用于治疗脂肪肝的松花粉提取物及其制备方法、用途

摘要

用于治疗脂肪肝的松花粉水提取物及其制备方法、用途，涉及从裸子植物松花粉中提取有效物质的工艺技术领域。先将松花粉除杂、破壁，再以常压常温水浸泡后的超声波提取，离心除去固体杂质，取水溶液，最后，在1～5℃的环境温度下分离出分子量为3000D以下的裸子植物松花粉水提取物，即为用于治疗脂肪肝的裸子植物松花粉水提取物，可作为儿童一般保健使用，预防脂肪肝的发生。可将松花粉水提取物用于制备治疗脂肪肝口服制剂，吸收效果好、价格低廉。还可将松花粉水提取物用于制备治疗脂肪肝的注射制剂，吸收迅速、治疗针对性强。

权利要求

1.用于治疗脂肪肝的松花粉提取物，为从松花粉中提取的分子量小于3000D的水溶性物质，包括以下步骤：

1）将裸子植物松花粉经气流粉碎破壁处理10～20分钟；

2）以常压常温水浸泡20～30分钟后，再以超声波处理20～40分钟；

3）离心法除去固体杂质，取上清液；

4）将所述上清液在1～5℃的环境温度下以分子筛超滤分离，取得分子量为3000D以下的裸子植物松花粉水溶性物质。

2.一种如权利要求1所述用于治疗脂肪肝的松花粉水提取物的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

1）将裸子植物松花粉经气流粉碎破壁处理10～20分钟；

2）以常压常温水浸泡20～30分钟后，再以超声波处理20～40分钟；

3）离心法除去固体杂质，取上清液；

4）将所述上清液在1～5℃的环境温度下以分子筛超滤分离，取得分子量为3000D以下的裸子植物松花粉水溶性物质。

3.根据权利要求2所述制备方法，其特征在于步骤3）中所述离心法是在转速为

10000～16000转的冷冻离心机中离心10～15分钟。

4.如权利要求1所述用于治疗脂肪肝的松花粉提取物用于制备治疗脂肪肝的口服制剂。

5.如权利要求1所述用于治疗脂肪肝的松花粉提取物用于制备治疗脂肪肝的注射制剂。

说明书

用于治疗脂肪肝的松花粉提取物及其制备方法、用途

技术领域

[0001] 本发明涉及从植物，特别是从裸子植物松花粉中提取有效物质的工艺技术领域。

背景技术

[0002] 脂肪肝是指由于各种原因引起的肝细胞内脂肪堆积过多的病变，脂肪性肝病正严重威胁国人的健康，成为仅次于病毒性肝炎的第二大肝病，已被公认为隐蔽性肝硬化的常见原因。脂肪肝是一种常见的临床现象，而非一种独立的疾病。其临床表现轻者无症状，重者病情凶猛。一般而言，脂肪肝属可逆性疾病，早期诊断并及时治疗常可恢复正常。脂肪肝的形成，一般是由于肝脏内脂肪的分解与合成代谢失去平衡，或运出发生障碍，脂肪就会在肝细胞内过量积聚，当脂肪含量增加至30%以上，则称为脂肪肝。脂肪肝按自身体素质不同、饮食习惯不同等导致脂肪肝的发病原理不同，一般可分为肥胖、过食性脂肪肝，肝炎后脂肪肝，酒精性脂肪肝，营养缺乏性脂肪肝，药物性脂肪肝，糖尿病性脂肪肝，妊娠性脂肪肝和不明原因的隐源性脂肪肝等。脂肪肝按轻重程度不同又分为轻度脂肪肝、中度脂肪肝和重度脂肪肝。轻度脂肪肝，已成为现代人的普遍问题，轻度脂肪肝是治疗脂肪肝的最佳时期。在某些职业人群中（白领人士、出租车司机、职业经理人、个体业主、政府官员、高级知识分子等）脂肪肝的平均发病率为25%；肥胖人群与Ⅱ型糖尿病患者中脂肪肝的发病率为50%；嗜酒和酗酒者脂肪肝的发病率为58%；在经常失眠、疲劳、不思茶饭、胃肠功能失调的亚健康人群中脂肪肝的发病率约为60%。近年来脂肪肝人群的年龄也不断下降，年龄只有
40岁，30岁左右的病人也越来越多，45岁以下男性脂肪肝明显多于女性。其中约25%的患者发生肝纤维化，1.5%～8.0%的患者发展为肝硬化，经济发达地区发病率较高，并且发病有小龄化的趋势，已成为一个严重危害人类健康的常见隐患。因此，防治脂肪肝已引起医学界的高度重视。由于脂肪肝并非为独立性病种，通过引发肝功能的损伤，引起血液生化指标和酶值的变化。在反应肝细胞损伤的检测项目中，以血清酶值最常见，如谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶(AST)、碱性磷酸酶（ALP）、γ－谷氨酰转肽酶（GGT）、乳酸脱氢酶（LDH）等。当肝脏发生脂肪变时，由于肝细胞受到损害，细胞变性、坏死，细胞膜破碎或细胞膜的通透性增加，肝细胞中所含的ALT和AST就会被释放到血液中，使血中ALT、AST活性增加。由于ALT、AST主要存在于肝细胞中，当其明显升高时常提示有肝损伤。肝脏发生脂肪变时，常见ALT、AST升高，但多以ALT升高为主。谷丙转氨酶（ALT）是诊断肝细胞实质损害的主要项目，其高低往往与病情轻重相平行。γ-谷氨酰转肽酶是酒精性肝损伤的重要指标，而且非常敏感。

