用于防止粘连的组合物

摘要

本发明涉及用于防止组织粘连的组合物，其包括生物相容的透明质酸和聚合物化合物。更具体地，本发明涉及包括没有被化学交联剂或化学改性剂修饰的透明质酸的组合物及其制备方法，以及用于防止粘连的具有优异性能的组合物。本发明的所述用于防止粘连的组合物显示出物理屏障功能和新型粘连预防功能，从而抑制作为粘连基础的血栓形成。与简单混合聚合物物质起物理屏障作用的传统组合物不同，本发明通过在人体内经历分解、吸收和一段时间后的排泄而发挥作为物理屏障的更有效的作用，不会干扰外科手术后疤痕的愈合，并且由于在外科手术的区域的应用是便利的因此显示出优异的效果。

权利要求

1.用于防止粘连的组合物，其包括透明质酸和羟乙基淀粉，

5 6

其中所述透明质酸具有的分子量为5.0×10 至3×10Da，以所述组合物的总重量计，所述透明质酸的含量的范围是0.3wt%至7.0wt%，所述羟乙基淀粉具有的分子量为

5 6

2.0×10 至1.0×10Da且具有的摩尔取代度为0.2至0.8，以及以所述组合物的总重量计，所述羟乙基淀粉的含量范围是0.05wt%至3.0wt%。

6

2.根据权利要求1所述的组合物，其中所述透明质酸具有的分子量为0.8×10 至6

3×10Da。

3.根据权利要求1所述的组合物，其中，以所述组合物的总重量计，所述透明质酸的含量的范围是0.5wt%至5.0wt%。

4.根据权利要求1所述的组合物，其中所述羟乙基淀粉具有的摩尔取代度为0.75至

0.4。

5

5.根据权利要求1所述的组合物，其中所述羟乙基淀粉具有的分子量为2.5×10 至5

6.7×10Da，且具有的摩尔取代度为0.75至0.4。

6.根据权利要求1所述的组合物，其中，以所述组合物的总重量计，所述羟乙基淀粉的含量范围是0.1wt%至2.0wt%。

7.根据权利要求1所述的组合物，其中所述透明质酸是从动物组织中提取得到的或者是由发酵法制备得到的。

8.用于防止粘连的组合物，其包括作为活性成分的透明质酸和羟乙基淀粉，以及药学可接受的赋形剂和/或添加剂，

5 6

其中所述透明质酸具有的分子量为5.0×10 至3×10Da，以所述组合物的总重量计，所述透明质酸的含量的范围是0.3wt%至7.0wt%，所述羟乙基淀粉具有的分子量为

5 6

2.0×10 至1.0×10Da且具有的摩尔取代度为0.2至0.8，以及以所述组合物的总重量计，所述羟乙基淀粉的含量范围是0.05wt%至3.0wt%。

9.用于防止粘连的组合物，其由作为活性成分的透明质酸和羟乙基淀粉以及药学可接受的赋形剂和/或添加剂组成，

5 6

其中所述透明质酸具有的分子量为5.0×10 至3×10Da，以所述组合物的总重量计，所述透明质酸的含量的范围是0.3wt%至7.0wt%，所述羟乙基淀粉具有的分子量为

5 6

2.0×10 至1.0×10Da且具有的摩尔取代度为0.2至0.8，以及以所述组合物的总重量计，所述羟乙基淀粉的含量范围是0.05wt%至3.0wt%。

10.权利要求1至9中任一项所述的组合物在制备用于防止粘连的药物制剂中的应用。

说明书

用于防止粘连的组合物

技术领域

[0001] 本发明涉及用于防止粘连的组合物，所述组合物包括生物相容的透明质酸和聚合物化合物。更具体地，本发明涉及具有优异效能的用于防止粘连的组合物及其制备方法，所述组合物包括没有被化学交联剂或化学改性剂修饰的透明质酸。

