一种治疗慢性乙型肝炎的中药组合物及其制备方法和应用

摘要

本发明公开了一种用于治疗慢性乙型肝炎的中药组合物及其制备方法和应用，它包括如下原料：龙葵、柴胡、白花蛇舌草、垂盆草、女贞子、焦栀子、甘草，经水提醇沉，喷雾干燥，添加辅料制备成各种制剂，本发明既能清热解毒、调和脾胃，又具有抗病毒、保肝、护肝的作用，本发明还公开了其在制备用于治疗慢性乙型肝炎药物中的应用。

权利要求

1.一种用于治疗慢性乙型肝炎的中药组合物，其特征在于，它由如下重量份数的原料制备得到：龙葵10-20份，柴胡6-10份，白花蛇舌草20-40份，垂盆草20-40份，女贞子

10-14份，焦栀子7-11份，甘草3-7份。

2.根据权利要求1所述的用于治疗慢性乙型肝炎的中药组合物，其特征在于，它由如下重量份数的原料制备得到：龙葵15份，柴胡8份，白花蛇舌草30份，垂盆草30份，女贞子

12份，焦栀子9份，甘草5份。

3.根据权利要求1所述的用于治疗慢性乙型肝炎的中药组合物，其特征在于，所述的柴胡为醋柴胡。

4.根据权利要求1所述的用于治疗慢性乙型肝炎的中药组合物，其特征在于，所述中药组合物添加辅料，用常规的制剂方法制成硬胶囊剂、颗粒剂、微丸剂、软胶囊、滴丸、口服液、分散片、泡腾片、咀嚼片或栓剂。

5.根据权利要求4所述的用于治疗慢性乙型肝炎的中药组合物，其特征在于，辅料为糊精、乳糖、淀粉、蔗糖、葡萄糖、微晶纤维素、甘露糖、甲基纤维素、羟丙基纤维素、羧甲基纤维素和甜菊苷的一种或几种。

6.权利要求1所述的用于治疗慢性乙型肝炎的中药组合物的制备方法，其特征在于，它包括如下步骤：取龙葵、柴胡、白花蛇舌草、垂盆草、女贞子、焦栀子、甘草七味药材合并，加水煎煮两次，合并煎液，浓缩至65℃时相对密度为1.15-1.20，加乙醇使含醇量的体积百分比达75-85％，搅拌，静置，过滤，滤液减压浓缩至65℃时相对密度为1.20-1.30并回收乙醇，得浓缩液，将浓缩液加水及辅料配制成口服液，或将浓缩液喷雾干燥得干浸膏粉，添加辅料制成硬胶囊剂、颗粒剂、微丸剂、软胶囊、滴丸、分散片、泡腾片、咀嚼片或栓剂。

7.权利要求5所述的用于治疗慢性乙型肝炎的中药组合物的制备方法，其特征在于，煎煮条件为：第一次加水为药材重量的8-12倍量，煎煮1-2h，第二次加水为药材重量的

6-10倍量，煎煮1-2h，

8.权利要求5所述的用于治疗慢性乙型肝炎的中药组合物的制备方法，其特征在于，喷雾干燥条件为：进风温度为100-120℃，出风温度为80-90℃，物料温度为70-90℃，雾化压力为0.2-0.4兆帕，喷雾速度为5-10ml/s。

9.根据权利要求1所述的用于治疗慢性乙型肝炎的中药组合物在制备治疗慢性乙型肝炎药物中的应用。

10.根据权利要求1所述的用于治疗慢性乙型肝炎的中药组合物在制备治疗慢性肝细胞损伤药物中的应用。

说明书

一种治疗慢性乙型肝炎的中药组合物及其制备方法和应用

技术领域

[0001] 本发明属于中药技术领域，具体涉及一种用于治疗慢性乙型肝炎的中药组合物及其制备方法及应用。

背景技术

[0002] 据调查，我国慢性乙型肝炎病毒感染者约占总人口的10％，其中慢性乙型肝炎患者约有1500万人，有30％以上的慢性肝炎患者发展为肝硬化。目前治疗的要点在于控制肝细胞的慢性损伤及保护肝细胞作用和抗乙型肝炎病毒感染以及控制慢性肝病向肝纤维化发展。国内外用于治疗慢性乙型肝炎的药物虽有很多，西药核苷类药物(阿昔洛韦、拉米夫丁、阿德福韦酯、贺普丁)和干扰素等抗病毒有效，文献报道干扰素对乙型肝炎表面抗原有一定转阴作用(30-40％)，但疗程须超过一年以上，且对肝功能的全面恢复不强，远期疗效不理想，价格又昂贵，不少出现类似药物过敏反应；核苷类药物停药后反跳现象严重，耐药现象呈增多趋势，如拉米夫丁用药1年后病毒变异率达16-32％。由于慢性肝病常需要较常时间的治疗，因此，从天然药物中寻求疗效好、安全可靠、并能全面恢复肝功能、阻止向肝纤维化发展的药物是肝病治疗领域的重点发展方向。

[0003] 现今，治疗慢性乙型肝炎中药制剂保肝降酶药有上百种，大多没有特别公认的疗效。

发明内容

[0004] 本发明所要解决的技术问题，是提供一种用于治疗慢性乙型肝病的中药组合物，其治疗效果明显，且无毒副作用。

[0005] 本发明还要解决的技术问题，是提供上述中药组合物的制备方法。

[0006] 本发明最后需要解决的技术问题，是提供上述中药组合物在制备治疗慢性乙型肝炎药物和治疗慢性肝细胞损伤药物中的应用。

[0007] 为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：

[0008] 一种用于治疗慢性乙型肝炎的中药组合物，它由如下重量份数的原料制备得到：龙葵10-20份，柴胡6-10份，白花蛇舌草20-40份，垂盆草20-40份，女贞子10-14份，焦栀子7-11份，甘草3-7份。

[0009] 上述用于治疗慢性乙型肝炎的中药组合物，它由如下重量份数的原料制备得到：龙葵15份，柴胡8份，白花蛇舌草30份，垂盆草30份，女贞子12份，焦栀子9份，甘草5份。

[0010] 上述用于治疗慢性乙型肝炎的中药组合物，所述的柴胡为醋柴胡。

[0011] 上述用于治疗慢性乙型肝炎的中药组合物，所述中药组合物添加辅料，用常规的制剂方法制成胶囊剂、片剂、颗粒剂、丸剂、微丸剂、软胶囊、滴丸、口服液、分散片、泡腾片、咀嚼片或栓剂。

[0012] 上述用于治疗慢性乙型肝炎的中药组合物，辅料为糊精、乳糖、淀粉、蔗糖、葡萄糖、微晶纤维素、甘露糖、甲基纤维素、羟丙基纤维素、羧甲基纤维素和甜菊苷的一种或几种。

