一种治疗慢性充血性心力衰竭征的注射剂的制备方法

摘要

本发明提供了一种治疗慢性充血性心力衰竭征的注射剂及其制备方法。所述的药物组合物含有重量比3%～6%的蜚蠊提取物，10%～30%聚乙二醇和0.7～1.0%氯化钠，余量为注射用水。所述的制备方法包括蜚蠊提取物制备：蜚蠊干虫体粉碎成粗粉，经乙醇回流，提取液经减压浓缩得稠膏；再加纯化水使油水分离，收集水层药液，活性炭吸附，装柱，正丁醇洗脱，洗脱液经减压浓缩后进行二次醇提，滤液经减压浓缩后水提，离心、过滤，脱色、超滤后减压浓缩得蜚蠊提取物稠膏。药物注射剂的制备：按组合物配比将蜚蠊提取物、药用聚乙二醇和药用氯化钠混合，调pH值5.4～6.4，用注射用水稀释至1000ml，滤过，灌封、灭菌、灯检、包装，即得蜚蠊提取物的注射剂。

权利要求

1.一种治疗慢性充血性心力衰竭征的注射剂制备方法，所述的注射剂中含有重量比

3～6%的蜚蠊醇提取物，10～30%聚乙二醇和0.7～1%氯化钠，余量为注射用水；所述的聚乙二醇为400型聚乙二醇；其特征在于所述的注射剂的制备方法包括：蜚蠊醇提取物制备：蜚蠊干虫体粉碎成粗粉，经5～10倍重量的90～95%乙醇渗漉提取8～12小时，提取液经减压浓缩得稠膏；再加4～6倍纯化水充分搅拌并静置12～24小时使油水分离，去除沉淀物和油脂，收集水层药液，加入药用活性炭静置1～2小时吸附药液至无色，装柱，水饱和正丁醇洗脱，洗脱液经减压浓缩后加入8～10倍重量的65～85%乙醇进行二次醇提，冷藏12～24小时后过滤，滤液经减压浓缩后，再加入8～10倍重量份的纯化水进行水提，经冷藏后12～24小时，低温离心过滤得水提液，水提液用0.1～0.5%重量比的针用活性炭脱色，边加边搅拌，并加热至60～80℃后静止0.5～1小时；经膜过滤器过滤、超滤后减压浓缩得蜚蠊提取物稠膏；

药物注射剂的制备：按组合物配比将蜚蠊提取物、药用聚乙二醇和医用氯化钠混合，用注射用水稀释至1000ml，滤过，灌封、灭菌、灯检、包装，即得蜚蠊提取物的注射剂。

2.根据权利要求1所述的注射剂的制备方法，其特征是：所述的蜚蠊提取物制备中，蜚蠊粗粉加入5～10倍重量比的90～95%乙醇浸渍48～60小时，再用90～95%乙醇作溶剂缓慢渗滤至滤液呈微黄色，滤液经减压浓缩得稠膏。

3.根据权利要求1所述的注射剂的制备方法，其特征是：所述的蜚蠊提取物制备中离心时的温度为2～6℃。

4.根据权利要求1所述的注射剂的制备方法，其特征是：所述的蜚蠊提取物制备中冷藏温度为4～8℃。

5.根据权利要求1所述的注射剂的制备方法，其特征是：所述的蜚蠊提取物制备中，减压浓缩温度为60～80℃。

6.根据权利要求1所述的注射剂的制备方法，其特征是：所述的蜚蠊提取物制备中，稠膏的相对密度为1.2～1.3。

说明书

一种治疗慢性充血性心力衰竭征的注射剂的制备方法

技术领域

[0001] 本发明属于生物制药技术领域，具体涉及一种治疗慢性充血性心力衰竭征的注射剂及其制备方法。

背景技术

[0002] 蜚蠊，又名美洲大蠊（俗称蟑螂，）是蜚蠊科中体积最大的，成虫体长29～35毫米。蜚蠊表皮含有巩膜质和甲壳质，溴、锌、镍、锰、钾、钙、钛、氯、硫、硅、铝、镁等元素，肌肉水解可得13种氨基酸，身体内还贮藏着微生素B1、B2、烟酸和抗坏血酸等，淋巴中含海藻糖、海藻糖酶、糖蛋白、肌醇、原儿茶酸葡萄甙等；全体含麦角硫因、龙虾肌碱、胡芦巴碱、甘氨酸、甜菜碱、肛碱、三甲胺、腺嘌呤等。现代科学研究表明，蜚蠊提取物具有很强的生物活性，但是现有技术对于蜚蠊提取物的应用还存在很大的局限性，蜚蠊提取物应用潜力有待于进一步开发和利用。

