黄芪总黄酮在制备预防和治疗急性放射性肺炎药物中的应用

摘要

本发明公开了一种黄芪总黄酮在制备治疗急性放射性肺炎药物中的应用。黄芪总黄酮中含有多种药用成分，对急性放射性肺炎具有预防和治疗的作用，其能明显减轻由放射因素引起的肺组织炎性病变，减轻肺泡壁及肺泡间隙增厚、充血，效果显著。

权利要求

1.一种黄芪总黄酮在制备治疗急性放射性肺炎药物中的应用，其特征是黄芪总黄酮的制备方法为：（1）药物前处理：将黄芪烘干至水分在10wt%以下，然后粉碎、过40目晒，密封保存；

（2）黄芪总黄酮提取

a.取黄芪粉末，用体积分数为90 %的乙醇浸泡72h，并不断搅拌，浸泡后过滤取浸提液保存，滤渣进入下一步；

b.将滤渣用体积分数为90%的乙醇洗涤，然后于80℃水浴中超声萃取30min，超声后过滤，收集提取液；

c.将超声后的滤渣放入渗滤桶中，按1:1的体积比加入90%的乙醇，搅拌均匀后进行渗滤，收集流出液；

d．将步骤a的浸提液，步骤b的提取液和步骤c的流出液混合、室温静置，收集上层液；

e．将上层液进一步过滤、浓缩至干，得黄芪总黄酮。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征是：制得的药物剂型为注射剂。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征是：将黄芪总黄酮采用生理盐水溶解，配制成浓度为100-150mg/L的注射剂。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征是：注射剂中黄芪总黄酮的浓度为120-140 mg/L。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征是：注射剂中黄芪总黄酮的浓度为130 mg/L。

6.根据权利要求1所述的应用，其特征是所述黄芪总黄酮中主要成分为：13 - 谷甾醇、芒柄花素、毛蕊异黄酮、β-谷甾醇-3-0-β-D-葡萄糖苷、 芒柄花素- 7-0-β-D吡喃葡萄糖苷和毛蕊异黄酮- 7-0-β-D吡喃葡萄糖苷。

7.根据权利要求1所述的应用，其特征是：黄芪总黄酮的制备方法中，步骤a 中1g黄芪用10-12ml的乙醇浸泡。

8.根据权利要求1所述的应用，其特征是：黄芪总黄酮的制备方法中，步骤b 中，洗涤时，滤渣与乙醇的体积比为1:1。

9.根据权利要求1所述的应用，其特征是：超声萃取时，超声频率为25kHz、功率为

350W；渗滤时，流速为2mL／min。

说明书

黄芪总黄酮在制备预防和治疗急性放射性肺炎药物中的应

用

技术领域

[0001] 本发明涉及一种黄芪提取物的医药用途，具体涉及一种黄芪总黄酮在制备预防和治疗急性放射性肺炎药物中的应用。

背景技术

[0002] 黄芪，别名：棉芪，绵芪，绵黄芪，棉黄芪，黄蓍，黄耆，箭芪，箭黄芪，内蒙古黄芪，王孙，戴芪，戴糁，戴椹，独椹，蜀脂，百本，百药棉，百药绵，土山爆张根，独根，大抽，二人抬，大有芪，蒙芪，元芪，红蓝芪，白皮芪，黑皮芪，膜荚黄芪，东北黄芪，内蒙黄芪，冲正芪，武川芪，炮台芪，浑源芪，为植物和中药材的统称。植物黄芪产于内蒙古、山西、甘肃、黑龙江等地，为国家三级保护植物。中药材黄芪为豆科草本植物蒙古黄芪、膜荚黄芪的根，具有补气固表、利水退肿、托毒排脓、生肌等功效。主治: 气虚乏力，食少便溏，中气下陷，久泻脱肛，便血崩漏，表虚自汗，气虚水肿，痈疽难溃，久溃不敛，血虚痿黄，内热消渴；慢性肾炎蛋白尿，糖尿病。

