一种具有镇痛活性的三棱总酚的制备方法

摘要

本发明公开了一种具有镇痛活性的三棱总酚的制备方法。将三棱粉碎，过40-80目筛，置提取罐中，加入体积量V：三棱粉末重量Kg为5-10:1的50%-95%乙醇，浸渍12小时；将浸渍的三棱回流提取2-4次，每次提取1-3小时，滤过，合并提取液，浓缩，干燥，得到三棱的醇提物；将三棱醇提物干法上聚酰胺柱，先分别以水和5%乙醇洗脱，再用40%-65%的乙醇洗脱，薄层色谱检识，收集40%-65%乙醇洗脱的馏分，浓缩，减压干燥，得三棱总酚，总酚含量为50%-99%。采用醋酸扭体法对制得的三棱总酚进行镇痛活性试验，结果显示三棱总酚物具有明显的镇痛作用。

权利要求

1.一种具有镇痛活性的三棱总酚的制备方法，其特征在于制备步骤如下：（1） 将三棱粉碎，过40-80目筛，得到三棱粉末备用；

（2） 取步骤（1）得到的三棱粉末置提取罐中，加入50%-95%乙醇，加入乙醇的体积量L：三棱粉末重量Kg的比例为5-10:1，浸渍12小时备用；

（3） 取步骤（2）得到的浸渍三棱回流提取2-4次，每次提取1-3小时，滤过，合并提取液，浓缩，干燥，得到三棱的醇提物备用；

（4）取步骤（3）得到的三棱醇提物，以三棱醇提物:聚酰胺=1:1.5的质量比拌样，上聚酰胺柱；先分别用水和5%乙醇洗脱，接着用40%-65%的乙醇洗脱，薄层色谱检识，收集

40%-65%乙醇洗脱的馏分，浓缩，减压干燥，得三棱总酚，总酚含量为50%-99%。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（1）中所述的三棱粉末的粒径为过60目筛。

3. 根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（2）中加入的乙醇浓度为75%，加入乙醇的体积量L：三棱粉末重量Kg比例为8:1。

4. 根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（3）中的提取条件为持续回流2小时，连续提取3次。

5. 根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（4）中收集65%乙醇洗脱的馏分。

说明书

一种具有镇痛活性的三棱总酚的制备方法

技术领域

[0001] 本发明属于医药领域，涉及一种从中药三棱中提取并富集具有镇痛活性的总酚的制备方法。技术背景

[0002] 中药三棱为黑三棱科植物黑三棱(Sparganium stoloniferum Buch.—Hma.)的块茎，始载于唐代《本草拾遗》并沿用至今，其药用价值已受广泛肯定。其性苦、平，入肝、脾经，具有破血行气、消积止痛等功能，属活血化瘀中药。三棱临床应用广泛，常用于治疗肿瘤、肝脾肿大、胁肋疼痛、产后瘀血、盆腔炎等证，疗效确切。三棱的镇痛活性明显，以昆明小鼠为实验，分别采用醋酸扭体法和热板法实验，结果表明：黑三棱的氯仿、乙酸乙酯、正丁醇及水的提取物均具有镇痛作用，且乙酸乙酯提取物的镇痛作用最明显[21邓英君. 三棱不同提取物镇痛及抗凝作用研究[J].时珍国医国药,1999,10(12):882—883.]。三棱生药经炮制后，其镇痛作用有较明显的提高。同样采用上述实验方法对生三棱、醋炙三棱、醋蒸三棱及醋煮三棱进行镇痛实验，结果显示各炮制品的镇痛作用均增强，且醋炙三棱的镇痛作用最显著[22陆兔林等. 三棱炮制品不同提取物镇痛作用研究[J].三棱炮制品不同提取物镇痛作用研究,1998,20(8)：22—23.]。

[0003] 现代药理研究表明，多酚类成分具有较强的镇痛活性（Ghannadi A，J Med Food.2005 ，8(4):488-93；V Hajhashemi，Research in Pharmaceutical Science，2007,92-98），而三棱含有苯丙素类、口山 酮类、黄酮类等多酚类成分，如：阿魏酸及其苷类衍生物、山奈酚、芦丁、芒柄花素、黄酮醇、三棱双苯内酯、2,7-二羟基呫吨酮、三棱二苯乙炔等（董学等.齐鲁药事，2005，24（10），612；董学等，药学学报, 2008, 43(1)：63-66；孔丽娟等，中草药，2011,42（3）:440-4442）.但三棱总酚类成分的制备方法及其镇痛活性未见报道。

