一种四环素类衍生物在制备放疗增敏药物中的应用

摘要

本发明属于放疗增敏药物领域，涉及一种四环素类衍生物的新用途，即在制备放疗增敏药物中的应用。所述四环素类衍生物的结构式如下所示：。本发明所述四环素类衍生物可以用于制备放射治疗增敏药物，并且可以在无毒副作用的低浓度下，提高肿瘤细胞的放疗敏感性。

权利要求

1.一种四环素类衍生物在制备用于宫颈癌的放疗增敏药物中的应用，所述四环素类衍生物的结构式如下所示： 。

说明书

一种四环素类衍生物在制备放疗增敏药物中的应用

技术领域

[0001] 本发明属于放疗增敏药物领域，涉及一种四环素类衍生物的新用途，即在制备放疗增敏药物中的应用。

背景技术

[0002] 宫颈癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，占女性生殖系统恶性肿瘤的半数以上。目前全球范围每年约有20多万女性死于宫颈癌。我国每年新发现的病例为13.15万，总的趋势是农村高于城市山区高于平原，我国宫颈癌死亡率占总癌症死亡率的第一位。国内女性患宫颈癌年龄为36至50岁，占总患病人数的50%以上。宫颈癌病例也呈现年轻化趋势。因此，宫颈癌的治疗成为研究的热点。目前的宫颈癌治疗方法包括有放射治疗、手术治疗、化学治疗、生物治疗、内分泌治疗、中药治疗、热疗、免疫治疗以及多学科综合治疗。放射治疗是宫颈癌的主要治疗手段之一。宫颈癌的放射治疗包括外照射及腔内照射两部分，各期的宫颈癌均可采用放射治疗，而早期病例以腔内放射治疗为主，体外放射治疗为辅；中期病人内外各半；晚期病例则以体外放射治疗为主，腔内放射治疗为辅。由于高分化鳞癌、腺癌、粘液腺癌等宫颈腺癌对放射治疗不敏感，因此，提高宫颈癌细胞对放射治疗敏感性的增敏药研究是当今宫颈癌放射治疗的研究方向之一。

[0003] 四环素类抗生素是临床广泛应用的广谱抗生素。其既有抗生作用又有抗炎作用。由于大量使用，人体内对四环素的耐药菌株和用药后的不良反应日渐增多，使四环素在临床上的广泛应用和适应性受到了很大限制。因此，研究人员对其结构进行适当的修饰从而以改善四环素的性能。近年来，新型四环素化合物的合成和四环素类非抗菌作用不断发现，为其临床新用开辟了广阔的前景。CMT-8是四环素脱去A环C4位置上的二甲氨基形成的一类无抗菌活性但保留其抗胶原酶活性的化学衍生四环素，其结构式如下所示： 。

[0004] 现有的研究表明CMT-8有良好的亲脂性和组织吸收性；能促进皮肤的伤口愈合；减轻牙周损害和骨质疏松；能抑制肿瘤细胞的生长，目前文献已报道CMT-8对下述肿瘤细胞：J774巨噬细胞、MDA-MB-468乳腺癌细胞、HCT-460肺癌细胞、HL-60白血病细胞的生长有抑制作用。其中对MDA-MB-468乳腺癌细胞、HL-60白血病细胞半数致死剂量分为42μg/ml、3.5μg/ml。（参见：1. Tolomeo M, Grimaudo S, Milano S, La Rosa M, Ferlazzo V, Di Bella G, Barbera C, Simoni D, D'Agostino P, Cillari E. Effects of chemically modified tetracyclines (CMTs) in sensitive,multidrug resistant and apoptosis resistant leukaemia cell lines. Br J Pharmacol. 2001, 133(2):306-14. 2. Pirilä E, Ramamurthy N, Maisi P, McClain S, Kucine A, Wahlgren J, Golub L, Salo T, Sorsa T. Wound healing in ovariectomized rats: effects of chemically modified tetracycline (CMT-8) and estrogen on matrix metalloproteinases -8, -13 and type I collagen expression. Curr Med Chem. 2001, 8(3):281-94。）

[0005] 现有技术中未见关于CMT-8放疗增敏方面的报道。

发明内容

[0006] 本发明的发明目的是提供一种四环素类衍生物的新用途，即在制备放疗增敏药物中的应用。

[0007] 为达到上述发明目的，本发明采用的技术方案是：一种四环素类衍生物在制备放疗增敏药物中的应用，所述四环素类衍生物的结构式如下所示：。

[0008] 发明人将不同浓度（<5 μmol/L）的CMT-8直接加到宫颈癌HeLa细胞培养液中，处理24小时后采用MTT比色法检测细胞生长和增殖，结果发现：小于5 μmol/L的CMT-8对HeLa细胞的生长和增殖并不产生明显的抑制作用。

