一种从西青果中提取α-葡萄糖苷酶抑制剂的方法

摘要

本发明公开了一种从西青果中提取α-葡萄糖苷酶抑制剂的方法，其特点是将西青果的干果粉碎，平均粒度为200～350μm，然后按料液比1g∶20～30ml加入浓度为50～100wt％的乙醇作为提取剂，在室温下震荡30～36小时，分离上清液，浓缩干燥后获得乙醇浸膏，得率为35～40％；将乙醇浸膏分散于蒸馏水中，料液比为1g∶20～30ml，按体积比1∶2加入正己烷震荡萃取2～3次，收集水相萃取物；将水相萃取物浓缩到15～20ml，上大孔吸附树脂Diaion HP-20层析柱，用水-甲醇梯度洗脱，浓度为25wt％、80wt％和100wt％，洗脱流速为1ml/min，收集具有活性的洗脱峰，浓缩干燥后得到小肠α-葡萄糖苷酶抑制剂有效分，得率为10～20％。α-葡萄糖苷酶抑制的活性，在0.4mg/ml浓度时，对小肠α-葡萄糖苷酶麦芽糖水解活性的抑制率达到76.2％，IC50值分别为51.7μg/ml。

权利要求

1.一种从西青果中提取小肠α-葡萄糖苷酶抑制剂的方法，其特征在于该方法包括以下步骤：(1)将西青果的干果粉碎，平均粒度为200～350μm，然后按料液比1g∶20～30ml加入浓度为50～100wt％的乙醇作为提取剂，在室温下震荡30～36小时，分离上清液，浓缩干燥后获得乙醇浸膏，得率为35～40％；

(2)将上述乙醇浸膏分散于蒸馏水中，料液比为1g∶20～30ml，然后按体积比1∶2加入正己烷震荡萃取2～3次，收集水相萃取物；

(3)将上述水相萃取物浓缩到15～20ml，上大孔吸附树脂Diaion HP-20层析柱，用水-甲醇梯度洗脱，甲醇浓度为25wt％、80wt％和100wt％，洗脱流速为1ml/min，收集具有活性的80wt％甲醇洗脱峰，浓缩干燥后得到小肠α-葡萄糖苷酶抑制剂有效成分，得率为

12～20％。

说明书

一种从西青果中提取α-葡萄糖苷酶抑制剂的方法

技术领域

[0001] 本发明涉及一种从西青果中提取α-葡萄糖苷酶抑制剂的方法，属于中草药制备及化工技术领域。

背景技术

[0002] 餐后高血糖的葡萄糖毒性作用有以下两点：一方面降低胰岛素敏感性，减少β细胞胰岛素分泌，加速其功能衰竭；另一方面急性血糖高峰直接导致氧化应激状态。对心血管系统，餐后血糖增高不仅具有高血糖的一般损害作用，还是众多心血管事件的独立危险因素。所以，解决餐后高血糖的预防和治疗问题，对于控制心血管疾病的发生和进展具有非常重要的意义。α-葡萄糖苷酶抑制剂能阻滞存在于小肠黏膜微绒毛膜表面的麦芽糖酶和蔗糖酶等双糖水解酶，使摄取的多糖、寡糖和双糖消化变成葡萄糖、果糖等单糖的过程受阻，从而降低餐后血糖峰值，是一种有广阔应用前景的治疗糖尿病的药物。国人饮食习惯以碳水化合物为主，因此α-葡萄糖苷酶抑制剂能更好的发挥降糖效果，从而对糖尿病、心血管疾病以及代谢综合症起到明显的防治作用。目前用于临床的α-葡萄糖苷酶抑制剂有三种：阿卡波糖(Acarbose)、伏格列波糖(Voglibose)和米格列醇(Miglitol)；但来源比较单一，均为细菌发酵产物，种类太少，都存在胃肠道的副作用，临床上没有更多的选择余地。因此，开发更多、更有效、副作用更少的α-葡萄糖苷酶抑制剂供临床选择使用就显得尤为重要。我国中药资源丰富，从天然植物和药物中寻找新的低毒、高效的α-葡萄糖苷酶抑制剂一直是国内外的研究热点。目前未见有其他相关的专利和非专利文献报道。

发明内容

[0003] 本发明的目的是针对现有技术的不足而提供一种西青果的干果中α-葡萄糖苷酶抑制剂有效成分的制备方法，具有工艺简单、操作方便等优点。

[0004] 本发明的目的有以下技术措施实现，其中所述原料份数除特殊说明外，均为重量份数。

[0005] 从西青果中提取小肠α-葡萄糖苷酶抑制剂的方法包括以下步骤：

[0006] (1)将西青果的干果粉碎，平均粒度为200～350μm，然后按料液比1g∶20～30ml加入浓度为50～100wt％的乙醇作为提取剂，在室温下震荡30～36小时，分离上清液，浓缩干燥后获得乙醇浸膏，得率为35～40％。

[0007] (2)将上述乙醇浸膏分散于蒸馏水中，料液比为1g∶20～30ml，然后按体积比1∶2加入正己烷震荡萃取2～3次，收集水相萃取物。

[0008] (3)将上述水相萃取物浓缩到15～20ml，上大孔吸附树脂Diaion HP-20层析柱，用水-甲醇梯度洗脱，浓度为25wt％、80wt％和100wt％，洗脱流速为1ml/min，收集具有活性的洗脱峰，浓缩干燥后得到小肠α-葡萄糖苷酶抑制剂有效成分，得率为12～20％。

[0009] 性能测试

[0010] 活性洗脱峰的检测方法：将洗脱部分用0.2mm的薄层硅胶板进行展开，展开剂为氯仿∶甲醇∶水＝6∶4∶1。用5％的硫酸喷雾后加热显色，具有最高活性洗脱峰的Rf值为0.2～0.3。