发明内容

[0003] 本发明的第一目的在于针对现有技术的不足，提供一种治疗慢性充血性心力衰竭征的注射剂；第二目的在于提供一种该该注射剂的制备方法。

[0004] 本发明的第一目的是这样实现的，

[0005] 所述的注射剂中含有重量比3～6%的蜚蠊醇提取物，10～30%聚乙二醇和0.7～1%氯化钠，余量为注射用水。

[0006] 其优化方案，所述的注射剂中含有重量比4～5%的蜚蠊提取物，15～20%聚乙二醇和0.8～1%氯化钠，余量为注射用水。

[0007] 所述的聚乙二醇为400型聚乙二醇。

[0008] 本发明的第二目的是这样实现的，所述的注射剂的制备方法包括：

[0009] 蜚蠊醇提取物制备：蜚蠊干虫体粉碎成粗粉，经5～10倍重量的90～95%乙醇渗漉提取8～12小时，提取液经减压浓缩得稠膏；再加4～6倍纯化水充分搅拌并静置12～24小时使油水分离，去除沉淀物和油脂，收集水层药液，加入药用活性炭静置1～2小时吸附药液至无色，装柱，水饱和正丁醇洗脱，洗脱液经减压浓缩后加入8～10倍重量的65～
85%乙醇进行二次醇提，冷藏12～24小时后过滤，滤液经减压浓缩后，再加入8～10倍重量份的纯化水进行水提，经冷藏后12～24小时，低温离心过滤得水提液，水提液用0.1～
0.5%重量比的针用活性炭脱色，边加边搅拌，并加热至60～80℃后静止0.5～1小时；经膜过滤器过滤、超滤后减压浓缩得蜚蠊提取物稠膏；

[0010] 药物注射剂的制备：按组合物配比将蜚蠊提取物、药用聚乙二醇和医用氯化钠混合，用注射用水稀释至1000ml，滤过，灌封、灭菌、灯检、包装，即得蜚蠊提取物的注射剂。

[0011] 其优化方案，

[0012] 所述的蜚蠊提取物制备中，蜚蠊粗粉加入5～10倍重量比的90～95%乙醇浸渍48～60小时，再用90～95%乙醇作溶剂缓慢渗滤至滤液呈微黄色，滤液经减压浓缩得稠膏。

[0013] 所述的蜚蠊提取物制备中离心时的温度为2～6℃。

[0014] 所述的蜚蠊提取物制备中冷藏温度为4～8℃。

[0015] 所述的蜚蠊提取物制备中，减压浓缩温度为60～80℃。

[0016] 所述的蜚蠊提取物制备中，稠膏的相对密度为1.2～1.3。

[0017] 本发明蜚蠊提取物及其制剂能够促进心肌细胞Ca2+内流，温和持久地增加心肌收缩力，扩张血管，降低肺动脉压、肺毛细血管压；扩张冠脉、增加冠脉流量，抑制氧自由基介导的心肌损伤；扩张肾血管、增加肾血流量、利尿；改善微循环；纠正神经内分泌失衡。 附图说明