[0013] 上述用于治疗慢性乙型肝炎的中药组合物的制备方法，它包括如下步骤：取龙葵、柴胡、白花蛇舌草、垂盆草、女贞子、焦栀子、甘草七味药材合并，加水煎煮两次，合并煎液，浓缩至65℃时相对密度为1.15-1.20，加乙醇使含醇量的体积百分比达75-85％，搅拌，静置，过滤，滤液减压浓缩至65℃时相对密度为1.20-1.30并回收乙醇，得浓缩液，将浓缩液加水及辅料配制成口服液，或将浓缩液喷雾干燥得干浸膏粉，添加辅料制成胶囊剂、片剂、颗粒剂、丸剂、微丸剂、软胶囊、滴丸、分散片、泡腾片、咀嚼片或栓剂。

[0014] 上述用于治疗慢性乙型肝炎的中药组合物的制备方法，煎煮条件为：第一次加水为药材重量的812倍量，煎煮1-2h，第二次加水为药材重量的610倍量，煎煮1-2h，[0015] 上述用于治疗慢性乙型肝炎的中药组合物的制备方法，喷雾干燥条件为：进风温度为100-120℃，出风温度为80-90℃，物料温度为70-90℃，雾化压力为0.20.4兆帕，喷雾速度为5-10ml/s。

[0016] 上述用于治疗慢性乙型肝炎的中药组合物在制备治疗慢性乙型肝炎药物中的应用。

[0017] 上述的用于治疗慢性乙型肝炎的中药组合物在制备治疗慢性肝细胞损伤药物中的应用。

[0018] 本发明中采用的药品原料(药材)符合中国药典等有关规定。

[0019] 龙葵为茄科植物龙葵(Solanum nigrum L)的全草，全国均有分布。味苦、性寒；具有清热解毒；活血消肿作用。文献记载治疔疮；痈肿；丹毒；跌打扭伤；慢性气管炎；肾炎水肿等病症。

[0020] 白花蛇舌草为双子叶植物药茜草科植物白花蛇舌草(Hedyotis diffusa Willd)的带根全草，主要分布于我国东南至西南部各地。味苦甘、性寒；具有清热解毒；利湿作用。文献记载治肺热喘咳；咽喉肿痛；肠痈；疖肿疮疡；毒蛇咬伤；热淋涩痛；水肿；痢疾；肠炎；
湿热黄疸；癌肿等病症。

[0021] 垂盆草为景天科植物垂盆草(Sedum sarmentosum Bunge)的全草，我国南北均有分布。味甘淡、性凉。具有清热利湿、解毒消肿作用。用于湿热黄疸，小便不利，痈肿疮疡；急、慢性肝炎等病症。

[0022] 焦栀子为双子叶植物药茜草科植物栀子(Gardenia jasminoidesEllis)的果实大火炒到焦糊色者，主产于：浙江、江西、湖南、福建等地。味苦、性寒。有泻火除烦，清热利尿，凉血解毒作用。用于热病心烦，黄疸尿赤，血淋涩痛，血热吐衄，目赤肿痛，火毒疮疡，扭挫伤痛等病症。

[0023] 柴胡为伞形科植物柴胡(Bupleurum chinense DC)的根，醋柴胡为柴胡的醋炮制品，分布于东北、华北及陕西、甘肃、山东、江苏、安徽、广西等地。味苦辛、性微寒。具有解表退热；疏肝解郁；升举阳气作用。文献记载治外感发热；寒热往来；疟疾；肝郁胁痛乳胀；头痛头眩；月经不调；气虚下陷之脱肛；子宫脱垂；胃下垂等病症。

[0024] 甘草为豆科植物甘草(Glycyrrhiza uralensis Fisch)的根及根茎，分布于东北、华北、西北等地。味甘、性平。具有益气补中；缓急止痛；润肺止咳；泻火解毒；调和诸药作用。文献记载治倦怠食少；肌瘦面黄；心悸气短；腹痛便溏；四肢挛急疼痛；脏躁；咳嗽气喘；咽喉肿痛；痈疮肿痛；小儿胎毒；及药物、食物中毒等病症。

[0025] 女贞子为木犀科植物女贞(Ligustrum lucidum Ait)的果实，主要分布于陕西、甘肃及长江以南等地。味甘苦、性凉。具有补益肝肾；清虚热；明目作用。文献记载治头昏目眩；腰膝酸软；遗精；耳鸣；须发早白，骨蒸潮热；目暗不明等病症。。

[0026] 有益效果：本发明与现有技术相比具有如下优点：1、本方针对慢性乙型肝病的发病机制，辨证合理，配伍准确，既具有清热解毒、调和脾胃的功效，又具有抗病毒、保肝、护肝效果。2、制备工艺中针对药材的有效成分特点，采用水提醇沉的提取工艺，设计合理，保留更多有效成分。3、本处方中原药材均为药典收载品种，基源明确，副作用小，疗效确切，适用于长期用药。4、本发明在于提供一种具有改善慢性乙型肝炎患者的临床症状、保护和恢复肝细胞损伤、一定程度上抑制乙型肝炎病毒复制、控制向肝纤维化发展发挥良好治疗作用的慢性肝病治疗药物组合。本发明在中医理论和临床实践的基础上，结合慢性乙型肝炎毒邪、湿热、湿困脾胃的病理机制，采用中医清热解毒、调和脾胃的治疗原则，取龙葵、白花蛇舌草为君，取其苦寒，以主清热解毒之功；以垂盆草、焦栀子为臣，取其甘、寒、凉辅以解毒清热；以柴胡、甘草为佐使，取其《伤寒论》“小柴胡”和解枢机之意，而畅达脾胃，醋柴胡又取醋制入肝之力；另女贞子甘凉濡润、有滋补肝肾之效。全方既具有传统的清热解毒、调和脾胃的功效，又具有一定抗病毒、保肝、护肝的现代作用。主治肝胆湿热、湿邪困脾、肝郁气滞、肝郁脾虚引起的慢性乙型肝病，疗效满意，药效安全稳定，无任何副作用。患病率高、复发率高是慢性乙型肝病的主要特点，同时反映出慢性乙型肝病治疗药物市场的需求巨大。本成果发明，能积极有效地防治慢性乙型肝病的发生与发展，这对于提高广大患者的生存与生活质量、保护广大患者的健康，进而提高劳动生产力，具有重要意义和较高的实用价值。由于本病发病率高，预计一经市场推广应用，必将产生良好的社会效益和经济效益。

具体实施方式

[0027] 以下通过实施例形式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明，但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例，凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。

[0028] 表1各实施例所需原料重量份数，单位：份

[0029]龙葵 柴胡 白花蛇舌草 垂盆草 女贞子 焦栀子 甘草
实施例1 10 10 20 40 10 11 3
实施例2 15 8 30 30 12 9 5
实施例3 20 6 40 20 14 7 7
实施例4 10 10 20 40 10 11 3
实施例5 15 8 30 30 12 9 5
实施例6 20 6 40 20 14 7 7
实施例7 10 10 20 40 10 11 3
实施例8 15 8 30 30 12 9 5
实施例9 20 6 40 20 14 7 7
实施例10 10 10 20 40 10 11 3
实施例11 15 8 30 30 12 9 5
实施例12 20 6 40 20 14 7 7