[0003] 当今脂肪肝的治疗仍以去除病因，积极治疗原发病和坚持合理饮食制度为主，药物仅起辅助治疗作用。所以，对该病的研究已成为国内外研究的共同热点和难点。到目前为止，西药尚无防治脂肪肝的有效药物，以中药长期调理性为好，其中何首乌和山楂最好，能降低血脂，防止胆固醇在肝内沉积。西药常选用保护肝细胞、去脂药物及抗氧化剂等，如维生素B、C、E、卵磷脂、肌苷、辅酶A、还原型谷胱甘肽、牛磺酸、肉毒碱乳清酸盐、肝泰乐，以及某些降脂药物（例如：肝旨清） 等等。上述药物虽然很多，但大多仍需要进一步验证其疗效以及安全性，因此，应在医生指导下正确选用，切不可滥用。

[0004] 有人把脂肪肝和冠心病比喻成高脂血症一根绳上的两个蚂蚱，因为肥胖、高脂血症、糖尿病和酗酒是脂肪肝的常见病因，而这些因素也同样与动脉粥样硬化和冠心病关系密切。有明显心肌损伤和血流动力学紊乱，T细胞免疫功能下降，肝活检研究显示，这些病例中91.4%有肝细胞脂肪变性。一般而言，酒精脂肪肝属可逆性疾病，早期诊断并及时治疗常可恢复正常。西方发达国家推测，儿童非酒精性脂肪肝的患病率至少为1%至2%，肥胖儿童患病率更高，达22.5%至52.8%发病率 。肝脏是身体内以物质代谢功能为主的一个器官，并在身体里面扮演着解毒、代谢、去氧化，储存肝糖，分泌性蛋白质的合成等等功能。随着生活水平提高，许多人每天都摄入大量的酒精和高脂类食物，不知不觉中形成脂肪肝。现代生活节奏快，大家忙于自己的工作，社会普遍认为脂肪肝不是病而忽视治疗。然而脂肪肝可以引发很多疾病，特别是通过引起多项血液生化指标的改变，影响机体代谢。长期食用高脂食物或大量饮酒，酒精会直接毒害肝细胞，影响其结构及功能；许多人就是因为饮酒过度才患上酒精性肝炎、脂肪肝致使肝脏受损。而肝损伤可导致甘油三酯（TG）下降，甘油三酯是长链脂肪酸和甘油形成的脂肪分子。是人体内含量最多的脂类，大部分组织均可以利用甘油三酯分解产物供给能量，是体内能量的主要来源。脂肪肝会导致食入的大量脂肪吸收减少，胆汁分泌不足，不能分解吃进去的脂肪，脂肪在肝脏形成脂肪滴从而加重病情。

[0005] 裸子植物松花粉是裸子植物的雄性生殖细胞，担负着植物繁衍的重任，包含着孕育新生命所必需的全部营养物质，其营养丰富、均衡、搭配合理，是纯天然的营养宝库。松花粉是松科植物马尾松、油松或同属树种的花粉，产生于雄蕊的花芯中是松树体精华之所在。松花粉是中国医学宝库中的药食兼用花粉品种，作为中国传统药材，其药食兼用的历史已逾数千年，从2400年前的《神农本草经》到今天的《中华人民共和国药典》等历代医药典籍中都有记载，明代的《本草纲目》中记载“松花，甘、温、无毒。润心肺，益气，除风止血。”在民间更是以其神奇的功效被奉为“仙药”。人工采集的松花粉具有品质纯净、无污染、无异体花粉或有毒花粉掺杂、无动物激素的特点，是纯天然的绿色食品。松花粉中含有丰富的蛋白质、氨基酸、不饱和脂肪酸、多糖、维生素、膳食纤维、酶类、黄酮、核酸、天然激素等多种营养成分和生物活性物质，众多研究表明其具有调节内分泌，改善生殖机能、促进新陈代谢，提高机体免疫力等功效，是大自然赐予人类的天然营养库。 目前我国脂肪肝的发病率很高，随着现代生活水平提高，人们营养过剩、肥胖、过量饮酒、高脂饮食、缺少运动，造成脂肪肝。在中国肥胖儿童中，脂肪肝的发病率高达八成左右，脂肪肝已经成为影响现代人生活质量的重要问题。而脂肪肝治疗期长，起效缓慢，患者依从性差，往往治疗易被人们忽视。