[0018] 附图为本发明注射液的标准指纹图谱。

具体实施方式

[0019] 下面结合实施例对本发明作进一步的说明，但不以任何方式对本发明加以限制，基于本发明教导所作的任何变换，均属于本发明的保护范围。

[0020] 本发明所述的注射剂中含有重量比3～6%的蜚蠊醇提取物，10～30%聚乙二醇和0.7～1%氯化钠，余量为注射用水。

[0021] 其优选实施方式，所述的注射剂中含有重量比4～5%的蜚蠊提取物，15～20%聚乙二醇和0.8～1%氯化钠，余量为注射用水。

[0022] 所述的聚乙二醇为400型聚乙二醇。

[0023] 本发明所述的注射剂的制备方法包括：

[0024] 蜚蠊醇提取物制备：蜚蠊干虫体粉碎成粗粉，经5～10倍重量的90～95%乙醇渗漉提取8～12小时，提取液经减压浓缩得稠膏；再加4～6倍纯化水充分搅拌并静置12～24小时使油水分离，去除沉淀物和油脂，收集水层药液，加入药用活性炭静置1～2小时吸附药液至无色，装柱，水饱和正丁醇洗脱，洗脱液经减压浓缩后加入8～10倍重量的65～
85%乙醇进行二次醇提，冷藏12～24小时后过滤，滤液经减压浓缩后，再加入8～10倍重量份的纯化水进行水提，经冷藏后12～24小时，低温离心过滤得水提液，水提液用0.1～
0.5%重量比的针用活性炭脱色，边加边搅拌，并加热至60～80℃后静止0.5～1小时；经膜过滤器过滤、超滤后减压浓缩得蜚蠊提取物稠膏；

[0025] 药物注射剂的制备：按组合物配比将蜚蠊提取物、药用聚乙二醇和医用氯化钠混合，用注射用水稀释至1000ml，滤过，灌封、灭菌、灯检、包装，即得蜚蠊提取物的注射剂。

[0026] 其优选实施方式，

[0027] 所述的蜚蠊提取物制备中，蜚蠊粗粉加入5～10倍重量比的90～95%乙醇浸渍48～60小时，再用90～95%乙醇作溶剂缓慢渗滤至滤液呈微黄色，滤液经减压浓缩得稠膏。

[0028] 所述的蜚蠊提取物制备中离心时的温度为2～6℃。

[0029] 所述的蜚蠊提取物制备中冷藏温度为4～8℃。

[0030] 所述的蜚蠊提取物制备中，减压浓缩温度为60～80℃。

[0031] 所述的蜚蠊提取物制备中，稠膏的相对密度为1.2～1.3。

[0032] 实施例1

[0033] 取蜚蠊干虫体1000g粉碎成粗粉，加入5倍重量的90%乙醇浸渍48小时，再以90%的乙醇渗漉提取8小时，提取液在60℃下减压浓缩得相对密度为1.2～1.3的稠膏；再加4倍纯化水充分搅拌并静置12小时使油水分离，去除沉淀物和油脂，收集水层药液，加入药用活性炭静置1小时吸附药液至无色，装柱，水饱和正丁醇洗脱，洗脱液经减压浓缩后加入
8倍重量的65%乙醇进行二次醇提，在4℃下冷藏12小时后过滤，滤液在60℃下减压浓缩后，再加入8倍重量份的纯化水进行水提，在4℃下冷藏12小时后，在2℃下低温离心过滤得水提液，水提液用0.1%重量比的针用活性炭脱色，边加边搅拌，并加热至60℃后静止0.5小时；经膜过滤器过滤、超滤后减压浓缩得相对密度为1.2～1.3的蜚蠊提取物稠膏；

[0034] 按3%的蜚蠊醇提取物，10%聚乙二醇和0.7%%氯化钠，余量为注射用水的比例配合，经滤过、灌封、灭菌、灯检、包装，即得所述的注射剂。

[0035] 实施例2

[0036] 蜚蠊干虫体粉碎成粗粉1000g，加入10倍重量的95%乙醇浸渍60小时，然后再用95%回流提取12小时，提取液在80℃下减压浓缩得相对密度为1.2～1.3的稠膏；再加6倍纯化水充分搅拌并静置24小时使油水分离，去除沉淀物和油脂，收集水层药液，加入药用活性炭静置2小时吸附药液至无色，装柱，水饱和正丁醇洗脱，洗脱液在80℃下减压浓缩后加入0倍重量的85%乙醇进行二次醇提，在8℃下冷藏24小时后过滤，滤液在80℃下减压浓缩后，再加入10倍重量份的纯化水进行水提，在8℃下冷藏24小时后，在6℃下低温离心过滤得水提液，水提液用0.5%重量比的针用活性炭脱色，边加边搅拌，并加热至80℃后静止1小时；经膜过滤器过滤、超滤后减压浓缩得相对密度为1.2～1.3的蜚蠊提取物稠膏；

