本发明公开了一种富硒毛头鬼伞菌丝体的制备方法，其特征在于，其包括以下步骤：(1)取毛头鬼伞菌菌种于斜面培养基培养得到毛头鬼伞菌斜面菌种；(2)取步骤(1)中的毛头鬼伞菌斜面菌种接种到摇瓶培养基中进行摇床培养得到液体菌种；(3)取步骤(2)中所得的液体菌种转接入含硒发酵培养基中进行发酵至发酵液透明，气味清香，菌丝体生物量为20～30g/L，pH为5～7时，停止发酵，得到富硒毛头鬼伞菌丝体。本发明还公开了一种富硒毛头鬼伞菌菌粉的制备方法。本发明采用毛头鬼伞菌为载体，进行硒的有机化转变，使得二者的生物学功能得到互补。
1.一种富硒毛头鬼伞菌丝体的制备方法，其特征在于，其包括以下步骤：
(1) 取毛头鬼伞菌菌种于斜面培养基培养得到毛头鬼伞菌斜面菌种；
(2) 取步骤(1)中的毛头鬼伞菌斜面菌种接种到摇瓶培养基中进行摇床培养得到液体菌种；
(3) 在生物反应器中配制250L含硒发酵培养基，所述含硒发酵培养基的配方为：葡萄糖20~30g，玉米粉20~40 g，花生粕2~6 g，KH2PO42~4 g，MgSO4·7H2O 0.5~1.5 g，VB1 -3 -3
10~20×10 g，Na2SeO3 4~6×10 g，蒸馏水1000mL，pH自然；所述的液体菌种接种量为
3~5%；取步骤(2)中所得的液体菌种转接入含硒发酵培养基中，在生物反应器温度25~28 ℃，无菌空气的通气量6~10L/min的条件下，发酵培养5~6 d，至发酵液透明，气味清香，按湿重计算菌丝体生物量为20~30 g/L， pH为5~7时，停止发酵，得到富硒毛头鬼伞菌丝体。
2.根据权利要求1所述的富硒毛头鬼伞菌丝体的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中的斜面培养基的配方为：土豆150~300 g，葡萄糖15~30 g，蛋白胨1.5~3 g，KH2PO4 1~3 g，MgSO4 ·7H2O 0.5~1.5 g，VB1 0.01~0.03 g，琼脂15~30 g，蒸馏水1000mL，pH自然；培养温度为：25~30℃。
3.根据权利要求1或2所述的富硒毛头鬼伞菌丝体的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中的摇瓶培养基的配方为：土豆150~300 g，葡萄糖15~30 g，蛋白胨2~4 g，KH2PO4 1~3 g，MgSO4 ·7H2O 0.5~1.5 g，VB1 0.01~0.03 g，蒸馏水1000mL，pH自然；所述的斜面菌种的2
4.根据权利要求3所述的富硒毛头鬼伞菌丝体的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)的摇床培养的培养条件为：摇床转速100~150 r/min，温度25~28 ℃，装液量与容器体积比为1:2~3，培养时间3~4 d。
5.一种富硒毛头鬼伞菌菌粉的制备方法，其特征在于，其包括以下步骤：
(1) 取毛头鬼伞菌菌种于斜面培养基培养得到毛头鬼伞菌斜面菌种；
(2) 取步骤(1)中的毛头鬼伞菌斜面菌种接种到摇瓶培养基中进行摇床培养得到液体菌种；
(3) 在生物反应器中配制250L含硒发酵培养基，所述含硒发酵培养基的配方为：葡萄糖20~30g，玉米粉20~40 g，花生粕2~6 g，KH2PO42~4 g，MgSO4·7H2O 0.5~1.5 g，VB1 -3 -3
10~20×10 g，Na2SeO3 4~6×10 g，蒸馏水1000mL，pH自然；所述的液体菌种接种量为
3~5%；取步骤(2)中所得的液体菌种转接入含硒发酵培养基中，在生物反应器温度25~28 ℃，无菌空气的通气量6~10L/min的条件下，发酵培养5~6 d，至发酵液透明，气味清香，按湿重计算菌丝体生物量为20~30 g/L， pH为5~7时，停止发酵，得到富硒毛头鬼伞菌丝体;(4) 取步骤(3)所得的富硒毛头鬼伞菌丝体进行干燥，然后粉碎得到富硒毛头鬼伞菌粉。