背景技术

[0002] 粘连是正常彼此分开的周围器官或组织之间的连接，其是由在包括由炎症、切口、擦伤或外科手术等引起的创伤的伤口愈合过程中纤维组织或外渗物的过度生成以及血液的凝固而产生的。在任一种外科手术后可能会引起粘连，并且由于在手术后愈合过程中在手术部位周围的器官或组织之间的粘连，可能会引起严重的临床后遗症。

[0003] 据报道通常手术后器官粘连的发生率的范围是55%至93%（Ann.Royal Coll.Surg.Engl.,75,147-153,1993）。有相当大比例的腹部手术会引起粘连。尽管这些粘连中的一些可能发生自发分解，但是在大多数的情况下甚至是在伤口愈合以后仍然存在有粘连，这可能导致多种后遗症。后遗症的种类是多种多样的。根据美国的统计数据，已知在随后的手术中所述手术后粘连（作为主要的症状）伴随有49%至74%的肠闭塞、15%至20%的不育症、20%至50%的慢性骨盆痛、和19%的肠穿孔（Eur.J.Surg.,Suppl577,32-39,1997）。

[0004] 腹膜内粘连的形成机制已在Granger发表的论文中有详细的描述（Infert.Reprod.Med.Clin.North Am.,5:3,391-404,1994）。Granger认为在手术后产生的渗出物中由凝血过程中产生的纤维蛋白引起粘连。炎性渗出物富含纤维蛋白，所述纤维蛋白在伤口表面形成血块。当纤维蛋白降解时，间皮再生，这通常导致伤口的愈合。纤维蛋白的分解或纤维蛋白溶解依赖于纤维蛋白溶酶原转变为纤维蛋白溶酶（其为纤维蛋白溶解酶），并且该反应由存在于间皮和基础基质中的组织型纤溶酶原激活物（tPA）所促进。然而，如果不发生纤维蛋白溶解，则炎性细胞和成纤维细胞渗透到所述纤维蛋白基质中，导致组织粘连。在这种方式中，通过一系列的纤维蛋白生成机制和纤维蛋白溶解机制而发生粘连，并且这两个机制之间的关系是复杂的且与伤口的愈合过程是密切相关的。

[0005] 作为预防所述粘连的多种方法之一，已针对预防相邻组织之间的粘连的形成的抗粘连剂进行深入研究，所述抗粘连剂是通过在组织的伤口愈合的过程中采用屏障形成物理屏障来进行预防所述粘连，这与表面活性剂的作用相似。这些屏障所采用的抗粘连屏障可根据它们的类型大致地分为两类：一类是包括薄膜型、非交织型和海绵型的膜型屏障，另一类是包括凝胶型的溶液型屏障。

[0006] 所述膜型抗粘连材料的实施例包括氧化-再生纤维素、膨体聚四氟乙烯（在下文中被称为“ePTFE”）、由改性透明质酸、羧甲基纤维素钠和化学改性剂等组成的膜剂。

[0007] 所述溶液型抗粘连材料的实施例包括乳酸盐林格溶液、右旋糖酐-70溶液、肝素溶液、羧甲基纤维素钠溶液、透明质酸溶液、硫酸软骨素溶液、聚乙二醇溶液、泊洛沙姆溶液等。在这些溶液型抗粘连材料中，乳酸盐林格溶液、右旋糖酐-70溶液、肝素溶液等具有主要的机制，即在腹膜的愈合过程中诱导纤维蛋白覆盖的表面相互分离。尽管它们是已被用于通过使组织相互分离而抑制粘连的制剂，但是由于它们能被腹膜快速吸收，因此不能得到令人满意的抗粘连效果（Am.Surg.,63,775-777,1983）。同时，由于聚乙二醇等在体内不能降解，仅可采用当吸收时可通过代谢途径排出的低分子量材料。然而，使用所述低分子量材料会导致过快吸收，使得其不能在较长的时间内作为有效的屏障防止粘连。