[0037] 按6%的蜚蠊醇提取物，30%聚乙二醇和1.0%氯化钠，余量为注射用水的比例配合，经滤过、灌封、灭菌、灯检、包装，即得所述的注射剂。

[0038] 实施例3

[0039] 蜚蠊干虫体粉碎成粗粉1000g，经8倍重量的95%乙醇浸渍55小时，然后再用95%回流提取10小时，提取液在70℃下减压浓缩得相对密度为1.2～1.3的稠膏；再加5倍纯化水充分搅拌并静置18小时使油水分离，去除沉淀物和油脂，收集水层药液，加入药用活性炭静置1.5小时吸附药液至无色，装柱，水饱和正丁醇洗脱，洗脱液在70℃下减压浓缩后加入9倍重量的75%乙醇进行二次醇提，在6℃下冷藏18小时后过滤，滤液在70℃下减压浓缩后，再加入9倍重量份的纯化水进行水提，在6℃下冷藏18小时后，在4℃下低温离心过滤得水提液，水提液用0.3%重量比的针用活性炭脱色，边加边搅拌，并加热至70℃后静止0.7小时；经膜过滤器过滤、超滤后减压浓缩得相对密度为1.2～1.3的蜚蠊提取物稠膏；

[0040] 按5%的蜚蠊醇提取物，20%聚乙二醇和0.8%氯化钠，余量为注射用水的比例配合，经滤过、灌封、灭菌、灯检、包装，即得所述的注射剂。

[0041] 实施例4

[0042] 用实施例1中制备的蜚蠊提取物稠膏，按4%的蜚蠊提取物，15%的聚乙二醇和0.8%的氯化钠，余量为注射用水，经滤过、灌封、灭菌、灯检、包装，即得所述的注射剂。

[0043] 实施例5

[0044] 用实施例1中制备的蜚蠊提取物稠膏，按5%的蜚蠊提取物， 20%聚乙二醇和1.0%氯化钠，余量为注射用水，经滤过、灌封、灭菌、灯检、包装，即得所述的注射剂。

[0045] 本发明的注射剂为黄色澄明液体，按以下方法对注射液和蜚蠊提取物进行鉴别、检查和测定：

[0046] 1、鉴别

[0047] （1）薄层色谱法试验：

[0048] 取注射剂1ml，加水稀释至5ml，作为供试品溶液。

[0049] 取蜚蠊干品1g，加正丁醇-冰醋酸（4：1）混合液50ml，超声处理30分钟后过滤，将滤液蒸干，残渣加水1ml溶解，作为药材对照溶液。

[0050] 依照薄层色谱法（《中国药典》一部附录Ⅵ B）试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以正丁醇-冰醋酸-水（4：1：1）混合液展开，取出，晾干，置紫外光灯（254nm）下检视，供试品色谱中，在与对照药材溶液色谱相应的位置上，应显3个相同颜色的斑点。再喷以2%的茚三酮溶液，105℃下加热至斑点显色清晰，在与对照药材色谱相应的位置上，应显1个相同颜色的斑点。

[0051] （2）高效液相色谱法试验：

[0052] 取注射剂1ml，加水稀释至5ml，通过强碱性阴离子交换葡聚糖层析柱（QAE-Sephadex A-25型，内径1.5cm，柱高5cm），用20ml水洗脱，弃去水洗脱液，再用
0.02mol/L盐酸洗脱，弃去初洗脱液8ml，收集续洗脱液20ml，作为供试品溶液。

