运动障碍相关病症的治疗

摘要

本文中公开了治疗帕金森病同时保持低的运动障碍诱导特征的方法及逆转运动障碍的方法，所述方法包括给药治疗有效量的本发明化合物。本发明还涉及所述化合物在制备用于治疗所述疾病的药物中的用途和所述化合物的药物组合物。

权利要求

1.(4aR，10aR)-1-正丙基-1，2，3，4，4a，5，10，10a-八氢-苯并[g]喹啉-6，7-二醇或其药学上可接受的盐在制备用于逆转运动障碍的药物中的用途。

2.(6aR，10aR)-7-正丙基-6，6a，7，8，9，10，10a，11-八氢-1，3-二氧杂-7-氮杂-环戊二烯并[a]蒽或其药学上可接受的盐在制备用于治疗帕金森病同时保持低的运动障碍诱导特征的药物中的用途。

3.(6aR，10aR)-7-正丙基-6，6a，7，8，9，10，10a，11-八氢-1，3-二氧杂-7-氮杂-环戊二烯并[a]蒽或其药学上可接受的盐在制备用于逆转运动障碍的药物中的用途。

4.(4aR，10aR)-1-正丙基-2，3，4，4a，5，7，8，9，10，10a-十氢-1H-苯并[g]喹啉-6-酮或其药学上可接受的盐在制备用于逆转运动障碍的药物中的用途。

5.权利要求1-4中任一项所述的用途，其中所述运动障碍与基底神经节相关运动病症有关。

6.权利要求5所述的用途，其中所述运动障碍与帕金森病有关。

7.权利要求6所述的用途，其中所述运动障碍与特发性帕金森病或脑炎后帕金森病有关。

8.权利要求7所述的用途，其中所述运动障碍与帕金森病中“关期”张力失常有关。

9.权利要求8所述的用途，其中所述运动障碍作为治疗帕金森病的治疗剂的副作用出现。

10.权利要求9所述的用途，其中所述运动障碍与多巴胺替代疗法有关。

11.权利要求10所述的用途，其中所述多巴胺替代疗法药物选自罗替戈汀、罗匹尼罗、普拉克索、卡麦角林、溴隐亭、利舒脲、培高利特、L-DOPA和阿扑吗啡。

12.权利要求11所述的用途，其中所述运动障碍确定为反复给药L-DOPA的结果。

说明书

运动障碍相关病症的治疗

发明领域

[0001] 本发明的各方面涉及治疗帕金森病同时保持低的运动障碍诱导特征的方法和逆转运动障碍的方法，所述方法包括给药治疗有效量的本文中公开的化合物。本发明还涉及所述化合物在制备用于治疗所述疾病或诸如亨廷顿舞蹈症的其它运动病症的药物中的用途和所述化合物的药物组合物。

背景技术

[0002] 多巴胺替代药剂在帕金森病(PD)症状治疗中的使用无疑成功地提高了患者的生活质量。L-DOPA，其已被使用许多年且仍然是PD治疗的黄金标准，减轻了具有运动缓慢(运动过缓)、僵化和/或颤动特征的PD的运动症状。已理解L-DOPA起着前药的作用，其被生物代谢成多巴胺(DA)。DA反过来激活脑内的多巴胺受体，所述受体分成两类：D1和D2受体。D1受体可分成D1和D5受体而D2受体可分成D2、D3和D4受体。然而，多巴胺替代疗法确实具有局限性，尤其在长期治疗后。多年来，响应一剂L-DOPA的持续时间逐渐变短，且患者响应药物的周期被一系列副作用的出现变得复杂。

[0003] 所述副作用可能表现为运动障碍，其可在患者进行多巴胺替代治疗或甚至当患者脱离治疗时观察到。运动障碍是异常不随意运动病症。异常运动可表现为舞蹈症(可能影响面部、手臂、腿或躯干的不随意、迅速、无规律、节律性运动)、投掷症(类似于舞蹈症但具有更猛烈且有力特征的不随意运动)、张力失常(持续肌肉收缩，通常产生扭曲和重复运动或异常姿势或体位)和/或手足徐动症(重复的不随意、缓慢、弯曲、扭转运动，其在手方面特别严重)。

[0004] 受PD折磨的患者可能在“开”期间(其并发运动障碍)和“关”期间(其间他们是严重的帕金森病患者)循环。结果，他们可能经历重型无力，尽管事实上L-DOPA在整个疾病过程中仍然是有效的抗帕金森药物(Obeso等人.Neurology 2000，55，S13-23)。诸如溴隐亭、利舒脲、普拉克索、罗匹尼罗和培高利特的多巴胺激动剂的功效比L-DOPA低，尤其在中等至严重PD中。然而，它们的副作用特征与L-DOPA不同。值得注意的是DA激动剂确实比L-DOPA引起更少的运动障碍，但这对运动障碍PD患者而言具有有限的价值，这是因为他们中的许多具有中等至严重PD，因此他们需要L-DOPA的功效。

[0005] 运动障碍及源自基底神经节功能不良的其它运动病症具有很大的社会-经济重要性。已多次尝试开发预防和/或治疗运动障碍的药物，尽管这些努力取得了有限的成功。因此，存在提供治疗运动障碍的新药物的需求。

[0006] 大鼠中帕金森病的6-羟基多巴胺(6-OHDA)损伤模型提供了研究临床前期PD和评价新治疗选择的非常宝贵的工具(Schwarting和Huston，Prog.Neurobiol.1996，50，275-331)。最广泛使用的6-OHDA范例之一是评价具有多巴胺能黑质纹状体路径的不连续变性的大鼠中的旋转行为(Ungerstedt和Aburthnott，Brain Res.1970，24，485)。在此模型中，6-OHDA被单侧注射到黑质纹状体路径、新纹状体或前脑内侧束(MFB)中，在多巴胺能黑质纹状体系统之间产生功能失衡。直接刺激多巴胺受体的药物(如多巴胺代谢前体L-DOPA和多巴胺激动剂阿扑吗啡)的给药产生远离其中6-OHDA被注射的体侧定向的旋转行为。

