木糖葡萄球菌A2的高密度培养的培养基及培养方法

摘要

本发明公开了一种木糖葡萄球菌A2的高密度培养方法及培养过程中所涉及的培养基。本发明的菌株是从发酵风干肠中提取并分离得到的，经鉴定确定为是一株木糖葡萄球菌(Staphylococcus xylosus)，命名为木糖葡萄球菌A2(Staphylococcus xylosusA2)可用于发酵肉制品，本发明进一步提供了该菌种的高密度培养方法，包括增殖培养基和发酵工艺条件优化控制，以及该菌株的高密度浓缩菌泥的制备方法。通过本发明的培养方法可以得到2.07×1011cfu/g以上活菌数的木糖葡萄球菌的高密度培养物，为进一步利用该菌株制备直投式木糖葡萄球菌发酵剂奠定了基础。

权利要求

1.一种用于木糖葡萄球菌（Staphylococcus xylosus）A2菌种保藏号为CGMCC No.5049的高密度培养的培养基，其特征在于所述培养基的配制包含以下步骤：首先，分别称取下述原料：0.5重量份乳糖、2重量份示蛋白胨、0.2重量份酵母膏、5重量份香菇汁、7.5重量份NaCl；

所述的香菇汁按以下方法制备：取新鲜香菇500g洗净后切碎，加适量蒸馏水煮沸

30min，冷却后于组织捣碎机中捣碎、过滤，滤液经离心后加蒸馏水补足至500mL，得到香菇汁;然后，将上述原料溶于1000重量份蒸馏水中，搅拌均匀，再使用中和剂将其pH值调节为7.2-7.8，装于三角瓶中，再在温度121℃下灭菌20分钟，即得到所述的培养基。

2.根据权利要求1所述的培养基，其特征在于使用中和剂将其pH值调节为7.5。

3.一种木糖葡萄球菌A2的高密度培养方法，其特征在于，包括以下步骤：a.菌种活化：将冷冻保存的木糖葡萄球菌A2(Staphylococcus xylosus A2)接种于MSA培养基斜面，在温度32℃下培养至出现菌落，然后再从斜面上挑取菌苔接入另一个斜

7 8

面，出现菌落后，重复上面操作，连续转接三次，使得活菌数达到10-10cfu/mL，即得活化菌种；

所述的木糖葡萄球菌A2(Staphylococcus xylosus A2)保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其菌种保藏编号为：CGMCC No.5049；

b.培养基的配制：

首先，分别称取下述原料：0.5重量份乳糖、2重量份示蛋白胨、0.2重量份酵母膏、5重量份香菇汁、7.5重量份NaCl；

所述的香菇汁按以下方法制备：取新鲜香菇500g洗净后切碎，加适量蒸馏水煮沸

30min，冷却后于组织捣碎机中捣碎、过滤，滤液经离心后加蒸馏水补足至500mL，得到香菇汁;然后，将上述原料溶于1000重量份蒸馏水中，搅拌均匀，再使用中和剂将其pH值调节为7.2-7.8，装于三角瓶中，三角瓶中的发酵摇瓶装液量的体积占三角瓶体积的90%，再在温度121℃下灭菌20分钟，这样得到所述的培养基；

c.菌种发酵液的制备：

以使用所述的培养基重量计，将步骤a得到的活化木糖葡萄球菌A2菌种按照培养基重量的2%-4%接种于在步骤b得到的培养基中，在温度30-34℃，摇床速度120-150rpm/min条件下，培养15-20小时得到木糖葡萄球菌A2菌种发酵液；

d.发酵：

以使用的培养基重量计，按照培养基重量的2%-4%将步骤c得到的木糖葡萄球菌A2菌种发酵液接种于在步骤b得到的培养基中，在温度32-35℃下进行震荡摇床发酵17小时；

e.终止发酵：

达到所述发酵时间后，将三角瓶置于4℃冷藏保存，终止发酵，得到木糖葡萄球菌A2活9

菌数达到3×10cfu/mL以上的木糖葡萄球菌高密度发酵液。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于所述步骤b中通过添加中和剂调节发酵介质的pH值为7.5；所述步骤b中中和剂是1mol/L NaOH溶液。

5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于所述木糖葡萄球菌A2菌种发酵液接种在步骤b得到的培养基中，在温度32℃，摇瓶速度是130rpm/min条件下，进行发酵17小时。

