无定形态人参皂苷Rb1及其制备方法

摘要

本发明涉及医药领域，公开了一种无定形态人参皂苷Rb1，具有如图1所示的X射线衍射图谱。本发明还提供所述无定形态人参皂苷Rb1的方法，包括：将人参皂苷Rb1溶于溶剂中，所述溶剂为低级链烷醇或低级链烷醇与水的混合物；减压回收溶剂，得到无定形态人参皂苷Rb1。所述制备方法操作简单，易于工业化生产。本发明所述方法制备的无定形态人参皂苷Rb1的X-射线粉末衍射分析、IR及HPLC分析表明，是一种非晶型，纯度高，高达98％以上，溶解度好，具有良好的药用前景。

权利要求

1.一种无定形态人参皂苷Rb1，其特征在于，具有如图1所示的X射线衍射图谱。

2.权利要求1所述的无定形态人参皂苷Rb1的制备方法，其特征在于，包括：步骤1：将人参皂苷Rb1溶于溶剂中，所述溶剂为低级链烷醇与水的混合物，所述低级链烷醇与水的混合物中水含量为2wt%～5wt%，所述低级链烷醇为含有1-4个碳原子的烷醇，；

步骤2：减压回收溶剂，得到无定形态人参皂苷Rb1。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述低级链烷醇的水含量为

3.5wt%～4.5wt%。

4.根据权利要求2或3所述的制备方法，其特征在于，所述低级链烷醇为甲醇、乙醇、异丙醇、正丁醇中的一种或多种的混合物。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤1还包括将溶剂加热至其沸点以下的步骤。

6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，人参皂苷Rb1在所述溶剂中的质量体积浓度为0.1g/ml～0.5g/ml。

7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述人参皂苷Rb1的质量体积浓度为

0.1g/ml～0.3g/ml。

8.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述人参皂苷Rb1的质量体积浓度为

0.15g/ml～0.25g/ml。

说明书

无定形态人参皂苷Rb1及其制备方法

技术领域

[0001] 本发明涉及医药领域，具体涉及一种无定形态人参皂苷Rb1及其制备方法。

背景技术

[0002] 人参皂苷Rb1是从三七中提取的主要活性成分，人参皂苷Rb1的药理作用有抗衰老作用，主要表现在改善性功能、改善肾上腺功能、抗应激作用、抗脂质过氧化；抗心肌缺血再灌注损伤，人参皂苷Rb1具有钙离子阻滞作用，可使心肌细胞的凋亡显著减少；人参皂苷Rb1能通过NO途径调节气道、血管平滑肌张力，抑制毛细血管渗出及中性粒细胞粘附，以减少缺血、缺氧引起的肺缺血再灌注损伤。人参皂苷Rb1能够减少缺氧引起的突触小泡兴奋性神经递质谷氨酸等的释放，有助于降低细胞外的谷氨酸水平，从而减轻其兴奋性神经毒性，保护神经细胞；，人参皂苷Rb1能够促进雪旺细胞增殖，从而促进周围神经细胞再生；人参皂苷Rb1具有提高脑组织乙酰胆碱含量和增加M胆碱受体数目等作用，加强胆碱系统功能，提高神经可塑性，从而改善学习记忆功能。

[0003] 固体药物多晶型状态是研究药物存在状态的重要内容，对于多数化学药物，一般都存在多晶型现象。不同的晶型物质影响着药物的理化性质和生物活性。无定形态(amorphous)是物质存在多晶型现象中的一种形式，也是一种特殊的晶型状态。同晶态物质那样，固体药物的无定形状态也可以存在不同的形式，这种现象被称之为固体物质无定形态的多态性，又称为无定形多态(polyamorphous)。吕扬与杜冠华(《晶型药物》，人民卫生出版社，2009年10月)指出，形成无定形态多态的物质的原因可能与化合物构型或构相、化学物质的组成成分、化学物质分子间作用力三种因素相关。

[0004] 众所周知，无定形形式的活性物质比相应的晶型形式的活性物质溶解性更好且溶解更快，并且与结晶形式的活性物质相比，无定形活性物质具有更好的生物利用度。本发明人对上述现有技术中的人参皂苷Rb1使用X射线衍射方法进行测试时，发现其具有如图2所示的X射线衍射图谱，是一种无定形态，现有资料表明，这种无定形态的人参皂苷Rb1的溶解度较差，生物利用度低。

