1，3-二环己基-1，2，3，6-四氢嘧啶-4，5-二甲酸二乙酯在制备抗炎镇痛的药物中的应用

摘要

本发明涉及1，3-二环己基-1，2，3，6-四氢嘧啶-4，5-二甲酸二乙酯在制备抗炎镇痛的药物中的应用。本发明所述的药物由1，3-二环己基-1，2，3，6-四氢嘧啶-4，5-二甲酸二乙酯和药学上可以接受的辅料组成，其中，1，3-二环己基-1，2，3，6-四氢嘧啶-4，5-二甲酸二乙酯的含量为1～20％。本发明所述的药物是片剂或胶囊等口服制剂。

权利要求

1.1，3-二环己基-1，2，3，6-四氢嘧啶-4，5-二甲酸二乙酯在制备抗炎镇痛的药物中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征是，所述的药物中1，3-二环己基-1，2，3，6-四氢嘧啶-4，5-二甲酸二乙酯的重量百分比含量为1～20％。

3.根据权利要求1所述的应用，其特征是，所述的药物是片剂、胶囊剂或丸剂。

说明书

1，3-二环己基-1，2，3，6-四氢嘧啶-4，5-二甲酸二乙酯在

制备抗炎镇痛的药物中的应用

技术领域

[0001] 本发明涉及含有机有效成分的医药配制品，具体涉及含有氮作为杂环原子的六元环的杂环系统的药物。

背景技术

[0002] 炎症反应一般具有红、肿、热、痛及机能障碍等特征，是多种疾病，如急、慢性炎性关节炎、风湿热、哮喘、创/烧伤、内毒素休克、慢性阻塞性肺部疾病等发生、发展过程中最常见的反应。严重的炎症反应可导致较大范围的组织细胞损坏，使组织细胞变性、坏死，引起机体出现难以忍受的疼痛、高热等，甚至出现死亡，严重地降低了患者的生存、生活质量。

[0003] 目前，临床上使用的抗炎药物主要为两类，即非甾体抗炎药和甾体抗炎药。非甾体抗炎药(Nonsteroidal anti-inflammatory drugs，NSAIDs)是目前世界上处方量最大的药物之一，广泛用于治疗各种急性和慢性炎症，特别是类风湿性关节炎和骨关节炎等。目前市场上有两大类NSAIDs，一类是非选择性环氧化酶抑制剂，另一类是选择性环氧化酶-2(COX-2)抑制剂。然而，非选择性环氧化酶抑制剂容易导致严重的胃肠道反应，选择性COX-2抑制剂长期使用又有诱发心血管不良事件的危险。甾体类抗炎药虽然有很强的抗炎作用，但由于其作用广泛、不良反应严重亦限制了其在临床上的应用。

[0004] 1，3-二 环 己 基-1，2，3，6- 四 氢 嘧 啶-4，5-二 甲 酸 二 乙 酯 (Diethyl1，3-dicyclohexyl-1，2，3，6-tetrahydropyrimidine-4，5-dicarboxylate)，代号为ZL-5010，属四氢嘧啶类化合物，其化学结构式如下式I所示，分子式为C22H36N2O4，分子量是392。1，
3-二环己基-1，2，3，6-四氢嘧啶-4，5-二甲酸二乙酯常温下为无色透明的液态物质，难溶于水，溶于乙醇、甲醇、乙醚、乙酸乙酯、氯仿、二甲基亚砜等有机溶剂。

[0005]

[0006] 式I

[0007] 专利CN101491526A公开了四氢嘧啶(化学名为：1，4，5，6-四氢-2-甲基-4-嘧啶羧酸；英文为：Ectoine)具有治疗关节炎的效果。但是Ectoine治疗的关节炎是针对膝关节的前后交叉韧带及内侧副韧带、完整切除内侧半月板所制备成的骨关节炎模型，属于机械损伤模型，其治疗关节炎的用途是利用四氢嘧啶的物理特性实现的，显然该物理特性不适用于制备通过人体吸收而产生抑制炎症作用的药物。