[0030] 实施例1：胶囊剂的制备

[0031] 按表1原料配比及胶囊剂剂型常规方法制备，制备成胶囊剂，具体方法如下：

[0032] 取龙葵10g、柴胡10g、白花蛇舌草20g、垂盆草40g、女贞子10g、焦栀子11g、甘草3g七味药材合并，加水煎煮两次，第一次加水为药材重量的8倍量，煎煮1h，第二次加水为药材重量的6倍量，煎煮1，合并煎液，浓缩至65℃时相对密度为1.15，加乙醇使含醇量的体积百分比达75％，搅拌，静置，过滤，滤液减压浓缩至65℃时相对密度为1.20并回收乙醇，得浓缩液，喷雾干燥得干浸膏粉，喷雾干燥条件为：进风温度为100℃，出风温度为80℃，物料温度为70℃，雾化压力为0.2兆帕，喷雾速度为5ml/s，加入适量淀粉，干法制粒，过60目筛，装入1号胶囊即可得胶囊剂。

[0033] 实施例2：颗粒剂的制备

[0034] 按表1原料配比及颗粒剂剂型常规方法制备，制备成颗粒剂，具体方法如下：

[0035] 取龙葵15g，柴胡8g，白花蛇舌草30g，垂盆草30g，女贞子12g，焦栀子9g，甘草5g七味药材合并，加水煎煮两次，第一次加水为药材重量的10倍量，煎煮1.5h，第二次加水为药材重量的8倍量，煎煮1.5h，合并煎液，浓缩至65℃时相对密度为1.20，加乙醇使含醇量的体积百分比达80％，搅拌，静置，过滤，滤液减压浓缩至65℃时相对密度为1.25并回收乙醇，得浓缩液，喷雾干燥得干浸膏粉，喷雾干燥条件为：进风温度为110℃，出风温度为85℃，物料温度为80℃，雾化压力为0.3兆帕，喷雾速度为7.5ml/s，加入适当糊精、可溶性淀粉、乳糖、蔗糖、甘露醇等其中一种或几种，用适量80％(v/v)乙醇润湿，制软材，过14目筛制粒，50-80℃干燥，60目整粒，得颗粒剂。

[0036] 实施例3：片剂的制备

[0037] 按表1原料配比及片剂剂型常规方法制备，制备成片剂，具体方法如下：

[0038] 取龙葵20g、柴胡6g、白花蛇舌草40g、垂盆草20g、女贞子14g、焦栀子7g、甘草7g七味药材合并，加水煎煮两次，第一次加水为药材重量的12倍量，煎煮2h，第二次加水为药材重量的10倍量，煎煮2h，合并煎液，浓缩至65℃时相对密度为1.20，加乙醇使含醇量的体积百分比达85％，搅拌，静置，过滤，滤液减压浓缩至65℃时相对密度为1.30并回收乙醇，得浓缩液，将浓缩液加水及辅料配制成口服液，或将浓缩液喷雾干燥得干浸膏粉，喷雾干燥条件为：进风温度为120℃，出风温度为90℃，物料温度为90℃，雾化压力为0.4兆帕，喷雾速度为10ml/s，加入淀粉、糊精、糖粉、乳糖、微晶纤维素等其中的一种或几种辅料，混合均匀，用适量80％(v/v)乙醇润湿，制软材，过30目筛制粒，于70～80℃干燥，用60目筛整粒，压片，包糖衣，分装，外包装，送检合格，得片剂。

[0039] 实施例4：胶囊剂的制备

[0040] 按表1原料配比及胶囊剂剂型常规方法制备，制备成胶囊剂，具体方法如下：

[0041] 取龙葵10g、醋柴胡10g、白花蛇舌草20g、垂盆草40g、女贞子10g、焦栀子11g、甘草3g七味药材合并，加水煎煮两次，第一次加水为药材重量的8倍量，煎煮1h，第二次加水为药材重量的6倍量，煎煮1，合并煎液，浓缩至65℃时相对密度为1.15，加乙醇使含醇量的体积百分比达75％，搅拌，静置，过滤，滤液减压浓缩至65℃时相对密度为1.20并回收乙醇，得浓缩液，喷雾干燥得干浸膏粉，喷雾干燥条件为：进风温度为100℃，出风温度为80℃，物料温度为70℃，雾化压力为0.2兆帕，喷雾速度为5ml/s，加入适量淀粉，干法制粒，过60目筛，装入1号胶囊即可得胶囊剂。

[0042] 实施例5：颗粒剂的制备

[0043] 按表1原料配比及颗粒剂剂型常规方法制备，制备成颗粒剂，具体方法如下：

[0044] 取龙葵15g，醋柴胡8g，白花蛇舌草30g，垂盆草30g，女贞子12g，焦栀子9g，甘草5g七味药材合并，加水煎煮两次，第一次加水为药材重量的10倍量，煎煮1.5h，第二次加水为药材重量的8倍量，煎煮1.5h，合并煎液，浓缩至65℃时相对密度为1.20，加乙醇使含醇量的体积百分比达80％，搅拌，静置，过滤，滤液减压浓缩至65℃时相对密度为1.25并回收乙醇，得浓缩液，喷雾干燥得干浸膏粉，喷雾干燥条件为：进风温度为110℃，出风温度为
85℃，物料温度为80℃，雾化压力为0.3兆帕，喷雾速度为7.5ml/s，加入适当糊精、可溶性淀粉、乳糖、蔗糖、甘露醇等其中一种或几种，用适量80％(v/v)乙醇润湿，制软材，过14目筛制粒，5080℃干燥，60目整粒，得颗粒剂。

[0045] 实施例6：片剂的制备

[0046] 按表1原料配比及片剂剂型常规方法制备，制备成片剂，具体方法如下：

[0047] 取龙葵20g、醋柴胡6g、白花蛇舌草40g、垂盆草20g、女贞子14g、焦栀子7g、甘草7g七味药材合并，加水煎煮两次，第一次加水为药材重量的12倍量，煎煮2h，第二次加水为药材重量的10倍量，煎煮2h，合并煎液，浓缩至65℃时相对密度为1.20，加乙醇使含醇量的体积百分比达85％，搅拌，静置，过滤，滤液减压浓缩至65℃时相对密度为1.30并回收乙醇，得浓缩液，将浓缩液加水及辅料配制成口服液，或将浓缩液喷雾干燥得干浸膏粉，喷雾干燥条件为：进风温度为120℃，出风温度为90℃，物料温度为90℃，雾化压力为0.4兆帕，喷雾速度为10ml/s，加入淀粉、糊精、糖粉、乳糖、微晶纤维素等其中的一种或几种辅料，混合均匀，用适量80％(v/v)乙醇润湿，制软材，过30目筛制粒，于70～80℃干燥，用60目筛整粒，压片，包糖衣，分装，外包装，送检合格，得片剂。

[0048] 实施例7-12均按照表1原料配比，并采用药剂学中常规制剂方法，添加相应辅料剂型制备。

[0049] 实施例13：本发明对CCL4所致慢性肝损伤的保护作用实验研究

[0050] 1.实验材料

[0051] 1.1实验动物：

[0052] 健康SD大鼠60只，雌雄各半，4～5月龄，体重220±50g，江苏省中医药研究院动物中心(SPF级)提供，合格证号：JZDVI NO：2008-0087，正常饲养一周适应。