[0008] 同时，在专利号为4,141,973的美国专利中公开的透明质酸是由交替连接的β-D-N-乙酰葡糖胺和β-D-葡萄糖醛酸组成的线性大分子多糖，并且已知即使当其被植入或注入体内时，其仍具有优异的生物相容性。然而，还由于在相对较短的时间内在体内的分解和吸收，其在作为抗粘连剂的性能方面仍存在限制。

[0009] 为了尝试改善这些缺点，专利号为6,387,413B1的美国专利公开了通过添加例如为羧甲基纤维素的聚合物化合物而制备透明质酸凝胶组合物，以实现对透明质酸凝胶在物理性质方面进行补充的目的。

[0010] 如上所述，已对透明质酸凝胶在物理性质方面进行补充进行了多种研究。在这些研究中，为了改善透明质酸在体内应用后容易被水溶解以及体内滞留时间相对较短的方面的缺点，已提出了对透明质酸的多种修饰，其可通过多种化学交联剂或化学改性剂来进行修饰。

[0011] 迄今为止，由此开发的材料显示出了预防粘连的潜力，但是由于主要采用化学交联方法，仍然存在有与不便于除去交联剂或添加剂和方法复杂相关的问题以及毒性和安全性的问题。

[0012] 作为为解决上述问题（即与抗粘连功能的低效、化学交联剂或添加剂的合成和可能的滞留毒性有关的问题）而进行的各种广泛而深入的研究和实验的结果，本发明的发明人发现通过提供包含有不采用化学交联剂的、具有优化的生物相容性的、高分子量的透明质酸的组合物可解决上述问题。

[0013] 此外，与用作为在抗粘连作用方面的物理屏障的包含有聚合物材料的简单混合物的常规产品不同，本发明是基于预防粘连的新功能方法，其中采用本发明的透明质酸和羟乙基淀粉不仅可以作为物理屏障，还可抑制主要是粘连发生的原因的血栓形成。因此，本发明可区别于传统的产品并且还被证实了在抗粘连效果和安全性方面是优异的。

发明内容

[0014] 技术问题

[0015] 因此，本发明的目的在于提供用于预防粘连的组合物，所述组合物包括透明质酸和羟乙基淀粉或甲壳低聚糖。所述组合物优选为凝胶型组合物。

[0016] 进一步地，本发明的目的在于提供包含有透明质酸和羟乙基淀粉或甲壳低聚糖的组合物在制备预防粘连的药物制剂的用途。

[0017] 进一步地，本发明的目的在于提供用于预防手术后粘连的方法，其包括向包括人类的哺乳动物给予包含有透明质酸和羟乙基淀粉或甲壳低聚糖的组合物。

[0018] 进一步地，本发明是基于粘连预防的新功能方法，其中由本发明提供的包含有透明质酸和羟乙基淀粉的组合物不仅可作为物理屏障，还可抑制主要是粘连发生的基础的血栓形成，因此其可区别于传统的产品并且还提供在抗粘连效果和安全性方面的优异效果。

[0019] 进一步地，本发明通过提供包含有透明质酸和甲壳低聚糖的组合物，来延长如在单次使用透明质酸后所显示出来的在体内透明质酸的早期分解和吸收，从而减少粘连的发病率。

[0020] 进一步地，本发明的目的在于提供减少手术后粘连的发生的组合物，防止在最初的手术以后和当伤口愈合完成时形成粘连，所述组合物在体内能被分解并吸收然后被排泄。

[0021] 技术方案

[0022] 通过将聚合物材料加入到透明质酸中而得到本发明的组合物。虽然所述聚合物材料可优选羟乙基淀粉或水溶性的甲壳低聚糖，但是可采用包括PLGA（聚乳酸聚乙醇酸共聚物）、PLL（聚左旋赖氨酸）、PEG（聚乙二醇）、HEC（羟乙基纤维素）、CMC（羧甲基纤维素）等的任意聚合物材料，只要相对于单独使用透明质酸凝胶不容易满足药物材料的所需的物理性质而言，其可增加透明质酸凝胶的固有性质即可。

