纤维蛋白止血贴及其制作方法

摘要

本发明涉及一种可在室温条件下储存的纤维蛋白止血贴，该纤维蛋白止血贴主要由来源于人或哺乳动物血液的纤维蛋白原和凝血酶，以及来源于哺乳动物皮肤或肌腱的胶原蛋白组成，纤维蛋白止血贴由纤维蛋白原、凝血酶、胶原蛋白组成，本发明由于在纤维蛋白原和凝血酶中添加了保护剂，使得该纤维蛋白止血贴可以在室温条件下储存，保质期大于6个月，最长保质期达到2年。该纤维蛋白止血贴适用于外科手术局部止血以及战场急救、抢险救灾等场合快速止血。

权利要求

1.一种纤维蛋白止血贴，其特征在于，所述纤维蛋白止血贴包含：纤维蛋白原、凝血酶、胶原蛋白和保护剂，所述纤维蛋白原和凝血酶来源于人或哺乳动物血液，所述胶原蛋白来源于哺乳动物皮肤或肌腱，所述保护剂为糖类、糖醇、氨基酸和盐类；所述纤维蛋白止血

2 2

贴中以下组分的浓度为：纤维蛋白原1～10mg/cm，凝血酶0.2～10IU/cm，胶原蛋白0.3～2

10mg/cm ；所述纤维蛋白止血贴包含以下质量百分比的成分：糖类2～15%，糖醇3～15%，氨基酸5～20%，盐类3-5%；

所述糖类为蔗糖、海藻糖之中的一种或几种；

所述糖醇为甘露醇、山梨醇、木糖醇之中的一种或几种；

所述氨基酸为甘氨酸、精氨酸、盐酸精氨酸、组氨酸之中的一种或几种；

所述盐类为氯化钠、柠檬酸钠、氯化钙、乙酸钠之中的一种或几种。

2.如权利要求1所述纤维蛋白止血贴的制作方法，步骤如下：步骤1：

a、制备纤维蛋白原与凝血酶：

用低温乙醇法从人或哺乳动物血浆中分离得到纤维蛋白原，将纤维蛋白原溶解后再进行一次低温乙醇法沉淀以去除聚山梨酯-80和磷酸三丁酯,得到纤维蛋白原；

利用硫酸钡吸附法从人或哺乳动物血浆中分离得到凝血酶原，用氯化钙激活后得到凝血酶；

配制纤维蛋白原保护剂和凝血酶保护剂：

所述纤维蛋白原保护剂为糖类、糖醇、氨基酸、盐类四种物质的蒸馏水溶解液，所述凝血酶保护剂为氨基酸和盐类两者的蒸馏水溶解液；

b、将步骤a中得到的纤维蛋白原加入蒸馏水溶解后，加入事先配制好的纤维蛋白原保护剂混合；将步骤a中得到的凝血酶加入蒸馏水溶解后，加入事先配制好的凝血酶保护剂混合；得到纤维蛋白原溶液和凝血酶溶液备用；

步骤2、在容器中将纤维蛋白原溶液冷冻凝固后，再倒上凝血酶溶液进行冷冻，最后倒上胶原蛋白溶液冷冻，将其冷冻干燥，进行切割包装即得纤维蛋白止血贴。

3.如权利要求1所述纤维蛋白止血贴的制作方法，步骤如下：步骤1：

a、制备纤维蛋白原与凝血酶：

用低温乙醇法从人或哺乳动物血浆中分离得到纤维蛋白原，将纤维蛋白原溶解后再进行一次低温乙醇法沉淀以去除聚山梨酯-80和磷酸三丁酯,得到纤维蛋白原；

利用硫酸钡吸附法从人或哺乳动物血浆中分离得到凝血酶原，用氯化钙激活后得到凝血酶；

配制纤维蛋白原保护剂和凝血酶保护剂：

所述纤维蛋白原保护剂为糖类、糖醇、氨基酸、盐类四种物质的蒸馏水溶解液，所述凝血酶保护剂为氨基酸和盐类两者的蒸馏水溶解液；

b、将步骤a中得到的纤维蛋白原加入蒸馏水溶解后，加入事先配制好的纤维蛋白原保护剂混合；将步骤a中得到的凝血酶加入蒸馏水溶解后，加入事先配制好的凝血酶保护剂混合；得到纤维蛋白原溶液和凝血酶溶液备用；