[0053] 1.2实验药物：

[0054] 按照上述实施例5中颗粒剂的制备方法制备，即取龙葵15g，醋柴胡8g，白花蛇舌草30g，垂盆草30g，女贞子12g，焦栀子9g，甘草5g七味药材合并，加水煎煮两次，第一次加水为药材重量的10倍量，煎煮1.5h，第二次加水为药材重量的8倍量，煎煮1.5h，合并煎液，浓缩至65℃时相对密度为1.20，加乙醇使含醇量的体积百分比达80％，搅拌，静置，过滤，滤液减压浓缩至65℃时相对密度为1.25并回收乙醇，得浓缩液，喷雾干燥得干浸膏粉，喷雾干燥条件为：进风温度为110℃，出风温度为85℃，物料温度为80℃，雾化压力为0.3兆帕，喷雾速度为7.5ml/s，加入适当糊精，用适量80％(v/v)乙醇润湿，制软材，过14目筛制粒，50-80℃干燥，60目整粒，得颗粒剂，由江苏省中医药研究院药材科提供，按成人常规计量根据人鼠等效计量换算法，分别配制成含生药0.5g/ml、1g/ml、2g/ml的溶液，按3ml/kg灌胃，则低中高剂量分别为1.5g生药量/kg，3g生药量/kg，6g生药量/kg。

[0055] 1.3主要仪器设备和试剂：

[0056] 超氧化物歧化酶(SOD)测定试剂盒(批号：20110328)，丙二醛(MDA)测定试剂盒(规格：50T/48样，批号：20110321)，均为南京建成生物研究所产品。三用恒温水箱，Cole-Parmer公司；生物洁净工作台，美国Labconco公司；离心机L600，湖南湘仪集团；电子天平，上海精天电子仪器有限公司生产，400型全自动生化仪，上海科华公司；756MC型紫外可见分光光度计，上海光学仪器厂。

[0057] 2.方法

[0058] 2.1造模方法：正常对照组给予皮下注射生理盐水3ml/kg，每隔3天注射1次；模型组予40％CCL4，方法同前正常对照组。第5周观察是否形成慢性肝损伤：造模第5周末随机处死每组各两只大鼠，眼球取血测定血清ALT、AST，确定是否造模成功。

[0059] 2.2分组方法及给药方法：

[0060] 取10只健康大鼠作为正常对照组，再将成功复制大鼠慢性肝损伤模型40只随机分为4组，每组10只，分别为模型对照组、本发明小剂量组、本发明中剂量组、本发明大剂量组。

[0061] 正常对照组：正常饲养。模型对照组：生理盐水3ml/kg灌胃，1次/天×5W；本发明小剂量组1.5g/kg、本发明中剂量组3g/kg、本发明大剂量组6g/kg，1次/天×5W。

[0062] 2.3标本采集方法：

[0063] 除正常对照组，其余各组禁食不禁水12h，腹腔注射30mg/kg戊巴比妥钠麻醉大鼠。断头取外周血7.5ml，分别置入注好标记的试管中，以16000r/min离心5min，作血清AST、ALT含量检测。

[0064] 剖腹暴露肝脏，选取肝脏组织，用滤纸擦干，用电子称取0.2g左右，电子天平称重，加9倍0.9％冰生理盐水后移于EP管中，用眼科小手术剪尽快剪碎组织块，再用匀浆器制备匀浆，分别作组织SOD、MDA含量检测。

[0065] 2.4检测方法：

[0066] 血清ALT、AST检测：采用400型全自动生化分析仪。肝脏组织匀浆MDA、SOD检测：采用分光光度法测。

[0067] 2.5统计学方法：处理全部数据采用SPSS 17.0(t检验，F分析)。

[0068] 3.结果

[0069] 3.1各组血清ALT、AST含量变化情况

[0070] 表2各组血清ALT、AST含量比较

[0071]

[0072]

[0073] 注：与模型对照组比较*P＜0.05，**P＜0.01

[0074] 表2显示：模型组AST、ALT显著高于正常对照组(P＜0.01)，表示造模成功，不同剂量药物各组AST、ALT均明显低于模型组(P＜0.05)，小、中、大剂量组组间比较无统计学差异(P＞0.05)。表明本发明各组能降低模型大鼠血清AST、ALT含量，改善肝功能，治疗肝损伤。

[0075] 3.2各组肝脏组织匀浆SOD、MDA含量

[0076] 表3各组肝脏组织匀浆SOD、MDA含量比较

[0077]

[0078] 注：与模型对照组比较*P＜0.05，**P＜0.01

[0079] 表3显示：正常对照组SOD显著高于模型组、而MDA含量显著低于模型组(P＜0.01)，说明肝损伤后SOD含量降低、MDA含量升高；而本发明不同剂量组SOD含量亦显著高于模型组(P＜0.01)，MDA含量亦显著低于模型组(P＜0.01)小、中、大剂量组间比较无差异(P＞0.05)，表明各组水提液均能提高肝损伤模型动物SOD活力，降低肝脏组织中MDA含量。

[0080] 4.结论：

[0081] 本发明对化学性慢性肝损伤大鼠肝功能损害具有改善作用。

[0082] 实施例14：对急性肝损伤大鼠模型的成模抑制作用的实验

[0083] 1.材料

[0084] 1.1动物：健康SD大鼠，雌雄各半，4～5月龄，体重220±50g。江苏省中医药研究院动物中心提供，合格证号：JZDVI NO：2008-0087。正常饲养2天适应。

[0085] 1.2试验药物：样品准备同前；对照药物：护肝宁片，0.35克/片(贵州信邦制药，国药准字Z20033118)，加蒸馏水溶解成2％的浓度的混悬液。

[0086] 1.3主要试剂：谷丙转氨酶(ALT)临床诊断试剂盒、谷草转氨酶临床诊断(AST)试剂盒，均为南京建成生物公司。GL-20G高速冷冻离心机L600，湖南湘仪集团；TG328A型电子天平，上海精天电子仪器有限公司；400型全自动生化仪，上海科华公司；756MC型紫外可见分光光度计，上海光学仪器厂。

[0087] 2方法：

[0088] 2.1分组及造模干预方法：

[0089] 将72只大鼠随机分为6组，每组12只，雌雄各半。正常对照组，正常饲养；模型组每天生理盐水10ml/kg灌胃；另4组分别予以本发明小剂量0.5g/ml、中剂量1.0g/ml、大剂量2.0g/ml溶液、2％护肝宁片混悬液、按10ml/kg灌胃，连续7天。第7天给药后6h，模型组、本发明小剂量组、中剂量组、大剂量组、肝宁片组均给予50％CCL4花生油2ml/kg腹腔注射，造成大鼠急性肝损伤。

[0090] 2.2指标测量方法：末次灌胃后，禁食不禁水12h，腹主动脉采血3ml，置入离心机，以16000r/min离心5min，取血清，采用400型全自动生化分析仪测定ALT，AST活性。

[0091] 2.2统计学处理方法：采用SPSS 17.0(t检验)。

[0092] 3结果

[0093] 表4各组肝损伤后血清中ALT和AST活性比较(IU/L )

[0094]