[0023] 因此，本发明提供用于预防粘连的包含有透明质酸和羟乙基淀粉或水溶性甲壳低聚糖的组合物。所述组合物优选为凝胶型组合物。

[0024] 进一步地，本发明提供包含有透明质酸和羟乙基淀粉或甲壳低聚糖的组合物在制备预防粘连的药物制剂中的用途。

[0025] 进一步地，本发明提供用于预防手术后周围器官或组织粘连的方法，其包括向包括人类的哺乳动物给予包含有透明质酸和羟乙基淀粉或甲壳低聚糖的组合物。

[0026] 进一步地，本发明提供用于防止粘连的组合物，其包括作为活性成分的透明质酸和羟乙基淀粉，以及药学可接受的赋形剂和/或添加剂其中所述透明质酸具有的分子量5 6
为5.0×10 至3×10Da，以所述组合物的总重量计，所述透明质酸的含量的范围是0.3wt%
5 6
至7.0wt%，所述羟乙基淀粉具有的分子量为2.0×10 至1.0×10Da且具有的摩尔取代度为0.2至0.8，以及以所述组合物的总重量计，所述羟乙基淀粉的含量范围是0.05wt%至
3.0wt%。

[0027] 进一步地，本发明提供用于防止粘连的组合物，其由作为活性成分的透明质酸和羟乙基淀粉以及药学可接受的赋形剂和/或添加剂组成，其中所述透明质酸具有的分子量5 6
为5.0×10 至3×10Da，以所述组合物的总重量计，所述透明质酸的含量的范围是0.3wt%
5 6
至7.0wt%，所述羟乙基淀粉具有的分子量为2.0×10 至1.0×10Da且具有的摩尔取代度为0.2至0.8，以及以所述组合物的总重量计，所述羟乙基淀粉的含量范围是0.05wt%至
3.0wt%。

[0028] 将在下文中更为详细地描述本发明的用于预防粘连的组合物。

[0029] 1、透明质酸（在下文中被称为“HA”）

[0030] 作为本发明的透明质酸，可不考虑其来源而采用任意的从动物组织提取得到的或由发酵法制备得到的透明质酸。透明质酸由透明质酸酶分解，然后通过代谢途径吸收和消除。

[0031] 进一步地，本发明的透明质酸是生物衍生材料，其没有受到化学交联，且不具有由于在体内的长期滞留而在人体内积累的毒性，而这是传统交联透明质酸的问题所在，且因此在安全性方面本发明的透明质酸优于传统的制剂。

[0032] 本发明的透明质酸的分子量的范围为约5.0×105至约5.0×106Da，且优选范围为6 6
约0.8×10 至约3×10Da。具有上述具体范围的分子量的透明质酸具有适当的体内半衰
5
期，因此可用作为物理屏障。在另一方面，传统的低分子量透明质酸（低于5.0×10）在伤口
6
愈合过程中可能难于保持为物理屏障。具有超过3×10Da的高分子量的透明质酸酶具有非常高的粘度，这会产生与诸如转移、过滤等的生产工艺相关的问题，因此是不合乎需要的。

[0033] 以本发明的组合物的总重量计，本发明的透明质酸的含量的范围是约0.3wt%至7.0wt%，优选为约0.5wt%至5.0wt%。如果透明质酸的含量低于0.3wt%，抗粘连的作用受到限制。在另一方面，如果透明质酸的含量高于7.0wt%，这可能会产生由于粘度的生产工艺的问题。

[0034] 2、羟乙基淀粉（在下文中称为“HES”）

[0035] 在本发明的组合物中，HES被用作为药物成分，其用于降低基本上是粘连发生的原因的凝血机制中血液凝固的发生。

[0036] 多种羟乙基淀粉目前用作为胶体血容量替代溶液。主要根据这些羟乙基淀粉的分子量和/或它们的醚化将它们分类为羟乙基和其它参数。其代表性实施例包括羟乙基淀粉（HES450/0.7）和喷他淀粉（PES200/0.5）。

