无咖啡因茶多酚及其制备方法

摘要

本发明涉及无咖啡因茶多酚及其制备方法，属于分离提取领域。本发明所解决的技术问题是提供了一种制备无咖啡因茶多酚的方法。本发明制备无咖啡因茶多酚的方法包括如下步骤：a、含咖啡因的茶多酚、含咖啡因的茶叶提取物中的至少一种，经过浓缩或加水溶解后过滤，所得滤液备用；b、a步骤所得滤液上样到凝胶层析柱，用5～25wt％的乙醇溶液洗脱至流出1.3～1.7BV洗脱液，然后改用50～70wt％的乙醇溶液继续洗脱至流出的洗脱液为1.8～2.5BV，收集50～70wt％的乙醇溶液的洗脱液，浓缩收集的洗脱液，干燥，得到茶多酚；其中，所述凝胶过滤层析所用的填料为葡聚糖凝胶LH-20或交联葡聚糖琼脂糖凝胶。

权利要求

1.制备无咖啡因茶多酚的方法，其特征在于包括如下步骤：

a、原料准备：含咖啡因的茶多酚、含咖啡因的茶叶提取物中的至少一种，经过浓缩或加水溶解后，过滤，所得滤液备用；

b、凝胶层析分离：a步骤所得滤液上样到凝胶层析柱，用5～25wt％的乙醇溶液洗脱至流出1.3～1.7BV洗脱液，然后改用50～70wt％的乙醇溶液继续洗脱至流出的洗脱液为

1.8～2.5BV，收集50～70wt％的乙醇溶液的洗脱液，浓缩收集的洗脱液，干燥，得到茶多酚；其中，所述凝胶过滤层析所用的填料为葡聚糖凝胶LH-20或交联葡聚糖琼脂糖凝胶。

2.根据权利要求1所述的制备无咖啡因茶多酚的方法，其特征在于：所述含咖啡因的茶叶提取物采用下述方法制备而成：采用水或乙醇溶液浸提茶叶，然后过滤，浓缩，得到含咖啡因的茶叶提取物。

3.根据权利要求2所述的制备无咖啡因茶多酚的方法，其特征在于：浸提茶叶的乙醇溶液的浓度为0～40wt％。

4.根据权利要求2所述的制备无咖啡因茶多酚的方法，其特征在于：采用水浸提茶叶。

5.根据权利要求1～4任一项所述的制备无咖啡因茶多酚的方法，其特征在于：a步骤中所述的过滤为膜过滤。

6.根据权利要求1～4任一项所述的制备无咖啡因茶多酚的方法，其特征在于：b步骤用5～25wt％的乙醇溶液洗脱时的流速为0.5～1.0BV/h，b步骤用50～70wt％的乙醇溶液洗脱时的流速为0.5～1.0BV/h。

7.根据权利要求1～4任一项所述的制备无咖啡因茶多酚的方法，其特征在于：所述b步骤为：凝胶层析分离：a步骤所得滤液上样到凝胶层析柱，用20wt％的乙醇溶液以0.8BV/h的流速洗脱至流出1.5BV洗脱液，然后用65wt％的乙醇溶液以0.8BV/h的流速继续洗脱至流出的洗脱液为2BV，收集1.5～2BV的洗脱液，浓缩收集液，干燥，得到茶多酚。

说明书

无咖啡因茶多酚及其制备方法

技术领域

[0001] 本发明涉及无咖啡因茶多酚及其制备方法，属于分离提取领域。

背景技术

[0002] 茶多酚是茶叶中一类重要的活性成分，含量一般在占茶叶干重的18％～36％，是一种天然的抗氧化剂，可广泛用于食品、医药、保健品和化妆品等行业，同时还具备降血脂和血糖，降血压和胆固醇，抗动脉硬化、抗突变和抗癌变、抗衰老、抗氧化等功能，以及用于临床治疗多种疾病。

[0003] 目前，制备茶多酚的方法主要有溶剂萃取法、树脂吸附分离法和超临界萃取法。溶剂萃取法是茶多酚目前生产最普遍采用的工艺，其得率高，成本低，但是产品质量较低，咖啡因含量高，有机溶剂残留高，环境成本高。树脂吸附法可生产纯度较高的产品，同时可以减少有机溶剂使用，但具有得率较低、成本高、周期较长的缺点，且不能有效的去除咖啡因而影响茶多酚的品质。超临界萃取法不使用有机溶剂并可得低咖啡因茶多酚，但产品杂质多、产品纯度不高，设备投入和维护成本过高、操作条件严格，要实现工业化生产还有一定难度。

