野生冬虫夏草菌种无性繁殖方法

摘要

一种野生冬虫夏草菌种无性繁殖方法，属于生物技术领域。该繁育方法采用野生冬虫夏草的活体细胞为菌株，利用特制的PDA培养基，通过克隆技术，获得适宜人工栽培的虫草菌种；其PDA培养基组分及配比为：水950-1050g、马铃薯280-320g、蛋白胨4-8g、磷酸二氢钾3-5g、硫酸镁1-2g、琼脂15-20g、葡萄糖18-23g，ph值6.0-7.0。经（1）选取活体细胞、（2）驯化菌株、（3）提纯、（4）复壮获取优良的虫草母种。本发明菌株PDA培养基营养成分合理，菌株活性高，不易受霉菌、细菌污染，菌种质量稳定，菌种不变异。虫草有效营养成分含量高，获得优质高产子实体。

权利要求

1.一种野生冬虫夏草菌种无性繁殖方法，其特征是采用野生冬虫夏草的活体细胞为菌株，利用特制的PDA培养基，通过克隆技术，获得适宜人工栽培的虫草菌种；其PDA培养基组分及配比为：水950-1050g、马铃薯280-320g、蛋白胨4-8g、磷酸二氢钾3-5g、硫酸镁1-2g、琼脂15-20g、葡萄糖18-23g，ph值6.0-7.0，其菌株制作工艺如下：（1）选取活体细胞：到青海、西藏野生冬虫夏草原产地获取野生菌株，在无菌条件下接种，采用上述培养基进行培养；

（2）驯化菌株：降低培养箱内氧气含量20-30%，温度18-22℃，湿度55-70%模拟野生菌株的自然环境；

（3）提纯：去除弱小菌株抗点，保留活性较高生长正常的菌丝，生长期25-35天；

（4）复壮：对经提纯的菌丝进行转管2-3次，生长期35-40天，获取优良的虫草母种。

说明书

野生冬虫夏草菌种无性繁殖方法技术领域[0001 ] 本发明属于生物技术领域。背景技术[0002]目前，冬虫夏草的菌种人工繁殖大多采用人工栽培的虫草进行组织分离，该方法存在的问题是：1、菌株活性差，易受霉菌、细菌污染，致使产品质量不稳定。2、变异速度快， 致使虫草有效营养成分偏低，严重时导致弱株、病株、甚至绝产。3、菌株PDA培养基营养成分偏低，C:N比不合理。发明内容[0003] 本发明的目的是提供一种野生冬虫夏草菌种无性繁殖方法，以解决现有技术菌株活性差，易受霉菌、细菌污染，致使产品质量不稳定。变异速度快，致使虫草有效营养成分偏低，严重时导致弱株、病株、甚至绝产。菌株PDA培养基营养成分偏低，C:N比不合理等问题。[0004] 本发明解决其技术问题所采用的技术方案是采用野生冬虫夏草的活体细胞为菌株，利用特制的PDA培养基，通过克隆技术，获得适宜人工栽培的虫草菌种；其PDA培养基组分及配比为：水950-1050g、马铃薯280-320g、蛋白胨4_8g、磷酸二氢钾3_5g、硫酸镁l_2g、 琼脂15-20g、葡萄糖18-23g，ph值6. 0-7. O。其菌株制作工艺如下：[0005] I、选取活体细胞：到青海、西藏等野生冬虫夏草原产地获取野生菌株，在无菌条件下接种，采用上述培养基进行培养。[0006] 2、驯化菌株：降低培养箱内氧气含量20-30%，温度18-22°C，湿度55-70%模拟野生菌株的自然环境。[0007] 3、提纯：去除弱小菌株抗点，保留活性较高生长正常的菌丝，生长期25-35天。[0008] 4、复壮：对经提纯的菌丝进行转管2-3次，生长期35-40天，获取优良的虫草母种。[0009] 本发明的积极效果是菌株PDA培养基营养成分合理，菌株活性高，不易受霉菌、细菌污染，菌种质量稳定，菌种不变异。虫草有效营养成分含量高，获得优质高产子实体。具体实施方式[0010] 本发明技术方案具体实施步骤如下：[0011] I、选取活体细胞：到青海、西藏等野生冬虫夏草原产地获取野生菌株，在无菌条件下接种，所采用培养基组分配比为：水970、马铃薯310、蛋白胨5、磷酸二氢钾4、硫酸镁2、 琼脂20、葡萄糖18，ph值6。[0012] 2、驯化菌株：降低培养箱内氧气含量20%,温度19°C，湿度60%，模拟野生菌株的自然环境，生长期15天左右。[0013] 3、提纯：去除弱小菌株抗点，保留活性较高生长正常的菌丝，生长期30天左右。[0014] 4、复壮：对经提纯的菌丝进行转管2-3次，生长期40天，获取优良的虫草菌种母种。