[0053] 依照高效液相色谱法（《中国药典》一部附录Ⅵ D）试验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，色谱柱（柱长150mm，柱内径为4.6mm）；以0.05mol/L醋酸钠缓冲液（pH 5.0）-甲醇（90：10）混合液为流动相，用二极管阵列检测器（DAD）进行检测，检测波长为246nm，流速为每分钟0.5ml，柱温为30℃。精密吸取供试品溶液5µl，注入液相色谱仪，测定，记录12分钟内的色谱图。供试品色谱图中主峰（最大峰面积）的DAD紫外检测光谱图在246nm与286nm的波长处有最大吸收。

[0054] 2、检查

[0055] 色泽：取本品1ml，加水至10ml，摇匀，依照《中国药典》一部附录Ⅺ A第一法进行检查，与黄色8号标准比色液比较，不得更深。

[0056] pH值：应为5.4～6.4（《中国药典》一部附录Ⅶ G）。

[0057] 蛋白质：取注射剂1ml，加入新鲜配制的30％磺基水杨酸溶液1ml，混匀，放置5分钟，不得出现浑浊。

[0058] 树脂：取注射剂5ml，加盐酸1滴，放置30分钟，应无树脂状物析出。

[0059] 草酸盐：取注射剂2ml，加3%氯化钙试液2～3滴，放置10分钟，不得出现浑浊或沉淀。

[0060] 钾离子：取注射剂2ml，先用小火炽灼至炭化，再在500～600℃炽灼至完全灰化，加入6%醋酸使溶解。置25ml量瓶中，加水稀释至刻度，混匀，量取1ml置于10ml纳氏比色管中，加碱性甲醛溶液（甲醛溶液用0.1mol/L氢氧化钠溶液调pH至8.0～9.0）12滴，3%的乙二胺四醋酸钠溶液2滴，3%的四苯硼酸钠溶液0.5ml，加水至10ml作为供试品管。取硫酸钾适量研细，于110℃干燥至恒重，精密称取2.330g，加水适量使溶解成1000ml，精密吸取10ml加水稀释成100ml，即得标准钾离子溶液；取标准钾离子溶液（100μg/ml）0.8ml，置于
10ml纳氏比色管中，同上操作作为对照品管，取供试品管和对照品管进行目测比浊，供试品管不得更浑浊。

[0061] 重金属：取注射剂2ml，依照《中国药典》一部附录Ⅸ E第二法检查，含重金属不得过百万分之五。

[0062] 砷盐：取注射剂1.0ml，缓缓加热炭化，如炭化不完全，加少量硫酸润湿后，缓缓加热使完全炭化，再于500～600℃炽灼灰化，放冷，加盐酸5ml，加水23ml，依照《中国药典》一部附录Ⅸ F第一法检查，应符合规定的0.0002%。

[0063] 热原：取注射剂依照《中国药典》一部附录ⅩⅢ A检查，剂量按家兔体重每kg注射1ml，其结果应符合规定。

[0064] 异常毒性：取注射剂，每1ml中加入氯化钠注射液稀释至10ml，依照《中国药典》二部附录Ⅺ C检查，按静脉注射给药，其结果应符合规定。

[0065] 3、过敏试验

[0066] 供试液制备：取注射剂，每1ml加氯化钠注射液稀释至4ml作为供试品。

[0067] 取体重250～350g健康豚鼠6只，隔日每只每次腹腔注射供试品0.5ml，共3次，进行致敏。然后将其均分为2组，每组3只，分别在首次注射后14日及21日，由静脉注射供试品1ml进行攻击。在注射后30分钟内，不得出现过敏反应。如有竖毛、喷嚏、干呕、连续咳嗽3声和呼吸困难等现象中的2种或2种以上，或出现抽搐、休克、死亡现象之一者，则判定供试品不符合规定。

[0068] 溶血与凝聚试验：

[0069] 先配制2%的红细胞混悬液。取家兔血数毫升，放入盛有玻璃珠的锥形瓶中，振摇10分钟，除去纤维蛋白原，使成脱纤血液，加10倍量的生理氯化钠溶液，摇匀，离心，除去上清夜，沉淀的红细胞再生理氯化钠溶液洗涤2～3次，至上清液不显红色为止；将所得的红细胞用生理氯化钠溶液配制成2%的红细胞混悬液，即得。