[0037] HES基于平均重量、醚化或羟乙基的摩尔取代度MS（例如，在HES200/0.5中的0.5；MS=羟乙基与无水葡萄糖单元的平均摩尔比例）或者取代度（例如，DS=单-或聚羟乙基葡萄糖与总无水葡萄糖单元的比例），由通常简写为KDa的分子量表示。根据分子量，可将临床应用中的HES分类为高分子量（450kDa）、中分子量（200kDa至250kDa）和低分子量（70kDa至130kDa）制剂。

[0038] HES具有非特异性的抗凝血作用。HES注入到循环系统期间血液的稀释会引起这些作用。所述血液稀释的影响会导致因凝血因子的稀释而降低血液凝固。根据早期的研究，其中提到HES的分子量对血液凝固具有影响。然而Franz等曾提到血液凝固紊乱显示出在高分子量的HES和低分子量的HES之间不具有显著差异（Anesth.Analg.,92,1402-1407,2001），并且欧洲专利2005-050877描述了HES溶液的止血抑制受到摩尔取代度而非平均分子量的显著影响。根据这些公开的内容，认为血小板的功能将受到其它因素而非HES的平均分子量的显著影响。

[0039] 已从FDA获得批准作为血液容量替代溶液且目前在国外已上市的HES溶液的示例包括人造血浆溶液（Hextend）（HES670/0.75,Biotime）、羟乙基淀粉（Hespan）（HES130/0.4,BBraun）和万汶（Voluven）（HES130/0.4,Fresenius kabi）。

[0040] 本发明的羟乙基淀粉的分子量的范围是约2.0×105至约1.0×106Da，且优选范围5 5 5
是约2.5×10 至约6.7×10Da。如果羟乙基淀粉的分子量低于2.0×10Da，其可能不能有
6
效预防粘连。在另一方面，如果羟乙基淀粉的分子量高于1.0×10Da，这可能会产生体内半衰期延长的问题。所采用的羟乙基淀粉的摩尔取代度的范围是约0.2至约0.8，且优选为约0.75至约0.4.如果羟乙基淀粉的摩尔取代度低于0.2，其可能不能有效预防粘连。在另一方面，如果羟乙基淀粉的摩尔取代度高于0.8，其可能产生与材料本身的安全性有关的问题。

[0041] 进一步地，以本发明的组合物的总重量计，本发明的羟乙基淀粉的含量的范围是约0.05wt%至约3.0wt%，且优选范围是约0.1wt%至约2.0wt%。如果羟乙基淀粉的含量低于0.05wt%，这可能不能有效预防粘连。在另一方面，如果羟乙基淀粉的含量高于3.0wt%，这可能导致降低其添加剂作用以及其在体内长期滞留。

[0042] 3、甲壳低聚糖（在下文中被称为“COS”）

[0043] 甲壳质和壳聚糖是天然的多糖且最近引起了特别的关注。壳聚糖是大自然（螃蟹、虾、甲壳类）中存在的甲壳质的脱乙酰化产物，并且是由β-1,4-连接的葡糖胺的聚合物构成的天然的大分子多糖。由于具有过高的分子量，从而导致体内吸收率或溶解度降低，因此尽管壳聚糖具有优异的生理活性，但是其应用受到限制。

[0044] 在另一方面，甲壳低聚糖是甲壳质和壳聚糖的部分分解产物，且具有高溶解度、允许多种化学修饰的高活性的伯胺基团、高的体内吸收率和抗菌活性同时具有壳聚糖的生理性质。因此，已证实甲壳低聚糖可作为医药材料促进抗粘连作用的表达。

[0045] 本发明的甲壳低聚糖的分子量的范围是约0.5×103至约1.0×104Da，且优选范围3 3 3
为约1×10 至约5×10Da。如果甲壳低聚糖的分子量低于0.5×10Da，这可能产生抗粘连
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作用的问题。在另一方面，如果甲壳低聚糖的分子量高于1.0×10，这可能导致体内应用的限制。