[0007] 除了运动相关缺陷外，6-OHDA模型可用于复制PD的其它特征。已在新纹状体或MFB中注射6-OHDA并用L-DOPA长期治疗的大鼠中观察到敏化的旋转行为及异常不随意运动(AIM)的发展，因此提供了研究L-DOPA诱导的运动障碍的另一动物模型(Lundblad等人.Eur.J Neurosci.2002，15，120-132)。在此模型中长期治疗过程中，L-DOPA而不是溴隐亭诱导AIM的逐渐发展。根据这些观察，已经认为被6-OHDA损伤的大鼠展示运动缺陷，所述运动缺陷与帕金森运动障碍具有本质的功能相似点且可用于评价治疗潜力以提供运动障碍治疗方法。

[0008] 在尝试确定治疗运动障碍及其它相关运动病症的新疗法中，申请人出乎意料地发现作为有效D1/D2激动剂的(4aR，10aR)-1-正丙基-1，2，3，4，4a，5，10，10a-八氢-苯并[g]喹啉-6，7-二醇[本文中称为化合物10]；(6aR，10aR)-7-正丙基-6，6a，7，8，9，10，10a，11-八氢-1，3-二氧杂-7-氮杂-环戊二烯并[a]蒽[本文中称为化合物11]；和(4aR，
10aR)-1-正丙基-2，3，4，4a，5，7，8，9，10，10a-十氢-1H-苯并[g]喹啉-6-酮[本文中称为化合物12]在具有单侧6-OHDA损伤的大鼠中具有有益特征。它们比L-DOPA和阿扑吗啡诱导更少的运动障碍且比D2激动剂(如普拉克索作为示例的)更有效地减少L-DOPA诱导的运动障碍。因此，化合物10、11和12具有变成具有L-DOPA样功效且不仅在诱导运动障碍方面而且作为用于逆转运动障碍的药物方面具有有益特征的第一PD药物的潜力。

[0009] 因此，预期以上确定的化合物可用于治疗运动障碍及诸如亨廷顿舞蹈症的其它相关运动病症。此外，本发明预期相应的外消旋反式混合物的用途。本发明还提供治疗运动障碍诱导特征低的帕金森病的方法，所述方法包括给药治疗有效量的所述化合物。在一方面，治疗帕金森病与L-DOPA治疗一样有效。还提供逆转运动障碍或治疗帕金森病的方法，所述方法包括给药所化合物及其药物组合物。

[0010] 发明概述

[0011] 本发明的一个方面涉及(4aR，10aR)-1-正丙基-1，2，3，4，4a，5，10，10a-八氢-苯并[g]喹啉-6，7-二醇或其药学上可接受的盐在制备用于治疗帕金森病同时保持低的运动障碍诱导特征的药物中的用途。

[0012] 另一方面涉及外消旋反式-1-正丙基-1，2，3，4，4a，5，10，10a-八氢-苯并[g]喹啉-6，7-二醇在制备用于治疗帕金森病同时保持低的运动障碍诱导特征的药物中的用途。

[0013] 本发明的一个独立方面涉及(4aR，10aR)-1-正丙基-1，2，3，4，4a，5，10，10a-八氢-苯并[g]喹啉-6，7-二醇或其药学上可接受的盐在制备用于治疗帕金森病的药物中的用途。

[0014] 另一方面涉及外消旋反式-1-正丙基-1，2，3，4，4a，5，10，10a-八氢-苯并[g]喹啉-6，7-二醇在制备用于治疗帕金森病的药物中的用途。

[0015] 本发明的一个独立方面涉及(4aR，10aR)-1-正丙基-1，2，3，4，4a，5，10，10a-八氢-苯并[g]喹啉-6，7-二醇或其药学上可接受的盐在制备用于逆转运动障碍的药物中的用途。

[0016] 另一方面涉及外消旋反式-1-正丙基-1，2，3，4，4a，5，10，10a-八氢-苯并[g]喹啉-6，7-二醇在制备用于逆转运动障碍的药物中的用途。

[0017] 另一方面涉及用于治疗帕金森病同时保持低的运动障碍诱导特征的药物组合物，其包含(4aR，10aR)-1-正丙基-1，2，3，4，4a，5，10，10a-八氢-苯并[g]喹啉-6，7-二醇或其药学上可接受的盐。

[0018] 本发明的独立方面涉及在制备用于治疗帕金森病同时保持低的运动障碍诱导特征的药物中的药物组合物，其包括外消旋反式-1-正丙基-1，2，3，4，4a，5，10，10a-八氢-苯并[g]喹啉-6，7-二醇。

[0019] 另一方面涉及治疗帕金森病同时保持低的运动障碍诱导特征的方法，其包括给药治疗有效量的(4aR，10aR)-1-正丙基-1，2，3，4，4a，5，10，10a-八氢-苯并[g]喹啉-6，7-二醇或其药学上可接受的盐。

[0020] 一个独立的方面涉及治疗帕金森病同时保持低的运动障碍诱导特征的方法，其包括给药治疗有效量的外消旋反式-1-正丙基-1，2，3，4，4a，5，10，10a-八氢-苯并[g]喹啉-6，7-二醇。

[0021] 另一方面涉及逆转运动障碍的方法，其包括给药治疗有效量的(4aR，10aR)-1-正丙基-1，2，3，4，4a，5，10，10a-八氢-苯并[g]喹啉-6，7-二醇或其药学上可接受的盐。

[0022] 另一方面涉及逆转运动障碍的方法，其包括给药治疗有效量的外消旋反式-1-正丙基-1，2，3，4，4a，5，10，10a-八氢-苯并[g]喹啉-6，7-二醇或其药学上可接受的盐。

[0023] 本发明的一个方面涉及(6aR，10aR)-7-正丙基-6，6a，7，8，9，10，10a，11-八氢-1，3-二氧杂-7-氮杂-环戊二烯并[a]蒽或其药学上可接受的盐在制备用于治疗帕金森病同时保持低的运动障碍诱导特征的药物中的用途。

[0024] 本发明的一个独立方面涉及(6aR，10aR)-7-正丙基-6，6a，7，8，9，10，10a，11-八氢-1，3-二氧杂-7-氮杂-环戊二烯并[a]蒽或其药学上可接受的盐在制备用于逆转运动障碍的药物中的用途。

[0025] 另一方面涉及用于治疗帕金森病同时保持低的运动障碍诱导特征的药物组合物，其包含(6aR，10aR-7-正丙基-6，6a，7，8，9，10，10a，11-八氢-1，3-二氧杂-7-氮杂-环戊二烯并[a]蒽或其药学上可接受的盐。