6.根据权利要求5所述的富硒毛头鬼伞菌菌粉的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中的斜面培养基的配方为：土豆150~300 g，葡萄糖15~30 g，蛋白胨1.5~3 g，KH2PO4 1~3 g，MgSO4 ·7H2O 0.5~1.5 g，VB1 0.01~0.03 g，琼脂15~30 g，蒸馏水1000mL，pH自然；培养温度为：25~30℃。
7.根据权利要求5或6所述的富硒毛头鬼伞菌菌粉的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中的摇瓶培养基的配方为：土豆150~300 g，葡萄糖15~30 g，蛋白胨2~4 g，KH2PO4 1~3 g，MgSO4 ·7H2O 0.5~1.5 g，VB1 0.01~0.03 g，蒸馏水1000mL，pH自然；所述的斜面菌种的2
8.根据权利要求7所述的富硒毛头鬼伞菌菌粉的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)的摇床培养的培养条件为：摇床转速100~150 r/min，温度25~28 ℃，装液量与容器体积比为1:2~3，培养时间3~4 d。
9.根据权利要求8所述的富硒毛头鬼伞菌菌粉的制备方法，其特征在于，所述的步骤(4)中的富硒毛头鬼伞菌丝体于50~60℃温度下进行干燥。
10.根据权利要求9所述的富硒毛头鬼伞菌菌粉的制备方法，其特征在于，所述的干燥时间控制在4~6小时之间。
一种富硒毛头鬼伞菌丝体及其菌粉的制备方法
技术领域
[0001] 本发明涉及一种富硒毛头鬼伞菌丝体的制备方法，本发明还涉及了一种富硒毛头鬼伞菌粉的制备方法。
背景技术
[0002] 硒(Se)是人体必需的一种微量元素，具有多种重要的生理功能，硒的摄入量不足与克山病、大骨节病、心血管疾病、肿瘤等许多疾病的发生有关。人体获取硒主要从食物中吸收，食物来自于农产品，农产品从土壤中吸收硒，而土壤缺硒是世界上广泛存在的问题，地球土壤的自然含硒量一般也只有0.1～2.0μg/g，平均为0.2μg/g。我国恰恰处在全球的缺硒带。目前，补硒剂主要有两类，一是无机硒，如亚硒酸钠、硒酸钠；二是有机硒，包括有机硒制剂、富硒地区出产的天然产物，以及人工生物转化的各种动、植物和微生物产品。
[0003] 毛头鬼伞(Coprinus comatus)是近年来人工开发生产的一种具有商业潜力的珍稀食用菌新品，其性平味甘，有益脾胃、清神宁智、增食欲及治疗痔疮等功效，还具有一定的降血糖、降血脂、提高免疫活性、抗肿瘤、抗病毒和抗菌等生物学功能，所以被联合国粮农组织(FAO)和世界卫生组织(WHO)确定为集“天然、营养、保健”三种功能为一体的16种珍稀食用菌之一。
[0004] 硒是一种具有副作用的营养素，安全范围较窄，有机硒的安全性远高于无机硒。近年来，对生物富硒的报道较多，真菌液体发酵过程有很强的富集、转化微量元素的能力，更有价值的是无机形态的微量元素经真菌吸收后，形成有机形态的元素。目前，作为有机硒制品富硒食用菌的研究和开发倍受关注，但是目前没有对富硒毛头鬼伞菌丝体及菌粉制备方法方面的研究。
发明内容
[0005] 本发明的第一个目的旨在提供一种富硒毛头鬼伞菌丝体的制备方法。
[0006] 本发明的第二个目的是提供一种富硒毛头鬼伞菌菌粉的制备方法。
[0007] 本发明的目的是通过以下技术措施来实现的：一种富硒毛头鬼伞菌丝体的制备方法，其包括以下步骤：
[0008] (1)取毛头鬼伞菌菌种于斜面培养基培养得到毛头鬼伞菌斜面菌种；
