糖化血红蛋白分析仪四梯度洗脱分析法

摘要

本发明涉及一种离子交换层析法检测糖化血红蛋白浓度的糖化血红蛋白分析仪四梯度洗脱分析法。本发明的方法是：设置四种固定浓度的洗脱液，使其分别对吸附有待测样本的阳离子交换树脂进行洗脱，并对洗脱后的液体进行色谱分析，确定洗脱成份的含量，进而确定血糖浓度；所述的四种洗脱液分别为：A洗脱液，用于阳离子交换树脂清洗、平衡；B洗脱液，用于洗脱糖化血红蛋白其他亚组分HbA1a、HbA1b；C洗脱液，用于洗脱糖化血红蛋白HbA1c亚组分；D洗脱液:用于洗脱非糖化血红蛋白及再生阳离子交换树脂。本发明在准确检测糖化血红蛋浓度同时，可简化检测设备结构和检测程序、提高设备运行可靠性、降低设备成本，同时可减少洗脱液交叉污染。

权利要求

1.一种糖化血红蛋白分析仪四梯度洗脱分析法，其特征是：设置四种固定浓度的洗脱液，使其分别对吸附有待测样本的阳离子交换树脂进行洗脱，并对洗脱后的液体进行色谱分析，确定洗脱成份的含量，进而确定糖化血红蛋白浓度；

所述的四种洗脱液分别为：

A洗脱液，用于阳离子交换树脂清洗、平衡；其组成成份及重量比百分比为：NaH2PO4

0.146～0.166%、Na2HPO4 0.035～0.055%、NaCl 0.022～0.024%、KCl 0.032～0.034%、NaN3 0.019～0.021%、去离子水 余量；

B洗脱液，用于洗脱糖化血红蛋白其他亚组分HbA1a、HbA1b；其组成成份及重量比百分比为：NaH2PO4 0.124～0.144%、Na2HPO4 0.043～0.063%、NaCl 0.341～0.361%、KCl 0.034～

0.036%、NaN3 0.019～0.021%、去离子水 余量；

C洗脱液，用于洗脱糖化血红蛋白HbA1c亚组分；其组成成份及重量比百分比为：NaH2PO4 0.118～0.138%、Na2HPO4 0.039～0.041%、NaCl 0.688～0.708%、KCl 0.072～

0.074%、NaN3 0.019～0.021%、去离子水 余量；

D洗脱液: 用于洗脱非糖化血红蛋白及再生阳离子交换树脂；其组成成份及重量比百分比为：NaH2PO4 0.1～0.12%、Na2HPO4 0.064～0.074%、NaCl 1.605～1.805%、NaN3

0.019～0.021%、去离子水 余量。

说明书

糖化血红蛋白分析仪四梯度洗脱分析法

技术领域

[0001] 本发明涉及一种离子交换层析法检测糖化血红蛋白浓度的糖化血红蛋白分析仪四梯度洗脱分析法。

背景技术

[0002] 人体血液中糖化血红蛋白的浓度是糖尿病诊断的重要临床指标。正常血红蛋白(Hb)被糖化后会形成多种亚组分，但最主要的亚组分为HbA1c，其形成后结构稳定，有90～120天的生命周期。通过检测该指标，可反映糖尿病人三个月的平均血糖水平。因此，临床上一般以该指标作为糖尿病人的筛查、诊断、治疗的重要依据。

[0003] 现在糖化血红蛋白的测定方法有离子交换层析法、电泳法、免疫比浊法和亲和层析法。最主要的方法为离子交换层析法。

[0004] 采用离子交换层析法是基于血红蛋白糖化后会导致血红蛋白分子表面阳离子丢失。当含有糖化血红蛋白的样本经过阳离子交换层析柱时，糖化血红蛋白和非糖化血红蛋白均被阳离子交换树脂所吸附。因不同亚组分的糖化血红蛋白和非糖化血红蛋白分子表面所带正电荷各不相同，所以与阳离子交换树脂的吸附力也各不相同。用不同离子浓度的洗脱液，采取由低到高的梯度洗脱方法，可以逐次洗脱出不同亚组分的糖化血红蛋白和非糖化血红蛋白。

[0005] 目前临床上采用离子交换液相层析法来分离糖化血红蛋白的方法，其中又分为离子交换高效液相色谱分析法(HPLC)和离子交换低压液相色谱分析法(LPLC)。其中，离子交换高效液相色谱分析法(HPLC)为糖化血红蛋白HbA1c国际公认的金标准分析方法。上述两种方法为能分离出多种糖化血红蛋白亚组分，均只采用两种离子浓度的洗脱液，即一种高离子浓度洗脱液和一种低离子浓度洗脱液。在使用时，是通过机内设置一个机械式的六通旋转分配阀来配比生成不同离子浓度的洗脱液，以对样本进行洗脱。理论上讲，配比出的离子浓度种类越多，能洗脱的亚组分越多。高压液相层析法由于采用能耐受近180个大气压的离子交换层析柱，因此，一般可以层析出多达十几种糖化血红蛋白的亚组分。而低压液相层析法的仪器，虽压力为常压，但也能分离出近2-3种糖化血红蛋白亚组分。而临床实践中，真正具有指导意义的指标只有HbA1c，其他亚组分对临床上糖尿病的筛查、治疗效果的检查没有太大的实际意义，一般只能用于研究或特殊病例。因而分离出的大多数结果对临床的指导意义并不大。但由于采用机内配比不同浓度洗脱液，必然带来仪器的复杂程度增高、故障率增加，洗脱液的交叉污染严重，仪器的制造、维修、使用的成本也高。