6.根据权利要求3所述的方法，其特征在于进一步包括将得到的木糖葡萄球菌A2高密

11

度发酵液在0~4℃下，6000rpm/min条件下离心30分钟，即得到活菌数达到2.06×10 cfu/mL以上的木糖葡萄球菌A2高密度浓缩菌泥。

7.由权利要求3-6任一项所述的方法制备得到的木糖葡萄球菌A2高密度培养物在制备肉制品发酵剂中的应用。

说明书

木糖葡萄球菌A2的高密度培养的培养基及培养方法

技术领域

[0001] 本发明涉及一种微生物的培养方法，特别涉及木糖葡萄球菌的高密度培养方法。属于微生物培养技术领域。

背景技术

[0002] 木糖葡萄球菌(Staphylococcus xylosus)是发酵肉制品中十分重要的一种菌种，Schleifer Kloos于1976年首次描述该菌是一种凝固酶阴性葡萄球菌(CNS)(Advances in Microbial Physiology，1976，13：245-292.)。此菌广泛存在于多种传统肉制品中(临床检验杂志.2001，19(4)：226.)，绝大部分能产生蛋白酶(Applied microbiology，2002，92(1)：158-164.)和脂酶(Food Microbiology，2002，19：441-449.)，具有温和的蛋白质和脂肪分解能力，通过代谢产生一些短链脂肪酸、短肽和氨基酸(Meat Science，2006，74：
281-288.)，赋予肉制品特殊风味(食品工业科技，2008，11(29)：153-155.)，且不产生如生物胺、酪胺、苯乙胺、精胺等对人体有害的物质(Meat Science，2006，73：559-564.)。该菌还因其高硝酸盐还原酶活性(Meat Science，2007，75：696-708.)和过氧化氢酶活性(食品科学，2010，31(17)：388-391.)，具有抑制异味产生，稳定颜色及清除过氧化物的作用，同时该菌能产生细菌素，对李斯特菌及假单胞杆菌等致病菌具有一定的抑制作用(Meat science，
2001，59(3)：267-276.)，可延长发酵肉制品货架期。目前国内外报道多集中在木糖葡萄球菌在发酵肉制品中发挥的作用方面，对其作为直投式发酵剂的高密度培养条件的报道还不多。

[0003] 发酵肉制品是指在自然或人工控制条件下，利用微生物或酶产生的发酵作用使原料肉发生一系列生物化学变化及物理变化，生成具有特殊风味、色泽和质地，且具有较长保存期的肉制品。近年来，随着人们对高品质肉制品的需求逐渐加大，解决传统发酵肉制品加工周期长、产率低、生产成本高等制约其规模化生产的问题具有十分重要的意义。

[0004] 直投式发酵剂具有活菌含量高、接种量少、发酵活力强、保藏期长、使用方便等特点，可使发酵制品生产更方便、产品质量更稳定(食品科学，2006，27(8)：191-197.)，并避免了传统发酵剂因中间继代培养(包括菌种活化、种子发酵剂、中间发酵剂、生产发酵剂的扩大增殖等过程)而产生菌种发酵活力退化和杂菌污染等情况(Food Science and Technology，2004，15：67-78.)。直投式发酵剂可直接向专业生产厂家生产购买，减少了菌种车间的投资，简化了工艺，提高了劳动生产率。

[0005] 本发明优化了木糖葡萄球菌的培养基配方，并对其培养条件和高密度培养物富集条件进行了研究，旨在提高培养物中木糖葡萄球菌活菌密度，为进一步利用其制备直投式肉制品发酵剂奠定基础。

发明内容

[0006] 本发明的目的在于提供木糖葡萄球菌A2(Staphylococcus xylosus A2)的优化增殖培养基配方。

[0007] 本发明的另一目的在于提供木糖葡萄球菌A2(Staphylococcus xylosus A2)的优化培养方法。

[0008] 本发明的另一目的在于提供木糖葡萄球菌A2(Staphylococcus xylosus A2)的高密度培养度的富集方法。

[0009] 所述的木糖葡萄球菌A2(Staphylococcus xylosus A2)为本发明人从发酵风干肠中提取并分离鉴定的菌种。菌种(株)A2保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址在北京市朝阳区北辰西路1号院中科院微生物研究所，其菌种保藏编号为：CGMCC No.5049，保藏日期为2011年7月8日，菌种的分类命名为木糖葡糖球菌(Staphylococcus xylosus)；