[0003] 黄芪的药用迄今已有2000多年的历史，现代研究，黄芪含黄酮类、皂甙、蔗糖、多糖、多种氨基酸、叶酸及硒、锌、铜等多种成分，有增强机体免疫功能、保肝、利尿、抗衰老、抗应激、降压和较广泛的抗菌作用。黄芪中所含黄酮类化合物主要有异黄酮类,二氢黄酮类,主要有山奈素、槲皮素、异鼠李素、鼠李柠檬素、熊竹素、芝柄花素、毛蕊异黄酮 (calycosm),芒柄花黄素(formononetm)，2,4-二羟基-5,6-二甲氧基-黄烷(2,4-dihydroxv—5,6- dimethoxvisoflavane)L-3-羟基-9-甲氧基紫檀烷-(L-3-hydroxv-9-methoxypterocarpan)等。已有研究表明，黄芪黄酮具有以下功能：1、对细胞免疫功能具有促进作用；2、具有抗心肌缺血作用；3、对血管内皮细胞具有保护作用；4、对肝损伤具有防护作用；5、具有抗炎作用；6、具有抗突变和抗损伤作用；7、清除自由基作用；8、具有抗骨质疏松作用。近年来，也有相关采用黄芪总黄酮制备治疗肺炎的药物的专利申请，例如，专利03156284.1公开了一种党参黄芪组合物在预防与治疗急性肺损伤中的用途，但是该组合物是用于治疗由LPS（lipopolysaccharide,脂多糖）引发的急性肺损伤疾病，并没有涉及急性放射性肺炎。

发明内容

[0004] 本发明是针对现有情况，提供了一种黄芪总黄酮在制备预防和治疗急性放射性肺炎药物中的应用。

[0005] 本发明提供了一种黄芪醇提物——黄芪总黄酮的一种新用途。现有材料中仅公开黄芪总黄酮在背景技术中的作用，但发明人在研究中发现，黄芪总黄酮对于放射性情况引起的急性肺炎也具有治疗效果，其具体技术方案如下：

[0006] 一种黄芪总黄酮在制备治疗急性放射性肺炎药物中的应用。

[0007] 进一步的，制得的药物剂型为注射剂。

[0008] 进一步的，黄芪总黄酮的应用方式为：将黄芪总黄酮采用生理盐水溶解，配制成浓度为100-150mg/L的注射剂。

[0009] 进一步的，所述注射剂中黄芪总黄酮的浓度为120-140 mg/L。

[0010] 更进一步的，注射剂中黄芪总黄酮的浓度为130 mg/L。

[0011] 本发明所述的黄芪总黄酮中主要含6种化合物，其中4种为异黄酮类化合物，它们分别是：13 - 谷甾醇、芒柄花素、毛蕊异黄酮、β-谷甾醇-3-0-β-D-葡萄糖苷、 芒柄花素- 7-0-β-D吡喃葡萄糖苷和毛蕊异黄酮- 7-0-β-D吡喃葡萄糖苷。

[0012] 本发明所用的黄芪总黄酮的制备方法为：

[0013] （1） 药物前处理：将黄芪烘干至水分在10wt%以下，然后粉碎、过40目晒，密封保存；

[0014] （2） 黄芪总黄酮提取

[0015] a、取黄芪粉末，用体积分数为90 %的乙醇浸泡72h，并不断搅拌，浸泡后过滤取浸提液保存，滤渣进入下一步；

[0016] b、将滤渣用体积分数为90%的乙醇洗涤，然后于80℃水浴中超声萃取30min，超声后过滤，收集提取液；

[0017] c、 将超声后的滤渣放入渗滤桶中，按1:1的体积比加入90%的乙醇，搅拌均匀后进行渗滤，收集流出液；

[0018] d、将步骤a的浸提液，步骤b的提取液和步骤c的流出液混合、室温静置，收集上层液；

[0019] e、 将上层液进一步过滤、浓缩至干，得黄芪总黄酮。

[0020] 上述黄芪总黄酮的制备方法中，步骤a 中1g黄芪用10-12ml的乙醇浸泡。

[0021] 上述黄芪总黄酮的制备方法中，步骤b 中，洗涤时，滤渣与乙醇的体积比为1:1。

[0022] 上述黄芪总黄酮的制备方法中，超声萃取时，超声频率为25kHz、功率为350W；渗滤时，流速为2mL／min。

[0023] 黄芪总黄酮中含有多种药用成分，对急性放射性肺炎具有预防和治疗的作用，其能明显减轻由放射因素引起的肺组织炎性病变，减轻肺泡壁及肺泡间隙增厚、充血，效果显著。