[0026] 本发明的独立方面涉及在制备用于治疗帕金森病同时保持低的运动障碍诱导特征的药物中的药物组合物，其包括(6aR，10aR)-7-正丙基-6，6a，7，8，9，10，10a，11-八氢-1，3-二氧杂-7-氮杂-环戊二烯并[a]蒽或其药学上可接受的盐。

[0027] 另一方面涉及治疗帕金森病同时保持低的运动障碍诱导特征的方法，其包括给药治疗有效量的(6aR，10aR)-7-正丙基-6，6a，7，8，9，10，10a，11-八氢-1，3-二氧杂-7-氮杂-环戊二烯并[a]蒽或其药学上可接受的盐。

[0028] 另一方面涉及逆转运动障碍的方法，其包括给药治疗有效量的(6aR，10aR)-7-正丙基-6，6a，7，8，9，10，10a，11-八氢-1，3-二氧杂-7-氮杂-环戊二烯并[a]蒽或其药学上可接受的盐。

[0029] 本发明的一个方面涉及(4aR，10aR)-1-正丙基-2，3，4，4a，5，7，8，9，10，10a-十氢-1H-苯并[g]喹啉-6-酮或其药学上可接受的盐在制备用于治疗帕金森病同时保持低的运动障碍诱导特征的药物中的用途。

[0030] 本发明的一个独立方面涉及(4aR，10aR)-1-正丙基-2，3，4，4a，5，7，8，9，10，10a-十氢-1H-苯并[g]喹啉-6-酮或其药学上可接受的盐在制备用于治疗帕金森病的药物中的用途。

[0031] 还一方面涉及(4aR，10aR)-1-正丙基-2，3，4，4a，5，7，8，9，10，10a-十氢-1H-苯并[g]喹啉-6-酮或其药学上可接受的盐在制备用于逆转运动障碍的药物中的用途。

[0032] 另一方面涉及用于治疗帕金森病同时保持低的运动障碍诱导特征的药物组合物，其包括(4aR，10aR)-1-正丙基-2，3，4，4a，5，7，8，9，10，10a-十氢-1H-苯并[g]喹啉-6-酮，或其药学上可接受的盐。

[0033] 本发明的独立方面涉及在制备用于治疗帕金森病同时保持低的运动障碍诱导特征的药物中的药物组合物，其包括(4aR，10aR)-1-正丙基-2，3，4，4a，5，7，8，9，10，10a-十氢-1H-苯并[g]喹啉-6-酮或其药学上可接受的盐。

[0034] 另一方面涉及治疗帕金森病同时保持低的运动障碍诱导特征的方法，其包括给药治疗有效量的(4aR，10aR)-1-正丙基-2，3，4，4a，5，7，8，9，10，10a-十氢-1H-苯并[g]喹啉-6-酮或其药学上可接受的盐。

[0035] 另一方面涉及逆转运动障碍的方法，其包括给药治疗有效量的(4aR，10aR)-1-正丙基-2，3，4，4a，5，7，8，9，10，10a-十氢-1H-苯并[g]喹啉-6-酮或其药学上可接受的盐。

[0036] 详述

[0037] 本发明化合物含有两个手性中心(在下式中用*表示)

[0038]

[0039] 本发明化合物可以两种不同的非对映体形式(顺式和反式异构体)存在，它们两者都可以两种对映体形式存在。本发明仅涉及反式外消旋体和(4aR，10aR)-对映体。

[0040]

[0041] 如前面所指出的，本发明基于以下发现：(4aR，10aR)-1-正丙基-1，2，3，4，4a，5，10，10a-八氢-苯并[g]喹啉-6，7-二醇(本文中称为“化合物10”)逆转了被6-OHDA损伤的大鼠中由L-DOPA/苄丝肼和阿扑吗啡诱导的运动障碍。对应的反式外消旋体也属于本发明范围。

[0042] 此外，本发明化合物含有两个手性中心(下式中用*表示)

[0043]

[0044] 本发明化合物可以两种不同的非对映体形式(顺式和反式异构体)存在，它们两者都可以两种对映体形式存在。本发明仅涉及反式外消旋体和(6aR，10aR)-对映体。

[0045]

[0046] 如前面所指出的，本发明基于以下发现：(6aR，10aR)-7-正丙基-6，6a，7，8，9，10，10a，11-八氢-1，3-二氧杂-7-氮杂-环戊二烯并[a]蒽(本文中称为“化合物11”)逆转了被6-OHDA损伤的大鼠中由L-DOPA/苄丝肼和阿扑吗啡诱导的运动障碍。

[0047] 此外，本发明基于以下发现：(4aR，10aR)-1-正丙基-2，3，4，4a，5，7，8，9，10，10a-十氢-1H-苯并[g]喹啉-6-酮(本文中称为化合物12)在有单侧6-OHDA损伤的大鼠中具有有益特征。它比L-DOPA和阿扑吗啡诱导更少的运动障碍，且比D2激动剂(如普拉克索作为示例的)更有效地减少L-DOPA诱导的运动障碍。

[0048] 下面对本发明进行更详细地解释，但本说明书不意在为可实施本发明的所有不同方式或可加入本发明的所有特征的详细目录。

[0049] 定义

[0050] 本文中所用的“运动障碍”是指具有与已知为基底神经节的脑部区域的紊乱有关的异常不随意运动的特征的病症。运动障碍可为出现的“L-DOPA诱导的运动障碍”且是治疗帕金森病(最常见的基底神经节疾病)的并发病。运动障碍可在身体上表现为两种形式：舞蹈症和张力失常。舞蹈症由身体的一部分流动到另一部分的不随意、连续、无目的、生硬、迅速、简短、不持续和不规则运动组成。张力失常是指引起扭曲和反复运动或异常姿势的持续肌肉收缩。

[0051] “治疗”是指在身体上(如可辨别症状的稳定)或生理上(例如物理参数的稳定)，或两者抑制疾病或病症，和抑制至少一种物理参数，所述物理参数对于患者可能是不可辨别的。此外，“治疗”是指延迟可能暴露于或易感染疾病或病症的患者(即使该患者还没有经历或显示所述疾病或病症的症状)中疾病或病症或至少其症状的发作。