[0009] (2)取步骤(1)中的毛头鬼伞菌斜面菌种接种到摇瓶培养基中进行摇床培养得到液体菌种；
[0010] (3)取步骤(2)中所得的液体菌种转接入含硒盐的发酵培养基中进行发酵至发酵液透明，气味清香，按湿重计算菌丝体生物量为20～30g/L，pH为5～7时，停止发酵，得到富硒毛头鬼伞菌丝体。
[0011] 本发明推荐的实施例是：所述步骤(1)中的斜面培养基的配方为：土豆150～300g，葡萄糖15～30g，蛋白胨1.5～3g，KH2PO41～3g，MgSO4·7H2O0.5～1.5g，VB10.01～
0.03g，琼脂15～30g，蒸馏水1000mL，pH自然；培养温度为：25～30℃。
[0012] 本发明所述步骤(2)中的摇瓶培养基推荐的配方为：土豆150～300g，葡萄糖15～30g，蛋白胨2～4g，KH2PO41～3g，MgSO4·7H2O 0.5～1.5g，VB10.01～0.03g，蒸馏
2
水1000mL，pH自然。所述的斜面菌种的接种量为0.5～1.0cm 菌落面积的菌丝。
[0013] 本发明推荐的所述步骤(2)的摇床培养的培养条件为：摇床转速100～150r/min，温度25～28℃，装液量与容器体积比为1∶2～3，培养时间3～4d。
[0014] 本发明推荐的所述步骤(3)中的发酵培养基的配方为：葡萄糖20～30g，玉米-3粉20～40g，花生粕2～6g，KH2PO42～4g，MgSO4·7H2O 0.5～1.5g，VB110～20×10 g，-3
Na2SeO34～6×10 g，蒸馏水1000mL，pH自然；所述的液体菌种接种量为3～5％。
[0015] 本发明中的斜面培养基、摇瓶培养基和发酵培养基在配制好后进行灭菌处理，然后再接种菌种，以保证得到的得到的富硒毛头鬼伞菌丝体无其他杂菌污染。所述的灭菌处理采用现有的常规灭菌方式进行即可。
[0016] 本发明推荐的所述步骤(3)的发酵培养的培养条件为：生物反应器温度25～28℃，无菌空气的通气量6～10L/min，培养时间5～6d。在此条件下，不仅适合于毛头鬼伞菌的生长，而且能让毛头鬼伞菌处于良性生长状态中，可以充分地吸收元素硒，有利于菌体富集微量元素硒，并且也不会伤害毛头鬼伞菌菌体，使生物量保持在较高的水平范围。
[0017] 本发明所述步骤(3)中发酵的放罐质量标准为：发酵液透明，气味清香，按湿重计算菌丝体生物量为20～30g/L，富硒率为80～85％，pH为5～7，且无任何杂菌污染。
[0018] 本发明的第二个目的是通过以下技术措施来实现的：一种上述富硒毛头鬼伞菌菌粉的制备方法，其包括以下步骤：
[0019] (1)取毛头鬼伞菌菌种于斜面培养基培养得到毛头鬼伞菌斜面菌种；
[0020] (2)取步骤(1)中的毛头鬼伞菌斜面菌种接种到摇瓶培养基中进行摇床培养得到液体菌种；
[0021] (3)取步骤(2)中所得的液体菌种转接入含硒发酵培养基中进行发酵至发酵液透明，气味清香，按湿重计算菌丝体生物量为20～30g/L，pH为5～7时，停止发酵，得到富硒毛头鬼伞菌丝体；
[0022] (4)取步骤(3)所得的富硒毛头鬼伞菌丝体进行干燥，然后粉碎得到富硒毛头鬼伞菌粉。
[0023] 本发明推荐的实施例是：所述步骤(1)中的斜面培养基的配方为：土豆150～300g，葡萄糖15～30g，蛋白胨1.5～3g，KH2PO41～3g，MgSO4·7H2O 0.5～1.5g，VB10.01～
0.03g，琼脂15～30g，蒸馏水1000mL，pH自然；培养温度为：25～30℃。
[0024] 本发明所述步骤(2)中的摇瓶培养基推荐的配方为：土豆150～300g，葡萄糖15～30g，蛋白胨2～4g，KH2PO41～3g，MgSO4·7H2O 0.5～1.5g，VB10.01～0.03g，蒸馏