附图说明

[0024] 图1为A组小鼠HE-染色后的肺组织光镜图（200倍）；

[0025] 图2为B组小鼠HE-染色后的肺组织光镜图（200倍）；

[0026] 图3为C组小鼠HE-染色后的肺组织光镜图（200倍）；

[0027] 图4为H组小鼠HE-染色后的肺组织光镜图（200倍）。

具体实施方式

[0028] 下面通过具体实施例对本发明进行进一步的阐述，应该明白的是，下述说明仅是为了解释本发明，并不对其内容进行限定。

[0029] 实施例1

[0030] 提取黄芪总黄酮

[0031] 一、药物前处理：

[0032] 将黄芪放入烘箱内，烘至水分在10%以下，粉碎，过40目筛，密封保存；

[0033] 二、黄芪总黄酮的醇提：

[0034] 1、准确称取烘干粉碎后的黄芪粉末1000g，倒入圆底烧瓶中，按 1g∶10-12ml的比例用 90%的乙醇浸泡 72小时, 其间不时搅拌；

[0035] 2、搅拌后将溶液过滤、收集浸提液，滤渣用同浓度的乙醇溶液按1∶ 1体积比洗涤，洗净后用数控超声波清洗器于 80℃水浴中超声（超声频率为25kHz、功率为350W）萃取30分钟,过滤、收集提取液；

[0036] 3、将经超声提取的黄芪粉末均匀装入渗滤桶中, 按 1∶1体积比加入 90%乙醇, 搅拌均匀后渗滤（流速为2mL／min）, 收集流出液；

[0037] 4、最后, 将收集的乙醇提取液混匀,于室温下静置,收集上层液, 去掉最底层析出物，用滤纸过滤醇提取液 ,将滤液用旋转蒸发仪浓缩得到浓缩液, 后者继续浓缩至干, 得黄芪总黄酮提取物。

[0038] 经测定，黄芪总黄酮中主要包括6种化合物，其中4种为异黄酮类化合物。它们分别是：13 - 谷甾醇、芒柄花素、毛蕊异黄酮、β-谷甾醇-3-0-β-D-葡萄糖苷、 芒柄花素-7-0-β-D吡喃葡萄糖苷和毛蕊异黄酮- 7-0-β-D吡喃葡萄糖苷，总黄酮的含量在70%以上。

[0039] 制备黄芪总黄酮注射剂

[0040] 实施例2

[0041] 按照实施例1的方法制得黄芪总黄酮，然后将其采用生理盐水溶解，配制成黄芪总黄酮浓度为100mg/L的注射剂。

[0042] 实施例3

[0043] 按照实施例1的方法制得黄芪总黄酮，然后将其采用生理盐水溶解，配制成黄芪总黄酮浓度为110mg/L的注射剂。

[0044] 实施例4

[0045] 按照实施例1的方法制得黄芪总黄酮，然后将其采用生理盐水溶解，配制成黄芪总黄酮浓度为120mg/L的注射剂。

[0046] 实施例5

[0047] 按照实施例1的方法制得黄芪总黄酮，然后将其采用生理盐水溶解，配制成黄芪总黄酮浓度为125mg/L的注射剂。

[0048] 实施例6

[0049] 按照实施例1的方法制得黄芪总黄酮，然后将其采用生理盐水溶解，配制成黄芪总黄酮浓度为130mg/L的注射剂。

[0050] 实施例7

[0051] 按照实施例1的方法制得黄芪总黄酮，然后将其采用生理盐水溶解，配制成黄芪总黄酮浓度为132mg/L的注射剂。

[0052] 实施例8

[0053] 按照实施例1的方法制得黄芪总黄酮，然后将其采用生理盐水溶解，配制成黄芪总黄酮浓度为135mg/L的注射剂。

[0054] 实施例9

[0055] 按照实施例1的方法制得黄芪总黄酮，然后将其采用生理盐水溶解，配制成黄芪总黄酮浓度为140mg/L的注射剂。

[0056] 实施例10

[0057] 按照实施例1的方法制得黄芪总黄酮，然后将其采用生理盐水溶解，配制成黄芪总黄酮浓度为150mg/L的注射剂。

[0058] 动物实验

[0059] 为了验证黄芪中黄酮的药学效果，发明人以实施例2、4、6、9、10为例进行了一系列的动物实验，实验方法和过程如下：

[0060] 1、实验药品

[0061] 将采用醇提法制得的黄芪总黄酮用生理盐水溶解，配成配置成浓度为100 mg/L（实施例2）、120 mg/L（实施例4）、130 mg/L（实施例6）、140 mg/L（实施例9）、150mg/L（实施例10）的注射剂，采用一次性无菌滤器过滤除菌。