[0052] “治疗有效量”是指当给药至患者以治疗疾病或病症时足够影响所述疾病或病症的这种治疗的化合物的量。所述“治疗有效量”将根据化合物、疾病或病症及其严重度和待治疗的患者的年龄和体重而变化。

[0053] 如本文中所用，短语“同时保持低的运动障碍特征”是指如在已经通过连续多巴胺能刺激治疗的患者中看到的运动障碍特征。包括连续多巴胺能刺激的治疗描述于Stocchi和Olanow，Neurology 2004，2004，62，S56-S63；和Hilary等人，Journal of Neurology2004，251，11，1370-1374中。

[0054] 本文中所用的作为有效D1/D2激动剂的(4aR，10aR)-1-正丙基-1，2，3，4，4a，5，10，10a-八氢-苯并[g]喹啉-6，7-二醇被称为化合物10。

[0055] 本文中所用的(6aR，10aR)-7-正丙基-6，6a，7，8，9，10，10a，11-八氢-1，3-二氧杂-7-氮杂-环戊二烯并[a]蒽被称为化合物11。

[0056] 本文中所用的(4aR，10aR)-1-正丙基-2，3，4，4a，5，7，8，9，10，10a-十氢-1H-苯并[g]喹啉-6-酮本文中称为化合物12。

[0057] 化合物10、11或12可作为单一疗法用于治疗运动障碍(即单独使用所述化合物)；作为组合物的辅料用于预防所述组合物引起的运动障碍副作用(例如作为用于治疗帕金森患者的L-DOPA或阿扑吗啡的辅料)或，或者所述化合物可与也减少运动障碍的其它治疗(例如阿片样物质受体拮抗剂、(α2-肾上腺素受体-拮抗剂、大麻素类CBI-拮抗剂、NMDA受体-拮抗剂、胆碱能受体拮抗剂、组胺H3-受体激动剂和苍白球/底丘脑核损伤/深脑刺激)联合给药。

[0058] 本发明还涉及在治疗帕金森病同时减少由L-DOPA或多巴胺激动剂诱导的运动障碍中的同时、分开或相继应用，其包括给药治疗有效量的化合物10、11或12或其药学上的盐。

[0059] 在一个实施方案中，所述运动障碍与基底神经节相关运动病症有关。

[0060] 在另一实施方案中，所述运动障碍与帕金森病有关。

[0061] 一个实施方案涉及与特发性帕金森病或脑炎后帕金森病相关的运动障碍。

[0062] 在一个实施方案，所述运动障碍与与帕金森病中“关期”张力失常(off-dystonia)有关。

[0063] 在一个独立的实施方案中，所述运动障碍作为治疗帕金森病的治疗剂的副作用出现。

[0064] 在另一实施方案中，所述运动障碍与多巴胺替代疗法有关。在一个实施方案中，多巴胺替代疗法药物选自罗替戈汀、罗匹尼罗、普拉克索、卡麦角林、溴隐亭、利舒脲、培高利特、L-DOPA和阿扑吗啡。

[0065] 在一个实施方案，所述运动障碍被确定为重复给药L-DOPA的结果。

[0066] 如前面所述，本发明提供在制备用于治疗帕金森病同时保持低的运动障碍诱导特征的药物中的药物组合物，其包含化合物10、11或12或其药学上可接受的盐，和在制备用于治疗帕金森病同时保持低的运动障碍诱导特征的药物中的药物组合物，其包含外消旋反式-1-正丙基-1，2，3，4，4a，5，10，10a-八氢-苯并[g]喹啉-6，7-二醇。

[0067] 在一个实施方案中，所述药物组合物还包含MAO-B抑制剂。

[0068] 在一个实施方案中，所述MAO-B抑制剂为司来吉兰(selegine)。在一个独立的实施方案中，所述MAO-B抑制剂为雷沙吉兰。

[0069] 在另一实施方案中，本发明涉及药物组合物，其包含治疗有效量的化合物10、11或12或其药学上可接受的酸加成盐，和一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂和赋形剂。

[0070] 在本发明的一个具体实施方案中，所述哺乳动物为人类受试者。

[0071] 治疗有效量的化合物10、11或12(计算成作为游离碱的以上化合物10、11或12的日剂量)合适地在0.01至125mg/天之间，更合适地在0.05至100mg/天之间，例如优选在0.1至50mg/天之间。

[0072] 在一个具体实施方案中，化合物10、11或12的日剂量在1.0至10mg/天之间。

[0073] 在另一实施方案中，化合物10、11或12的日剂量低于约1.0mg/天。

[0074] 在一个独立的实施方案中，化合物10、11或12的日剂量为约0.10mg/天。

[0075] 在另一实施方案中，本发明提供包含0.001mg至125mg化合物10、11或12的口服制剂。

[0076] 在另一实施方案中，本发明提供包含0.001mg至0.100mg化合物10、11或12的口服制剂。

[0077] 在另一实施方案中，本发明提供包含0.01mg至1.0mg化合物10、11或12的口服制剂。

[0078] 在另一实施方案中，本发明提供包含0.10mg至10mg化合物10、11或12的口服制剂。

[0079] 药学上可接受的盐

[0080] 化合物10、11或12与各种各样有机和无机酸形成药学上可接受的酸加成盐。这些盐也是本发明的部分。如本领域中众所周知的，化合物10、11或12的药学上可接受的酸加成盐由药学上可接受的酸形成。这些盐包括Journal of Pharmaceutical Science，1977，66，2-19中列出的药学上可接受的盐且是本领域技术人员已知的。用于形成这些盐的典型无机酸包括盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硝酸、硫酸、磷酸、次磷酸、偏磷酸、焦磷酸及类似酸。还可使用衍生自有机酸的盐，所述有机酸如脂族一元酸和二元羧酸、苯基取代的链烷酸、羟基链烷酸和羟基链烷双酸、芳族酸、脂族和芳族磺酸。因此，这些药学上可接受的盐包括氯化物、溴化物、碘化物、硝酸盐、乙酸盐、苯基乙酸盐、三氟乙酸盐、丙烯酸盐、抗坏血酸盐、苯甲酸盐、氯苯甲酸盐、二硝基苯甲酸盐、羟基苯甲酸盐、甲氧基苯甲酸盐、甲基苯甲酸盐、邻乙氧基苯甲酸盐、异丁酸盐、苯基丁酸盐、α-羟基丁酸盐、丁炔-1，4-二羧酸盐、己炔-1，4-二羧酸盐、癸酸盐、辛酸盐、肉硅酸盐、柠檬酸盐、甲酸盐、富马酸盐、乙醇酸盐、庚酸盐、马尿酸盐、乳酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、羟基马来酸盐、丙二酸盐、扁桃酸盐、甲磺酸盐、烟酸盐、异烟酸盐、草酸盐、邻苯二甲酸盐、对苯二甲酸盐(teraphthalate)、丙炔酸盐、丙酸盐、苯基丙酸盐、水杨酸盐、癸二酸盐、琥珀酸盐、辛二酸盐、苯磺酸盐、对溴苯磺酸盐、氯代苯磺酸盐、乙基磺酸盐、2-羟基乙基磺酸盐、甲基磺酸盐、萘-1-磺酸盐、萘-2-磺酸盐、萘-1，5-磺酸盐、对甲苯磺酸盐、二甲苯磺酸盐、酒石酸盐及类似盐。