[0004] 茶多酚纯度高低，特别是咖啡因和儿茶素含量直接决定了产品的品质和用途。因此，制备无咖啡因且儿茶素含量高的茶多酚成为本领域目前迫切需要解决的技术难题。

发明内容

[0005] 本发明所要解决的技术问题是提供一种制备无咖啡因茶多酚的方法。

[0006] 本发明制备无咖啡因茶多酚的方法包括如下步骤：

[0007] a、原料准备：含咖啡因的茶多酚、含咖啡因的茶叶提取物中的至少一种，经过浓缩或加水溶解(如果原料为溶液，则浓缩，如果原料为固体或半固体，则加水溶解，为了便于层析分离，最好制备高浓度的溶液，以满足凝胶层析分离的需要)后过滤(优选为膜过滤)，所得滤液备用；

[0008] b、凝胶层析分离：a步骤所得滤液上样到凝胶层析柱，用5～25wt％的乙醇溶液洗脱至流出1.3～1.7BV洗脱液，然后改用50～70wt％的乙醇溶液继续洗脱至流出的洗脱液为1.8～2.5BV，收集50～70wt％的乙醇溶液的洗脱液，浓缩收集的洗脱液，干燥(优选真空冷冻干燥)，得到茶多酚；其中，所述凝胶过滤层析所用的填料为葡聚糖凝胶LH-20或交联葡聚糖琼脂糖凝胶。

[0009] 其中，上述a步骤中的含咖啡因的茶多酚、含咖啡因的茶叶提取物可以采用市售产品，也可以自行制备。如含咖啡因的茶叶提取物可以采用下述方法制备而成：采用水或乙醇溶液浸提茶叶，然后过滤，浓缩，得到含咖啡因的茶叶提取物。

[0010] 其中，用水或乙醇溶液浸提茶叶时，水或乙醇溶液的用量为常规用量即可，进一步的，水或乙醇溶液的用量优选为茶叶重量的6～70倍，水或乙醇溶液的用量最优选为茶叶重量的15～30倍。

[0011] 其中，任意浓度的乙醇溶液包括纯乙醇溶液(即95wt％以上的乙醇溶液)都可以用于茶叶的浸提，为了降低成本，上述a步骤中所述乙醇溶液的浓度优选为0～40wt％。

[0012] 其中，由于用水(沸水)浸提茶叶与用乙醇溶液浸浸提茶叶中茶多酚相比没有明显差异，为了使产品中不残留任何有机试剂，且降低成本，优选采用水(沸水)浸提茶叶。

[0013] 其中，制备含咖啡因的茶叶提取物时，可以采用常规方法进行浓缩，浓缩方法优选为减压旋蒸浓缩。

[0014] 进一步的，为了提高产品的品质，上述b步骤用5～25wt％的乙醇溶液洗脱时的流速优选为0.5～1.0BV/h，b步骤用50～70wt％的乙醇溶液洗脱时的流速优选为0.5～1.0BV/h。

[0015] 更进一步的，为了提高产品的品质，本发明方法的b步骤最优选为：凝胶层析分离：a步骤所得滤液上样到凝胶层析柱，用20wt％的乙醇溶液以0.8BV/h的流速洗脱至流出1.5BV洗脱液，然后用65wt％的乙醇溶液以0.8BV/h的流速继续洗脱至流出的洗脱液为2BV，收集1.5～2BV的洗脱液，浓缩收集液，干燥，得到茶多酚。

[0016] 其中，上述b步骤所述凝胶过滤层析所用的填料优选为葡聚糖凝胶LH-20。

[0017] 本发明还提供了由上述方法所制备的无咖啡因茶多酚。

[0018] 本发明方法操作简单，生产效率高，经济环保，产品无有毒试剂残留，用于食品、医药等行业安全可靠。本发明方法所得茶多酚纯度可以达到98％以上，不含咖啡因，富含儿茶素(儿茶素含量可以达到90％以上)，其中抗氧化活性最强EGCG含量在60％以上。本发明为高品质、高附加值的茶多酚生产提供了一种新的选择，具有广阔的应用前景附图说明

[0019] 图1为柱层析分离制备茶多酚的色谱图，其中，峰A为茶多酚；

[0020] 图2为高效液相分析色谱图，图中，图(A)为产品的色谱图；图(B)为茶叶提取物的色谱图，图(C)为茶叶生化成分标准品的色谱图。

具体实施方式

[0021] 本发明制备无咖啡因茶多酚的方法包括如下步骤：

[0022] a、原料准备：含咖啡因的茶多酚、含咖啡因的茶叶提取物中的至少一种，经过浓缩或加水溶解(如果原料为溶液，则浓缩，如果原料为固体或半固体，则加水溶解，为了便于层析分离，最好制备高浓度的溶液，以满足凝胶层析分离的需要)后过滤(优选为膜过滤)，所得滤液备用；

