一种极东锦鸡儿的微繁方法，它涉及一种微繁方法。它解决了极东锦鸡儿数量稀少、繁殖周期长、增殖效率低的问题。方法：一、带芽茎段预处理后进行增殖培养，得丛生芽苗；二、丛生芽苗切离后进行生根培养，得再生植株；三、再生植株进行移植培养至长出的新叶完全展开，获得极东锦鸡儿苗木即完成。本发明中极东锦鸡儿的微繁，对母本破坏小，繁殖周期短，繁殖速度快，增殖效率高(每1个月增殖30～40倍)，而且产生的后代遗传稳定性好；苗木成活率高达80％～85％；可以实现缩短繁殖周期、提高繁殖效率、有效扩大极东锦鸡儿资源数量的目标。
1.一种极东锦鸡儿的微繁方法，其特征在于极东锦鸡儿的微繁方法按以下步骤实现：一、切取极东锦鸡儿植株个体的带芽茎段进行预处理，然后接种到含0.1～1mg/L玉米素、
20～40g/L蔗糖和5～7g/L琼脂的DKW培养基上，在温度为20～30℃、湿度为40％～-2 -1
80％、光照强度为20～100μmol·m ·s 、每天光照12～24h、每10～30天更换新鲜培养基的条件下培养1～3个月，获得丛生芽苗；
二、挑选健壮的丛生芽苗，以单个芽苗为单位进行切离，将切离后的单个芽苗切割成长度为1.5～5.0cm的带顶芽的茎段，然后将带顶芽的茎段接种到含有0.05～0.5mg/L吲哚丁酸、20～40g/L蔗糖和5～7g/L琼脂的WPM培养基上，在温度为20～30℃、湿度为-2 -1
40％～80％、光照强度为20～100μmol·m ·s 、每天光照12～24h、每10～30天更换新鲜培养基的条件下培养1～2个月，获得再生植株；
三、将株高达4cm、根系发达、叶片展开的再生植株在培养室内敞口炼苗3d，然后洗净根系附着的培养基，再移植到栽培基质中并浇透水，在温度为20～30℃、湿度为60％～-2 -1
80％、光照强度为40～100μmol·m ·s 、每天光照12～18h的条件下用塑料薄膜覆盖容器口培养至长出的新叶完全展开后，去掉覆盖的塑料薄膜，获得极东锦鸡儿苗木，即完成极东锦鸡儿的微繁方法；其中步骤三中栽培基质按体积份数比由5份的草炭土、4份的蛭石和1份的珍珠岩组成。
2.根据权利要求1所述的一种极东锦鸡儿的微繁方法，其特征在于步骤一中极东锦鸡儿植株个体的带芽茎段为带有顶芽或腋芽、且长度为1.0～2.0cm的茎段。
3.根据权利要求1所述的一种极东锦鸡儿的微繁方法，其特征在于步骤一中预处理的过程为：用体积浓度为70％～80％的乙醇溶液浸泡20～60s后再用另一份体积浓度为70％～80％的乙醇溶液浸泡20～60s，然后用无菌水冲洗3～7次，再用质量浓度为
0.05％～0.2％的氯化汞溶液搅拌浸泡8～15min，然后用无菌水冲洗3～7次。
4.根据权利要求1所述的一种极东锦鸡儿的微繁方法，其特征在于步骤一中在温度为-2 -1
25℃、湿度为60％、光照强度为50μmol·m ·s 、每天光照16h、每15天更换新鲜培养基的条件下培养2个月，获得丛生芽苗。
5.根据权利要求1所述的一种极东锦鸡儿的微繁方法，其特征在于步骤二中在温度为-2 -1
27℃、湿度为70％、光照强度为60μmol·m ·s 、每天光照18h、每20天更换新鲜培养基的条件下培养1.5个月，获得再生植株。
6.根据权利要求1所述的一种极东锦鸡儿的微繁方法，其特征在于步骤三中在温度为-2 -1
25℃、湿度为70％、光照强度为40μmol·m ·s 、每天光照16h的条件下用塑料薄膜覆盖容器口培养至长出的新叶完全展开后，去掉覆盖的塑料薄膜，获得极东锦鸡儿苗木。