[0081] 药物组合物

[0082] 制备固体药物组合物的方法也是本领域中众所周知的。因此，可通过将活性成分与常规佐剂、填料和稀释剂混合，随后在方便的制片机中挤压所得混合物来制备片剂。佐剂、填料和稀释剂的实例包括微晶纤维素、玉米淀粉、马铃薯淀粉、乳糖、甘露醇、山梨糖醇、滑石、硬脂酸镁、明胶、乳糖、胶质及类似物。还可使用诸如着色剂、香料、防腐剂等的任何其它佐剂或添加剂，条件是它们与活性成分相容。

[0083] 具体而言，可通过直接挤压与常规佐剂或稀释剂混合的化合物10、11或12来制备本发明的片剂制剂。或者，可使用化合物10、11或12的湿粒料或熔体粒料，任选与常规佐剂或稀释剂混合进行片剂的挤压。

[0084] 可通过将活性成分和可能的添加剂溶解于一部分注射用溶剂(优选无菌水)中，将所得溶液调整到所需体积，将所得溶液消毒并装入合适安瓿或小瓶中来制备用于注射的化合物10、11或12的溶液剂。可加入本领域中通常使用的任何合适添加剂，如张力剂、防腐剂、抗氧化剂、增溶剂等。

[0085] 附图简述

[0086] 图1：化合物ent-10的晶体结构。通过“重”溴原子的反常散射确定绝对构型。

[0087] 图2：通过hD5-转染的CHO-Ga16细胞中多巴胺作用的胞内Ca2+释放的浓度依赖性刺激的剂量-反应曲线。

[0088] 实验部分

[0089] 在装备有大气压光致电离设备的PE Sciex API 150EX仪和Shimadzu LC-8A/SLC-10A LC系统上获得分析LC/MS数据。通过UV(254nm)和ELSD示踪的积分确定纯度。MS仪来自Peskier(API)，其装备有APPI源并以阳离子模式运行。UV-示踪的停留时间(RT)用min表示。溶剂A由在水中的0.05％TFA制备，而溶剂B由在乙腈中的0.035％TFA和
5％水制备。使用以下几种不同方法：

[0090] 方法25：API 150EX和Shimadzu LC10AD/SLC-10A LC系统。柱：dC-184.6x30mm，3μm(Atlantis，Waters)。柱温：40℃。梯度：具有离子对的反相。流速：3.3mL/min。注射体积：15μL。梯度：2.4min内从在A中的2％B至100％B，然后在A中2％B，0.4min。总运行时间：2.8min。

[0091] 方法14：API 150EX和Shimadzu LC8/SLC-10A LC系 统。柱：C-184.6x30mm，3.5μm(Symmetry，Waters)。柱温：室温。梯度：具有离子对的反相。流速：2mL/min。注射体积：10μL。梯度：4min内从在A中的10％B至100％B；然后在A中的10％B，1min。总运行时间：5min。

[0092] 按照如下进行X射线晶体结构的确定。使用Cryostream氮气冷却系统将化合物的晶体冷却至120K。在具有CCD面积敏感检测器的Siemens SMART Platform衍射仪上2
收集数据。通过直接方法解答所述结构并通过所有数据对F 的满矩阵最小二乘来改进。
可在电子密度示差谱中发现所述结构中的氢原子。各向异性地精确确定非氢原子。所有氢原子在使用O-H＝0.84，C-H＝0.99-1.00，N-H＝0.92-0.93 的运行模型(riding model)的计算位置。对于所有氢原子，固定热参数[连接原子的U(H)＝1.2U]。Flack x-参数在0.0(1)-0.05(1)范围，表明所述绝对结构是正确的。用于数据收集、数据简化和合并的程序为SMART、SAINT和SADABS[参见“SMART and SAINT，Area Detector Control and Integration Software”，5.054版，Bruker Analytical X-Ray Instruments Inc.，Madison，美国(1998)，Sheldrick“SADABS，Program for Empirical Correction of Area Detector Data”2.03版，University of 德国(2001)]。使用程序SHELXTL[参见Sheldrick“SHELXTL，Structure Determination Programs”，6.12版，Bruker Analytical X-Ray Instruments Inc.，Madison，USA(2001)]解答结构和分子图形。

[0093] 本发明化合物(化合物10和11)的合成

[0094] 以如Taber等人，J.Am.Chem.Soc.，124(42)，12416(2002)中所述制备的化合物1(其合成描述于该文献中)为原料，按照本文中所述以8个步骤制备化合物8。可通过本文中所述的手性SFC拆分此物质，以得到化合物9和ent-9。断开Boc保护基团后，可采用还原性胺化在氮原子上引入正丙基基团。可通过用48％HBr处理或通过与BBr3反应在标准条件下使所得掩蔽的儿茶酚胺脱保护，得到化合物10和ent-10。可采用10与CH2ClBr或相关试剂在碱存在下的进一步反应来得到本发明化合物(化合物11)。

[0095]

[0096] 化合物10和ent-10的合成

[0097] 7-碘-1，2，6-三甲氧基-萘(化合物2).