[0010] 本发明的目的是通过如下技术方案实现的：

[0011] 首先，本发明提供了一种用于木糖葡萄球菌A2的高密度培养的培养基，其特征在于所述培养基的配制包含以下步骤：

[0012] (1)分别称取下述原料：0.5重量份乳糖、2重量份示蛋白胨、0.2重量份酵母膏、5重量份香菇汁、7.5重量份NaCl；

[0013] (2)将上述原料溶于1000重量份蒸馏水中，搅拌均匀，再使用中和剂将其pH值调节为7.2-7.8，装于三角瓶中，再在温度121℃下灭菌20分钟，即得到所述的培养基。

[0014] 根据本发明的一种优选实施方式，所述的香菇汁可按照以下方法制备：取新鲜香菇500g洗净后切碎，加适量蒸馏水煮沸30min，冷却后于组织捣碎机中捣碎、过滤，滤液经离心后加蒸馏水补足至500mL，得到香菇汁。

[0015] 根据本发明的一种优选实施方式，使用中和剂将培养基的pH值调节为7.5。

[0016] 其次，本发明涉及一种木糖葡萄球菌A2的高密度培养方法，其特征在于该方法步骤如下：

[0017] a.菌种活化：将冷冻保存的木糖葡萄球菌A2(Staphylococcus xylosus A2)接种于MSA培养基斜面，在温度32℃下培养至出现菌落，然后再从斜面上挑取菌苔接入另一个7 8
斜面，出现菌落后，重复上面操作，连续转接三次，使得活菌数达到10-10cfu/mL即得活化菌种；

[0018] 所述的木糖葡萄球菌A2(Staphylococcus xylosus A2)保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其菌种保藏编号为：CGMCC No.5049；

[0019] b.培养基的配制：

[0020] 首先，分别称取下述原料：0.5重量份乳糖、2重量份示蛋白胨、0.2重量份酵母膏、5重量份香菇汁、7.5重量份NaCl；

[0021] 然后，将上述原料溶于1000重量份蒸馏水中，搅拌均匀，再使用中和剂将其pH值调节为7.2-7.8，装于三角瓶中，再在温度121℃下灭菌20分钟，这样得到所述的培养基；

[0022] c.菌种发酵液的制备：

[0023] 以使用所述的培养基重量计，将步骤a得到的活化木糖葡萄球菌A2菌种按照培养基重量的2％-4％接种于在步骤b得到的培养基中，在温度30-34℃，摇床速度120-150rpm/min条件下，培养15-20小时得到木糖葡萄球菌A2菌种发酵液；

[0024] d.发酵：

[0025] 以使用的培养基重量计，按照培养基重量的2％-4％将步骤c得到的木糖葡萄球菌A2菌种发酵液接种于在步骤b得到的培养基中，在温度32-35℃下进行震荡摇床发酵17小时；

[0026] e.终止发酵：

[0027] 达到所述发酵时间后，将三角瓶置于4℃冷藏保存，终止发酵，得到木糖葡萄球菌9
A2活菌数达到3×10cfu/mL以上的木糖葡萄球菌高密度发酵液。

[0028] 根据本发明的一种优选实施方式，所述的中和剂是1mol/L NaOH溶液。

[0029] 根据本发明的一种优选实施方式，所述步骤b中通过添加中和剂调节发酵介质的pH值为7.5。

[0030] 根据本发明的一种优选实施方式，所述的三角瓶中发酵摇瓶装液量的体积占三角瓶体积的90％(450mL/500mL)。

[0031] 根据本发明的一种优选实施方式，步骤c得到的木糖葡萄球菌A2菌种发酵液接种在步骤b得到的所述培养基中，在温度32℃，摇瓶速度是130rpm/min条件下，进行发酵17小时。

[0032] 根据本发明的一种优选实施方式，所述的香菇汁可按照以下方法制备：取新鲜香菇500g洗净后切碎，加适量蒸馏水煮沸30min，冷却后于组织捣碎机中捣碎、过滤，滤液经离心后加蒸馏水补足至500mL，得到香菇汁。

[0033] 进一步的，本发明还涉及一种木糖葡萄球菌(Staphylococcus xylosus A2)高密度浓缩菌泥的制备方法，其特征在于：将前面所述方法制备的木糖葡萄球菌A2高密度发酵11
液在0～4℃下，6000rpm/min条件下离心30分钟，得到活菌数达到2.06×10 cfu/mL以上的木糖葡萄球菌A2的高密度浓缩菌泥。