一种极东锦鸡儿的微繁方法
技术领域
[0001] 本发明涉及一种微繁方法。
背景技术
[0002] 极东锦鸡儿(Caragana fruticosa)是豆科锦鸡儿属的一种分布范围极狭、资源量极少的濒危树种，喜光、耐寒、耐干旱、耐瘠薄，适宜于作绿化观赏、蜜源和饲料植物及荒山绿化和水土保持林造林树种。极东锦鸡儿在我国主要分布于黑龙江省尚志市帽儿山山顶的岩石裸露处，分布面积很小，是黑龙江省特有种，已处于灭绝边缘。开发极东锦鸡儿规模化繁殖技术，不但可以有效扩大极东锦鸡儿资源数量，而且可以增加东北地区尤其是干旱、瘠薄、寒冷地带的可利用树种资源，生态和经济意义重大。
[0003] 极东锦鸡儿用种子繁殖。但是由于极东锦鸡儿数量稀少，导致可采种资源严重不足。同时，极东锦鸡儿育性很差，果荚内经常无种子或仅有1粒种子，种实害虫严重，种子被害率很高，并且利用种子繁殖存在苗木生长速度较慢，长势不齐，很难在短时间内繁殖出大量、优质的苗木的问题。因此，依靠种子繁殖进行资源扩繁是不现实的。如果利用嫩枝扦插或嫁接的方式进行繁殖，存在可利用植物材料不足，繁殖周期长，增殖效率低的问题，因此很难在短时间内实现极东锦鸡儿苗木的资源扩繁，使极东锦鸡儿的种质资源保存和生态经济利用受到了限制。
发明内容
[0004] 本发明的目的是为了解决极东锦鸡儿数量稀少、繁殖周期长、增殖效率低的问题，而提供的一种极东锦鸡儿的微繁方法。
[0005] 极东锦鸡儿的微繁方法按以下步骤实现：一、切取极东锦鸡儿植株个体的带芽茎段进行预处理，然后接种到含0.1～1mg/L细胞分裂素、20～40g/L蔗糖和5～7g/L琼脂的增殖培养基上，在温度为20～30℃、湿度为40％～80％、光照强度为20～-2 -1100μmol·m ·s 、每天光照12～24h、每10～30天更换新鲜培养基的条件下培养1～
3个月，获得丛生芽苗；
[0006] 二、挑选健壮的丛生芽苗，以单个芽苗为单位进行切离，将切离后的单个芽苗切割成长度为1.5～5.0cm的带顶芽的茎段，然后将带顶芽的茎段接种到含有0.05～0.5mg/L生长素、20～40g/L蔗糖和5～7g/L琼脂的生根培养基上，在温度为20～30℃、湿度为-2 -140％～80％、光照强度为20～100μmol·m ·s 、每天光照12～24h、每10～30天更换新鲜培养基的条件下培养1～2个月，获得再生植株；
[0007] 三、将株高达4cm、根系发达、叶片展开的再生植株在培养室内敞口炼苗3d，然后洗净根系附着的培养基，再移植到栽培基质中并浇透水，在温度为20～30℃、湿度为-2 -160％～80％、光照强度为40～100μmol·m ·s 、每天光照12～18h的条件下用塑料薄膜覆盖容器口培养至长出的新叶完全展开后，去掉覆盖的塑料薄膜，获得极东锦鸡儿苗木，即完成极东锦鸡儿的微繁方法；
[0008] 其中步骤一中增殖培养基为MS培养基、1/2MS培养基(MS培养基中大量元素浓度减半)、DKW培养基、WPM培养基或QL培养基，pH值均为5～6；
[0009] 步骤一中细胞分裂素为苄基腺嘌呤(BA)、玉米素(ZT)、激动素(KT)或噻苯隆(TDZ)；
[0010] 步骤二中生根培养基为1/2MS培养基、DKW培养基或WPM培养基，pH值均为5～6；
[0011] 步骤二中生长素为萘乙酸(NAA)或吲哚丁酸(IBA)；
[0012] 步骤三中栽培基质按体积份数比由5份的草炭土、4份的蛭石和1份的珍珠岩组成。