发明内容

[0005] 本发明的目的在于提供一种无定形态人参皂苷Rb1。与现有技术中的无定形态人参皂苷Rb1相比，本发明制备的人参皂苷Rb1具有较好的溶解度，纯度高。

[0006] 一种无定形态人参皂苷Rb1，其具有如图1所示的X射线衍射图谱。

[0007] 本发明还提供所述无定形态人参皂苷Rb1的制备方法，包括：

[0008] 步骤1：将人参皂苷Rb1溶于溶剂中，所述溶剂为低级链烷醇或低级链烷醇与水的混合物；

[0009] 步骤2：减压回收溶剂，得到无定形态人参皂苷Rb1。

[0010] 作为优选，所述低级链烷醇为含有1-4个碳原子的烷醇。

[0011] 作为优选，所述低级链烷醇与水的混合物中水含量为2wt％～5wt％。

[0012] 优选的，所述低级链烷醇的水含量为3.5wt％～4.5wt％。

[0013] 作为优选，所述低级链烷醇为甲醇、乙醇、异丙醇、正丁醇中的一种或多种的混合物。

[0014] 优选的，步骤1还包括将溶剂加热至其沸点以下的步骤。

[0015] 优选的，人参皂苷Rb1在所述溶剂中的质量体积浓度为0.1g/ml～0.5g/ml。

[0016] 更优选的，所述人参皂苷Rb1的质量体积浓度为0.1g/ml～0.3g/ml。

[0017] 优选的，所述人参皂苷Rb1的质量体积浓度为0.15g/ml～0.25g/ml。

[0018] 通常认为固体药物的无定型状态不会像晶态物质那样有多种多样的形式。但事实上，物质的无定型状态也可以存在不同的形式，这种现象称为固体物质无定型态的多态性，简称为无定型多态(polyamorphous)。形成无定型多态的物质的原因可能是我们的样品中含有较多的极性基团(葡萄糖基和羟基)，在无定型状态下，分子受到极性基团作用力影响，因此出现了不同趋势的分子间作用力从而产生另一种无定型状态。

[0019] 本发明提供的无定形态人参皂苷Rb1提高了其溶解度和生物利用度。其制备方法简单而易于重复，适合工业规模生产。附图说明：

[0020] 图1是本发明非晶型人参皂苷Rb1的X射线粉末衍射图。

[0021] 图2是现有技术中的无定形态人参皂苷Rb1的X射线粉末衍射图。

[0022] 图3是本发明所述无定形态人参皂苷Rb1的红外光谱图。

[0023] 图4是现有技术中的无定形态人参皂苷Rb1的红外光谱图。

[0024] 图5是本发明所述无定形态人参皂苷Rb1的高效液相色谱图。具体实施方式：

[0025] 本发明公开了一种无定形态人参皂苷Rb1及其制备方法，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的产品和方法已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。

[0026] 本发明提供的一种无定形态人参皂苷Rb1，具有如图1所示的X射线衍射图谱。

[0027] 按照本发明，制备本发明所述的无定形态人参皂苷Rb1的步骤包括：

[0028] 步骤1：将人参皂苷Rb1溶于溶剂中，所述溶剂为低级链烷醇或低级链烷醇与水的混合物；

[0029] 步骤2：减压回收溶剂，得到无定形态人参皂苷Rb1。

[0030] 按照本发明，对于本发明使用的人参皂苷Rb1的来源，本发明并无特别限制，可以使用本领域技术人员熟知的方法提取，人参皂苷Rb1优选使用标定纯度的人参皂苷Rb1，纯度优选大于98wt％，更优选大于99.9wt％。

[0031] 按照本发明，先将人参皂苷Rb1溶解在碳原子个数为1～4、水含量为2wt％～5wt％的低级链烷醇中，在溶解时，可以在加热条件下进行，优选将低级链烷醇加热至沸点以下的温度，将人参皂苷Rb1溶解。所述低级链烷醇可以为甲醇、乙醇、异丙醇、正丁醇、支链丁醇中一种或它们的混合物。其中，低级链烷醇的水含量优选为3.5wt～4.5wt％。在溶解人参皂苷Rb1时，人参皂苷在低级链烷醇中的质量体积浓度优选为0.1g/ml～0.5g/ml，更优选为0.1g/ml～0.3g/ml，最优选为0.15g/ml～0.25g/ml。

[0032] 将人参皂苷Rb1溶解在含水的低级链烷醇中后，减压回收低级链烷醇至干燥，减压回收低级链烷醇时，对于回收温度，优选为低级链烷醇的沸点以下的温度，优选低于沸点5～10℃，对于减压压力并无特别限制，只要能够将低级链烷醇回收即可。