发明内容

[0006] 本发明第一目的在于发明一种能高效地从根本上治疗脂肪肝的裸子植物松花粉水溶性物质。

[0007] 本发明所述水溶性物质为从裸子植物松花粉中提取的分子量为3000D以下的水溶性物质。

[0008] 本发明的第二个目的在于发明上述松花粉水溶性物质的制备方法。

[0009] 包括以下步骤：

[0010] 1）将裸子植物松花粉经气流粉碎破壁处理10～20分钟；

[0011] 2）以常压常温水浸泡20～30分钟后，再以超声波处理20～40分钟；

[0012] 3）离心法除去固体杂质，取上清；

[0013] 4）将所述上清在1～5℃的环境温度下以分子筛超滤分离，取得分子量为3000D以下的裸子植物松花粉水溶性物质。

[0014] 经试验，利用裸子植物松花粉治疗脂肪肝效果显著，且无副作用，而且费用低廉，简单易行。裸子植物松花粉是裸子植物雄蕊花药，是植物的雄性生殖细胞。裸子植物松花粉内含各种丰富的营养物质，具有多种的生物学活性。裸子植物松花粉能够在激素的受体水平上发挥抗雌激素、抗雄激素的药理作用，但对裸子植物松花粉中是何物质起作用目前研究不多。本发明就是利用水提的方法从裸子植物松花粉分离出对脂肪肝有治疗效果的成份。

[0015] 本发明所述步骤1）的气流粉碎破壁是一种低温破壁工艺，经10～20分钟处理，目的是破坏裸子植物松花粉的细胞壁，便于裸子植物松花粉中有效成份的提取和保持活性。

[0016] 本发明步骤2）中先浸泡时间为20～30分钟，然后超声波提取20～40分钟，目的是便于裸子植物松花粉中有效成份充分溶解、分离。

[0017] 本发明步骤3）中除去固体杂质的方法是在转速为10000～16000转的离心机中离心10～15分钟。目的是能有效去处裸子植物松花粉中固体杂质，使提取液澄清，透明，使提取液得到进一步提纯。