发明内容

[0008] 本发明要解决的技术问题是提供1，3-二环己基-1，2，3，6-四氢嘧啶-4，5-二甲酸二乙酯在制备抗炎镇痛的药物中的用途。

[0009] 上述用途是1，3-二环己基-1，2，3，6-四氢嘧啶-4，5-二甲酸二乙酯的抗炎镇痛用途，具体是1，3-二环己基-1，2，3，6-四氢嘧啶-4，5-二甲酸二乙酯在制备抗炎镇痛的药物中的应用。

[0010] 本发明所述的1，3-二环己基-1，2，3，6-四氢嘧啶-4，5-二甲酸二乙酯(diethyl1，3-dicyclohexyl-1，2，3，6-tetrahydropyrimidine-4，5-dicarboxylate)，又名ZL-5010，分子式为C22H36N2O4，分子量是392。

[0011] 本发明所述的1，3-二环己基-1，2，3，6-四氢嘧啶-4，5-二甲酸二乙酯可以 根 据 文献 (QiuhuaZhu，et al.Practical synthesis and mechanistic study of polysubstituted tetrahydropyrimidines withuse of domino multicomponent reactions.Tetrahedron，2009，65(23)：4604-4613)所述方法制备得到。

[0012] 本发明人认为值得推荐的方法如下所述：

[0013] 将丁炔二酸二乙酯、环己胺、甲醛及冰醋酸按照摩尔数之比为1∶2∶2.5～5∶1～5在乙醇或甲醇中、室温下反应1～3h后，经硅胶柱分离得到。

[0014] 反应式如下：

[0015]

[0016] 本发明所述的1，3-二环己基-1，2，3，6-四氢嘧啶-4，5-二甲酸二乙酯具有抗炎镇痛作用。

[0017] 本发明所述的药物由1，3-二环己基-1，2，3，6-四氢嘧啶-4，5-二甲酸二乙酯和药学上可以接受的辅料组成，其中，1，3-二环己基-1，2，3，6-四氢嘧啶-4，5-二甲酸二乙酯的重量百分比含量为1～20％。

[0018] 本发明所述的药物是本领域常用的口服剂型，如胶囊(硬胶囊、软胶囊)、口服乳剂、片剂(薄膜衣片)、丸剂(微丸、滴丸)等。

[0019] 下面将通过动物实验进一步说明1，3-二环己基-1，2，3，6-四氢嘧啶-4，5-二甲酸二乙酯的抗炎镇痛药理作用。

[0020] (I)1，3-二环己基-1，2，3，6-四氢嘧啶-4，5-二甲酸二乙酯的镇痛作用：小鼠冰醋酸致痛扭体实验

[0021] (1)动物分组：取健康昆明种小鼠50只，体重32±2g，雌雄各半，随机均分为5组，分别为空白对照组(0.005％Tween-80的生理盐水液)，已知药物(Ectoine 0.5mmol/kg.b.w)对照组及1，3-二环己基-1，2，3，6-四氢嘧啶-4，5-二甲酸二乙酯高、中、低(0.5、0.25、0.125mmol/kg.b.w)剂量组。Ectoine及1，3-二环己基-1，2，3，6-四氢嘧啶-4，5-二甲酸二乙酯用0.005％Tween-80的生理盐水液配制。

[0022] (2)实验方法：各组小鼠按0.2ml/10g.b.w灌胃给药(高、中、低剂量组的药物浓度分别为1％，0.5％，0.25％)，每日灌胃1次，连续给药3天。末次给药后60min，按0.1ml/10g.b.w腹腔注射新配制的0.7％(v/v)醋酸生理盐水液。观察并记录注射0.7％醋酸后20min内小鼠扭体次数，按下式计算扭体反应抑制率。实验温度为25±1℃。

[0023] 扭体反应抑制率(％)＝((溶媒对照组扭体次数-给药组扭体次数)/溶媒对照组扭体次数)×100

[0024] 表1.1，3-二环己基-1，2，3，6-四氢嘧啶-4，5-二甲酸二乙酯对醋酸所致小鼠扭体反应(疼痛)的抑制作用(均数±标准差，n＝10)

[0025]