步骤2：将纤维蛋白原溶液和凝血酶溶液分别冷冻干燥后碾成粉末，用低温有机溶剂混合后涂布到冻干的胶原蛋白上，将有机溶剂挥发，即得纤维蛋白止血贴。

4.按权利要求3所述纤维蛋白止血贴的制作方法，其特征在于，所述有机溶剂为无水乙醇。

说明书

纤维蛋白止血贴及其制作方法

技术领域

[0001] 本发明涉及生物制药技术领域，具体是一种能在室温条件下储存并保持其功能和药效的纤维蛋白止血贴及其制作方法。

背景技术

[0002] 纤维蛋白类止血产品是一种能快速有效进行伤口止血的生物制品，其具有止血快速、黏合性好、组织相容性好、促进伤口愈合、促进组织再生等优点。目前纤维蛋白类止血产品在国内外得到了广泛的应用。根据纤维蛋白原来源不同，可将纤维蛋白类止血产品分为人源纤维蛋白制剂和猪源纤维蛋白制剂两大类；根据产品剂型的不同，又可分为纤维蛋白胶和纤维蛋白止血贴两类。

[0003] 纤维蛋白胶由纤维蛋白原、凝血酶及其溶解液组成，使用之前用溶解液将纤维蛋白原和凝血酶分别溶解后，装入特制的双管注射器中，用喷头将其喷在伤口表面，迅速形成纤维蛋白固体，起到止血封闭等作用。纤维蛋白止血贴是由纤维蛋白原、凝血酶、胶原蛋白等组合而成的冻干海绵状敷料。使用时将其直接贴在出血伤口或创面表面，在短时间内迅速反应粘合在表面上。

[0004] 纤维蛋白止血贴和纤维蛋白胶相比的优点主要有：即开即用，不需要提前准备，无需溶解，不需要繁琐的配制过程；延展性更好，能适应各种器官的移动或伸缩；出血量大的条件下也能使用；可以在纤维蛋白止血贴上加压，使其与伤口结合更加紧密。

[0005] 由于纤维蛋白止血贴具有的上述优点，使其非常适用于战场急救、抢险救灾等领域的伤病员救治。据统计战场上的阵亡人员有50％是因为得不到及时的救治而流血致死，而送往战地医院的伤员仍有一部分由于未能迅速止血而失血过多牺牲。纤维蛋白止血贴携带方便、使用简单、止血效果好，受到军事医学研究人员的亲睐。

[0006] 纤维蛋白原、凝血酶和胶原蛋白都是生物来源的蛋白产品，因此具有不耐热的缺点，在室温条件下保存易造成蛋白质的失活、变性，从而失去止血的功效。通常纤维蛋白胶或纤维蛋白止血贴都需要保存在4℃左右的低温环境，这样限制了使用范围，造成携带的不便。

[0007] 现有纤维蛋白胶或纤维蛋白止血贴中的保护剂主要起着保护在干热灭病毒或辐照等工艺中纤维蛋白蛋白原的稳定，尚不能达到使其在室温条件下运输储存的作用。在室温保存一段时间后，纤维蛋白原的溶解度下降，凝血酶的效价降低，纤维蛋白的粘合性下降直至丧失。

发明内容

[0008] 本发明主要解决的技术问题是提供一种能在室温条件下长时间储存的纤维蛋白止血贴，纤维蛋白止血贴加入了保护剂，此保护剂既有冻干保护剂的作用，又有病毒灭活保护剂的作用，还能起到运输储存中的保护作用。

[0009] 本发明采用的技术方案是提供一种可长时间储存的纤维蛋白止血贴，所述纤维蛋白止血贴包含：纤维蛋白原、凝血酶、胶原蛋白和保护剂，所述纤维蛋白原和凝血酶来源于人或哺乳动物血液，所述胶原蛋白来源于哺乳动物皮肤或肌腱，所述保护剂为糖类、糖醇、氨基酸、盐类中的一种或几种。

[0010] 本发明的有益效果是，纤维蛋白止血贴加入了保护剂，此保护剂既有冻干保护剂的作用、又有病毒灭活保护剂的作用，还能起到运输储存中的保护作用，使纤维蛋白原、凝血酶、胶原蛋白等主要成分更稳定。从而大大扩展了纤维蛋白止血贴的适用范围，为战场急救、抢险救灾等提供帮助。

[0011] 作为本发明的进一步改进，所述纤维蛋白止血贴中以下组分的浓度为：纤维蛋白2 2 2
原1～10mg/cm，凝血酶0.2～10IU/cm，胶原蛋白0.3～10mg/cm。

[0012] 作为本发明的进一步改进，所述糖类为蔗糖、海藻糖之中的一种或几种；所述糖醇为甘露醇、山梨醇、木糖醇之中的一种或几种；所述氨基酸为甘氨酸、精氨酸、盐酸精氨酸、组氨酸之中的一种或几种；所述盐类为氯化钠、柠檬酸钠、氯化钙、乙酸钠之中的一种或几种。