[0098]

[0099] 在氩气气氛、-78℃下向化合物1(26.2g；如Taber等人，J.Am.Chem.Soc.，124(42)，12416(2002)中所述制备的)在无水THF(200mL)中的搅拌溶液中缓慢加入仲丁基锂(在环己烷中，1.2M，110mL)。将所述溶液在-78℃搅拌3h。在10min内加入碘(30.5g)在无水THF(50mL)中的溶液。接着将所得混合物在-78℃搅拌另外10min。通过加入饱和NH4Cl(100mL)、水(240mL)和Et2O(240mL)使反应混合物猝灭。有机层经10％亚硫酸钠水溶液(100mL)洗涤，干燥(Na2SO4)并真空浓缩。通过蒸馏掉未反应原料将粗物质纯化。通过硅胶色谱法(EtOAc/庚烷)将残余物进一步纯化，得到不纯固体物质，通过使其从EtOAc/庚烷中沉淀纯化，得到11.46g化合物2。

[0100] (E/Z)-3-(3，7，8-三甲氧基-萘-2-基)-丙烯腈(化合物3).

[0101]

[0102] 向在微波反应小瓶中的化合物2(3.41g)在无水乙腈(10.7mL)中的悬浮液中加入丙烯腈(1.19mL)、Pd(OAc)2(73mg)和三乙胺(1.48mL)。将小瓶密封，在微波辐射下将混合物在145℃加热40min。将此步骤再进行两次(使用总共10.23g化合物5)。将粗反应混合物合并，过滤掉催化剂，将滤出液真空浓缩。使残余物在Et2O(300mL)和2M HCl(150mL)之间分层。有机层经盐水(100mL)洗涤，干燥(Na2SO4)并真空浓缩。通过硅胶色谱法(EtOAc/庚烷)将粗物质(7.34g)纯化，得到5.23g化合物3，为烯烃异构体混合物。

[0103] 3-(3，7，8-三甲氧基-萘-2-基)-丙腈(化合物4)

[0104]

[0105] 将化合物3(5.23g)溶解于CHCl3(15mL)和99％EtOH(100mL)中。加入10％Pd/C(0.8g)并使用Parr震荡器在3bar氢气压力下将溶液氢化45min。过滤掉催化剂，使滤出液通过一小块硅胶(洗脱剂：99％EtOH)。产量：4.91g白色固体状的化合物4。

[0106] [3-(3，7，8-三甲氧基-1，4-二氢-萘-2-基)-丙基]-氨基甲酸叔丁酯(化合物5)。

[0107]

[0108] 将化合物4(5.0g)溶解于99％EtOH(150mL)中并在氮气气氛下将混合物加热回流。在3h内以小块加入钠金属(5g)。使混合物回流另外2h，然后将其在室温搅拌2天。接着再次将其加热回流，加入更多钠金属(3.68g)并使混合物回流过夜。在冰/水浴上冷却后，通过加入固体氯化铵(20g)和水(25mL)使反应猝灭。过滤所得混合物，将滤出液真空浓缩。使残余物在二乙醚(50mL)和水(50mL)之间分层。水层经37％HCl中和并用二乙醚(2x50mL)萃取。合并的有机萃取液经盐水(50mL)洗涤，干燥(MgSO4)并真空浓缩，得到油。在室温下将此物质溶解于THF(50mL)中并用Boc2O(2.34g)和Et3N(1.78mL)处理。6天后，真空除去挥发物并通过硅胶色谱法(EtOAc/庚烷)将残余物纯化。这样提供不纯化合物5(1.52g)。

[0109] 外消旋6，7-二甲氧基-2，3，4，4a，5，10-六氢-苯并[g]喹啉盐酸盐(化合物6)[0110]

[0111] 将化合物5(1.52g，来自以上步骤)溶解于MeOH(20mL)中。加入37％HCl(3.5mL)，使混合物回流4h。真空除去挥发物，使用甲苯来共沸除去水。这样提供黄色油状的不纯化合物6(0.89g)。

[0112] 外消旋反式-6，7-二甲氧基-3，4，4a，5，10，10a-氢-2H-苯并[g]喹啉-1-甲酸叔丁酯(化合物8)。

[0113]

[0114] 将化合物6(0.89g)溶解于MeOH(10mL)中并加入NaCNBH3(0.19g)。将反应物在室温搅拌过夜。将粗混合物在冰/水浴上冷却，然后用在Et2O(1mL)中的2MHCl将其猝灭。使混合物在Et2O(50mL)、水(50mL)和2M NaOH(10mL)之间分层。水层经二乙醚(3x50mL)萃取。将合并的有机层干燥(MgSO4)并真空浓缩，得到不纯游离胺(化合物7)。将此物质溶解于THF(25mL)中并在室温下用Boc2O(0.68g)和Et3N(0.86mL)处理1h。将粗混合物真空浓缩，通过硅胶色谱法(EtOAc/庚烷)将残余物纯化，得到1.18g稍微不纯的外消旋化合物8。

[0115] 外消旋反式-6，7-二甲氧基-3，4，4a，5，10，10a-氢-2H-苯并[g]喹啉-1-甲酸叔丁酯的对映体(化合物9和ent-9)的SFC分离

[0116]

[0117] 采 用 手 性SFC 在 装 备 有Chiralcel OD 21.2x 250mm 柱 的 Berger SFC multigramII仪上将化合物8(19.7g)拆分成其对映体。溶剂体系：CO2/EtOH(85∶15)，方法：恒定梯度，流速为50mL/min。通过UV 230nm检测进行馏分收集。快速洗脱对映体(4aR，10aR对映体；化合物9)：9.0g白色固体。慢洗脱对映体(4aS，10aS对映体，化合物ent-9)：
8.1g白色固体。

[0118] (4aS，10aS)-6，7-二甲氧基-1，2，3，4，4a，5，10，10a-八氢-苯并[g]喹啉盐酸盐(化合物ent-9’)

[0119]

[0120] 在室温下将化合物ent-9(0.52g)溶解于MeOH(15mL)中并用在Et2O(7.5mL)中的5M HCl处理2h。将混合物真空浓缩并将固体真空干燥，得到白色固体状的化合物ent-9’。
LC/MS(方法14)：RT 1.31min。

[0121] (4aR，10aR)-1-丙基-1，2，3，4，4a，5，10，10a-八氢-苯并[g]喹啉-6，7-二醇氢溴酸盐(化合物10)

[0122]