[0026] 与对照组相比，**P＜0.01，***P＜0.001

[0027] 由表1可知，1，3-二环己基-1，2，3，6-四氢嘧啶-4，5-二甲酸二乙酯在0.25、0.5mmol/kg.b.w剂量下能明显减少小鼠扭体反应次数，平均扭体反应抑制率分别为
46.3％、53.5％，与空白对照组比较有显著性差异(p＜0.01，p＜0.001)，说明1，3-二环己基-1，2，3，6-四氢嘧啶-4，5-二甲酸二乙酯具有镇痛作用。而Ectoine组与对照组相比无统计学意义(p＞0.05)。我们即使将Ectoine的剂量增加到2.8mmol(400mg)/kg.b.w，也不能抑制由冰醋酸致痛所引起的小鼠扭体反应，提示Ectoine通过口服给药没有镇痛作用。

[0028] (II)1，3-二环己基-1，2，3，6-四氢嘧啶-4，5-二甲酸二乙酯的抗炎作用：小鼠耳廓二甲苯致炎实验

[0029] (1)动物分组：取健康雄性昆明种小鼠50只，体重32±2g，随机均分为5组，分别为溶媒(0.005％Tween-80的生理盐水液)对照组，已知药物(Ectoine 0.5mmol/kg.b.w)对照组及1，3-二环己基-1，2，3，6-四氢嘧啶-4，5-二甲酸二乙酯高、中、低(0.5、0.25、0.125mmol/kg.b.w)剂量组。Ectoine及1，3-二环己基-1，2，3，6-四氢嘧啶-4，5-二甲酸二乙酯用0.005％Tween-80的生理盐水液配制。

[0030] (2)实验方法：各组小鼠按0.2ml/10g.b.w灌胃给药(高、中、低剂量组的药物浓度分别为1％，0.5％，0.25％)，每日灌胃1次，连续给药3天。末次给药后60min，在每只小鼠右耳上均匀涂布AR级二甲苯50μl(耳廓内外两侧各25μl)致炎，30min后将小鼠颈椎脱臼处死，沿耳根部剪下左右耳朵，用内径为8mm的打孔器分别在左右耳同一部位打下圆形耳片，称重，并按下式计算耳廓肿胀度和耳廓肿胀抑制率。

[0031] 耳廓肿胀度＝右耳片重-左耳片重(mg)

[0032] 耳廓肿胀抑制率(％)＝((溶媒对照组肿胀度-给药组肿胀度)/溶媒对照组肿胀度)×100

[0033] 表2.1，3-二环己基-1，2，3，6-四氢嘧啶-4，5-二甲酸二乙酯对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的抑制作用(均数±标准差，n＝10)

[0034]

[0035] 与对照组相比，**P＜0.01，***P＜0.001

[0036] 由表2可知，1，3-二环己基-1，2，3，6-四氢嘧啶-4，5-二甲酸二乙酯在0.25、0.5mmol/kg.b.w剂量下能明显抑制二甲苯所致的小鼠耳廓肿胀，与溶媒对照组比较有显著差异(p＜0.01，p＜0.001)，并在一定范围内呈剂量依赖性关系，说明1，3-二环己基-1，
2，3，6-四氢嘧啶-4，5-二甲酸二乙酯具有抗炎作用。而Ectoine在0.5mmol/kg.b.w剂量下无作用(p＞0.05)。

[0037] (III)1，3-二环己基-1，2，3，6-四氢嘧啶-4，5-二甲酸二乙酯的抗炎作用：大鼠足趾角叉菜胶致炎实验

[0038] (1)动物分组：取SD大鼠40只，雌雄各半，体重220±20g，按性别随机均分为5组，每组8只，分别为溶媒(0.005％Tween-80的生理盐水液)对照组，已知药物(Ectoine0.5mmol/kg.b.w)对照组及1，3-二环己基-1，2，3，6-四氢嘧啶-4，5-二甲酸二乙酯高、中、低(0.5、0.25、0.125mmol/kg.b.w)剂量组。Ectoine及1，3-二环己基-1，2，3，6-四氢嘧啶-4，5-二甲酸二乙酯用0.005％Tween-80的生理盐水液配制。