[0095] 注，与正常组比较*P＜0.01；与模型组比较#P＜0.05；与本发明大剂量组比较☆P＜0.05

[0096] 表4显示：各组AST、ALT含量比较，模型组显著高于正常对照组(P＜0.01)；本发明不同剂量组及及护肝宁组均显著低于模型组(P＜0.05)，而大剂量组又明显低于中、小剂量组和护肝宁组(P＜0.05)，显示，本发明具有降低模型组AST、ALT含量的作用，并且随剂量的增加作用效果越明显。

[0097] 4.结论

[0098] 本发明具有抗急性肝损伤的作用，在急性肝损伤模型的形成中，能减轻药物对肝脏的损害。

[0099] 实例15本发明对Hepg2.2.15细胞的生长抑制作用的体外实验

[0100] 1实验材料

[0101] 1.1实验药物 样品准备同上；乙肝健片(0.26g/片，三普药业股份有限公司，批号：Z20023080)。

[0102] 1.2仪器与试剂

[0103] 1.2.1仪器 8452A型紫外分光光度计(美国惠普公司)；TG328A型电光分析天平(上海天平仪器厂)；二氧化碳孵箱(Heraeus公司)；三用恒温水箱(Cole-Parmer公司)；倒置生物显微镜CKX31-12PHP(Olympus公司)；生物洁净工作台(美国Labconco公司)；
酶标仪(Thermo LabsystemS公司)；L600离心机(湖南湘仪集团)；一次性滤器(0.22um)(美国Costar公司)；流式细胞仪(美国BD公司)；MDFu-281超低温冰箱(日本SANYO公司)；ES-315全自动灭菌锅(日本TOM公司)。

[0104] 1.2.2试剂 冰醋酸(上海试剂四厂，批号：090402)伊文斯兰(国药集团化学试剂有限公司，批号：2010053)；MEM培养基(Gibco公司)；胎牛血清(Hyclone公司)；G418(Sunshine公司)；胰酶(Sunshine公司)；EDTA(Sunshine公司)；二甲基噻唑二苯基四唑嗅盐(MTT)(Sunshine公司)；二甲基亚砜(DMSO)(Sunshine公司)。HBsAg及HBeAg酶联免疫检测试剂盒(上海荣盛生物技术有限公司)；细胞周期检测试剂盒(南京凯基生物有限公司)。Hepg2.2.15细胞株，中科院上海药物研究所左建平主任惠赠。

[0105] 1.3动物 清洁级SD大鼠60只，雌雄各半，体重220±50g，4～5月龄。江苏省中西医结合医院动物中心提供，合格证号：SYXK(苏)2007-0026。

[0106] 2实验方法

[0107] 2.1本发明药液的制备 取按上述实施例5制备方法制成颗粒剂，加入500ml水，配制成浓度为182mg生药/mL的溶液，放入离心管中，于离心机8000转离心，去杂质，取其清液，制成本发明提取液，并按照10倍对数稀释。

[0108] 2.2含药血清的制备：取SD大鼠60只，雌雄各半，随机分成5组，即空白血清组(给予同体积消毒饮用水)、乙肝健血清组(0.143g乙肝健A片混悬液/kg)和本发明血清1、2、3剂量组(6.31、12.63、25.26g生药/kg，分别相当于70kg成人日用量的0.5倍、同倍、
2倍、4倍)，每组12只。每日给予相应药液2.5ml灌胃1次，连续给药7天。末次给药前
12小时禁食不禁水，末次给药后1小时腹主动脉取血，3000rpm离心10min，分离血清，并将每组大鼠的血清混合，经56℃灭活30min，0.22μm滤膜过滤灭菌，置-20℃冰箱保存备用。

[0109] 2.3溶液的配制：①DMEM培养基：将DMEM粉末溶于800mL去离子水，定容至1L，0.22μm过滤灭菌，4℃保存备用。②胰蛋白酶溶液：称取0.25g胰蛋白酶，加入80ml×PBS缓冲液，完全溶解后，定容至100mL，过滤除菌，4℃保存。③二甲基噻唑二苯基四唑嗅盐(MTT)(5mg/mL)：20mg MTT溶于4mL的PBS，充分溶解，4℃避光贮存。

[0110] 2.4HepG2.2.15细胞的复苏与培养：预热培养基，30分钟后，向培养瓶中加入8ml已预热的培养基，取出冻存于液氮中的HepG2.2.15细胞株，迅速投至37℃的水浴锅中，不断振摇。取出冻存管，75％酒精擦洗消毒，将冻存的细胞悬液吸至培养瓶中，混和均匀后，移入三气培养箱中37℃、5％CO2条件下培养。细胞长至90％融合时，接种细胞，加入0.25％5
胰蛋白酶，含10％新生牛血清的DMEM培养液将细胞稀释为10/mL的细胞悬液，接种于96孔培养板，每孔体积200μL，置于37℃、5％CO2的孵箱培养24h。

[0111] 2.5HepG2.2.15细胞活性测定(MTT法)

[0112] 参照Mosmann MTT比色法，将1×105/ml的细胞悬液加入96孔培养板中，每孔100μl，置CO2孵箱(37℃，5％CO2)中培养24h后，细胞贴壁且生长良好，吸除全部培养液，加入用培养基稀释的乙肝健药液(终浓度为：16mg/ml)、不同浓度的发明组合药药液(终浓度分别为：10、12、14、16、18、20mg/ml)及各相应的含药血清，每个浓度设3个复孔，连续培养48h，培养结束前4h，每孔加入MTT 10μl，于CO2孵箱中继续培养。4h后小心吸弃上清液，每孔加DMSO 100μl，微量振荡器振荡5min，使结晶紫完全溶解。自动酶标仪(检测波长570nm，参考波长630nm)读取各孔OD值，记录结果。

[0113] 2.6ELISA法定量检测HBsAg和HBeAg

[0114] 将1×105/ml的细胞悬液加入96孔培养板中，每孔100μL，置CO2孵箱(37℃，5％CO2)中培养24h后，分别加入乙肝健药液(终浓度为：15mg/ml)、发明组合药药液(终浓度分别为：10、17、20mg/ml)及各相应含药血清，每个浓度3个复孔。连续培养48h后，分别吸出上清液，用乙型肝炎病毒e抗原诊断试剂盒和乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒(酶联免疫法)检测上清液中HBeAg和HBsAg的表达。再次加入各组药液及其含药血清继续培养48h后，分别吸出上清液做HBeAg和HBsAg的表达检测，具体步骤参照试剂盒说明书。

[0115] 2.7细胞周期测定(流式细胞术)

[0116] ①取对数生长期的细胞，均以4×105/ml密度接种于6孔细胞培养板上，每孔约2000-2500μl，置CO2孵箱(37℃，5％CO2)中培养24h后，加入乙肝健药液(终浓度为：
15mg/ml)、不同浓度的本发明药液(终浓度分别为：10、17、20mg/ml)及各相应含药血清，连续培养48h。②消化收集细胞，包括培养液中悬浮的死细胞。③1000r/min离心5min，去上
6
清。④加1ml PBS缓冲液重悬细胞，再次离心去上清。⑤调整细胞浓度为1×10 个/ml，于-20℃预冷的70％冰乙醇中4℃固定24h。⑥PBS清洗三次，在每个离心管中留1ml PBS，打散细胞团，每管分别加入100μl Rnase，37℃水浴30分钟，再加入400ul PI染色均匀，
4℃避光30分钟。上流式细胞仪测定细胞周期。