[0034] 由以上方法制备得到的木糖葡萄球菌A2高密度培养物可用于制备肉制品发酵剂，尤其可用于直投式木糖葡萄球菌发酵剂的制备。

具体实施方式

[0035] 下面结合具体实施例对本发明做进一步说明，应该理解的是，这些实施例仅用于例证的目的，决不限制本发明的保护范围。

[0036] 本发明具体实施例中所涉及的材料：新鲜香菇购买自市场；乳糖、示蛋白胨、酵母膏、氯化钠等均购买自北京奥博新生物技术有限公司。

[0037] 本发明具体实施例中所涉及的菌种：木糖葡萄球菌A2，为本发明人从发酵风干肠中提取并分离鉴定的菌种，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其菌种保藏编号为：CGMCC No.5049。

[0038] 实施例1

[0039] 一种木糖葡萄球菌A2的高密度培养方法，包括以下步骤：

[0040] a.菌种活化：将冷冻保存的木糖葡萄球菌A2(Staphylococcus xylosus A2)接种于MSA培养基斜面，在温度32℃下培养至出现菌落，然后再从斜面上挑取菌苔接入另一个7 8
斜面，出现菌落后，重复上面操作，连续转接三次，使得活菌数达到10-10cfu/mL即得活化菌种；

[0041] 所述的木糖葡萄球菌A2(Staphylococcus xylosus A2)，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其菌种保藏编号为：CGMCC No.5049；

[0042] b.培养基的配制：

[0043] 首先，分别称取下述原料：0.5g份乳糖、2g示蛋白胨、0.2g酵母膏、5g香菇汁、7.5g NaCl；

[0044] 然后，将上述原料溶于1000g蒸馏水中，搅拌均匀，再使用1mol/L NaOH溶液将其pH值调节为7.2，装于三角瓶中，三角瓶中的发酵摇瓶装液量是90％，再在温度121℃下灭菌20分钟，这样得到所述的培养基；

[0045] c.菌种发酵液的制备：

[0046] 以使用所述的培养基重量计，将步骤a得到的活化木糖葡萄球菌A2菌种按照培养基重量的2％接种于在步骤b得到的培养基中，在温度30℃，摇床速度120rpm/min条件下，培养20小时得到木糖葡萄球菌A2菌种发酵液；

[0047] d.发酵：

[0048] 以使用所述的培养基重量计，将步骤c得到的所述木糖葡萄球菌A2菌种发酵液按照培养基重量的4％接种于在步骤b得到的培养基中，在温度35℃下进行震荡摇床发酵17小时；

[0049] e.终止发酵：

[0050] 达到所述发酵时间后，将三角瓶置于4℃冷藏保存，终止发酵，得到木糖葡萄球菌9
A2活菌数达到3×10cfu/mL以上的木糖葡萄球菌高密度发酵液。

[0051] 实施例2

[0052] 一种木糖葡萄球菌A2的高密度培养方法，其特征在于，包括以下步骤：

[0053] a.菌种活化：将冷冻保存的木糖葡萄球菌A2(Staphylococcus xylosus A2)接种于MSA培养基斜面，在温度32℃下培养至出现菌落，然后再从斜面上挑取菌苔接入另一个7 8
斜面，出现菌落后，重复上面操作，连续转接三次，使得活菌数达到10-10cfu/mL即得活化菌种；

[0054] 所述的木糖葡萄球菌A2(Staphylococcus xylosus A2)，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其菌种保藏编号为：CGMCC No.5049；

[0055] b.培养基的配制：

[0056] 首先，分别称取下述原料：0.5g乳糖、2g示蛋白胨、0.2g酵母膏、5g香菇汁、7.5g NaCl；

[0057] 然后，将上述原料溶于1000g蒸馏水中，搅拌均匀，再使用1mol/L NaOH溶液将其pH值调节为7.5，装于三角瓶中，再在温度121℃下灭菌20分钟，这样得到所述的培养基；

[0058] c.菌种发酵液的制备：

[0059] 以使用的培养基重量计，将步骤a得到的活化木糖葡萄球菌A2菌种按照培养基重量的4％接种于在步骤b得到的培养基中，在温度32℃，摇床速度130rpm/min条件下，培养17小时得到木糖葡萄球菌A2菌种发酵液；