发明内容

[0006] 本发明所要解决的技术问题是，提供一种在准确检测糖化血红蛋白浓度同时，可简化检测设备结构和检测程序、提高设备运行可靠性、降低设备成本，同时可减少洗脱液交叉污染的糖化血红蛋白分析仪四梯度洗脱分析法。

[0007] 本发明的方法是：设置四种固定浓度的洗脱液，使其分别对吸附有待测样本的阳离子交换树脂进行洗脱，并对洗脱后的液体进行色谱分析，确定洗脱成份的含量，进而确定糖化血红蛋白浓度；

[0008] 所述的四种洗脱液分别为：

[0009] A洗脱液，用于阳离子交换树脂清洗、平衡；其组成成份及重量百分比为：NaH2PO40.146～0.166％、Na2HPO4 0.035～0.055％、NaCl 0.022～0.024 ％、KCl 0.032～
0.034％、NaN3 0.019～0.021％、去离子水余量；

[0010] B洗脱液，用于洗脱糖化血红蛋白其他亚组分HbA1a、HbA1b；其组成成份及重量比百分比为：NaH2PO4 0.124～0.144％、Na2HPO4 0.043～0.063％、NaCl 0.341～0.361％、KCl0.034～0.036％、NaN3 0.019～0.021％、去离子水余量；

[0011] C洗脱液，用于洗脱糖化血红蛋白HbA1c亚组分；其组成成份及重量比百分比为：NaH2PO4 0.118～0.138％、Na2HPO4 0.039～0.041％、NaCl0.688～0.708％、KCl 0.072～
0.074％、NaN3 0.019～0.021％、去离子水余量；

[0012] D洗脱液：用于洗脱非糖化血红蛋白及再生阳离子交换树脂；其组成成份及重量比百分比为：NaH2PO4 0.1～0.12％、Na2HPO4 0.064～0.074％、NaCl 1.605～1.805％、NaN3 0.019～0.021％、去离子水余量；

[0013] 采用本发明方法的仪器也只需采用普通的电磁阀和简单的流路系统在常压的条件下就能实现只有高效液相层析法在高压条件下才能实现的糖化血红蛋白HbA1c的分离精度，也避免了为配比多种离子浓度洗脱液而必须采用的结构复杂的六通旋转分配阀，消除了不同浓度洗脱液之间的交叉污染影响，可使洗脱液的离子浓度更精确可靠，糖化血红蛋白HbA1c亚组分的分离精度更高。

[0014] 由于人体血液中的糖化血红蛋白的浓度是诊断糖尿病的重要临床指标。人体血液中正常血红蛋白(Hb)由三种血红蛋白亚组分组成：血红蛋白A(HbA)，血红蛋白F(HbF)，血红蛋白A2(HbA2)。成人血红蛋白中主要含有血红蛋白A(HbA)，约占整个血红蛋白的95％～97％。而血红蛋白A(HbA)又由两种亚组分组成：糖化血红蛋白(HbA1)(5％～7％)和非糖化血红蛋白(HbA0)(90％)。糖化血红蛋白(HbA1)是血红蛋白(Hb)与糖类(如葡萄糖、
6-磷酸葡萄糖或1.6-二磷酸果糖)经非酶促结合而成的。在糖化血红蛋白(HbA1)中，除存在少量其他不同变异体外，主要亦有三种亚组分，分别为：HbA1a、HbA1b和HbA1c。其中，HbA1c约占HbA1的75％～80％，且结构稳定。因此，通过本发明的方法对糖化血红蛋白(HbA1)的各亚组分及非糖化血红蛋白(HbA0)进行精确的洗脱分离就可以通过理论推导获得糖化血红蛋白的浓度。

[0015] 经试验对比，本发明方法的检测结果能够完全满足临床诊断的需要。

附图说明

[0016] 图1是本发明方法实施例所采用的检测设备原理图。

具体实施方式

[0017] 在图1所示的检测设备中，设置四种独立的洗脱液，即：A洗脱液1、B洗脱液2、C洗脱液3、D洗脱液4，四种洗脱液容器的出口管路分别由各自的电磁阀控制，并可分别在蠕动泵5的作用下经过吸附了待测样本的阳离子交换树脂6，洗脱后进入比色池进行色谱分析。

[0018] 洗脱液的具体实施例如下：

[0019] 实施例一

[0020]

[0021] 实施例二

[0022]

[0023] 实施例三

[0024]

[0025] 将上述实施例的洗脱液用于糖化血红蛋白分析仪中，进行四梯度洗脱分析，对其精密度和准确度进行试验，结果如下：

[0026] 1.精密度试验

[0027]序号 实施例一 实施例二 实施例三
1 9.85 9.80 9.75
2 9.80 9.58 9.77
3 9.76 9.70 9.49
4 9.74 9.86 9.76
5 9.56 9.76 9.80
6 9.79 9.76 9.64
7 9.56 9.59 9.59
8 9.76 9.76 9.55
9 9.46 9.64 9.65
10 9.75 9.66 9.63
均值 9.70 9.71 9.66
标准偏差 0.13 0.09 0.10
变异系数(％) 1.32 0.95 1.07

[0028] 2.准确度试验

[0029]序号 实施例一 实施例二 实施例三
1 5.76 5.59 5.66
2 5.74 5.54 5.71
3 5.61 5.61 5.69
均值 5.70 5.58 5.69
质控品靶值 5.5 5.5 5.5
准确度(％) 0.2 0.08 0.19