[0117] 2.8统计方法

[0118] 所有结果数据用均数士标准差以 表示，多组间两两比较采用单因素方差分析，以P＜0.05表示差异有统计学意义。所有数据利用SPSS 17.0软件包分析。

[0119] 3结果

[0120] 3.1本发明对Hepg2.2.15细胞生长的抑制作用

[0121] 3.1.1对细胞形态的影响

[0122] 接种后24h在倒置相差显微镜下观察，可见细胞清晰、大小均一、呈梭形、贴壁生长，细胞饱满，胞浆均匀透明，折光性好，生长旺盛呈细长型。而加入各组药物后，各组细胞逐渐变圆、胞间接触变松、体积变小、折光性减弱、细胞变粗糙、贴壁减少、有少量悬浮细胞。

[0123] 3.1.2不同浓度发明组合药药液对Hepg2.2.15细胞生长的抑制作用

[0124] 表5不同浓度本发明药液处理的Hepg2.2.15细胞的OD值( n＝3)

[0125]

[0126]

[0127] 注：与空白对照组比较，*P＜0.01，与乙肝健组比较，☆P＜0.01。

[0128] 表5显示：本发明不同浓度药液组及乙肝健组OD值均低于空白对照组(P＜0.01)；本发明不同浓度组随着浓度的增加，OD值似呈降低趋势；各组与乙肝健组比较，在10、12、14、16mg/ml浓度时，OD值高于乙肝健组(P＜0.01)，而在18、20mg/ml浓度时，OD值又低于乙肝健组，且仅20mg/ml浓度组有显著差异(P＜0.01)。说明，本发明低浓度组对Hepg2.2.15细胞生长的抑制作用略低于乙肝健组，但高浓度组的抑制作用优于乙肝健组。

[0129] 3.2本发明含药血清对Hepg2.2.15细胞生长的抑制作用

[0130] 表6不同浓度本发明含药血清处理的Hepg2.2.15细胞的OD值( n＝3)

[0131]

[0132] 注：与空白血清组比较，☆P＜0.05，☆☆P＜0.01，与乙肝健血清组比较，△P＞0.05

[0133] 表6显示：本发明不同浓度含药血清组及乙肝健含药血清组OD值均低于空白血清组(P＜0.01)，而本发明不同浓度含药血清组与乙肝健含药血清组OD值相比，各组间无显著性差异(P＞0.05)。似可看出，本发明各浓度血清组及乙肝健血清组对Hepg2.2.15细胞生长具有抑制作用，且两者抑制作用相当。

[0134] 3.3不同浓度本发明药液对2.2.15细胞分泌HBsAg和HBeAg的抑制作用[0135] 表7不同浓度、时间本发明药液处理的2.2.15细胞上清液中HBsAg利HBeAg OD值( n＝3)

[0136]

[0137]

[0138] 注：与空白对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01，与乙肝健比较，☆P＜0.01[0139] 表7显示：本发明不同浓度药液组及乙肝健药液组在48h及96h各指标OD值比较，除本发明1组HBsAg 98h外，其余值均低于空白对照组(P＜0.01)；本发明各药液组与乙肝健药液组比较，除本发明-3药液组OD值略低于乙肝健药液组(P＞0.05)外，其余均高于乙肝健组(P＜0.01)。说明本发明药液对病毒标记物的抑制作用总体低于乙肝健药液，但本发明高浓度显示出对HBsAg及HBeAg抑制的优势。

[0140] 3.4本发明含药血清对2.2.15细胞分泌HBsAg和HBeAg的抑制作用

[0141] 表8不同浓度、时间本发明含药血清处理的2.2.15细胞上清液中HBsAg和HBeAg OD值( n＝3)

[0142]

[0143] 注：与空白血清组比较，*P＜0.05，**＜0.01，与乙肝健血清比较，△P＜0.05，△△P＜0.01

[0144] 表8显示：本发明各浓度含药血清和乙肝健含药血清各指标均低于空白血清组(P＜0.05)；本发明不同浓度血清组各指标OD值均低于乙肝健血清组，大部分有显著性差异(P＞0.05)。说明，本发明含药血清对病毒标记物的抑制作用总体优于乙肝健血清。

[0145] 3.5本发明药液及其含药血清对对Hepg2.2.15细胞周期的影响

[0146] 本发明药液及其含药血清作用于Hepg2.2.15细胞后，G0/G1期细胞比例均增加。本发明药液浓度在10mg/mL与20mg/mL之间时，随着本发明药物浓度的增加，G0/G1期细胞比例明显增加。而乙肝健组G0/G1期细胞则增加数量相对较少，与本发明组相比则呈减少趋势。

[0147] 4结论：

[0148] 从实验数据我们可以看出，本发明药液对Hepg2.2.15细胞生长具有抑制作用。在10与20mg/ml浓度之间时，其抑制作用与药液浓度高低明显相关，随着药液浓度的增加，其抑制作用逐渐增强，呈现一个明显的量效关系；本发明低浓度组抑制Hepg2.2.15细胞生长的抑制作用略低于乙肝健药液，但高浓度组的抑制作用优于乙肝健药液；本发明各浓度血清组及乙肝健血清组对Hepg2.2.15细胞生长的抑制作用相当。

[0149] 本发明药液及其含药血清具有一定抑制HBV体内复制的作用；本发明药液对病毒标记物的抑制作用总体低于乙肝健药液，但本发明药液随着浓度的增加显示出对病毒标记物抑制作用增强的趋势；本发明含药血清对病毒标记物的抑制作用总体优于乙肝健血清。

[0150] 本发明含药血清作用于Hepg2.2.15细胞后，G0/G1期细胞比例明显增加，随着药物浓度的增加，G0/G1期的细胞比例不断增加，且本发明组细胞增加比例较乙肝健组明显。分析其可能原因为本发明及其含药血清可使细胞周期停滞于G0/G1期，也就是说处于静止期和DNA复制前期的细胞比例增加，DNA合成期和有丝分裂期的细胞比例相对减少，表明本发明和含药血清可影响细胞周期分布，其中G0/G1期对药物最为敏感。

[0151] 实例16本发明对肝细胞保护作用的体外实验

[0152] 1.实验材料

[0153] 1.1实验动物：清洁级SD大鼠4只，♂，体重150～180g，购于上海斯莱克实验动物有限公司，合格证号：SCXK(沪)2007-0005；动物饲养环境：SPF级，合格证号：SYXK(苏)2007-0026。

[0154] 1.2细胞株及主要试剂、药物：

[0155] 正常人肝L-O2细胞，中科院上海细胞库；DMEM培养基，Gibco公司；小牛血清，杭州四季青公司；胰岛素，Sigma公司；二甲基噻唑二苯基四唑嗅盐(M TT)，Sigma公司；二甲基亚砜(DMSO)，Sigma公司；其余试剂为国产分析纯。本发明药物制备方法同前，按成人日常用量，配制成浓度为182mg生药/mL的溶液。对照药益肝灵片，0.2克/片，(江苏中兴药业有限公司，国药准字Z32020090)按成人日常用量，配置成200mg/mL益肝灵混悬液。