[0070] 进行试验。取洁净试管5支，编号，1～3号管为供试品管，4号管为阴性对照管，5号管为阳性对照管；按下表所示依次加入2%的红细胞混悬液、生理氯化钠溶液、蒸馏水、供试注射液，混均后，立即置于37℃的恒温水浴中，开始每隔15分钟观察一次，1小时后，每隔1小时观察一次，共观察3小时。
试管编号 1 2 3 4 5
2%红细胞混悬液（ml） 2.52.52.52.52.5
生理氯化钠溶液（ml） 2.22.22.22.5-
蒸馏水（ml） - - - - 2.5
供试注射液（ml） 0.30.30.30.00.0

[0071] 按上法检查，供试注射液在3小时内不得出现溶血和红细胞凝聚。

[0072] 指纹图谱：取注射液1ml，加水稀释至5ml，通过强碱性阴离子交换树脂层析柱（Dowex2、Cl¯型，200目，内径1.5cm，高2.5cm，湿法装柱，层析柱预处理采用0.5mol/L氢氧化钠溶液10ml洗脱，再用水10ml洗脱，备用），用水10ml洗脱，弃去水洗脱液，再用0.25mol/L醋酸溶液洗脱，弃去初洗脱液5ml,收集续洗脱液25ml，摇匀，作为供试品溶液。
取肌苷对照品适量，精密称定，加水配制成每1ml含肌苷50µg的溶液，作为对照品溶液。依照《中国药典》一部附录Ⅵ D的高效液相色谱法测定，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，色谱柱（柱长150mm，柱内径为4.6mm）；梯度洗脱，以0.05 mol/L醋酸钠缓冲液（pH 5.0）为流动相A，以甲醇为流动相B，检测波长为254nm，流速为每分钟0.6ml，柱温为30℃。理论板数按肌苷峰计算应不低于5000。
时间（分钟） 流动相A（%） 流动相B（%）
0～5 90 10
5～15 90→74 10→26
15～18 74 26

[0073] 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5µl，注入液相色谱仪，记录25分钟内的色谱图。供试品色谱图应与标准指纹图谱基本一致。将供试品色谱图导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2004，1.0B版），与标准指纹图谱相比较，计算相似度。相似度应不低于0.90。

[0074] 4、蜚蠊提取物中有效成份含量测定

[0075] 复合核苷碱基的测定：精密量取蜚蠊提取物1ml，置50ml量瓶中，用甘氨酸-盐酸缓冲液溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml置100ml量瓶中，加上述缓冲液至刻度，摇匀，即得供试品溶液。依照紫外-可见分光光度法（《中国药典》一部附录VA），在254nm波长处测定吸收度，按下式计算每ml蜚蠊提取物注射剂的复合核苷碱基含量C（mg）[0076] 　　 　

[0077] 式中： A为供试品溶液吸收度

[0078] 490为蜚蠊提取物中复合核苷碱基类浓度为1％时在254nm波长处的平均吸收度。

[0079] n为稀释倍数

[0080] 测定结果为蜚蠊提取物每1ml中含复合核苷碱基应为10.0mg～18.0mg。

[0081] 结合氨基酸的测定：

[0082] 制备标准曲线。精密称取谷氨酸对照品10mg，加约160ml水温热溶解，置200ml容量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得每1ml中含0.05mg的对照品溶液。取具塞试管6只，分别精密加入对照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml，分别加水至1.0ml，以1.0ml水为空白各加入0.2mol/L柠檬酸缓冲液（pH5.0）1.0ml。茚三酮试剂1.0ml，摇匀，在100℃水浴中加热15分钟，取出，用水冷却，放置5～10分钟，各加入60％乙醇3.0ml，摇匀，依照紫外-可见分光光度法(《中国药典》一部附录V A)在570nm波长处测定吸收度。以谷氨酸浓度为横坐标，吸收度为纵坐标绘制标准曲线。

[0083] 制备供试品溶液。精密量取蜚蠊提取物1.0ml，于50ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，即为供试品稀释液。精密量取1.0ml供试品稀释液，置空安瓿中，加1.0ml盐酸，封口，于110℃水解8小时，取出放冷，将内容物全部转到蒸发皿中置沸水浴蒸干，加水适量使溶解并移入10ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，即为供试品水解液。