[0060] d.发酵：

[0061] 以使用的培养基重量计，将步骤c得到的木糖葡萄球菌A2菌种发酵液按照培养基2％接种于在步骤b得到的培养基中，在温度34℃下进行震荡摇床发酵17小时；

[0062] e.终止发酵：

[0063] 达到所述发酵时间后，将三角瓶置于4℃冷藏保存，终止发酵，得到木糖葡萄球菌9
A2活菌数达到3×10cfu/mL以上的木糖葡萄球菌高密度发酵液。

[0064] 将得到的木糖葡萄球菌A2高密度发酵液在4℃，6000rpm/min条件下离心30分11
钟，得到活菌数达到2.06×10 cfu/mL以上的木糖葡萄球菌A2高密度浓缩菌泥。

[0065] 实验例1木糖葡萄球菌A2的高密度培养方法的条件优化

[0066] 本发明涉及一种木糖葡萄球菌A2的高密度培养方法。

[0067] 所述木糖葡萄球菌A2的高密度培养方法步骤如下：

[0068] 1碳源的选择

[0069] 研究了添加九种不同碳源制成的液体培养基，分别接种活化好的木糖葡萄球菌A2，32℃恒温培养17小时，检测菌悬液活菌数，测定pH值，观察每种碳源对其的增菌效果。根据附表1结果表明，木糖葡萄球菌A2在添加9种碳源的培养基中均可正常生长并进行代谢产酸。添加淀粉的培养基中增菌效果显著高于添加其他单因子碳源增菌效果(P＜0.05)；添加糊精、乳糖、半乳糖和海藻糖的培养基较添加其他单因子培养基的增菌效果也较好，且彼此之间差异不显著(P＞0.05)，木糖葡萄球菌A2在生长过程中利用碳源代谢产生乳酸，使溶液pH值降低，当溶液pH值过低时就会发生菌体“自溶”现象而抑制增长，由表1可看出增菌效果好的组在生长代谢17h后，培养液中pH值下降并不显著(P＞0.05)。因淀粉和糊精在高温灭菌后成糊状而使培养基呈分层状态，综合考虑经济成本、工业化生产发酵罐的使用维护及菌体的富集分离等因素，故选取乳糖为木糖葡萄球菌A2的最佳碳源。

[0070] 表1不同碳源对木糖葡萄球菌A2菌体生长的影响

[0071]

[0072] 注：表中字母表示同一列比较，字母相同则表示差异不显著(P＞0.05)，不同则表示差异显著(P＜0.05)

[0073] 2氮源的选择

[0074] 研究了添加十一种不同氮源制成的液体培养基，表2结果表明，木糖葡萄球菌A2在本实验所用11种氮源生长培养基中均可正常生长并进行代谢，在1％尿素培养基中生长受到抑制，发酵后菌体活菌数减少。添加有机氮源培养基较添加无机氮源培养基增菌效果差异显著(P＜0.05)，添加无机氮源的培养基发酵后，pH值无明显降低，增菌效果不明显甚至无增菌效果，这可能是因为木糖葡萄球菌生长代谢过程中很难利用无机氮源发酵产酸，部分无机氮源对其生长甚至有抑制作用；添加酸水解酪蛋白和示蛋白胨的培养基较添加其他单因子培养基的增菌效果进行比较分析差异显著(P＜0.05)，但彼此之间差异不显著(P＞0.05)。结合经济成本因素考虑，选取示蛋白胨为木糖葡萄球菌A2的最佳氮源。

[0075] 表2不同氮源对木糖葡萄球菌A2菌体生长的影响

[0076]

[0077] 注：表中字母表示同一列比较，字母相同则表示差异不显著(P＞0.05)，不同则表示差异显著(P＜0.05)

[0078] 3营养因子的选择

[0079] 研究了添加八种不同营养因子制成的液体培养基。根据表3表明，木糖葡萄球菌A2在本实验所用8种营养因子生长培养基中均可正常生长并进行代谢。添加香菇汁、碳酸钙、平菇汁、西红柿汁和酵母膏培养基中，对木糖葡萄球菌A2增菌效果显著好于添加其他营养因子的增菌效果(P＜0.05)，香菇汁、平菇汁、西红柿汁和酵母膏中含有促进木糖葡萄球菌的维生素、氨基酸等生长因子，对增菌效果作用显著；对于发酵产酸的菌种，发酵液中添加碳酸钙可中和菌体生长增殖过程中产生的酸以保证培养基pH值不会显著变化，菌体细胞增长较好，但在培养过程中碳酸钙会沉积于容器底部而使培养基呈分层状态，不利于工业化生产发酵罐的使用维护及菌体的富集分离，故后续试验不添加碳酸钙。结合营养因子的同源性综合考虑，选取香菇汁和酵母膏为为木糖葡萄球菌A2的最佳营养因子。