[0156] 1.3实验仪器：

[0157] 二氧化碳孵箱，Heraeus公司；三用恒温水箱，Cole-Parmer公司；倒置生物显微镜CKX31-12PHP，Olympus公司；生物洁净工作台，美国Labconco公司；酶标仪，ThermoLabsystemS公司；离心机L600，湖南湘仪集团。

[0158] 2方法

[0159] 2.1溶液的配制：

[0160] ①DMEM(Dulbecco’s modified Eagle medium)培养基，1L：将DMEM粉末溶于800ml去离子水，定容至1L，0.22μm过滤灭菌，4℃保存备用。②1×PBS缓冲液，1L：NaCL8.5g，KCL0.2g，Na2HPO4·12H2O2.2.77g，KH2PO40.31g，溶于800mlddH2O中，定容至1L，高压灭菌，4℃保存。③胰蛋白酶溶液，100ml：称0.25g胰蛋白酶，加入80ml×PBS缓冲液，完全溶解后，定容至100ml，过滤除菌，4℃保存。④二甲基噻唑二苯基四唑嗅盐(MTT)(5mg/ml)：20mg MTT溶于4ml PBS，充分溶解，4℃避光贮存。

[0161] 2.2含药血清的制备

[0162] 取雄性SD大鼠4只，随机分成3组，即空白血清组(给予同体积消毒饮用水)、阳性药血清组(0.2mg/kg益肝灵混悬液)和本发明血清组(8.34g生药/kg)、每组1只。每日两次间隔12小时，连续给药3天。末次给药后1小时，全麻下腹主动脉取血，3000rpm离心10min，分离血清，经56℃灭活30min，0.22μm滤膜过滤灭菌，-80℃保存备用。

[0163] 2.3L-O2细胞的复苏、培养和分组

[0164] 打开超净工作台紫外灯灭菌，同时预热培养基，30分钟后，关掉紫外，打开通风和照明，向准备好的培养瓶中加入8ml已预热的培养基。取出冻存于液氮中的L-O2细胞株，迅速投至37℃的水浴锅中，不断振摇，使之尽快融化。取出冻存管，用75％酒精擦洗消毒，移入已经灭菌超净工作台，将冻存的细胞悬液吸至培养瓶中，混和均匀后，移入三气培养箱中37℃、5％CO2条件下培养。当细胞长至90％融合时，用PBS轻轻荡洗两次，加入0.25％5
胰蛋白酶，37℃条件下消化2～3min。按1x10 分瓶传代，置于37℃、5％CO2的孵箱培养。

[0165] 待L-O2细胞在培养瓶内铺满单层后倒掉培养液，用PBS轻轻荡洗两次，加入0.25％胰蛋白酶，37℃条件下消化2～3min，后加入DMEM培养液终止消化，用吸管轻轻吹打数次，使细胞完全分散，倒置显微镜下观察计数，用含10％新生牛血清的DMEM培养液将细
5
胞稀释为10/ml的细胞悬液，接种于96孔培养板，37℃、5％CO2培养24小时，细胞贴壁铺满单层即可用于实验。

[0166] 实验用细胞分为空白对照组、CCL4对照组、本发明药液不同浓度组和本发明药液不同浓度加入CCL4组。本发明药液用DMEM培养液按1∶10梯度稀释，按1∶100加入96孔板中，使终浓度分别为182mg/ml、18.2mg/ml、1.82mg/ml、0.182mg/ml，每项相同实验均重复3次。

[0167] 2.4实验分组：

[0168] 肝细胞培养12h后，随机分组，每组3孔，分为CCL4模型组(加入浓度为25mmol/L的CCL410μL)、本发明不同药液组(7组，加入CCL4后同步分别加不同浓度本发明稀释液10μL)，正常对照组不添加任何液体，置于37℃、CO2培养箱中继续培养12h。

[0169] 2.5细胞存活测定：采用四唑盐(MTT)比色法，测定前4h，每孔加入20μL MTT液(5mg/mL)，终止培养，吸弃上清，加入DMSO 200μL/孔，待结品溶解后，于全自动酶标光度计570nm处，测定每孔的吸光度(OD值)，计算细胞的存活率。

[0170] 2.8统计方法：所有结果数据采用均数±标准差表示，并利用SPSS 13.0软件包分析。

[0171] 3.结果

[0172] 3.1不同浓度本发明药液对L-O2细胞损伤OD值情况

[0173] 表9本发明与CCL4模型组L-O2细胞OD值比较( n＝3)

[0174]

[0175] 注：与正常对照组比较△P＜0.01；与CCL4模型组比较*P＜0.05，**P＜0.01[0176] 表9显示，正常对照组L-O2细胞OD值均高于CCL4模型组及各药液组(P＜0.01)；本发明药液除在高浓度(182mg/ml)时，与CCL4模型组之间OD值之间无明显差异(P＞
0.05)，其它各浓度组OD值均高于CCL4组(P＜0.05)。

[0177] 3.2本发明含药血清对CCL4损伤后肝细胞OD值变化情况

[0178] 表10本发明对损伤后L-O2细胞OD值变化情况比较( n＝3)

[0179]

[0180] 注：*与CCL4组和空白组比较P＜0.05；△与益肝灵血清组比较P＜0.05[0181] 表11显示，正常血清组与CCL4模型组L-O2细胞OD值比较无显著性差异(P＞0.05)。本发明血清组及益肝灵血清组L-O2细胞OD值明显高于CCL4模型组和正常血清组，差异显著(P＜0.05)；本发明血清组L-O2细胞OD值又显著高于益肝灵血清组(P＜0.05)。

[0182] 4结论：

[0183] 本发明药液对人肝L-O2细胞具有抗CCL4损伤的作用，除在高浓度(182mg/ml)时，与CCL模型组之间OD值之间无明显差异(P＞.05)，其它各浓度组OD值均高于CCL4组(P＜0.05)，提示本发明具有抗肝细胞损伤作用。

[0184] 本发明含药血清和益肝灵含药血清对L-O2细胞生长作用后，OD值明显高于空白血清加CCL4组和DMEM加CCL4组，二者之间的差异存在显著性(P＜0.01)，二者对L-O2细胞有抗损伤作用。

[0185] 本发明含药血清和益肝灵含药血清对L-O2细胞生长作用后，OD值之间存在显著性差异(P＜0.05)，说明本发明含药血清的抗CCL4损伤作用优于益肝灵含药血清。

[0186] 实例17：临床疗效观察及典型病例

[0187] 1.临床观察资料

[0188] 样品制备：按上述实施例5制备临床试验样品，规格为10g/袋，含生药量为27.25g/袋。

[0189] 本研究共纳入60例患者，其中治疗组30例，对照组30例。治疗组男23例，女7例；对照组男17例，女13例，治疗组年龄范围21～65岁，平均年龄38.33±12.06岁；对照组年龄范围22～65岁，平均年龄39.97±13.52岁。治疗组最长病程最长22年，最短3月；对照组病程最长20年，最短7月。病情轻重治疗组轻度18例，中度10例，重度2例；对照组轻度14例，中度14例，重度2例。治疗组与对照组的性别、年龄、病程等比较，差别无统计学意义(P＞0.05)。