[0033] 实验结果表明，本发明使用低级链烷醇溶解人参皂苷Rb1后，再回收低级链烷醇后，得到的人参皂苷被证明提高了溶解度，这是由于部分水分子在人参皂苷Rb1中形成了人参皂苷的结晶水合物，因此提高了人参皂苷Rb1的生物利用度和溶解度。按照本发明，如果使用水含量低于2wt％的低级链烷醇时，则由于不能充分的形成水合物，因此不能有效的提高人参皂苷Rb1的溶解度；如果使用水含量高于5wt％的低级链烷醇时，则由于减压回收后的人参皂苷Rb1中还会含有较多的水分，不能形成干燥的人参皂苷Rb1。

[0034] 下面结合实施例，进一步阐述本发明：

[0035] 实施例1

[0036] 在加热条件下，将5g人参皂苷Rb1人参皂苷Rb1，昆明制药集团股份有限公司提供，纯度98.8％。)溶解于25ml甲醇中，搅拌约10分钟使其完全溶解，在加热条件下，将溶液用旋转蒸发仪减压回收溶剂至干，获得5g均匀非晶型人参皂苷Rb1，收率100％。

[0037] 实施例2

[0038] 在加热条件下，将5g人参皂苷Rb1溶解于25ml乙醇与正丁醇的混合物中，搅拌约10分钟使其完全溶解，在加热条件下，将溶液用旋转蒸发仪减压回收溶剂至干，获得5g均匀非晶型人参皂苷Rb1，收率100％。

[0039] 实施例3

[0040] 取5g人参皂苷Rb1溶解于25ml含水量为2wt％的甲醇中，搅拌10分钟，使人参皂苷Rb1完全溶解，在上述溶解过程中将甲醇加热到50℃保温，然后在50℃条件下减压回收甲醇至干。

[0041] 实施例4

[0042] 取5g人参皂苷Rb1溶解于25ml含水量为5wt％的甲醇中，搅拌10分钟，使人参皂苷Rb1完全溶解，在上述溶解过程中将甲醇加热到50℃保温，然后在50℃条件下减压回收甲醇至干。

[0043] 实施例5：X射线粉末衍射分析

[0044] 仪器：日本理学D/MAX-2200型衍射仪

[0045] 靶：Cu-Kα辐射(λ＝1.5405A)，2θ＝2°～70°

[0046] 阶跃角：0.04°

[0047] 管压：36KV

[0048] 管流：30mA

[0049] 扫描速度：10°/min

[0050] 滤片：石墨单色器

[0051] X射线衍射的测量基于点阵原子的电子的衍射和干扰。点阵结构由X射线图的反射显示。由于它的无序结果，非晶型材料在衍射图中不显示尖峰，仅有平滑的曲线表征。

[0052] 对现有技术的原料人参皂苷Rb1(以下简称原料样品)进行X射线衍射测试，结果如图2所示，由于其是无定形状态，因此在衍射图谱中不显示尖峰，仅有平滑的曲线。

[0053] 取实施例1制备的样品进行X射线衍射测试，结果如图1所示，图1的结果表明，本发明提供的无定形人参皂苷Rb1具有不同的X射线衍射结果。图2所示的原料样品在2θ高于20°以后的位置平滑过渡；与图2中的原料样品相比，图1中的X射线在2θ为23°～30°之间的位置有凹陷，在2θ为35°～45°之间的位置，出现了明显的晶胞峰。

[0054] 实施例6：红外光谱(IR)分析

[0055] 仪器：Shimadzu FTIR-8400S红外光谱仪

[0056] 本发明所述无定形态人参皂苷Rb1(溴化钾压片)的红外光谱，见图3所示，现有技术的人参皂苷Rb1的的红外光谱，见图4所示，说明两者是同一种物质。

[0057] 实施例7：本发明所述无定形态人参皂苷Rb1纯度检测

[0058] 仪器与试药试剂：Agilent1100高效液相色谱仪。

[0059] 色谱柱：Luna C18150×4.6mm。

[0060] 乙腈为色谱级、HPLC用水为重蒸蒸馏水。

[0061] 人参皂苷Rb1对照品：批号：8420-200102，由中国药品生物制品检定所提供；

[0062] 人参皂苷Rb1，实施例1-4制备。

[0063] 色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水)(19∶81)为流动相；检测波长为203nm。理论板数按人参皂苷Rb1计算应不低于3000。

[0064] 测定：取本品约10mg，精密称定，置50ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图；另取人参皂苷Rb1对照品约10mg，同法测定，按外标法以峰面积计算，即得。结果见表1。