[0046] 以本发明的组合物的总重量计，甲壳低聚糖的含量的范围是约0.05wt%至15wt%，优选为约0.1wt%至10wt%。如果甲壳低聚糖的含量低于0.05wt%，这可能产生抗粘连作用的问题。在另一方面，如果甲壳低聚糖的含量高于15wt%，这可能产生由于溶解度的生产工艺的问题。

[0047] 本发明的组合物可配制成多种剂型，优选为溶液剂或凝胶剂等。可通过添加药学可接受的赋形剂或添加剂等来制备所述溶液剂或凝胶剂。例如可采用生理盐水或蒸馏水。

[0048] 为了预防手术后在组织或器官之间的粘连，可根据以下通用方法采用包含有本发明的组合物的产品。

[0049] 1）确认使损伤或者外科手术部位完全止血。

[0050] 2）确保在无菌的地方打开本产品的包装，去掉注射器的瓶盖且然后导管转向固定到其上。

[0051] 3）将组合物充分施加到靶点。必要时，可采用例如喷雾器的辅助手段来实现所述溶液的有效应用。

[0052] 4）给药后弃去残留的溶液。

[0053] 本发明的组合物的有效量的范围优选为约0.01至约10ml/单位面积（1cm2），且更优选为约0.1至5ml。所述组合物的有效量可根据多种因素而发生变化，所述多种因素为例如损伤或手术区域的深度、大小和位置，损伤区域的组织和器官特异性、本发明的组合物的剂量以及外科手术操作者的个人观点。

[0054] 有益效果

[0055] 如上所述，本发明的用于预防粘连的组合物可通过采用不需要化学交联的生物衍生的材料来减少异物反应，在体内停留一定时间，然后分解和吸收，不会干扰外科手术后的伤口的愈合，可在其应用时方便使用，并且可预防粘连。

附图说明

[0056] 图1为显示将本发明的组合物向动物给药的照片。

[0057] 图2为显示根据本发明的对照组的动物实验的结果的代表性照片。

[0058] 图3为显示根据本发明的比较实施例的动物实验的结果的代表性照片。

[0059] 图4和图10为显示在本发明的组合物的动物实验中粘连面积减少率（%）的比较结果的图。

[0060] 图5和图6为显示本发明的实施例的动物实验的结果的代表性照片。

[0061] 图7为显示在本发明的组合物的动物实验中粘连程度的比较结果的图。

[0062] 图8为显示在本发明的组合物的动物实验中粘连强度的比较结果的图。

[0063] 图9为显示本发明的组合物的动物实验中粘连面积的比较结果的图。

具体实施方式

[0064] 通过下文中给出的结合以下附图而做出的详细实施方式，本发明的这些和其它目的、优点和特征以及实现其的方法将变得显而易见。然而，本发明可以体现为不同的形式，并且不应解释为限制本文中所提出的实施方式。相反，提供这些实施方式，使得该公开内容将彻底和完整，并且将向本领域技术人员充分表达本发明的范围。因此，本发明将仅由所附的权利要求书所限定。

[0065] 比较实施例1至4：制备对照组和用于预防粘连的仅含有透明质酸的组合物[0066] 比较实施例1：Guardix-sol

[0067] 作为由透明质酸（HA）和羧甲基纤维素组成的抗粘连剂，采用市售的产品（Guardix-sol，由韩国的BIORANE CO.,LTD.制造）。

[0068] 比较实施例2

[0069] 将分子量为2.5×106至3×106Da且粘度为30dl/g至35dl/g的HA溶解于生理盐水直到浓度为0.5wt%。得到的水溶液在冷室中在4℃溶解约2天，从而得到包含有HA的凝胶组合物。