[0009] 同时，发明人采用不同浓度（0、1、2、3、4或5μmol/L）CMT-8处理HeLa细胞24小时后，再给予细胞6Gy的χ-线照射，然后继续培养24小时后采用MTT比色法检测细胞生长和增殖，结果显示，无毒副作用浓度的CMT-8(< 5μmol/L)预处理可以明显增加放射治疗所诱导的HeLa细胞的细胞死亡率；在1 μmol/L CMT-8处理后，放射诱导的细胞死亡环比增加了30%；而在4μmol/L CMT-8处理后，放射诱导的细胞死亡环比则增加了65%。这些研究数据表明CMT-8在无明显毒副作用浓度下可以增加细胞的放射敏感性。

[0010] 因此，本发明要求保护CMT-8在制备放射治疗增敏药物中的应用。对正常细胞和肿瘤细胞的生长无任何明显作用的用药浓度条件下，采用CMT-8处理肿瘤细胞，可以提高放射治疗的敏感性，从而提高放射治疗疗效。

[0011] 优选的技术方案中，所述放疗增敏药物为适用宫颈癌的放疗增敏药物。

[0012] 由于上述技术方案运用，本发明与现有技术相比具有下列优点：

[0013] 1．本发明所述CMT-8可以用于制备放射治疗增敏药物，并且可以在无毒副作用的低浓度下，提高肿瘤细胞的放疗敏感性。

附图说明

[0014] 图1是实施例一中小于5μmol/L CMT-8 处理24小时对HeLa细胞生长和增殖的影响；

[0015] 图2是是实施例二中CMT-8预处理HeLa细胞的放射治疗敏感性改变。

具体实施方式

[0016] 下面结合附图及实施例对本发明作进一步描述：

[0017] 材料：人宫颈癌细胞株HeLa购于美国细胞收藏中心(ATCC)，并由本实验室保存和培养；DMEM、培养基干粉，小牛血清，胰酶粉末购自Gibco公司；HEPES购自Sigma（美国）；各种规格培养皿、96孔板、6孔板、各种规格离心管购自Fisher公司；噻唑蓝（MTT）、二甲基亚砜（DMSO）均为上海生物技术科技有限公司。

[0018] 实施例一：

[0019] (1) 细胞培养：将细胞培养于含10%小牛血清, 谷氨酸胺及100万U/L青霉素和链霉素的DMEM培养基。细胞置于5%CO2，37℃培养箱内培养，每2-3天传代1次，取对数生长期细胞用于实验。

[0020] (2) 将处于对数生长期的HeLa细胞(6×104/mL)接种至96孔板中，培养24小时后加入不同浓度的CMT-8，加入浓度为0、1、2、3、4、5μmol/L，每个浓度设6个平行孔。继续培养24小时后于细胞培养液中加入μg/mL) 20μL MTT (5 μg/mL) 继续培养4小时。吸弃培养液，每孔加入150μL DMSO，摇床轻柔振荡10分钟。 最后采用酶标仪(A570 nm/A630 nm吸光值)检测光密度，采用细胞存活率=加药组值/对照组值×100%方式计算细胞存活率，所得结果如图1所示，小于5 μmol/L的CMT-8对HeLa细胞的生长和增殖并不产生明显的抑制作用。

[0021] 实施例二

[0022] (1) 细胞培养同实施例一；

[0023] (2) 将处于对数生长期的HeLa细胞(6×104/mL)接种至96孔板中，将不同浓度（0、1、2、3、4、5μmol/L）CMT-8处理HeLa细胞24小时，每个浓度设6个平行孔，然后给予6Gy的χ-线照射，继续孵育24小时后于细胞培养液中加入20 μl MTT(5 μg/mL)继续培养4小时。吸弃培养液，每孔加入150 μL DMSO，摇床轻柔振荡10分钟。 最后采用酶标仪(A570 nm/A630 nm吸光值)检测光密度，计算细胞存活率，所得结果如图2所示，无毒副作用浓度的CMT-8(< 5μmol/L)处理可以明显增加HeLa细胞的放射治疗敏感性， 而且显示出剂量依赖性辐射增敏效果：在1 μmol/L CMT-8处理后，放射诱导的细胞死亡环比增加了
30%；而在4μmol/L CMT-8处理后，放射诱导的细胞死亡环比则增加了65%。这些研究数据表明CMT-8在无明显毒副作用浓度下可以增加细胞的放射敏感性；图中，设6 Gy χ-射线单独照射后细胞存活数量为100%。

[0024] 其中，照射条件：细胞置于直线加速器下，射线性质为高能6兆伏χ-线，照射野为10 cm × 10 cm，源皮距为100 cm，剂量率为200 cGy/min。照射时培养皿面上覆盖1.5 cm厚等效蜡板以调整照射剂量。