一种蛋白质稳定剂及其制备方法

摘要

本发明公开了一种蛋白质稳定剂及其制备方法，按重量份数磷酸氢二钠0.07～0.142份溶于100份纯化水中，配成溶液A；磷酸二氢钾0.068～0.136份溶于100份纯化水中，配成溶液B；用溶液B调溶液A至pH7.20，配成磷酸盐缓冲液；磷酸盐缓冲液100份、BSA2～15份、1～8份、二硫苏糖醇0.1～1份，乙二胺四乙酸0.2-1.2份加入磷酸盐缓冲液中，搅拌均匀，得到蛋白稳定剂。本发明能长时间保护蛋白质活性，是一种非常好的蛋白质保护剂，且稳定剂组成成分常见，价格相对便宜，整个制备也比较方便，制备工序简单容易操作。

权利要求

1.一种蛋白质稳定剂，按重量份数由下列原料组成：pH值为7.2的磷酸盐缓冲液100份

BSA2～15份

蔗糖l～8份

二硫苏糖醇0.1～1份

乙二胺四乙酸0.2～1.2份

所述蛋白质稳定剂适用保护胱抑素C。

2.根据权利要求l所述一种蛋白质稳定剂，其特征在于：所述磷酸盐缓冲液按重量份数由磷酸氢二钠0.07～0.142份溶于100份纯化水中，配成溶液A；称取磷酸二氢钾

0.068～0.136份溶于100份纯化水中，配成溶液B；用溶液B调溶液A至pH7.20制得。

3.一种如权利要求l或2所述蛋白质稳定剂的制备方法，其特征在于按如下步骤进行：（l）称取磷酸氢二钠0.07～0.142份溶于100份纯化水中，配成溶液A；称取磷酸二氢钾0.068～0.136份溶于100份纯化水中，配成溶液B；用溶液B调溶液A至pH7.20，配成磷酸盐缓冲液；

（2）量取磷酸盐缓冲液100份，称取BSA2～15份，蔗糖l～8份，二硫苏糖醇0.1～l份，乙二胺四乙酸0.2～1.2份加入磷酸盐缓冲液中，搅拌均匀，得到蛋白稳定剂。

说明书

一种蛋白质稳定剂及其制备方法

技术领域

[0001] 本发明属于生物技术领域，具体的说，涉及一种保护蛋白质不会失活的蛋白质稳定剂及其制备方法。

背景技术

[0002] 蛋白质是一种具有复杂的空间立体结构的大分子物质,易受外界条件的影响发生变性。蛋白质稳定性与组成中的氨基酸种类有关系,例如含有巯基的氨基酸,最常见的2 + 2 +
是半胱氨酸,会降低蛋白质的稳定性,尤其在某些金属离子,Cu 、Zn 等存在时,蛋白质对空气中的氧更为敏感,而易发生不可逆变性。蛋白质活性的保存已经成为生物技术领域的重大难题。目前，蛋白质的长期保存一般用真空冷冻干燥方法保存，该保存方法的优点是，活性保存效果理想，保存时间长，但是存在缺点是操作繁琐，需要特殊的仪器，成本高，需要水做复溶剂等。

发明内容

[0003] 为解决以上技术问题，本发明目的之一在于提供一种成本低廉，能长时间保护蛋白质活性的保护剂。

[0004] 本发明目的之二在于提供一种蛋白质稳定剂的制备方法。

[0005] 本发明目的是这样实现的：

[0006] 一种蛋白质稳定剂按重量份数由下列原料组成：

[0007] pH值为7.2的磷酸盐缓冲液100份

[0008] BSA（牛血清白蛋白）2～15份

[0009] 蔗糖 1～8份

[0010] 二硫苏糖醇0.1～1份

[0011] 乙二胺四乙酸0.2～1.2份。

[0012] 上述磷酸盐缓冲液按重量份数由磷酸氢二钠0.07～0.142份溶于100份纯化水中，配成溶液A；称取磷酸二氢钾0.068～0.136份溶于100份纯化水中，配成溶液B；用溶液B调溶液A至pH7.20制得。