[0023] b、凝胶层析分离：a步骤所得滤液上样到凝胶层析柱，用5～25wt％的乙醇溶液洗脱至流出1.3～1.7BV洗脱液，然后改用50～70wt％的乙醇溶液继续洗脱至流出的洗脱液为1.8～2.5BV，收集50～70wt％的乙醇溶液的洗脱液，浓缩收集的洗脱液，干燥(优选真空冷冻干燥)，得到茶多酚；其中，所述凝胶过滤层析所用的填料为葡聚糖凝胶LH-20或交联葡聚糖琼脂糖凝胶。

[0024] 其中，上述a步骤中的含咖啡因的茶多酚、含咖啡因的茶叶提取物可以采用市售产品，也可以自行制备。如含咖啡因的茶叶提取物可以采用下述方法制备而成：采用水或乙醇溶液浸提茶叶，然后过滤，浓缩，得到含咖啡因的茶叶提取物。

[0025] 其中，用水或乙醇溶液浸提茶叶时，水或乙醇溶液的用量为常规用量即可，进一步的，水或乙醇溶液的用量优选为茶叶重量的6～70倍，水或乙醇溶液的用量最优选为茶叶重量的15～30倍。

[0026] 其中，任意浓度的乙醇溶液包括纯乙醇溶液(即95wt％以上的乙醇溶液)都可以用于茶叶的浸提，为了降低成本，上述a步骤中所述乙醇溶液的浓度优选为0～40wt％。

[0027] 其中，由于用水(沸水)浸提茶叶与用乙醇溶液浸浸提茶叶中茶多酚相比没有明显差异，为了使产品中不残留任何有机试剂，且降低成本，优选采用水(沸水)浸提茶叶。

[0028] 其中，制备含咖啡因的茶叶提取物时，可以采用常规方法进行浓缩，浓缩方法优选为减压旋蒸浓缩。

[0029] 进一步的，为了提高产品的品质，上述b步骤用5～25wt％的乙醇溶液洗脱时的流速优选为0.5～1.0BV/h，b步骤用50～70wt％的乙醇溶液洗脱时的流速优选为0.5～1.0BV/h。

[0030] 更进一步的，为了提高产品的品质，本发明方法的b步骤最优选为：凝胶层析分离：a步骤所得滤液上样到凝胶层析柱，用20wt％的乙醇溶液以0.8BV/h的流速洗脱至流出1.5BV洗脱液，然后用65wt％的乙醇溶液以0.8BV/h的流速继续洗脱至流出的洗脱液为2BV，收集1.5～2BV的洗脱液，浓缩收集液，干燥，得到茶多酚。

[0031] 其中，上述b步骤所述凝胶过滤层析所用的填料优选为葡聚糖凝胶LH-20。

[0032] 本发明还提供了由上述方法所制备的无咖啡因茶多酚。

[0033] 下面结合实施例对本发明的具体实施方式做进一步的描述，并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。

[0034] 实施例1采用本发明方法从茶叶中提取无咖啡因茶多酚

[0035] 3g茶叶加沸水50ml浸提30min，过0.45μm孔径的滤膜，滤液浓缩上样到填充好的葡聚糖凝胶LH-20(购至GE医疗集团)柱子，然后用20wt％的乙醇溶液以0.8BV/h的流速洗脱至流出1.5BV洗脱液，然后改用65wt％的乙醇溶液以0.8BV/h的流速继续洗脱，收集1.5～2BV的洗脱液，洗脱液浓缩、真空冷冻干燥得到产品。

[0036] 柱层析分离制备茶多酚的色谱图如图1所示，其中，峰A即为茶多酚。按照标准《GB/T8313-2008茶叶中茶多酚和儿茶素类含量的检测方法》、《GB/T 8312-2002茶咖啡碱测定》、《QB2154-95食品添加剂茶多酚》对产品进行检测，结果如图2所示，通过定量计算可知产品儿茶素含量高达90.05，其中抗氧化活性最强EGCG含量达61.62％。茶多酚产品纯度为97.82％，咖啡因未检出。

[0037] 经测定，本实施例茶多酚的得率为12.27％，柱层析对茶多酚的回收率为92.30％。

[0038] 实施例2采用本发明方法从茶叶中提取无咖啡因茶多酚

[0039] 3g茶叶加乙醇溶液(浓度20wt％)70ml并加热至沸腾浸提30min，过0.45μm孔径的滤膜，滤液浓缩上样到填充好的琼脂糖交联葡聚糖凝胶(购至GE医疗集团)柱子，然后用20wt％的乙醇溶液以0.6BV/h的流速洗脱至流出1.6BV洗脱液，然后改用67wt％的乙醇溶液以0.6BV/h的流速继续洗脱，收集1.6～2.1BV的洗脱液，洗脱液浓缩、真空冷冻干燥得到产品。

[0040] 按实施例1的方法检测产品，结果：茶多酚产品纯度为98.53％，咖啡因未检出，儿茶素含量高达91.20，其中抗氧化活性最强EGCG含量达62.45％。

[0041] 经测定，本实施例茶多酚的得率为11.78％，柱层析对茶多酚的回收率为90.94％。