[0123] 在室温下将化合物9(0.5g)溶解于99％EtOH(5mL)中并用在Et2O(4mL)中2M HCl处理过夜。将粗混合物真空浓缩，使残余物在EtOAc和10％NaOH水溶液(5mL)之间分层。水层经EtOAc萃取，合并的有机层经盐水洗涤，干燥(MgSO4)并真空浓缩。在室温下将残余物溶解于99％EtOH(5mL)中并用丙醛(0.52mL)、NaCNBH3(0.45g)和AcOH(3滴)处理过夜。使粗混合物在饱和NaHCO3水溶液(12.5mL)、水(12.5mL)和EtOAc(2x25mL)之间分层。
合并的有机层经盐水洗涤，干燥(MgSO4)并真空浓缩。通过硅胶色谱法(MeOH/EtOAc)将残余物纯化。在150℃、微波条件下用48％HBr(3mL)处理所得中间体1h，然后将粗混合物在
4℃储存过夜。通过过滤分离沉淀的物质并真空干燥。化合物10的产量：103mg固体。LC/MS(方法25)：RT 0.77min。

[0124] (4aS，10aS)-1-丙基-1，2，3，4，4a，5，10，10a-八氢-苯并[g]喹啉-6，7-二醇氢溴酸盐(化合物ent-10).

[0125]

[0126] 依照针对化合物10所述的步骤以化合物ent-9’(0.5g；在还原性胺化步骤之前通过在EtOAc和10％NaOH水溶液之间分层释放出HCl盐)为原料。化合物ent-10的产量：70mg固体。LC/MS(方法25)：RT 0.70min。将少量化合物ent-10样品溶解于MeOH中并让其在2个月内在室温缓慢结晶。收集形成的白色晶体并经X射线分析(参见图1)。通过X射线晶体学确定化合物ent-10的绝对构型并明确确定化合物9和10及因此其衍生物的立体化学。

[0127] (6aR，10aR)-7-正丙基-6，6a，7，8，9，10，10a，11-八氢-1，3-二氧杂-7-氮杂-环戊二烯并[a]蒽盐酸盐(化合物11)

[0128]

[0129] 在 氩 气 气 氛 下 将 化 合 物 10(7.80g)、Cs2CO3(18.6g)、CH2BrCl(2.2mL) 和DMF(180mL)加热至100℃，保持1h。将粗反应混合物加入分液漏斗中并用冰/水(300mL)稀释。所得混合物用Et2O(3x300mL)萃取。合并的有机层经盐水(200mL)洗涤，干燥(MgSO4)并真空浓缩。通过硅胶色谱法(EtOAc/MeOH)将残余物纯化，得到浅红色固体，将其溶解于MeOH(25mL)中并通过加入在Et2O(20mL)中的2M HCl及Et2O(100mL)使之作为盐酸盐沉淀。通过过滤分离沉淀产物并真空干燥。化合物11的产量：5.1g.LC/MS(方法111)：RT +0.70min。ELSD 100％。UV 97.0％。MH ：274.0。

[0130] (4aR，10aR)-n-1-丙 基-2，3，4，4a，5，7，8，9，10，10a- 十 氢 -1H-苯 并 [g] 喹啉-6-酮(化合物12)

[0131] 可如EP专利No.1274411中所述准备化合物12的合成，所述专利的内容通过引用结合于本文中。在上述专利中，化合物12被称为(-)-GMC6650。

[0132] 实验部分

[0133] 实施例1：体内给药后化合物11和12转变成化合物10的含儿茶酚的活性代谢物[0134]

[0135] 发现所述活性代谢物(即化合物10)在体外对D1和D2受体起有效激动剂的作用。如下面更详细讨论的，体内实验产生的数据表明该活性代谢物具有比其它多巴胺激动剂优异的特征并与采用L-DOPA/阿扑吗啡治疗看到的功效相同。

[0136] 实施例2：化合物10的药理学测试

[0137] D1cAMP测定

[0138] 按照如下测定在稳定表达人重组D1受体的CHO细胞中所述化合物刺激或抑制D1受体介导的cAMP形成的能力。将细胞以11000细胞/孔的浓度接种于96孔板中，3天后进行实验。在实验的当天，在预热的G缓冲液(在PBS(磷酸盐缓冲盐水)中的1mM MgCl2、0.9mM CaCl2和1mM IBMX(3-异丁基-1-甲基黄嘌呤))中将细胞洗涤一次并通过加入30nM A68930和G缓冲液中稀释的测试化合物的100微升混合物(拮抗)或100微升在G缓冲液中稀释的测试化合物(激动)启动该测定。

[0139] 将所述细胞在37℃孵育20分钟并通过加入100微升S缓冲液(0.1M HCl和0.1mM CaCl2)终止反应，将各板在4℃放置1h。加入68微升N缓冲液(0.15M NaOH和60mM NaOAc)并将各板摇晃10分钟。将60微升反应物转移至包含40微升60mM乙酸钠(pH 6.2)的cAMP FlashPlates(DuPont NEN)中并加入100微升IC mix(50mM乙酸钠，pH 6.2、0.1％叠氮化125
钠、12mM CaCl2、1％BSA(牛血清白蛋白)和0.15μCi/mL I-cAMP)。在4℃孵育18h后，将各板洗涤一次并在Wallac TriLux计数仪中计数。在本测定中，化合物10被证明起作D1激动剂的作用。

[0140] D2cAMP测定

[0141] 按照如下测定在被人D2受体转染的CHO细胞中所述化合物刺激或抑制D2受体介导抑制cAMP形成的能力。将细胞以8000细胞/孔的浓度接种于96孔板中，3天后进行实验。在实验的当天，在预热的G缓冲液(在PBS中的1mM MgCl2、0.9mM CaCl2和1mM IBMX)中将细胞洗涤一次并通过加入1μM喹吡罗、10μM毛喉素和在G缓冲液中的测试化合物的100微升混合物(拮抗)或10μM毛喉素和在G缓冲液中的测试化合物的100微升混合物(激动)启动该测定。

[0142] 将细胞在37℃孵育20分钟并通过加入100微升S缓冲液(0.1M HCl和0.1mMCaCl2)终止反应，将各板在4℃放置1h。加入68微升N缓冲液(0.15M NaOH和60mM乙酸钠)并将各板摇晃10分钟。将60微升反应物转移至包含40微升60mMNaOAc(pH 6.2)的cAMP FlashPlates(DuPont NEN)中并加入100微升IC mix(50mMNaOAc，pH 6.2、0.1％
125
叠氮化钠、12mM CaCl2、1％BSA和0.15μCi/ml I-cAMP)。在4℃孵育18h后，将各板洗涤一次并在Wallac TriLux计数仪中计数。在本测定中，化合物10被证明起作D2激动剂的作用。