[0080] 表3不同营养因子对木糖葡萄球菌A2菌体生长的影响

[0081]

[0082]

[0083] 注：表中字母表示同一列比较，字母相同则表示差异不显著(P＞0.05)，不同则表示差异显著(P＜0.05)

[0084] 4增殖培养基配方的确定

[0085] 考虑到几种增殖因子之间可能存在联合协同的交互作用，因而对在单因素试验中增殖效果较明显的几种增殖因子(乳糖、示蛋白胨、香菇汁及酵母膏)采用L9(34)正交试验优化木糖葡萄球菌A2的最佳增菌培养。表4结果表明，四个因素中，对木糖葡萄球菌A2活菌增殖量的影响顺序为B＞C＞D＞A，说明影响木糖葡萄球菌A2生长发育的最主要的因素是示蛋白胨，其他3个因素依次是香菇汁、酵母膏和乳糖，氮源是木糖葡萄球菌A2生长的主要因素，氮源含量高的培养液中木糖葡萄球菌A2增殖迅速，而碳源对此作用不大，因此确定最佳增殖培养基配比为A1B3C1D3，即0.5％乳糖、2％示蛋白胨、5％香菇汁和0.2％酵母膏。

[0086] 表4木糖葡萄球菌A2发酵培养基成分优化正交试验结果

[0087]

[0088] 5培养基初始pH值的选择

[0089] 研究了木糖葡萄球菌A2在培养基初始pH调6.0-8.0范围内的生长情况，表5结果表明，培养基初始值对菌株菌体增长情况影响较大。培养基初始pH值为7.5的增菌效果明显高于其他组(P＜0.05)。木糖葡萄球菌利用碳源、氮源等生长物质发酵产生乳酸，随着乳酸的积累、培养液中pH值的降低，会抑制木糖葡萄球菌菌体的正常生长代谢，因此起始pH值低于7.5的培养液中，木糖葡萄球菌A2增殖缓慢。但是初始pH过高，也会对不木糖葡萄球菌菌体的生长产生抑制作用，故确定木糖葡萄球菌A2增殖培养基初始pH值为7.5。

[0090] 表5培养基初始pH值对木糖葡萄球菌A2菌体生长的影响

[0091]

[0092] 注：表中字母相同则表示差异不显著(P＞0.05)，不同则表示差异显著(P＜0.05)

[0093] 6摇瓶装液量的选择

[0094] 研究了木糖葡萄球菌A2在培养基按60％-100％的装液量(分装于500mL三角瓶中)范围内的生长情况，表6结果表明，摇瓶装液量对菌株菌体增长情况影响较大，其中装液量为90％(450mL/500mL)的培养基较其他装液量增菌效果明显，差异显著(P＜0.05)，这可能是因为木糖葡萄球菌多为好氧菌或兼性厌氧菌，装液量的多少会影响液体培养基中的溶氧量，过多或过少的氧气含量均不利于其生长增殖，通过试验可以看出90％(450mL/500mL)为木糖葡萄球菌A2的最佳摇瓶装液量。

[0095] 表6装液量对木糖葡萄球菌A2菌体生长的影响

[0096]

[0097] 注：表中字母相同则表示差异不显著(P＞0.05)，不同则表示差异显著(P＜0.05)

[0098] 本发明还涉及一种木糖葡萄球菌A2的高密度培养物的富集方法，其特征在于如下：

[0099] 研究了木糖葡萄球菌A2培养液在6组离心条件下进行的高密度富集情况，根据附表7所示，菌体富集时，选择恰当的离心参数(转数、时间)是非常必要的。一般来说，离心时间越长，离心转数越高，对菌体的机械损伤越大，离心后菌体存活率越低。但选择低转数短时间离心又会使菌体富集不完全，部分菌体还存在于上清液中。综合考虑以上两个方面和实际成本以及对离心机的使用维护，本试验采用6000rpm，30min作为木糖葡萄球菌A2菌体富集的离心条件。

[0100] 表7不同离心条件对木糖葡萄球菌A2菌体生长的影响

[0101]