[0070] 比较实施例3

[0071] 以与实施例1相同的方法得到包含有HA的凝胶组合物，不同的是HA溶解于生理盐水直到浓度为1wt%。

[0072] 比较实施例4

[0073] 将羟乙基淀粉（HES,670/0.75）溶解于生理盐水直到浓度为8.0wt%，从而得到仅含有HES的组合物。

[0074] 实施例1至5：制备用于预防粘连的包含有透明质酸和羟乙基淀粉450/0.7的组合物

[0075] 实施例1

[0076] 将6%HES（450/0.7）溶液溶解于生理盐水中直到浓度为0.03wt%，并将分子量为6 6
2.5×10 至3×10Da且粘度为30dl/g至35dl/g的HA溶解于所获得的生理盐水溶液中直到浓度为1wt%。得到的水溶液在冷室中在4℃溶解约2天，从而得到包含有HA和HES的凝胶组合物。

[0077] 实施例2

[0078] 以与实施例1相同的方法得到包含有HA和HES的凝胶组合物，不同的是HES溶解于生理盐水直到浓度为0.06wt%。

[0079] 实施例3

[0080] 以与实施例1相同的方法得到包含有HA和HES的凝胶组合物，不同的是HES溶解于生理盐水直到浓度为0.12wt%。

[0081] 实施例4

[0082] 以与实施例3相同的方法得到包含有HA和HES的凝胶组合物，不同的是HES溶解于生理盐水直到浓度为0.24wt%。

[0083] 实施例5

[0084] 以与实施例3相同的方法得到包含有HA和HES的凝胶组合物，不同的是HES溶解于生理盐水直到浓度为0.5wt%。

[0085] 实施例6：制备用于预防粘连的包含有透明质酸和羟乙基淀粉670/0.75的组合物[0086] 以与实施例1相同的方法得到包含有HA和HES的凝胶组合物，不同的是具有不同分子量和摩尔取代度的6%HES（670/0.75）溶解于生理盐水直到浓度为0.5wt%。

[0087] 实施例7：制备用于预防粘连的包含有透明质酸和羟乙基淀粉264/0.45的组合物[0088] 以与实施例1相同的方法得到包含有HA和HES的凝胶组合物，不同的是具有不同分子量和摩尔取代度的10%HES（264/0.45）溶解于生理盐水直到浓度为0.5wt%。

[0089] 实施例8：制备用于预防粘连的包含有透明质酸和甲壳低聚糖的组合物[0090] 将分子量为1×103至5×103Da的甲壳低聚糖（在下文中被称为“COS”,由韩国KITTOLIFE CO.,LTD.制造）溶解于生理盐水直到浓度为0.5wt%且HA溶解于所述溶液中直到浓度为1wt%。得到的水溶液在冷室中在4℃溶解约2天，从而得到包含有HA和COS的凝胶组合物

[0091] 实验实施例1：在大鼠盲肠-腹腔壁磨损模型中进行抗粘连试验

[0092] 采用大鼠盲肠-腹腔壁磨损模型评价比较实施例1至4和实施例1至8中制备的样品的抗组织粘连性能。作为试验动物，采用7周Sprague-Dawley雄性大鼠（SLC，日本）并对其进行分组（n=5/组）。为了诱导粘连，通过腹腔注射盐酸氯胺酮（0.1ml/100g）对实验动物进行麻醉，然后腹部剃毛并用70%乙醇消毒，然后在腹部的中线做4至5cm切口。从切开的部位取出盲肠，用灭菌的纱布摩擦所述盲肠的浆膜（1.2cm×1.2cm）直到发生出血，采用试剂勺使相对的腹膜（1.2cm×1.2cm）损伤。用5-0缝线固定与所述摩擦损伤区域1cm远的两个点，使得两个损伤的表面接触，从而促使粘连的形成。

[0093] 将生理盐水注入空白对照组。对于实验组，5ml的抗粘连溶液被注入每个损伤的区域（参照图1）。然后，缝合腹膜和皮肤。在手术完成后，在一周内随意给动物喂食饲料和水，然后处死，并评价粘连。采用粘连评价系统，得到的分数计算总和以及求平均值（Am.J.Obstet.Gynecol.,146,88-92,1983）。结果分别在表1至表4中给出。