[0039] (2)实验方法：各组大鼠按1ml/100g.b.w灌胃给药(高、中、低剂量组的药物浓度分别为2％，1％，0.5％)，每日灌胃1次，连续给药3天。末次给药后60min，大鼠右后足趾皮下注射高压灭菌的1％角叉菜胶生理盐水液0.1ml/只，并用记号笔在踝关节处做好标记，用大鼠足趾容积测量仪(pv-200型)分别在注射后0、1、2、3、4及5h时刻测定大鼠右后足容积，分别以每只大鼠1、2、3、4及5h时刻右后足容积减去该大鼠0h时刻右后足容积作为对应时刻大鼠足趾肿胀度，并按下式计算大鼠足趾肿胀抑制率。

[0040] 足趾肿胀抑制率(％)＝((溶媒对照组肿胀度-给药组肿胀度)/溶媒对照组肿胀度)×100

[0041] 表3.1，3-二环己基-1，2，3，6-四氢嘧啶-4，5-二甲酸二乙酯对角叉菜胶诱发大鼠足趾肿胀的抑制作用(均数±标准差，n＝8)

[0042]* ** ***

[0043] 与对照组相比，P＜0.05，P＜0.01， P＜0.001

[0044] 由表3可知，1，3-二环己基-1，2，3，6-四氢嘧啶-4，5-二甲酸二乙酯在0.25、0.5mmol/kg.b.w剂量下能明显抑制角叉菜胶诱导的大鼠足趾肿胀，与溶媒对照组比较有显著差异(p＜0.05，p＜0.01，P＜0.001)，最大抑制率达到93.2％，说明1，3-二环己基-1，
2，3，6-四氢嘧啶-4，5-二甲酸二乙酯具有抗炎作用。而Ectoine在0.5mmol/kg.b.w剂量下无作用(p＞0.05)，抑制率在不同的时间点有些为正，有些为负，说明是由操作误差所致。

[0045] 上述实验表明，给大鼠和小鼠口服灌胃给药，ZL-5010具有明显的抗炎镇痛作用；然而，在同样条件下，没有发现Ectoine有任何抗炎镇痛作用。

[0046] (IV)1，3-二环己基-1，2，3，6-四氢嘧啶-4，5-二甲酸二乙酯的急性毒性实验[0047] 按照国家药政管理规定，用昆明种封闭群健康小鼠，体重20.0±1.0g，雌雄各30只，随机分为六组，每组雌雄各5只，经口灌胃一次性给药，剂量分别为2500、2740、3010、3310、3640、4000mg/kg.b.w，记录小鼠毒性反应情况和死亡动物分布，以Bliss统计法测定LD50值。1，3-二环己基-1，2，3，6-四氢嘧啶-4，5-二甲酸二乙酯小鼠灌胃LD50为3543mg/kg.b.w，95％可信区间为3286～3820mg/kg.b.w；治疗指数约为70。实验结果表明：1，3-二环己基-1，2，3，6-四氢嘧啶-4，5-二甲酸二乙酯毒性低，安全性好。

[0048] 上述实验同时证明了1，3-二环己基-1，2，3，6-四氢嘧啶-4，5-二甲酸二乙酯能够减少醋酸所致小鼠扭体反应(疼痛)的次数，减轻二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的程度，降低角叉菜胶诱发大鼠足趾的肿胀度，说明1，3-二环己基-1，2，3，6-四氢嘧啶-4，5-二甲酸二乙酯具有抗炎镇痛作用。

[0049] 本发明所述的1，3-二环己基-1，2，3，6-四氢嘧啶-4，5-二甲酸二乙酯虽然属于四氢嘧啶类化合物，且仅存在四氢嘧啶N上的氢被环己基取代和四氢嘧啶的4，5位碳上连接了酯基的差异，但上述一系列试验说明，Ectoine不具有临床上可接受的抗炎镇痛效果，而本发明所述的1，3-二环己基-1，2，3，6-四氢嘧啶-4，5-二甲酸二乙酯则具有明显的抗炎镇痛作用，因此可以用于制备抗炎镇痛药物。

具体实施方式

[0050] 实施例1

[0051] 本发明人参考文献(Qiuhua Zhu，et al.Practical synthesis and mechanistic study ofpolysubstituted tetrahydropyrimidines with use of domino multicomponent reactions.Tetrahedron，2009，65(23)：4604-4613)所述方法，对反应条件优化后施行。具体步骤如下：