[0065] 表1、本发明所述无定形态人参皂苷Rb1纯度检测结果

[0066]样品 实施例1 实施例2 实施例3 实施例4
含量(％) 98.7 98.5 99.0 99.1

[0067] 结果如图5和上表所示，本发明所述非晶型人参皂苷Rb1的含量高达98％以上。

[0068] 实施例8：本发明所述无定形态人参皂苷Rb1与人参皂苷Rb1溶解度比较[0069] 取实施例1-4制备的本发明所述无定形态人参皂苷Rb1，人参皂苷Rb1适量，分别加水、0.9％氯化钠水溶液、3％甘露醇水溶液各10ml，分别振摇30分钟，使其溶解至饱和状态，取上述溶液，HPLC法测定人参皂苷Rb1含量。结果见表2。

[0070] 表2、本发明所述无定形态人参皂苷Rb1与人参皂苷Rb1溶解度比较[0071]条件/含量(mg/ml) 水 0.9％氯化钠水溶液 3％甘露醇水溶
本发明所述无定形态
人参皂苷Rb1 40.15 44.82 48.29
人参皂苷Rb1 33.65 35.18 40.57

[0072] 上表显示，本发明所述无定形态人参皂苷Rb1与人参皂苷Rb1在不同溶液中溶解度比较研究中，本发明所述无定形态人参皂苷Rb1溶解度较好。

[0073] 实施例9

[0074] 本发明所述无定形态人参皂苷Rb1与人参皂苷Rb1对ADP诱导家兔体外血小板聚集的影响比较

[0075] 仪器：LBY-NJ2血液凝聚仪：北京普利生仪器有限公司；LG10-2.4A高速离心机：北京高速离心机厂。

[0076] 试剂：二磷酸腺苷(ADP)：Sigma公司产品；枸橼酸钠：天津市化学试剂三厂，批号：061107；氯化钠注射液：昆明南疆制药有限公司，批号：A08070412；水合氯醛(分析纯)：天津市瑞金特化学品有限公司，批号：20060917；吐温-80(化学纯CP)：国药集团化学试剂有限公司，批号：F20050324。

[0077] 动物：健康家兔，♀ 兼用，体重2-2.5kg，四川省医学科学研究院动物研究所提供，生产批号：Dossy-2009-10。

[0078] 试验样品：实施1-4制备的无定形态人参皂苷Rb1，人参皂苷Rb1由昆明制药集团提供。实验前用蒸馏水配制成高浓度为3.5700mg/ml、中浓度为1.7850mg/ml、低浓度为0.8925mg/ml作为终浓度的溶液。正常对照组选用生理盐水，其中各剂量的受试药物及生理盐水中每l0ml中加入吐温30μl。受试药物在体外给药前均配制成澄明溶液。

[0079] 统计方法：计量资料用单因素方差分析，采用统计软件进行统计分析，多组间比较采用Dunnett检验。

[0080] 方法：用10％的水合氯醛腹腔注射麻醉家兔，自颈总动脉取血，收集于一次性塑料试管中，采用3.2％枸橼酸钠抗凝，血液与抗凝剂容积比为9∶1，取后立即颠倒混匀(不可用力晃动)。血液于室温分别采用800r/min离心6min，所得上层血浆即为不同转速的PRP。剩余血液再以3000r/min离心15min，上层液即为PPP。试验过程中，PRP中的血小板数控制在约为50万个·mm-3。

[0081] 按Born氏比浊法原理采用血小板聚集仪进行测定。分别取不同转速PPP 300μl于比浊杯中调零，取PRP 270μl于另一比浊杯中加溶媒或受试药液30μl，在37℃预热孔中温育5min。测定时将PPP杯插到测试孔中调零，取出PPP杯插入PRP杯，并在PRP中加入搅拌子，然后在仪器操作提示下加入终浓度为15μmol/L的诱导剂ADP 10μl，诱导血小板聚集，测定5min内血小板最大聚集率[3]。血小板聚集抑制率按下式计算：聚集抑制率(％)＝(1-给药组聚集率/对照组聚集率)×100％。

[0082] 本发明所述无定形态人参皂苷Rb1与人参皂苷Rb1对ADP诱导家兔体外血小板聚集作用的影响，结果见表3：

[0083] 表3、本发明所述无定形态人参皂苷Rb1与人参皂苷Rb1对ADP诱导家兔体外血小板聚集率的影响( n＝6)

[0084]

[0085] 注：各组与正常对照组相比：**P＜0.01；

[0086] 从表3可以看出：本发明所述无定形态人参皂苷Rb1高浓度和中浓度及人参皂苷Rb1的高浓度与正常对照组比较，差异均具有显著性意义(P＜0.01)；本发明所述无定形态人参皂苷Rb1与人参皂苷Rb1的组间进行比较，差异无显著性意义(P＞0.05)。但从抑制率看，本发明所述无定形态人参皂苷Rb1效果较人参皂苷Rb1好。

[0087] 以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。