[0094] 根据以下分为0至5等级的标准评价粘连的程度（0：无粘连，1：一个薄膜状粘连，2：二个或二个以上薄膜状粘连，3：病灶局部厚粘连，4：片状局部粘连，5：伴随有血管形成或一个或一个以上片状密集粘连的非常厚的粘连）。

[0095] 根据以下分为1至4等级的标准评价粘连的强度（1：容易被非常弱的力释放的薄膜状的粘连，2：需要适当的力来释放粘连，3：采用相当大的压力释放的粘连，4：难于释放的或者需要非常高的压力来释放的非常强的粘连）。

[0096] 表1.用于防止粘连的包含有透明质酸的组合物的给药

[0097]

[0098]

[0099] 数据由平均值±S.D(n=5)表示

[0100] *:与无(阴性对照)比较，p<0.05,**:与无(阴性对照)比较，p<0.05

[0101] 如表1所示，与对照组相比较，比较实施例2和3显示出可减少组织的粘连，且当与比较实施例2相比较，比较实施例3显示出增加的抗粘连作用。因此证明与传统的市售组合物相比较，仅包含有HA的组合物具有优异的抗粘连作用。

[0102] 可以看出比较实施例4的组合物具有非常弱的抗粘连作用。因此似乎仅包含有HES不足以用作为屏障。

[0103] 在图2中显示了针对对照组的动物实验结果的代表性照片；在图3中显示了针对比较实施例1的动物实验结果的代表性照片；以及在图4中以图表显示了动物实验中组织粘连面积的减少率（%）。

[0104] 表2.用于防止粘连的包含有透明质酸和羟乙基淀粉450/0.7的组合物的给药[0105]

[0106] 数据由平均值±S.D(n=5)表示

[0107] *:与无(阴性对照)比较，p<0.05,**:与无(阴性对照)比较，p<0.05

[0108] 如表2中所示，证明与对照组相比较，用实施例1至实施例5的组合物进行给药的组显示出显著的组织粘连减少，且当在本发明的实施例组合物中的HES的含量（wt%）增加时，所述粘连面积减少且抗组织粘连性能更优异。

[0109] 在图5中显示了实施例5的动物实验结果；在图6中显示了针对不发生粘连的结果（在实施例5-处理组中的一种情况）的代表性照片；在图7至10中分别显示了在动物实验中组织粘连程度、粘连强度、粘连面积和粘连面积减少率（%）。

[0110] 表3.用于防止粘连的包含有透明质酸和羟乙基淀粉670/0.75或264/0.45的组合物的给药

[0111]

[0112] 数据由平均值±S.D(n=5)表示

[0113] *:与无(阴性对照)比较，p<0.05,**:与无(阴性对照)比较，p<0.05

[0114] 如表3中所示，证明与对照组相比较，实施例6和7显示了组织粘连的减少。与其中0.5wt%的6%HES(264/0.45)溶液被加到所述凝胶组合物的实施例7相比较，其中0.5wt%的10%HES(670/0.75)溶液被加到所述凝胶组合物的实施例6显示粘连面积减少更多。此外，在实施例6的两个动物中未观察到有粘连的发生，因此显示了更优异的抑制粘连的活性。

[0115] 表4.用于防止粘连的包含有透明质酸和甲壳低聚糖的组合物的给药

[0116]

[0117]

[0118] 数据由平均值±S.D(n=5)表示

[0119] *:与无(阴性对照)比较，p<0.05,**:与无(阴性对照)比较，p<0.05

[0120] 如表4中所示，证明与对照组相比较，添加了COS的实施例8显示组织粘连的更大的减少。

[0121] 与对照组相比较，由于所述应用的材料，所有的实验组1至8在给药时均没有显示出特别的炎症反应，由此还证明所述应用的材料具有优异的生物相容性。