[0084] 测定。精密量取供试品水解液0.1ml，加水至1.0ml，置于试管A中，为供试品未水解液；取供试品水解液1.0ml置于试管B众。以1.0ml水为空白，依照上述标准曲线制备项下的方法自“各加入0.2mol/L柠檬酸缓冲液（pH5.0）1.0ml”起，分别测定未水解和水解液的吸收度，从标准曲线查出其氨基酸浓度，计算，即得每克蜚蠊提取物中游离氨基酸含量（A）和总氨基酸含量（B），由（B—A）即得每克蜚蠊提取物中结合氨基酸含量。 [0085] 本品每1ml含结合氨基酸以谷氨酸（C5H9NO4）计，应为15.0 mg～25.0mg。 [0086] 尿嘧啶、次黄嘌呤与肌苷的测定：

[0087] 依照《中国药典》一部附录ⅥD的高效液相色谱法测定。

[0088] 色谱条件与系统适用性试验。以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂。流动相A为0.05mol/L醋酸钠缓冲液（pH5.0）；流动相B为甲醇-流动相A（80：20）。按下表进行梯度洗脱；检测波长为254nm，流速为0.5ml/min，理论板数分别按尿嘧啶、次黄嘌呤与肌苷峰计算均应不低于3000。尿嘧啶、次黄嘌呤与肌苷之间的分离度应符合要求。
时间（分钟） 流动相A（%） 流动相B（%）
0～5 90 10
5～15 90→70 10→30
15～18 70 30

[0089] 对照品溶液的制备。精密称取尿嘧啶、次黄嘌呤和肌苷对照品适量，加流动相A制成每1ml中各含尿嘧啶、次黄嘌呤和肌苷分别为30µg、40µg、70µg的溶液，摇匀，即得。 [0090] 供试品溶液的制备。精密量取蜚蠊提取物1ml，置50ml量瓶中，用流动相A稀释至刻度，摇匀，即得。

[0091] 测定。分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10µl，注入液相色谱仪，测定，即得。

[0092] 蜚蠊提取物每ml中含尿嘧啶（C4H4N2O2）应为1.0mg～1.8mg、次黄嘌呤（C5H5N4O）应为1.5mg～2.5mg、肌苷（C10H12N4O5）应为3.5mg～5.0mg。

[0093] 本发明药物制剂的药效学试验结果：

[0094] 本发明所得制剂具有益气活血，通阳利水。用于气阳两虚，瘀血内阻所致的心悸、气促、浮肿、面色晦暗、口唇发绀；慢性充血性心力衰竭、慢性肺原性心脏病见上述证候者。以下为本注射剂在上海中医药大学临床药理基地进行Ⅱ期临床试验的总结摘要：根据本注射液治疗充血性心力衰竭的Ⅱ期临床研究计划，按1：1随机对照试验各100例，开放试验
208例，总408例。试验结果为：治疗组显效率37%，有效率89%；开放试验组显效率55.29%，有效率87.5%，治疗组与对照组（多巴酚丁胺）比较、统计，有显著性差异（P﹤0.01）。该注射液对右心衰、全心衰、心功能Ⅱ级和Ⅲ级的疗效明显，均优于多巴酚丁胺对照组。两组心功能起效时间无统计学差异（P＞0.05），治疗组心功能起效时间为3.31天。治疗组对气虚血瘀型和心气阴虚型疗效分别为93.35%和88.46%，与对照组有显著差异（P＜0.01和P＜0.05），治疗组对呼吸、心率和水肿有明显疗效。两组呼吸心率起效时间比较，均有显著性差异（P＜0.01和P＜0.05）。中医症候积分比较，治疗组对心悸、气促、乏力和畏寒积分改善明显好于对照组（P＜0.01）。心电图、胸片、血压变化，两组无统计学差异，安全性检查未见明显不良反应。试验结果表明，该注射液能改善心功能，缓解心悸、气促、水肿等症候，对气虚血瘀型和心气阴虚型疗效明显。该注射液治疗充血性心力衰竭疗效可靠，使用安全。