发明内容

[0004] 发明目的：本发明的目的是提供具有镇痛活性的三棱总酚的制备方法。本发明的制备方法能有效提取分离三棱中的总酚，提取物中总酚含量高，工艺完善、合理；所制得的三棱总酚具有明显的镇痛活性。

[0005] 技术方案：本发明提供一种具有镇痛活性的三棱总酚的制备方法，具体包括以下步骤：

[0006] (1)将三棱粉碎，过40-80目筛，得到三棱粉末备用；

[0007] (2)取步骤（1）得到的三棱粉末置提取罐中，加入50%-95%乙醇，加入乙醇的体积量V：三棱粉末重量Kg的比例为5-10:1，浸渍12小时备用；

[0008] (3)取步骤（2）得到的浸渍三棱回流提取2-4次，每次提取1-3小时，滤过，合并提取液，浓缩，干燥，得到三棱的醇提物备用；

[0009] (4)取步骤（3）得到的提物三棱醇提物，以三棱醇提物:聚酰胺=1:1.5的质量比拌样，上聚酰胺柱；先分别用水和5%乙醇洗脱，接着用40%-65%的乙醇洗脱，薄层色谱检识，收集40%-65%乙醇洗脱的馏分，浓缩，减压干燥，得三棱总酚，总酚含量为50%-99%。

[0010] 步骤（1）中所述的三棱粉末的粒径为过60目筛。

[0011] 步骤（2）中加入的乙醇浓度为75%，加入乙醇的体积量V：三棱粉末重量Kg比例为8:1。

[0012] 步骤（3）中的提取条件为持续回流2小时，连续提取3次。

[0013] 步骤（4）中收集65%乙醇洗脱的馏分。

[0014] 将得到的三棱总酚，采用醋酸扭体法对三棱总酚进行镇痛活性试验，结果表明三棱总酚痛作用明显。

[0015] 具体实施方式：

[0016] 实施例1：

[0017] 取三棱5Kg，将其粉碎，过40目筛，置提取罐中，加入体积量V：三棱粉末重量Kg为5:1的50%乙醇，浸渍12小时；将浸渍的三棱回流提取2次，每次提取1小时，滤过，合并提取液，浓缩，干燥，得到三棱的醇提物；将三棱醇提物干法上聚酰胺柱，先分别以水和5%乙醇洗脱，再用40%的乙醇洗脱，聚酰胺薄层色谱检识，收集40%乙醇洗脱的馏分，浓缩，减压干燥，得三棱总酚，含量为50.3%。

[0018] 实施例2：

[0019] 取三棱5Kg，将其粉碎，过60目筛，置提取罐中，加入体积量V：三棱粉末重量Kg为5:1的50%乙醇，浸渍12小时；将浸渍的三棱回流提取2次，每次提取1小时，滤过，合并提取液，浓缩，干燥，得到三棱的醇提物；将三棱醇提物干法上聚酰胺柱，先分别以水和5%乙醇洗脱，再用40%的乙醇洗脱，聚酰胺薄层色谱检识，收集40%乙醇洗脱的馏分，浓缩，减压干燥，得三棱总酚，含量为57.8%。

[0020] 实施例3：

[0021] 取三棱5Kg，将其粉碎，过80目筛，置提取罐中，加入体积量V：三棱粉末重量Kg为5:1的50%乙醇，浸渍12小时；将浸渍的三棱回流提取2次，每次提取1小时，滤过，合并提取液，浓缩，干燥，得到三棱的醇提物；将三棱醇提物干法上聚酰胺柱，先分别以水和5%乙醇洗脱，再用40%的乙醇洗脱，聚酰胺薄层色谱检识，收集40%乙醇洗脱的馏分，浓缩，减压干燥，得三棱总酚，含量为53.2%。

[0022] 实施例4：

[0023] 取三棱5Kg，将其粉碎，过60目筛，置提取罐中，加入体积量V：三棱粉末重量Kg为8:1的50%乙醇，浸渍12小时；将浸渍的三棱回流提取2次，每次提取1小时，滤过，合并提取液，浓缩，干燥，得到三棱的醇提物；将三棱醇提物干法上聚酰胺柱，先分别以水和5%乙醇洗脱，再用40%的乙醇洗脱，聚酰胺薄层色谱检识，收集40%乙醇洗脱的馏分，浓缩，减压干燥，得三棱总酚，含量为59.4%。