[0013] 作为本发明的进一步改进，所述纤维蛋白止血贴包含以下质量百分比的成分：糖类2～15％，糖醇3～15％，氨基酸5～20％，盐类3-5％。

[0014] 为解决上述技术问题，本发明采用的另一个技术方案是提供上述纤维蛋白止血贴的制作方法，步骤如下：

[0015] 步骤1：

[0016] a、制备纤维蛋白原与凝血酶：

[0017] 用低温乙醇法从人或哺乳动物血浆中分离得到纤维蛋白原，将纤维蛋白原溶解后再进行一次低温乙醇法沉淀以去除聚山梨酯-80和磷酸三丁酯，得到纤维蛋白原；

[0018] 利用硫酸钡吸附法从人或哺乳动物血浆中分离得到凝血酶原，用氯化钙激活后得到凝血酶；

[0019] 配制纤维蛋白原保护剂和凝血酶保护剂：

[0020] 所述纤维蛋白原保护剂为糖类、糖醇、氨基酸、盐类四种物质的蒸馏水溶解液，所述凝血酶保护剂为氨基酸和盐类两者的蒸馏水溶解液；

[0021] b、将步骤a中得到的纤维蛋白原加入蒸馏水溶解后，加入事先配制好的纤维蛋白原保护剂混合；将步骤a中得到的凝血酶加入蒸馏水溶解后，加入事先配制好的凝血酶保护剂混合；得到纤维蛋白原溶液和凝血酶溶液备用；

[0022] 步骤2、在容器中将纤维蛋白原溶液冷冻凝固后，再倒上凝血酶溶液进行冷冻，最后倒上胶原蛋白溶液冷冻，将其冷冻干燥，进行切割包装即得纤维蛋白止血贴。

[0023] 为解决上述技术问题，本发明采用的另一个技术方案是提供另一种上述纤维蛋白止血贴的制作方法，步骤如下：

[0024] 步骤1：

[0025] a、制备纤维蛋白原与凝血酶：

[0026] 用低温乙醇法从人或哺乳动物血浆中分离得到纤维蛋白原，将纤维蛋白原溶解后再进行一次低温乙醇法沉淀以去除聚山梨酯-80和磷酸三丁酯，得到纤维蛋白原；

[0027] 利用硫酸钡吸附法从人或哺乳动物血浆中分离得到凝血酶原，用氯化钙激活后得到凝血酶；

[0028] 配制纤维蛋白原保护剂和凝血酶保护剂：

[0029] 所述纤维蛋白原保护剂为糖类、糖醇、氨基酸、盐类四种物质的蒸馏水溶解液，所述凝血酶保护剂为氨基酸和盐类两者的蒸馏水溶解液；

[0030] b、将步骤a中得到的纤维蛋白原加入蒸馏水溶解后，加入事先配制好的纤维蛋白原保护剂混合；将步骤a中得到的凝血酶加入蒸馏水溶解后，加入事先配制好的凝血酶保护剂混合；得到纤维蛋白原溶液和凝血酶溶液备用；步骤2：将纤维蛋白原溶液和凝血酶溶液分别冷冻干燥后碾成粉末，用低温有机溶剂混合后涂布到冻干的胶原蛋白上，将有机溶剂挥发，即得纤维蛋白止血贴。

[0031] 作为上述纤维蛋白止血贴的制作方法的进一步改进，所述纤维蛋白止血贴的制作方法中步骤2所述有机溶剂为无水乙醇。

具体实施方式

[0032] 为详细说明本发明的技术内容、所实现目的及效果，以下结合实施方式详予说明。

[0033] 实施例1

[0034] 本发明选用的保护剂为糖类(蔗糖、海藻糖)，糖醇(甘露醇、山梨醇、木糖醇)，氨基酸(甘氨酸、精氨酸、盐酸精氨酸、组氨酸)，盐类(氯化钠、柠檬酸钠、氯化钙、乙酸钠)的组合物。纤维蛋白原保护剂为糖类、糖醇、氨基酸、盐类四种物质的蒸馏水溶解液，凝血酶保护剂为氨基酸和盐类两者的蒸馏水溶解液，制备几组不同组分和浓度的保护剂备用。

[0035] 实施例2

[0036] 将猪血浆用1％聚山梨酯80和0.3％磷酸三丁酯进行S/D法灭活，去除病毒。用低温乙醇法从猪血浆中分离得到纤维蛋白原，将纤维蛋白原溶解后再进行一次低温乙醇法沉淀以便去除聚山梨酯80和磷酸三丁酯。利用硫酸钡吸附法(李中民，宋建，牛凝血酶原的分离纯化及活性鉴定-中国医科大学学报，1994，5(23)：436-437)从血浆中分离得到凝血酶原，用氯化钙激活后得到凝血酶。将从猪肌腱提取的胶原蛋白溶解成20mg/ml的溶液。