[0013] 本发明中极东锦鸡儿的微繁(即为极东锦鸡儿芽增殖途径的植株再生)，对母本破坏小，繁殖周期短，繁殖速度快，增殖效率高(每1个月增殖30～40倍)，而且产生的后代遗传稳定性好；苗木成活率高达80％～85％；可以实现缩短繁殖周期、提高繁殖效率、有效扩大极东锦鸡儿资源数量的目标。
具体实施方式
[0014] 具体实施方式一：本实施方式极东锦鸡儿的微繁方法按以下步骤实现：一、切取极东锦鸡儿植株个体的带芽茎段进行预处理，然后接种到含0.1～1mg/L细胞分裂素、20～40g/L蔗糖和5～7g/L琼脂的增殖培养基上，在温度为20～30℃、湿度为40％～80％、光-2 -1
照强度为20～100μmol·m ·s 、每天光照12～24h、每10～30天更换新鲜培养基的条件下培养1～3个月，获得丛生芽苗；
[0015] 二、挑选健壮的丛生芽苗，以单个芽苗为单位进行切离，将切离后的单个芽苗切割成长度为1.5～5.0cm的带顶芽的茎段，然后将带顶芽的茎段接种到含有0.05～0.5mg/L生长素、20～40g/L蔗糖和5～7g/L琼脂的生根培养基上，在温度为20～30℃、湿度为-2 -140％～80％、光照强度为20～100μmol·m ·s 、每天光照12～24h、每10～30天更换新鲜培养基的条件下培养1～2个月，获得再生植株；
[0016] 三、将株高达4cm、根系发达、叶片展开的再生植株在培养室内敞口炼苗3d，然后洗净根系附着的培养基，再移植到栽培基质中并浇透水，在温度为20～30℃、湿度为-2 -160％～80％、光照强度为40～100μmol·m ·s 、每天光照12～18h的条件下用塑料薄膜覆盖容器口培养至长出的新叶完全展开后，去掉覆盖的塑料薄膜，获得极东锦鸡儿苗木，即完成极东锦鸡儿的微繁方法；
[0017] 其中步骤一中增殖培养基为MS培养基、1/2MS培养基(MS培养基中大量元素浓度减半)、DKW培养基、WPM培养基或QL培养基，pH值均为5～6；
[0018] 步骤一中细胞分裂素为苄基腺嘌呤(BA)、玉米素(ZT)、激动素(KT)或噻苯隆(TDZ)；
[0019] 步骤二中生根培养基为1/2MS培养基、DKW培养基或WPM培养基，pH值均为5～6；
[0020] 步骤二中生长素为萘乙酸(NAA)或吲哚丁酸(IBA)；
[0021] 步骤三中栽培基质按体积份数比由5份的草炭土、4份的蛭石和1份的珍珠岩组成。
[0022] 本实施方式步骤一中极东锦鸡儿植株个体的带芽茎段为无菌组织培养苗的带芽茎段或野外多年生植株的带芽茎段。
[0023] 本实施方式步骤一中每10～30天更换新鲜培养基，在每次更换新鲜培养基前可将已经形成的丛生芽分割成小的丛芽群，然后分别接种到新鲜培养基上，可循环重复进行，以获得更多增殖倍数的芽苗，直至产生能够满足需求的芽苗数量。
[0024] 本实施方式步骤三中移植后的培养过程中每天用喷雾器喷水1次。
[0025] 本实施方式中涉及的MS培养基、1/2MS培养基、DKW培养基、WPM培养基和QL培养基的成分如表1所示。
[0026] 表1
[0027]
[0028] 具体实施方式二：本实施方式与具体实施方式一的不同是步骤一中极东锦鸡儿植株个体的带芽茎段为带有顶芽或腋芽、且长度为1.0～2.0cm的茎段。其它步骤及参数与具体实施方式一相同。
[0029] 具体实施方式三：本实施方式与具体实施方式一的不同是步骤一中预处理的过程为：用体积浓度为70％～80％的乙醇溶液浸泡20～60s后再用另一份体积浓度为70％～80％的乙醇溶液浸泡20～60s，然后用无菌水冲洗3～7次，再用质量浓度为0.05％～