[0052] 将丁炔二酸二乙酯320μl(2mmol)、环己烷胺214μl(2mmol)加入6mL乙醇中，混合均匀得到反应液1；将环己烷胺214μl(2mmol)、甲醛液450μl(6mmol)及冰醋酸240μl(4mmol)加入6mL乙醇中，混合均匀得到反应液2。将反应液1缓慢滴加到反应液2中，室温下反应3h。反应完成后，减压浓缩，得淡黄色油状物。利用硅胶色谱柱对其进行分离，得到无色透明液态物质0.6751g。

[0053] 将所得无色透明液态物质采用核磁和MALDIMS进行鉴定，鉴定结果如下所示：

[0054] 1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ4.37(q，J ＝ 7.2Hz，2H)，4.08(q，J ＝ 7.2Hz，2H)，3.98(s，2H)，3.53(s，2H)，3.04-3.00(m，1H)，2.49(brs，1H)，1.92-1.60(m，10H)，
1.38-1.05(m，16H)ppm。

[0055] MALDIMS：m/z＝393([M+H]+，100％)，415([M+Na]+)，431([M+K]+)。

[0056] 由鉴定结果可知，所得无色透明液态物质为1，3-二环己基-1，2，3，6-四氢嘧啶-4，5-二甲酸二乙酯。

[0057] 实施例2

[0058] 软胶囊剂的制备

[0059] 处方：1，3-二环己基-1，2，3，6-四氢嘧啶-4，5-二甲酸二乙酯 100g[0060] 大豆油 300g[0061] 囊 材：明 胶 -甘 油 -水 ( 三 者 之 间 的 重 量 比 为 1 ∶0.4 ∶ 1，)100g

[0062] 制成1000粒软胶囊

[0063] 制法：取1，3-二环己基-1，2，3，6-四氢嘧啶-4，5-二甲酸二乙酯加入大豆油中，搅匀使溶解，于软胶囊机上压囊，干燥，包装，即得每丸含100mg的1，3-二环己基-1，2，3，6-四氢嘧啶-4，5-二甲酸二乙酯的软胶囊剂。

[0064] 口服：300-600mg/日，即3-6丸/日，分2-3次服用。

[0065] 实施例3

[0066] 口服乳剂的制备

[0067] 处方：

[0068]

[0069] 制法：将1，3-二环己基-1，2，3，6-四氢嘧啶-4，5-二甲酸二乙酯与大豆卵磷脂加入大豆油中，充分溶解后得油相，将泊洛沙姆、苯甲酸钠与阿斯巴甜溶于500ml水中得水相，在高剪切分散乳匀机搅拌下将水相慢慢加至油相中，6000rpm搅拌15min得初乳，加水至1000ml，经高压均质机循环5次，得乳白色的终乳，充氮灌装，即得每mL含有10mg 1，3-二环己基-1，2，3，6-四氢嘧啶-4，5-二甲酸二乙酯。

[0070] 口服：300-600mg/日，即30-60ml/日，分2-3次服用，使用时注意摇匀。

[0071] 实施例4

[0072] 片剂的制备

[0073] 处方：

[0074]

[0075] 制法：取β-环糊精加水混合，研匀，加入1，3-二环己基-1，2，3，6-四氢嘧啶-4，5-二甲酸二乙酯，充分研磨至成糊状物，50℃下减压除水，再经室温真空干燥得1，3-二环己基-1，2，3，6-四氢嘧啶-4，5-二甲酸二乙酯-β-环糊精包合物，粉碎，过100目筛，加入微晶纤维素与羧甲基淀粉钠，用75％乙醇制软材，16目筛湿法制粒，60℃干燥3h，12目筛整粒，加入硬脂酸镁，混匀，压片，包薄膜衣，即得，每片含1，3-二环己基-1，2，3，6-四氢嘧啶-4，5-二甲酸二乙酯50mg。

[0076] 口服：300-600mg/日，即6-12片/日，分2-3次服用。

[0077] 实施例5

[0078] 微囊胶囊剂的制备

[0079] 处方：

[0080]