[0024] 实施例5：

[0025] 取三棱5Kg，将其粉碎，过60目筛，置提取罐中，加入体积量V：三棱粉末重量Kg为10:1的50%乙醇，浸渍12小时；将浸渍的三棱回流提取2次，每次提取1小时，滤过，合并提取液，浓缩，干燥，得到三棱的醇提物；将三棱醇提物干法上聚酰胺柱，先分别以水和5%乙醇洗脱，再用40%的乙醇洗脱，聚酰胺薄层色谱检识，收集40%乙醇洗脱的馏分，浓缩，减压干燥，得三棱总酚，含量为59.6%。

[0026] 实施6：

[0027] 取三棱5Kg，将其粉碎，过60目筛，置提取罐中，加入体积量V：三棱粉末重量Kg为8:1的75%乙醇，浸渍12小时；将浸渍的三棱回流提取2次，每次提取1小时，滤过，合并提取液，浓缩，干燥，得到三棱的醇提物；将三棱醇提物干法上聚酰胺柱，先分别以水和5%乙醇洗脱，再用40%的乙醇洗脱，聚酰胺薄层色谱检识，收集40%乙醇洗脱的馏分，浓缩，减压干燥，得三棱总酚，含量为71.6%。

[0028] 实施例7：

[0029] 取三棱5Kg，将其粉碎，过60目筛，置提取罐中，加入体积量V：三棱粉末重量Kg为8:1的95%乙醇，浸渍12小时；将浸渍的三棱回流提取2次，每次提取1小时，滤过，合并提取液，浓缩，干燥，得到三棱的醇提物；将三棱醇提物干法上聚酰胺柱，先分别以水和5%乙醇洗脱，再用40%的乙醇洗脱，聚酰胺薄层色谱检识，收集40%乙醇洗脱的馏分，浓缩，减压干燥，得三棱总酚，含量为65.1%。

[0030] 实施例8：

[0031] 取三棱5Kg，将其粉碎，过60目筛，置提取罐中，加入体积量V：三棱粉末重量Kg为8:1的75%乙醇，浸渍12小时；将浸渍的三棱回流提取3次，每次提取1小时，滤过，合并提取液，浓缩，干燥，得到三棱的醇提物；将三棱醇提物干法上聚酰胺柱，先分别以水和5%乙醇洗脱，再用40%的乙醇洗脱，聚酰胺薄层色谱检识，收集40%乙醇洗脱的馏分，浓缩，减压干燥，得三棱总酚，含量为75.2%。

[0032] 实施例9：

[0033] 取三棱5Kg，将其粉碎，过60目筛，置提取罐中，加入体积量V：三棱粉末重量Kg为8:1的75%乙醇，浸渍12小时；将浸渍的三棱回流提取4次，每次提取1小时，滤过，合并提取液，浓缩，干燥，得到三棱的醇提物；将三棱醇提物干法上聚酰胺柱，先分别以水和5%乙醇洗脱，再用40%的乙醇洗脱，聚酰胺薄层色谱检识，收集40%乙醇洗脱的馏分，浓缩，减压干燥，得三棱总酚，含量为75.5%。

[0034] 实施例10：

[0035] 取三棱5Kg，将其粉碎，过60目筛，置提取罐中，加入体积量V：三棱粉末重量Kg为8:1的75%乙醇，浸渍12小时；将浸渍的三棱回流提取3次，每次提取2小时，滤过，合并提取液，浓缩，干燥，得到三棱的醇提物；将三棱醇提物干法上聚酰胺柱，先分别以水和5%乙醇洗脱，再用40%的乙醇洗脱，聚酰胺薄层色谱检识，收集40%乙醇洗脱的馏分，浓缩，减压干燥，得三棱总酚，含量为81.7%。

[0036] 实施例11：

[0037] 取三棱5Kg，将其粉碎，过60目筛，置提取罐中，加入体积量V：三棱粉末重量Kg为8:1的75%乙醇，浸渍12小时；将浸渍的三棱回流提取3次，每次提取3小时，滤过，合并提取液，浓缩，干燥，得到三棱的醇提物；将三棱醇提物干法上聚酰胺柱，先分别以水和5%乙醇洗脱，再用40%的乙醇洗脱，聚酰胺薄层色谱检识，收集40%乙醇洗脱的馏分，浓缩，减压干燥，得三棱总酚，含量为82.4%。

[0038] 实施例12：

[0039] 取三棱5Kg，将其粉碎，过60目筛，置提取罐中，加入体积量V：三棱粉末重量Kg为8:1的75%乙醇，浸渍12小时；将浸渍的三棱回流提取3次，每次提取2小时，滤过，合并提