2
水1000mL，pH自然。所述的斜面菌种的接种量为0.5～1.0cm 菌落面积的菌丝。
[0025] 本发明推荐的所述步骤(2)的摇床培养的培养条件为：摇床转速100～150r/min，温度25～28℃，装液量与容器体积比为1∶2～3，培养时间3～4d。
[0026] 本发明推荐的所述步骤(3)中的发酵培养基的配方为：葡萄糖20～30g，玉米-3粉20～40g，花生粕2～6g，KH2PO42～4g，MgSO4·7H2O 0.5～1.5g，VB110～20×10 g，-3
Na2SeO34～6×10 g，蒸馏水1000mL，pH自然；所述的液体菌种接种量为3～5％。
[0027] 本发明中的斜面培养基、摇瓶培养基和发酵培养基在配制好后进行灭菌处理，然后再接种菌种，以保证得到的得到的富硒毛头鬼伞菌丝体无其他杂菌污染。所述的灭菌处理采用现有的常规灭菌方式进行即可。
[0028] 本发明推荐的所述步骤(3)的发酵培养的培养条件为：生物反应器温度25～28℃，无菌空气的通气量6～10L/min，培养时间5～6d。
[0029] 本发明所述步骤(3)中发酵的放罐质量标准为：发酵液透明，气味清香，按湿重计算菌丝体生物量为20～30g/L，富硒率为80～85％，pH为5～7，且无任何杂菌污染。
[0030] 本发明所述的步骤(4)中的富硒毛头鬼伞菌丝体于50～60℃温度下进行干燥。干燥时间控制在4～6小时之间，以保证富硒毛头鬼伞菌中的活性成分的活性。
[0031] 与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
[0032] (1)本发明采用毛头鬼伞菌为载体，进行硒的有机化转变，使得二者的生物学功能得到互补。
[0033] (2)本发明采用液态深层发酵法培养富硒毛头鬼伞菌丝体，与固态发酵法相比，具有生产周期短，没有杂菌感染，生物量和富硒率的相对稳定，因而产品质量稳定。本发明易于机械化生产，自动化管理控制。
附图说明
[0034] 图1是本发明制备富硒毛头鬼伞菌的工艺流程方框图；
[0035] 图2是本发明制备富硒毛头鬼伞菌菌粉的工艺流程方框图。
具体实施方式
[0036] 以下结合具体实施例对本发明作进一步描述，但不作为对本发明的限定。
[0037] 实施例一
[0038] (1)按下述配方配制斜面培养基，灭菌后，接种经活化的毛头鬼伞菌种，在28℃温度下培养至斜面上长满新鲜的毛头鬼伞菌。
[0039] 斜面培养基的配方为：土豆200g，葡萄糖15g，蛋白胨2g，KH2PO42g，MgSO4·7H2O1g，VB10.01g，琼脂20g，蒸馏水1000mL，pH自然。其中，土豆采用的是土豆水提液。
[0040] (2)按下述配方配制摇瓶培养基，灭菌后，挑取0.5cm2菌落面积的毛头鬼伞斜面菌种的菌丝，接种到三角瓶摇瓶培养基中，摇床转速100r/min，温度25℃，装液量75mL/250mL，培养3d，得液体菌种。
[0041] 摇瓶培养基的配方：土豆200g，葡萄糖30g，蛋白胨4g，KH2PO42g，MgSO4·7H2O1g，VB10.01g，蒸馏水1000mL，pH自然。其中，土豆采用的是土豆水提液。
[0042] (3)按下述配方，在生物反应器中配制250L发酵培养基，然后进行灭菌。灭菌完成后将所得的液体菌种按接种量3％(V液体菌种/V液体菌种+发酵培养基)接种于发酵培养基中于温度25℃，无菌空气通气量为6L/min的条件下，培养时间5d，得富硒毛头鬼伞菌丝体，按湿重计算菌丝体生物量为23.5g/L，富硒率为80.3％。其中，富硒率是指毛头鬼伞菌丝体内富集的硒含量与培养基中所添加的硒含量之比值。
[0043] 发酵培养基的配方：葡萄糖20g，玉米粉40g，花生粕4g，KH2PO42g，MgSO4·7H2O1g，-3 -3VB110×10 g，Na2SeO34×10 g，蒸馏水1000ml，pH自然。