[0018] 本发明再一目的在于发明上述裸子植物松花粉水提物的应用方法。

[0019] 一种应用方法是：用于治疗脂肪肝的裸子植物松花粉水提取物用于制备治疗脂肪肝口服制剂。

[0020] 作为口服制剂的优点是使用方便、吸收效果好、价格低廉，可作为儿童一般保健使用，预防脂肪肝的发生。

[0021] 第二种应用方法是：用于治疗脂肪肝的裸子植物松花粉水提取物用于制备治疗脂肪肝的注射制剂。

[0022] 作为注射制剂的优点是吸收迅速、治疗针对性强。

附图说明

[0023] 图1为自然健康组肝脏组织切片图。

[0024] 图2为灌胃猪油白酒模型对照组肝脏组织切片图。

[0025] 图3为灌胃松花粉水提液组肝脏组织切片图。

[0026] 图4为注射松花粉水提液组肝脏组织切片图。

具体实施方式

[0027] 一、制备裸子植物松花粉治疗脂肪肝水提物：

[0028] 1、分检裸子植物松花粉：在常温下去除花粉杂质。

[0029] 2、将除杂的裸子植物松花粉气流粉碎破壁处理10～20分钟。

[0030] 3、以常压常温水浸泡的花粉20～30分钟后，超声波粉碎20～40分钟。

[0031] 4、除去固体杂质，取水溶液：

[0032] 在转速为10000～16000转的离心机中离心10～15分钟，取上清。

[0033] 5、将上清在1～5℃的环境温度下，以3000D分子筛超滤分离出分子量为3000D以下的裸子植物松花粉水提物，即为用于治疗脂肪肝松花粉水提物。

[0034] 二、制备口服制剂和注射制剂：

[0035] 1、制备口服制剂A：

[0036] 将治疗脂肪肝的裸子植物松花粉水提物与蜂蜜或其他食品添加剂调匀，经超滤和巴氏消毒灭菌后，灌装备用。

[0037] 2、制备注射制剂B：

[0038] 将治疗脂肪肝的裸子植物松花粉水提物巴氏消毒灭菌后与注射生理盐水以1︰1～2的体积比混和，均匀溶解后抽真空密封，待用。

[0039] 三、应用：

[0040] （一）试验对象：

[0041] 大鼠（体重200～300克）

[0042] （二）使用剂量：

[0043] 1、口服制剂：口服4-6毫升/天，连接服用20～30天。

[0044] 2、注射：肌肉或腹腔注射2-4毫升/天连续20～30天

[0045] （三）对比结果：

[0046] 试验组二月龄SD大鼠肝脏组织切片结果比较：

[0047] 1、将自然健康组肝脏组织切片，见图1。

[0048] 从图1可见雄性大白鼠肝脏肝细胞结构清晰，肝血窦明显，肝索排列整齐。

[0049] 2、将灌胃猪油和白酒模型组肝脏组织切片，见图2。

[0050] 从图2可见肝细胞边界不清，变圆内有空泡，肝血窦受压变窄，肝索排列紊乱。

[0051] 3、将灌胃松花粉水提液组肝脏组织切片，见图3。

[0052] 从图3可见肝脏出现大量肝血窦，肝索较清晰，肝细胞排列较整齐，细胞内未见脂肪空泡。

[0053] 4、将注射松花粉水提液组肝脏组织切片，见图4。

[0054] 从图4可见肝脏肝血窦分布均匀，肝索清晰可见，肝细胞排列整齐，细胞核大位于细胞中央。

[0055] 裸子植物松花粉水提液干预后对各试验组大鼠血液酶值指标比较分析，如下表：

[0056] 松花粉水提液干预后对各试验组大鼠血液酶值指标比较分析表（单位：u/l）[0057]组别 ALT ALP AST LDH GGT
自然对照组 71.00±5.66 196.00±5.66 96.50±4.95 824.50±441.97 3.50±0.71模型对照组 70.00±7.07 229.50±29.00 99.50±2.12 888.50±385.37 5.50±2.12灌胃松组 55.50±2.12 155.50±4.95 85.00±7.07 699.50±620.13 3.00±2.83
腹注松组 45.00±7.07 183.00±22.63 77.50±20.51 1060±626.50 4.00±2.83 [0058] 经过SPSS统计分析，自然对照组和模型组ALT与腹注松组差异极显著，与灌胃松组差异显著。模型组ALP与灌胃松组差异极显著。

[0059] 长期大量的酒精摄入可以造成肝脏的几种不同病变，轻者只有脂肪变性，重者形成酒精性肝炎和肝纤维化，再发展则导致不可逆转的肝硬化。转氨酶是肝细胞损害敏感标志，也是乙醇所致肝损伤最敏感的指标。人的酒精性脂肪肝可有AST和ALT轻度升高，酒精性肝炎具有特征性的酶学改变，即AST升高比ALT升高明显。使用松花粉水提液干预后，血液酶值指标中ALT、ALP均有显著下降，这二种酶是衡量肝脏功能的关键酶；另外，谷草转氨酶（AST）也得到了一定程度的改善。可以初步推断裸子植物松花粉水提液对大鼠肝脏脂肪变，具有明显的改善作用。

[0060] 以上实验结果表明：裸子植物松花粉水提液对各实验组大鼠肝脏脂肪变有相当大的治疗作用，从肝脏组织切片来看，裸子植物松花粉水提液对改善肝脏组织结构具有很强的作用；另外通过ALT 、ALP、AST、LDH 等酶值指标的比较，发现所有实验组与对照组比都下降了，而且用松花粉水提液干预组的酶值比模型组的要低得多，差异是显著的，这更好说明裸子植物松花粉水提液不仅能改善肝脏组织结构，而且能改善肝功能。

[0061] 总之，通过以上试验表明：本发明产品能有效防治脂肪肝，且注射制剂的疗效好于口服制剂。目前我国在裸子植物松花粉防治脂肪肝研究方面刚刚起步，通过实验，发现腹腔注射花粉水提液对脂肪肝防治效果最好，为开发治疗脂肪肝的药物提出新思路。裸子植物松花粉是我国传统保健产品，能提高肝细胞活性，改善血液酶值指标，预防脂肪肝，对维护和提高我国民众的肝脏保健具有重大意义。