[0013] 磷酸盐缓冲液保持溶液的酸碱度，使用BSA，蔗糖给蛋白“穿上”一层蛋白外衣尽量隔断目标蛋白与空气结合，二硫苏糖醇的加入是中和溶液中的氧化物杂质，乙二胺四乙酸的加入是去除溶液中的重金属离子，通过以上各组分的综合作用达到保护蛋白活性的目的。

[0014] 上述磷酸氢二钠0.07～0.142份。

[0015] 上述磷酸二氢钾0.068～0.136份。

[0016] 一种蛋白质稳定剂的制备方法，其特征在于按如下步骤进行： [0017] （1）称取磷酸氢二钠0.07～0.142份溶于100份纯化水中，配成溶液A；称取磷酸二氢钾0.068～0.136份溶于100份纯化水中，配成溶液B；用溶液B调溶液A至pH7.20，配成磷酸盐缓冲液；

[0018] （2）量取磷酸盐缓冲液 100份，称取BSA 2～15份，蔗糖 1～8份,二硫苏糖醇（DTT）0.1～1份，乙二胺四乙酸（EDTA）0.2-1.2份加入磷酸盐缓冲液中，搅拌均匀，得到蛋白稳定剂。

[0019] 有益效果：本发明能长时间保护蛋白质活性，是一种非常好的蛋白质保护剂，且稳定剂组成成分常见，价格相对便宜，整个制备也比较方便，制备工序简单容易操作。 具体实施方式实施例

[0020] （1）称取磷酸氢二钠0.07克溶于100毫升纯化水中，配成溶液A；称取磷酸二氢钾0.068克溶于100毫升纯化水中，配成溶液B；用溶液B调溶液A至pH7.20，配成溶液C [0021] （2）量取溶液C 100毫升，称取BSA 2克，蔗糖 1克,二硫苏糖醇（DTT）0.1克，乙二胺四乙酸（EDTA）0.2克加入溶液C中，搅拌均匀，配成蛋白稳定剂；

[0022] 实施例2

[0023] （1）称取磷酸氢二钠0.09克溶于100毫升纯化水中，配成溶液A；称取磷酸二氢钾0.08克溶于100毫升纯化水中，配成溶液B；用溶液B调溶液A至pH7.20，配成溶液C[0024] （2）量取溶液C 100毫升，称取BSA 4克，蔗糖 2克,二硫苏糖醇（DTT）0.2克，乙二胺四乙酸（EDTA）0.4克加入溶液C中，搅拌均匀，配成蛋白稳定剂；

[0025] 实施例3

[0026] （1）称取磷酸氢二钠0.1克溶于100毫升纯化水中，配成溶液A；称取磷酸二氢钾0.1克溶于100毫升纯化水中，配成溶液B；用溶液B调溶液A至pH7.20，配成溶液C[0027] （2）量取溶液C 100毫升，称取BSA 5克，蔗糖 3克,二硫苏糖醇（DTT）0.3克，乙二胺四乙酸（EDTA）0.5克加入溶液C中，搅拌均匀，配成蛋白稳定剂；

[0028] 实施例4

[0029] （1）称取磷酸氢二钠0.11克溶于100毫升纯化水中，配成溶液A；称取磷酸二氢钾0.11克溶于100毫升纯化水中，配成溶液B；用溶液B调溶液A至pH7.20，配成溶液C[0030] （2）量取溶液C 100毫升，称取BSA 7克，蔗糖 4克,二硫苏糖醇（DTT）0.5克，乙二胺四乙酸（EDTA）0.7克加入溶液C中，搅拌均匀，配成蛋白稳定剂；

[0031] 实施例5

[0032] （1）称取磷酸氢二钠0.12克溶于100毫升纯化水中，配成溶液A；称取磷酸二氢钾0.12克溶于100毫升纯化水中，配成溶液B；用溶液B调溶液A至pH7.20，配成溶液C[0033] （2）量取溶液C 100毫升，称取BSA 9克，蔗糖 5克,二硫苏糖醇（DTT）0.6克，乙二胺四乙酸（EDTA）0.8克加入溶液C中，搅拌均匀，配成蛋白稳定剂；

