水溶液或者甲醇-乙腈-0.1％冰醋酸水溶液为流动相，其中，甲醇的比例为25％-40％；乙腈的比例为0-10％，0.1％冰醋酸水溶液的比例为60％-75％；检测波长为278nm；以连翘酯苷对照品、芦丁对照品为对照，通过测定连翘酯苷峰面积、芦丁峰面积，计算连翘酯苷峰面积与芦丁峰面积比值R，大于R值的为炮制合格的青翘，小于R值的为老翘或炮制不合格的青翘。

2.如权利要求1所述的鉴别方法，其特征在于该鉴别方法中R值为18。

3.如权利要求1或2所述的鉴别方法，其特征在于该鉴别方法中对照品溶液的制备为取连翘酯苷对照品、芦丁对照品适量，加30-100％甲醇分别溶解，即得。

4.如权利要求1或2所述的鉴别方法，其特征在于该鉴别方法中供试品溶液的制备为分别取不同炮制方法的连翘药材粉碎，取药粉1g，加甲醇30-50ml，超声提取，过滤，即得。

5.如权利要求1或2所述的鉴别方法，其特征在于该鉴别方法中：

色谱条件与系统适用性实验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-0.1％冰醋酸水溶液为流动相，其洗脱条件如下： 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5-20ul，注入液相色谱仪，测定；计算不同供试品色谱图中连翘酯苷峰面积与芦丁峰面积比值R。

6.如权利要求1或2所述的鉴别方法，其特征在于该鉴别方法中：

色谱条件与系统适用性实验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-乙腈-0.1％冰醋酸水溶液为流动相，其洗脱条件如下： 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5-20ul，注入液相色谱仪，测定； 计算不同供试品色谱图中连翘酯苷峰面积与芦丁峰面积比值R。

7.如权利要求5或6所述的鉴别方法，该鉴别方法中R值大于18的连翘药材为汽蒸青翘、水煮青翘或能作为原料使用的连翘药材，R值小于18的为老翘、生晒青翘或其他炮制方法所得的不能作为原料使用的连翘药材。

说明书

一种连翘药材的鉴别方法

技术领域

[0001] 本发明涉及一种药材的质量控制方法，特别涉及一种连翘药材的鉴别方法。 背景技术

[0002] 连翘为木犀科连翘属植物连翘[Forsythiasu spensor(Thunb)va hl]的干燥果实。连翘呈长卵形至卵形，长1.5-2厘米，直径0.5-1.3厘米。表面有不规则的纵皱纹及多数凸起的小斑点，两面各有一条明显的纵沟，顶端锐尖，基部有小果梗或已脱落。连翘分青翘和老翘(黄翘)，青翘和老翘因采收时间和加工方法不同而成。青翘为白露前8-9天采收尚未成熟的青绿果实，用沸水煮片刻或用笼蒸30分钟后，取出晒干成青翘。青翘多不开裂，表面绿褐色，凸起的灰白色小斑点较少，质硬，种子多数，黄绿色、细长一侧有翅。老翘为10月霜降后果实成熟，果皮变黄褐色，果实裂开时摘下，除去种子为老翘。老翘自顶端开裂或裂成两瓣，表面黄棕色或红棕色，内表面多为淡黄棕色，平滑，具一纵隔。质脆，种子棕色，多已脱落。

[0003] 连翘有抗菌、强心、利尿、镇吐等药理作用，常用连翘治疗急性风热感冒、痈肿疮毒、淋巴结结核、尿路感染等症。连翘是双黄连制剂、清热解毒口服液、连草解热口服液、银翘解毒冲剂等中药制剂的主要原料。

[0004] 在双黄连制剂中，三味原料药连翘、金银花、黄芩的比例关系是2∶1∶1，连翘的用量最大，而且方中连翘能清解肺经之郁热，又能轻宣肺卫之风热，具有“清热解毒透邪”(《中药学》)之功，为君药，所以保证质量稳定的连翘原料是保证双黄连制剂质量稳定的前提和基础。

[0005] 双黄连制剂包括颗粒剂、含片、分散片、咀嚼片、泡腾片、口服液、滴眼剂、气雾剂、胶囊剂、软胶囊剂、栓剂、注射剂和粉针剂。2009年国家食品药品监督管理局开展中药注射剂安全性再评价工作，目的是控制已上市中药注射剂的安全风险、确保公众用药安全有效，其中明确要求对原料的质量控制，包括固定药材的基原、药用部位、产地、采收期、产地加工、贮存条件，建立相对稳定的药材基地，建立可控性强的注射剂用原料质量标准，完善质量控制项目等。

[0006] 本发明正是在2009年开展注射剂安全性再评价工作的背景下，对不同炮制过程的连翘药材进行鉴别方法的研究，第一次突破性的提出一种新颖、明确、可行的鉴别区分不同炮制过程的青翘、老翘的质量控制方法和控制标准，从而建立可控性强的双黄连注射剂的原料质量标准，完善了连翘药材的质量控制项目，保证连翘药材的质量稳定，从而降低中药双黄连注射剂的安全风险，保证双黄连注射剂的质量稳定、可控。