[0011] 本发明具有如下优点：

[0012] (1)工艺简单、操作方便；

[0013] (2)抑制活性强。实验证明，在0.4mg/ml浓度时，本实验的提取物对小肠α-葡萄糖苷酶麦芽糖水解活性的抑制率达76.2％，IC50值为51.7μg/ml。

附图说明

[0014] 图1：西青果提取物的高效液相色谱分析

[0015] 分析条件如下：ODS-3色谱柱(4.6×250mm，5μm)；流速，1ml/min；柱温，25℃；检测波长，280nm；梯度洗脱液：0min，10％甲醇；10min，20％甲醇；20-30min，30％甲醇；50min，40％甲醇；70-90min，50％甲醇；100min，100％甲醇。诃子素(保留时间为
31.20min)、诃黎勒酸(保留时间为40.97min)和诃子酸(保留时间为56.29min)。

具体实施方式

[0016] 下面通过实施例对本发明进行具体的描述，有必要在此指出的是本实施例只用于对本发明进行进一步说明，不能理解为对本发明保护范围的限制，该领域的技术熟练人员可以根据本发明的内容作出一些非本质的改进和调整。

[0017] 实施例1：

[0018] (1)将西青果的干果5g粉碎后，平均粒度为200μm，然后用浓度为50wt％乙醇150ml作为提取剂，在室温下36小时震荡，分离上清液，并将上清液浓缩干燥后获得乙醇浸膏1.97g，得率为39.4％。

[0019] (2)将上述乙醇浸膏分散于40ml蒸馏水中，然后用80ml正己烷震荡萃取2次，将萃取液和水相萃取物分离。

[0020] (3)将上述水相萃取物浓缩到15ml后，上聚苯乙烯型弱极性大孔吸附树脂DiaionHP-20(重量为100g)层析柱，用水-甲醇梯度洗脱，浓度为25wt％、80wt％和100wt％，洗脱流速为1ml/min。收集具有活性的80％甲醇洗脱峰，浓缩干燥后得到淡黄色固体0.65g，得率为13％。

[0021] 实施例2：

[0022] (1)将西青果的干果5g粉碎后，平均粒度为350μm，然后用浓度为80wt％乙醇120ml作为提取剂，在室温下34小时震荡，分离上清液，并将上清液浓缩干燥后获得乙醇浸膏1.76g，得率为35.2％。

[0023] (2)将上述乙醇浸膏分散于44ml蒸馏水中，然后用88ml正己烷震荡萃取3次，将萃取液和水相萃取物分离。

[0024] (3)将上述水相萃取物浓缩到20ml后，上聚苯乙烯型弱极性大孔吸附树脂DiaionHP-20(重量为100g)层析柱，用水-甲醇梯度洗脱，浓度为25wt％、80wt％和100wt％，洗脱流速为1ml/min。收集具有活性的80％甲醇洗脱峰，浓缩干燥后得到淡黄色固体0.96g，得率为19.2％。

[0025] 实施例3：

[0026] (1)将西青果的干果5g粉碎后，平均粒度为300μm，然后用浓度为100wt％乙醇100ml作为提取剂，在室温下30小时震荡，分离上清液，并将上清液浓缩干燥后获得乙醇浸膏1.81g，得率为36.2％。

[0027] (2)将上述乙醇浸膏分散于54ml蒸馏水中，然后用108ml正己烷震荡萃取2次，将萃取液和水相萃取物分离。

[0028] (3)将上述水相萃取物浓缩到20ml后，上聚苯乙烯型弱极性大孔吸附树脂DiaionHP-20(重量为100g)层析柱，用水-甲醇梯度洗脱，浓度为25wt％、80wt％和100wt％，洗脱流速为1ml/min。收集具有活性的80％甲醇洗脱峰，浓缩干燥后得到淡黄色固体0.85g，得率为17％。

[0029] 应用实例1

[0030] 由上述实施例中获得的西青果提取物对α-葡萄糖苷酶抑制活性试验方法及结果如下：

[0031] 从SIGMA公司订购大鼠小肠丙酮提取粉末，用磷酸缓冲液(PBS，0.1M，pH7.0)匀浆处理，离心后除去上清液；再用PBS+10％Triton的混合液匀浆处理，离心后获得上清液。用透析膜24小时透析后，以获得大鼠小肠粗α-葡萄糖苷酶溶液。大鼠小肠α-葡萄糖苷酶粗酶麦芽糖水解活性是1.85U/ml。其中酶活力单位定义为：37℃、pH6.8条件下，在酶的作用下1分钟分解1μmol麦芽糖，规定为一个酶活力单位(U)。

[0032] 测定小肠α-葡萄糖苷酶的麦芽糖水解活性的酶反应混合溶液包括：大鼠小肠α-葡萄糖苷酶粗溶液(0.05ml)、受试物(0.1ml，溶于25％二甲基亚砜)、麦芽糖溶液(0.35ml，3.5mM麦芽糖溶于0.1M，pH6.3的磷酸缓冲液)。将以上反应混合溶液在37℃培养箱中反应15分钟，用0.75ml的Tris-HCl溶液停止酶的水解反应。用葡萄糖氧化法(GOD法)，测定在490nm波长下的OD值，以葡萄糖的含量计算α-葡萄糖苷酶抑制活性。

[0033] 抑制百分率＝[1-(提取物吸光值-提取物空白吸光值)/酶活吸光值]×100％。

[0034] 测试结果如表1所示：

[0035] 表1西青果提取物对大鼠小肠α-葡萄糖苷酶抑制活性

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