[0034] 实施例6

[0035] （1）称取磷酸氢二钠0.13克溶于100毫升纯化水中，配成溶液A；称取磷酸二氢钾0.13克溶于100毫升纯化水中，配成溶液B；用溶液B调溶液A至pH7.20，配成溶液C[0036] （2）量取溶液C 100毫升，称取BSA 10克，蔗糖 6克,二硫苏糖醇（DTT）0.7克，乙二胺四乙酸（EDTA）0.9克加入溶液C中，搅拌均匀，配成蛋白稳定剂；

[0037] 实施例7

[0038] （1）称取磷酸氢二钠0.14克溶于100毫升纯化水中，配成溶液A；称取磷酸二氢钾0.13克溶于100毫升纯化水中，配成溶液B；用溶液B调溶液A至pH7.20，配成溶液C[0039] （2）量取溶液C 100毫升，称取BSA 11克，蔗糖 7克,二硫苏糖醇（DTT）0.8克，乙二胺四乙酸（EDTA）1.0克加入溶液C中，搅拌均匀，配成蛋白稳定剂；

[0040] 实施例8

[0041] （1）称取磷酸氢二钠0.142克溶于100毫升纯化水中，配成溶液A；称取磷酸二氢钾0.136克溶于100毫升纯化水中，配成溶液B；用溶液B调溶液A至pH7.20，配成溶液C[0042] （2）量取溶液C 100毫升，称取BSA 12克，蔗糖 8克,二硫苏糖醇（DTT）0.9克，乙二胺四乙酸（EDTA）1.1克加入溶液C中，搅拌均匀，配成蛋白稳定剂；

[0043] 实施例9

[0044] （1）称取磷酸氢二钠0.142克溶于100毫升纯化水中，配成溶液A；称取磷酸二氢钾0.136克溶于100毫升纯化水中，配成溶液B；用溶液B调溶液A至pH7.20，配成溶液C[0045] （2）量取溶液C 100毫升，称取BSA 13克，蔗糖 8克,二硫苏糖醇（DTT）1.0克，乙二胺四乙酸（EDTA）1.2克加入溶液C中，搅拌均匀，配成蛋白稳定剂；

[0046] 实施例10

[0047] （1）称取磷酸氢二钠0.142克溶于100毫升纯化水中，配成溶液A；称取磷酸二氢钾0.136克溶于100毫升纯化水中，配成溶液B；用溶液B调溶液A至pH7.20，配成溶液C[0048] （2）量取溶液C 100毫升，称取BSA 13克，蔗糖 8克,二硫苏糖醇（DTT）1.0克，乙二胺四乙酸（EDTA）1.2克加入溶液C中，搅拌均匀，配成蛋白稳定剂；

[0049] 实施例11

[0050] （1）称取磷酸氢二钠0.142克溶于100毫升纯化水中，配成溶液A；称取磷酸二氢钾0.136克溶于100毫升纯化水中，配成溶液B；用溶液B调溶液A至pH7.20，配成溶液C[0051] （2）量取溶液C 100毫升，称取BSA 14克，蔗糖 8克,二硫苏糖醇（DTT）1.0克，乙二胺四乙酸（EDTA）1.2克加入溶液C中，搅拌均匀，配成蛋白稳定剂；

[0052] 实施例12

[0053] （1）称取磷酸氢二钠0.142克溶于100毫升纯化水中，配成溶液A；称取磷酸二氢钾0.136克溶于100毫升纯化水中，配成溶液B；用溶液B调溶液A至pH7.20，配成溶液C[0054] （2）量取溶液C 100毫升，称取BSA 15克，蔗糖 8克,二硫苏糖醇（DTT）1.0克，乙二胺四乙酸（EDTA）1.2克加入溶液C中，搅拌均匀，配成蛋白稳定剂；

[0055] 表1是本发明实施例1-12的测试部分结果

[0056] 表1中用于测试的原料分别为：

[0057] 抗原：胱抑素C（上海蓝韵生物技术有限公司生产）

[0058] BSA：Roche公司生产

[0059] 检测试剂：胱抑素C检测试剂盒（重庆中元生物技术有限公司生产）[0060] 所用的一般化学试剂均为分析纯级别

[0061] 测试时把胱抑素C加入蛋白质活性保护剂中，在奥林巴斯生化分析仪AU400上用胱抑素C检测试剂盒检测胱抑素C的浓度，然后进行数据分析。

[0062] 表1：测试结果