发明内容

[0007] 本发明目的在于提供一种区分不同炮制方法的青翘、老翘的鉴别方法。 [0008] 本发明鉴别方法如下：

[0009] 采用高效液相色谱法测定，以连翘酯苷对照品、芦丁对照品为对照，通过测定连翘酯苷峰面积、芦丁峰面积，计算连翘酯苷峰面积与芦丁峰面积比值R，以R值为限，大于R值的为炮制合格的青翘，小于R值的为老翘或炮制不合格的青翘。

[0010] 本发明R值确定为18，R值优选为20。

[0011] 本发明具体优选的鉴别方法如下：

[0012] 色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-冰醋酸水溶液，或甲醇-乙腈-冰醋酸水溶液为流动相，进行洗脱；检测波长为278nm。 [0013] 对照品溶液的制备取连翘酯苷对照品、芦丁对照品适量，加30-100％甲醇分别溶解，即得。

[0014] 供试品溶液的制备分别取汽蒸青翘、水煮青翘、生晒青翘和老翘药材粉碎，取药粉1g，加甲醇30-50ml，超声提取，过滤，即得。

[0015] 测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5～20μl，注入液相色谱仪，测定。

[0016] 计算不同供试品色谱图中连翘酯苷峰面积与芦丁峰面积比值R。

[0017] 本发明洗脱是梯度或等度洗脱，洗脱的时间是30分钟-90分钟，优选30分钟-50分钟；流动相中甲醇的比例是15％-45％，优选25％-40％；乙腈的比例是0-20％，优选是0-10％；冰醋酸水溶液的比例是55％-85％，优选60％-75％；冰醋酸水溶液的浓度大于
0.1％。

[0018] 本发明定义大于R值的为汽蒸青翘、水煮青翘，或其他炮制方法所得合格规定的青翘，小于R值的为老翘、生晒青翘或其他炮制方法不合格的青翘。

[0019] 本发明的鉴别方法能够有效的区分不同炮制方法的水煮、汽蒸的青翘，生晒的青翘和老翘，从而达到控制产品质量的目的。该鉴别方法主要是通过发现特定、灵敏的R值，能够准确的分离出不同炮制方法的连翘药材。同时，本发明通过大量的实验证实当R值大于一定区间的数值时，所鉴别出的中药炮制药材是合格的，而低于一定区间数值的R值的药材原料都是不符合中药炮制方法要求的，尤其是不符合中药双黄连注射剂的原料要求的，因此通过本发明的鉴别方法，能够保证连翘药材的质量稳定，从而降低中药双黄连注射剂的安全风险，保证双黄连注射剂的质量稳定、可控。

[0020] 本发明的鉴别方法分离度、稳定性、重复性和回收率均较好，分离度R＞1.0；稳定性试验 中，连翘酯苷峰面积RSD为0.39％，芦丁峰面积RSD为2.5％，连翘苷峰面积RSD为1.3％；重复性试验中，连翘酯苷峰面积RSD为0.98％，芦丁峰面积RSD为0.64％，连翘苷峰面积RSD为1.4％；水煮或汽蒸的青翘的连翘酯苷峰面积与芦丁峰面积之比，与老翘的的连翘酯苷峰面积与芦丁峰面积之比，P小于0.05，有统计学意义。

附图说明

[0021] 图1连翘酯苷对照品HPLC图。

[0022] 图2芦丁对照品HPLC图。

[0023] 图3青翘(批号Y070601)HPLC图，1号峰为连翘酯苷峰，2号峰为芦丁峰。 [0024] 图4老翘(批号Y091004)HPLC图，1号峰为连翘酯苷峰，2号峰为芦丁峰。 [0025] 实验例1：流动相考察实验

[0026] (1)流动相考察了甲醇-0.1％冰醋酸水溶液见下表1：

[0027]

[0028] (2)流动相考察了甲醇-乙腈-0.1％冰醋酸水溶液见下表2：

[0029]

[0030] (3)流动相考察了甲醇-乙腈-0.1％冰醋酸水溶液见下表3：

[0031]

[0032] 结果表明条件(1)、(2)均能使连翘酯苷、芦丁、连翘苷达到基线分离，但本发明技术方案选用的流动相色谱峰分离度更大，条件(3)连翘酯苷不能达到基线分离； [0033] 实验例2：提取溶剂体积的考察实验

[0034] 取粉碎过40目筛的连翘药粉1g，三份，分别置100ml锥形瓶中，分别加入30ml、40ml、50ml甲醇(样1，样2，样3)，称重，超声1h后放冷，称重，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密吸取续滤液，按上述色谱条件测定，记录色谱图，结果见表4、5。 [0035] 表4提取溶剂考察结果

[0036]

[0037] 表5提取溶剂考察结果分析

[0038]

[0039] 根据上述实验结果，本发明优选40ml甲醇提取。

[0040] 实验例3：提取时间的考察实验

[0041] 取粉碎过40目筛的连翘药粉1g，三份，分别置100ml锥形瓶中，加入40ml甲醇分别超声30min，40min，50min后放冷(样1，样2，样3)，称重，用甲醇补足减失的重量，滤过，精密吸取续滤液，按上述色谱条件测定，记录色谱图，结果见表6。

[0042] 表6提取时间考察结果

[0043]

[0044] 根据上述实验结果，本发明优选超声时间为40min.