[0062] 2、实验方法

[0063] 2.1、将96只健康BALC/c小鼠随机分为A、B、C、D、E、F、G、H 8组，其中A组为单纯给药组， B组为单纯照射组，C、D、E、F、G组为药物治疗组，H组为正常对照组。

[0064] 2.2、分组后，B、C、D、E、F、G组小鼠接受10Gy胸部照射，A、D两组小鼠给予模拟照射。照射后，A组小鼠尾静脉注射浓度150mg/L的黄芪总黄酮注射剂，C组小鼠尾静脉注射浓度100mg/L的黄芪总黄酮注射剂，D组小鼠尾静脉注射浓度120mg/L的黄芪总黄酮注射剂，E组小鼠尾静脉注射浓度130mg/L的黄芪总黄酮注射剂，F组小鼠尾静脉注射浓度140mg/L的黄芪总黄酮注射剂，G组小鼠尾静脉注射浓度150mg/L的黄芪总黄酮注射剂,均为2次/w，每次注射0.1ml；H组小鼠注射生理盐水作为对照。

[0065] 2.3、经上述处理后的各组分别于1w（周）、2w、3w、4w、5w、6w、8w时在麻醉下处死1-2只小鼠，挖眼球法取血，4℃离心获得血清。福尔马林固定肺组织。

[0066] 3、实验结果

[0067] 3.1、肺组织病理

[0068] HE-染色:照射后一周小鼠即出现肺组织炎性改变。其中，单纯照射组（B组）和药物治疗组（C、D、E、F、G组）小鼠光镜下见肺泡壁及肺泡间隙增厚、充血，部分肺泡闭锁，高倍镜视野下可见较多量的巨噬细胞、中性粒细胞浸润，间质水肿，病变以渗出为主，单纯给药组（A组）与正常对照组（H组）无上述变化，具体见图1-4。

[0069] 上述肺组织炎性病变中，单纯照射组明显严重于药物治疗组，其中，药物治疗组E组变化最弱，D、F组次之。

[0070] 3.2、免疫组化结果：

[0071] TGF-β：B组在照射后5w，可见肺间隔肿胀增宽，肺实质内即可见大量TGF-β阳性的细胞。另外有大量纤维细胞，尤其是在血管旁和气管旁的区域内。蛋白阳性表达主要在肺泡上皮细胞、巨噬细胞、支气管黏膜上皮细胞、间质细胞等的胞浆中，多数细胞核呈蓝色。药物治疗组与B组相比表达弱，其中，E组效果最好，表达最弱，D、F组次之。

[0072] TNF-α：B组在照射后3w，可见TNF-α在肺泡间隔、细支气管平滑肌、血管平滑肌、血管内皮、血管周围表达，阳性面积大。蛋白阳性表达主要在肺泡上皮细胞、肺间质巨噬细胞的胞浆中，多数细胞核呈蓝色。药物治疗组与B组相比表达弱，其中，E组效果最好，表达最弱，D、F组次之。

[0073] 3.3、血清抗氧化指标

[0074] 测量各组小鼠中血清SOD含量，结果见下表1：

[0075]

[0076] 从上表可以看出，单纯给药组A的血清SOD含量明显高于正常对照组H（统计学指标P =0.031，差异有统计意义）、单纯照射组B（统计学指标P< 0. 01，差异有高度统计意义）和药物治疗组C、D、E、F、G（统计学指标P<0.01，差异有高度统计意义），具有显著性差异，而正常对照组血清SOD含量明显高于单纯照射组B（统计学指标P< 0. 01，差异有高度统计意义）和药物治疗组C、D、E、F、G（统计学指标P<0.038，差异有统计意义）。由此可以，黄芪总黄酮可提高动物体血清SOD含量，对机体起到保护作用，同时，可以对放射性损害起到预防作用。

[0077] 4、实验总结

[0078] 通过以上实验可以看出，黄芪总黄酮对于放射性原因引起的肺部病变具有良好的治疗作用，它能够减轻肺组织病变，升高血清SOD含量，明显改善放射性急性肺炎的病情，效果良好。

[0079] 上述仅列举了本发明个别实施例的动物实验，其他药物浓度的注射剂也能够减轻肺组织病变，升高血清SOD含量，明显改善放射性急性肺炎的病情。