[0044] (4)将所得毛头鬼伞菌丝体于60℃鼓风干燥设备中干燥4小时，然后取出用粉碎机粉碎后，得富硒毛头鬼伞菌粉，密封保存。
[0045] 实施例二
[0046] (1)按下述配方配制斜面培养基，然后灭菌后，接种经活化的毛头鬼伞菌种，在25℃温度下培养至斜面上长满新鲜的毛头鬼伞菌。
[0047] 斜面培养基的配方为：土豆200g，葡萄糖15g，蛋白胨2g，KH2PO42g，MgSO4·7H2O1g，VB10.01g，琼脂20g，蒸馏水1000mL，pH自然。其中，土豆采用的是土豆水提液。
[0048] (2)按下述配方配制摇瓶培养基，灭菌后，挑取0.75cm2菌落面积的斜面菌种的菌丝，接种到三角瓶摇瓶培养基中，摇床转速150r/min，温度28℃，装液量100mL/250mL，培养4d，得液体菌种。
[0049] 摇瓶培养基的配方：土豆200g，葡萄糖30g，蛋白胨4g，KH2PO42g，MgSO4·7H2O1g，VB10.01g，蒸馏水1000mL，pH自然。其中，土豆采用的是土豆水提液。
[0050] (3)按下述配方，在生物反应器中配制250L发酵培养基，然后进行灭菌。灭菌完成后将所得的液体菌种按接种量4％(V液体菌种/V液体菌种+发酵培养基)接种于发酵培养基中于温度28℃，无菌空气通气量8L/min的条件下，培养时间6d，得富硒毛头鬼伞菌丝体，按湿重计算菌丝体生物量为26.4g/L，富硒率为85.0％。
[0051] 发酵培养基的配方：葡萄糖20g，玉米粉40g，花生粕4g，KH2PO42g，MgSO4·7H2O1g，-3 -3VB110×10 g，Na2SeO35×10 g，蒸馏水1000mL，pH自然。
[0052] (4)将所得毛头鬼伞菌丝体于50℃鼓风干燥设备中干燥5小时，然后取出用粉碎机粉碎后，得富硒毛头鬼伞菌粉，密封保存。
[0053] 实施例三
[0054] (1)按下述配方配制斜面培养基，然后灭菌后，接种经活化的毛头鬼伞菌种，在30℃温度下培养至斜面上长满新鲜的毛头鬼伞菌。
[0055] 斜面培养基的配方为：土豆200g，葡萄糖15g，蛋白胨2g，KH2PO42g，MgSO4·7H2O1g，VB10.01g，琼脂20g，蒸馏水1000mL，pH自然。其中，土豆采用的是土豆水提液。
[0056] (2)按下述配方配制摇瓶培养基，灭菌后，挑取1cm2菌落面积的菌丝，接种到三角瓶摇瓶培养基中，摇床转速100r/min，温度28℃，装液量90mL/250mL，培养4d，得液体菌种。
[0057] 摇瓶培养基的配方：土豆200g，葡萄糖30g，蛋白胨4g，KH2PO42g，MgSO4·7H2O1g，VB10.01g，蒸馏水1000mL，pH自然。其中，土豆采用的是土豆水提液。
[0058] (3)按下述配方，在生物反应器中配制250L发酵培养基，然后进行灭菌。灭菌完成后将所得的液体菌种按接种量5％(V液体菌种/V液体菌种+发酵培养基)接种于发酵培养基中于温度28℃，无菌空气通气量10L/min的条件下，培养时间5d，得富硒毛头鬼伞菌丝体，按湿重计算菌丝体生物量为24.8g/L，富硒率为84.7％。
[0059] 发酵培养基的配方：葡萄糖20g，玉米粉40g，花生粕4g，KH2PO42g，MgSO4·7H2O1g，-3 -3VB110×10 g，Na2SeO34.4×10 g/L，蒸馏水1000mL，pH自然。
[0060] (4)将所得毛头鬼伞菌丝体于55℃鼓风干燥设备中干燥6小时，然后用粉碎机粉碎后，得富硒毛头鬼伞菌粉，密封保存。
[0061] 上述实施并不限制本发明的保护范围，所有在不偏离本发明精神的基础上所做修改和改进，均属于本发明要求保护范围。