[0045] 下面实施例用于进一步说明但不限于本发明。

[0046] 实施例1：青翘的液相鉴别

[0047] 仪器：美国安捷伦1100高效液相色谱仪/美国安捷伦1200高效液相色谱仪(VWD检测器、ChemStation for LC色谱工作站)；Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18色谱柱(4.6×250mm，C184.6×10mm保护柱)；梅特勒-托利多AB135-S电子天平。

[0048] 试药：连翘苷对照品(中国药品生物制品检定所批号：110821-200711)，芦丁对照品(中国药品生物制品检定所批号：100080-200707)，连翘酯苷化学对照品(上海融合医药科技发展有限公司提供，批号：090923)；乙腈(色谱纯)，甲醇(色谱纯)，冰醋酸(分析纯)，水(自制超纯水)。

[0049] 色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.1％冰醋酸水溶液，或甲醇-乙腈-0.1％冰醋酸水溶液为流动相，进行梯度洗脱；检测波长为278nm；连翘酯苷，芦丁，连翘苷分离度均大于1。

[0050] 对照品溶液的制备取连翘酯苷对照品，芦丁对照品适量，加30-70％甲醇分别溶解制成每1ml含0.05mg/ml的溶液，即得。

[0051] 供试品溶液的制备取青翘药材粉碎，烘干，取药粉1g，加甲醇40ml，称重，超声40min后放冷，称重，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，即得。

[0052] 测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定。 [0053] 计算不同样品中连翘酯苷峰面积与芦丁峰面积之比，青翘的连翘酯苷峰面积与芦丁峰面积之比应不得小于18，结果见表7、图3[青翘(批号Y070601)HPLC色谱图]。 [0054] 表7青翘样品测定结果

[0055]积
面
丁
芦
/
积
面苷 0.9 1.6 6.5 8.7 4.1 2.4 5.2 6.3 5.1 8.2 7.
酯 1 2 2 2 2 2 2 2 2 1 8
积
面 2. 2. 9. 1. 3. 7. 8. 4. 2.
丁芦 903 713 562 712 191 233 542 333 403 821 141

积
面

苷 8 9 9 1 8 1 9
酯翘 878 662 .397 .130 .601 .940 .325 588 .155 836 .722
连 5 8 6 6 4 8 5 7 6 1 1
法
方

制 干 干 干 干 干 干 干 干 干
炮 烘 烘 烘 烘 烘 烘 烘 烘 烘
品 炕 蒸 蒸 蒸 蒸 煮 蒸 蒸 煮 晒 晒
样 火 气 气 气 气 水 气 气 水 生 生
号
批 201 203 303 106 109 200 100 101 105 200 201
品样 070Y 070Y 070Y 070Y 070Y 170Y 190Y 080Y 080Y 190Y 070Y

名
品 翘 翘 翘 翘 翘 翘 翘 翘 翘 翘 翘
样 青 青 青 青 青 青 青 青 青 青 青

号 0 1
序 1 2 3 4 5 6 7 8 9 1 1

[0056] 实施例2：老翘的液相鉴别

[0057] 按照实施例1方法测定老翘样品，记录连翘酯苷峰面积、芦丁峰面积，计算样品中连翘酯苷与芦丁的面积比，结果见表8、图4[老翘(批号Y091004)HPLC色谱图]。 [0058] 表8老翘样品测定结果

[0059]样品名 样品批号 样品炮制方法 连翘酯苷面积 芦丁面积 酯苷面积/芦丁面积
1 老翘 Y091014 晒干 469.2 41.7 11.3
2 老翘 Y091015 晒干 509.4 44 11.6
3 老翘 Y091003 晒干 281.1 38.4 7.3
4 老翘 Y091016 晒干 137.6 72.5 1.9
5 老翘 Y091004 晒干 413.1 72.6 5.7
6 老翘 Y091017 晒干 26.9 0 -
7 老翘 Y091005 晒干 467.9 48.8 9.6
8 老翘 Y091018 晒干 1069.8 72.5 14.8
9 老翘 Y091006 晒干 249.9 42.1 5.9
10 老翘 Y091007 晒干 76 30.6 2.5
11 老翘 Y091008 晒干 381.4 58.1 6.6
12 老翘 Y091009 晒干 215.8 57.3 3.8
13 老翘 Y091010 晒干 134.9 42 3.2
14 老翘 Y091011 晒干 225.5 42.1 5.4
15 老翘 Y091012 晒干 191.9 29.3 6.5
16 老翘 Y091013 晒干 146 47.2 3.1