[0190] 诊断标准：①有急性肝炎病程超过半年，或原有乙型肝炎或HBsAg携带史。②具有慢性乙型肝炎症状、体征及肝功能异常。③慢性肝炎并有任何一项：血清HBsAg阳性；血清HBV-DNA阳性；血清抗-HBcAb阳性；肝内HBcAg和/或HBsAg阳性，或HBV-DNA阳性被诊断为慢性乙型肝炎。

[0191] 服用方法：每日三次，每次一袋，服用6个月。

[0192] 疗效判定标准：①显效：自觉症状消失，肝脾肿大稳定或缩小，无压痛及扣痛；其他慢性肝炎体征减轻或稳定不变；肝功能复常，病毒复制指标降低。②有效：症状明显减轻或消失，肝脾肿大稳定不变；无明显压痛及叩痛，肝功能检查恢复正常或较治疗前异常值下降50％以上，HBV DNA、HbeAg、HbsAg有1项阴转。③无效：疗程结束后，未达到上述标准者。

[0193] 结果：

[0194] 表11两组降酶疗效的比较

[0195]

[0196] 表11显示治疗后治疗组降酶显效明显高于对照组，有显著意义。(P＜0.05)[0197] 表12治疗前后肝功能变化比较

[0198]

[0199] 注：与治疗前比较，**P＜0.01，与对照组比较，#P＜0.05。

[0200] 表12显示，发明组合药能显著改善患者AST、ALT水平，改善程度优于对照组(P＜0.05)

[0201] 表13两组乙肝病毒标志物疗效的比较

[0202]

[0203] 表13显示治疗组乙肝病毒标志物疗效治疗组明显高于对照组，而且两组间比较差别有统计学意义(P＜0.05)。

[0204] 表14两组病例治疗前后乙肝标志物检测指标变化的比较

[0205]

[0206] 表14显示治疗前后乙肝病毒标志物HBV-DNA转阴率高于对照组，，经统计学检验，HBV-DNA转阴率在两组间有显著差异(P＜0.05)。

[0207] 表15两组病例治疗前后乙肝标志物检测指标变化的比较

[0208]

[0209] 注：#为转阳率

[0210] 本发明通过对临床60例慢性乙型肝炎疗效观察显示：治疗组用本发明，对照组予复方益肝灵，疗程为6个月，观察两组患者治疗前后临床症状、体征、肝功能、乙肝病毒标志物的变化。结果显示：①两组临床综合疗效比较：治疗组显效率为16.7％，有效率为76.7％，总有效率为93.4％；对照组显效率为3.3％，有效率为66.7％，总有效率为70.0％，两组相比治疗组均高于对照组，临床综合疗效比较有统计学差异(P＜0.05)。②治疗后两组中医证候均较前有所改善，在腹胀脘闷、胁肋疼痛、倦怠乏力、大便稀溏证候方面治疗组效果优于对照组，两组比较有统计学意义(P＜0.05)。③改善肝功能方面比较：两组治疗后在AST、ALT、γ-GT、TB、DB等方面均较前明显改善，在降酶及γ-GT方面两者比较有显著差异(P＜0.05)，治疗组效果优于对照组。④乙肝病毒标志物变化情况：治疗组HBsAg阴转率为3.3％，HBeAg阴转率48.0％，HBV-DNA阴转率51.9％；对照组HBsAg阴转率为0％，HBeAg阴转率3.7％，HBV-DNA阴转率0％，治疗组各项阴转率高于对照组，两组比较在HBeAg阴转率和HBV-DNA阴转率方面有非常显著意义(P＜0.01)。⑤试验组中的治愈病例，半年、
1年后分别作回访，均无复发。综上所述，本发明的治疗效果良好。

[0211] 典型的实例

[0212] 1、许某，女，30岁，江苏南京人。

[0213] 主诉：进食油腻食物后胸胁胀闷不舒1年余。

[0214] 病史：患者1年来进食油腻食物后时感胸胁胀闷不舒，乏力，既往有CHB病史3年，2007年09月28日查肝功能：谷丙转氨酶：161U/L，谷草转氨酶：110U/L，γ-GT：47U/L，乙肝五项：HBsAg(+)，HBeAg(+)，HBcAb(+)，HBV-DNA：2.22×106copies/ml。

[0215] 刻诊：两胁肋胀闷不舒，偶有隐痛，乏力明显，纳食一般，无口干口苦，无嗳气泛酸，无恶心呕吐，二便正常，舌苔黄腻，舌质红，脉细弦。

[0216] 辨病：慢性乙型病毒性肝炎。

[0217] 辨证：肝郁脾虚，湿热瘀毒留恋不解。

[0218] 治则：疏肝健脾，清热利湿，活血解毒。

[0219] 处方用药：服用按上述实施例5制备的本发明颗粒剂。

[0220] 复诊(2周后)：胸胁胀闷、乏力略有好转，寐差，苔薄白，脉细弦。

[0221] 服本发明药物半年后(未用抗HBV治疗)，胸胁无明显胀闷不适，乏力不明显，苔薄舌红，脉细弦，复查肝功能正常，HBV-DNA＜500copies/ml，后复查肝功能正常。

[0222] 2、患者郑某，男，22岁，江苏南京人。

[0223] 主诉：反复乏力，纳差2年余。

[0224] 病史：2年来反复乏力，纳差，腹胀，胁痛，既往有CHB病史10年，肝功能反复波动。2007年09月27日查：AST 32U/L，ALT 29U/L，乙肝五项：HBeAg(+)，HBV-DNA：3.06×103copies/ml。

[0225] 刻诊：乏力，纳食欠佳，腹胀，胁痛，便溏，大便每日2-3次，舌苔薄腻微黄，舌质暗红，脉细弦。

[0226] 辨病：慢性乙型病毒性肝炎。

[0227] 辨证：湿热毒邪蕴结，气滞血瘀，肝脾失调。

[0228] 治则：调肝运脾、清化瘀毒。

[0229] 处方用药：服用按上述实施例5制备的本发明颗粒剂。

[0230] 复诊(2周后)：乏力，纳差略有好转，仍有腹胀，胁痛，大便每日2次，苔薄白，脉细弦。

[0231] 服药半年后(未用抗病毒治疗)，乏力不明显，偶有腹胀，纳食可，大便偶尔质稀，苔薄舌红，脉细弦，复查肝功能正常，HBV-DNA＜500copies/ml，后复查肝功能正常。

[0232] 3、盛某某，男，35岁，江苏无锡人。

[0233] 主诉：右胁隐痛3年余，间断痰中带血1月。

[0234] 病史：患者近3年时感乏力，近1月来时有痰中带血，既往有CHB病史6年，未正规治疗，2007年4月13日查肝功能：谷丙转氨酶：34U/L，谷草转氨酶：14U/L。

[0235] 刻诊：右胁隐痛，无痰中带血，纳食一般，无嗳气泛酸，无恶心呕吐，二便正常，舌苔