0.2％的氯化汞溶液搅拌浸泡8～15min，然后用无菌水冲洗3～7次。其它步骤及参数与具体实施方式一相同。
[0030] 本实施方式中氯化汞溶液可加入1～2滴吐温80。
[0031] 具体实施方式四：本实施方式与具体实施方式一的不同是步骤一中在温度为-2 -125℃、湿度为60％、光照强度为50μmol·m ·s 、每天光照16h、每15天更换新鲜培养基的条件下培养2个月，获得丛生芽苗。其它步骤及参数与具体实施方式一相同。
[0032] 具体实施方式五：本实施方式与具体实施方式一的不同是步骤二中在温度为-2 -127℃、湿度为70％、光照强度为60μmol·m ·s 、每天光照18h、每20天更换新鲜培养基的条件下培养1.5个月，获得再生植株。其它步骤及参数与具体实施方式一相同。
[0033] 具体实施方式六：本实施方式与具体实施方式一的不同是步骤三中在温度为-2 -125℃、湿度为70％、光照强度为40μmol·m ·s 、每天光照16h的条件下用塑料薄膜覆盖容器口培养至长出的新叶完全展开后，去掉覆盖的塑料薄膜，获得极东锦鸡儿苗木。其它步骤及参数与具体实施方式一相同。
[0034] 具体实施方式七：本实施方式极东锦鸡儿的微繁方法按以下步骤实现：一、切取极东锦鸡儿植株个体的带芽茎段进行预处理，然后接种到含0.5mg/L苄基腺嘌呤、20g/L蔗-2 -1糖和6g/L琼脂的MS培养基上，在温度为25℃、湿度为70％、光照强度为40μmol·m ·s 、每天光照16h、每20天更换新鲜培养基的条件下培养1个月，获得丛生芽苗；
[0035] 二、挑选健壮的丛生芽苗，以单个芽苗为单位进行切离，将切离后的单个芽苗切割成长度为1.5cm的带顶芽的茎段，然后将带顶芽的茎段接种到含有0.05mg/L萘乙酸、25g/L蔗糖和6g/L琼脂的1/2MS培养基上，在温度为25℃、湿度为70％、光照强度为-2 -140μmol·m ·s 、每天光照16h、每20天更换新鲜培养基的条件下培养1个月，获得再生植株；
[0036] 三、将株高达4cm、根系发达、叶片展开的再生植株在培养室内敞口炼苗3d，然后洗净根系附着的培养基，再移植到栽培基质中并浇透水，在温度为25℃、湿度为70％、光照-2 -1强度为40μmol·m ·s 、每天光照16h的条件下用塑料薄膜覆盖容器口培养至长出的新叶完全展开后，去掉覆盖的塑料薄膜，获得极东锦鸡儿苗木，即完成极东锦鸡儿的微繁方法；
[0037] 其中培养基的pH值均为5.8；步骤三中栽培基质按体积份数比由5份的草炭土、4份的蛭石和1份的珍珠岩组成。
[0038] 本实施方式步骤一中极东锦鸡儿植株个体的带芽茎段为野外多年生植株的一年生枝条的带休眠芽茎段。
[0039] 本实施方式步骤一中预处理的过程为：用体积浓度为75％的乙醇溶液浸泡30s后再用另一份体积浓度为75％的乙醇溶液浸泡30s，然后用无菌水冲洗5次，再用质量浓度为0.1％的氯化汞溶液(加入2滴吐温80)搅拌浸泡15min，然后用无菌水冲洗5次。
[0040] 本实施方式中每1个月增殖数量可达30倍，且移栽成活率达82％。
[0041] 具体实施方式八：本实施方式极东锦鸡儿的微繁方法按以下步骤实现：一、切取极东锦鸡儿植株个体的带芽茎段进行预处理，然后接种到含0.6mg/L玉米素、25g/L蔗糖和-2 -17g/L琼脂的DKW培养基上，在温度为25℃、湿度为70％、光照强度为50μmol·m ·s 、每