[0037] 将纤维蛋白原用蒸馏水溶解后，加入事先溶解的纤维蛋白原保护剂溶液混合，使最终质量浓度为纤维蛋白原70mg/ml，蔗糖30mg/ml，甘露醇20mg/ml，盐酸精氨酸35mg/ml，氯化钠4mg/ml，柠檬酸三钠7mg/ml，维生素B2(显色指示用)适量。

[0038] 将凝血酶溶解后，加入事先溶解的凝血酶保护剂溶液混合，使最终质量浓度为凝血酶500IU/ml，甘氨酸20mg/ml，氯化钙4mg/ml。

[0039] 将纤维蛋白原溶液按照0.1ml/cm2倒入平板容器中，在低温冰箱中冷冻至完全凝2
固；然后在纤维蛋白原固体上喷上凝血酶溶液为0.01ml/cm，在低温冰箱中冷冻至凝血酶
2
完全凝固；最后在凝血酶固体上倒上0.5ml/cm 的胶原蛋白溶液，将其在低温冰箱中冷冻至完全凝固。将冷冻后的固体放入冻干机中冷冻干燥，经切割包装后进行辐照灭菌和灭病毒即得长时间储存的纤维蛋白止血贴。

[0040] 表1纤维蛋白止血贴室温保存稳定性情况

[0041]

[0042] 所述凝固活力为纤维蛋白止血贴与血液接触后血液凝固止血所需要的时间。上表1显示将纤维蛋白止血贴置于25℃和37℃存放一定时间后，纤维蛋白原仍保持较好的凝固活力，具有较好的粘合力和吸水性，能满足快速止血的目的。与未在37℃保存的样品相比，外观基本上变化不大，仅凝固时间稍有增加，但对使用没有不利影响。

[0043] 实施例3：

[0044] 按照实施例1制备纤维蛋白原、凝血酶和胶原蛋白。

[0045] 将纤维蛋白原溶解后，加入事先溶解纤维蛋白原保护剂，使最终浓度为纤维蛋白原30mg/ml，海藻糖25mg/ml，山梨醇20mg/ml，盐酸精氨酸35mg/ml，甘氨酸10mg/ml，氯化钠4mg/ml，柠檬酸三钠7mg/ml，维生素B2(显色指示用)适量。

[0046] 将凝血酶溶解后，加入事先溶解的凝血酶保护剂溶液，使最终浓度为凝血酶100IU/ml，甘氨酸20mg/ml，氯化钙4mg/ml。

[0047] 将纤维蛋白原溶液和凝血酶溶液分别进行冻干并进行干热法灭活病毒。

[0048] 把从猪肌腱提取的胶原蛋白溶解成10mg/ml的溶液，将胶原蛋白溶液倒入平板容2
器中，添加量为0.5ml/cm，冻干后成为疏松的胶原蛋白海绵，剪切成一定规格。

[0049] 把冻干的纤维蛋白原和凝血酶碾成粉末，用4℃的无水乙醇将其按5∶1混合均匀，将混合后的粉末均匀涂布到胶原蛋白海绵上，于低温下使乙醇完全挥发，即可制得纤维蛋白止血贴。

[0050] 实施例4

[0051] 按照实施例2制备纤维蛋白原、凝血酶和胶原蛋白。设计几种不同的纤维蛋白原和凝血酶保护剂配方，如表2所示。

[0052] 表2几种不同的保护剂配方(保护剂各组分质量百分比)

[0053]

[0054] 按照实施例3中的方法，使用几种不同的纤维蛋白原和凝血酶保护剂，制得纤维蛋白止血贴。

[0055] 将该纤维蛋白止血贴在25℃保温24个月后检测其外观性状和凝固性能，结果如下表3：

[0056] 表3三种保护剂配方的保护效果

[0057]

[0058] 从上表可见，三种保护剂配方都能起到较好的保护效果。纤维蛋白止血贴在25℃保温24个月后外观没有发生明显的改变，凝固活力都在10s之内，符合规定，能起到较好的止血效果。

[0059] 本发明所得纤维蛋白止血贴以下组分质量百分比为：纤维蛋白原1～10mg/cm2，2 2
凝血酶0.2～10IU/cm，胶原蛋白0.3～10mg/cm，糖类2～15％，糖醇3～15％，氨基酸
5～20％，盐类3-5％。

[0060] 以上所述仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发