[0143] D5测定

[0144] 在hD5转染的CHO-Ga16细胞中通过多巴胺作用浓度依赖性刺激胞内Ca2+释放。向细胞中加入氟-4(一种钙指示剂染料)，保持1h。通过FLIPR(荧光成像读数仪)监控钙响应(荧光变化)2.5min。将来自各数据点的两个孔的峰响应(EC50)平均，并与药物浓度作图(针对多巴胺，参见图2)。在本测定中，化合物10被证明起作D5激动剂的作用。

[0145] 6-OHDA大鼠模型

[0146] 多巴胺激动剂可对D1受体、D2受体或两者具有活性。可采用在具有单侧6-OHDA损伤的大鼠中的旋转响应来评估化合物刺激两种受体类型和诱导旋转的能力(Ungerstedt和Arbuthnott，Brain Res.，1970，24，485；Setler等人.Eur.J.Pharmacol.，1978，50(4)，419；和Ungerstedt等人.“Advances in Dopamine Research”(Kohsaka，Ed.)，Pergamon Press，1982，Oxford，p.219)。6-OHDA(6-羟基多巴胺)是神经生物学家用来在实验动物脑内的注射部位选择性地杀死多巴胺能神经元的神经毒素。在6-OHDA模型中，通过将
6-OHDA注射到位于黑质前面的前脑内侧束内来破坏脑的一侧(单侧)的黑质纹状体多巴胺细胞。与诸如阿扑吗啡的多巴胺激动剂的刺激结合的这种单侧注射将诱导如同仅脑的一侧受到刺激的旋转行为。实验由确定讨论的化合物诱导旋转的最低有效剂量(MED)组成。一旦确定MED，进行第二实验以确定化合物克服奈莫必利阻断的MED(MED奈莫必利)。奈莫必利是阻断D2受体的D2拮抗剂，因此任何观察到的旋转可能取决于对D1受体的活性。
最后，一旦知道MED奈莫必利，使用该MED奈莫必利剂量并观察D1拮抗剂(单独的SCH 23390)、D2拮抗剂(单独的奈莫必利)的效果和最后SCH 23390和奈莫必利联合处理的效果来进行第三实验。此第三实验证实：作为任一单独的拮抗剂的化合物对两种受体的活性仅能部分抑制测试化合物诱导的旋转响应而联合处理完全阻断大鼠中的所有旋转[Arnt和Hyttel，Psychopharmacology，1985，85(3)，346；和Sonsalla等人，J.Pharmacol Exp.Ther.，1988，
247(1)，180]。采用阿扑吗啡作为混合D1/D2激动剂的原理论证化合物验证了此模型。

[0147] 在此模型中，与阿扑吗啡的D1/D2比为约3相比，化合物10具有‘阿扑吗啡’样特征，其中D1/D2比为约2-4。此外，观察到的化合物作用时间为约18h，这明显高于使用L-DOPA/阿扑吗啡所看到的作用时间。对于D2-激动剂(以普拉克索和罗替戈汀为例)不能观察到D1组分。

[0148] 优化模型

[0149] 在严重多巴胺耗竭的小鼠模型中阿扑吗啡和L-DOPA能逆转运动缺陷。阿扑吗啡和L-DOPA都刺激D1和D2多巴胺受体。在此模型中普拉克索(D2受体的激动剂)是无效的。

[0150] 按照如下进行实验：使用先用MPTP(2x15mg/kg皮下)处理且有稳定损伤的小鼠并用载体处理的小鼠作为正常对照。MPTP(1-甲基-4-苯基-1，2，3，6-四氢吡啶)是通过杀死脑黑质中的某些神经元而引起永久性帕金森病症状的神经毒素。用它来研究猴和小鼠中的疾病。在实验的当天，用AMPT(250mg/kg皮下)处理小鼠然后使其回到饲养笼，在1.5小时后，将它们放入运动装置的单个笼子中。AMPT(α-甲基-p-酪氨酸)是短暂降低脑儿茶酚胺活性(在这种情况下，具体为多巴胺水平)的药物。注射AMPT三小时后，尝试用化合物10挽救运动缺陷并记录活性另外1.5小时。如载体对照中水平提高所证实，由于处理和注射使动物紧张，挽救治疗后收集的第一个30min数据被“污染”，因此，采用最后1小时的记录数据进行数据分析。对各种多巴胺能化合物逆转此模型中产生的运动缺陷的能力进行测试。在小鼠中L-DOPA/苄丝肼和阿扑吗啡都以剂量依赖性方式恢复运动。苄丝肼是不能穿过血脑屏障的DOPA脱羧酶抑制剂；它被用于在脑外部防止L-DOPA代谢成多巴胺。相反，在小鼠内D2激动剂普拉克索和溴隐亭不恢复运动。

[0151] 使用此模型来评价化合物10是否相对D2激动剂展示与L-DOPA和阿扑吗啡相同的优越性。进行化合物10的剂量响应实验且存在逆转由内生多巴胺严重耗竭诱导的运动不足缺陷的剂量依赖性趋势。在此模型中进行直接比较阿扑吗啡、普拉克索和化合物10效果的最终实验并证实在MPTP处理的小鼠中化合物10能恢复运动且优于普拉克索。

[0152] 使用首次用于实验的6-OHDA大鼠的运动障碍模型的诱导

[0153] 使用20只具有单侧6-OHDA损伤的雄性Sprague Dawley大鼠来测试与L-DOPA/苄丝肼(6mg/kg/15mg/kg皮下给药；n＝7；第2组)和阿扑吗啡(1mg/kg皮下给药；n＝6；第3组)相比化合物10(皮下给药；n＝7；第1组)对运动障碍的诱导。苄丝肼是不能穿过血脑屏障的DOPA脱羧酶抑制剂；它被用于在脑外部防止L-DOPA代谢成多巴胺。在6-OHDA手术后三周，测试2.5mg/kg苯丙胺诱导的动物旋转反应，与动物对主要对脑的损伤侧起作用的诸如L-DOPA和阿扑吗啡的直接激动剂的响应相比，苯丙胺诱导同侧回转(苯丙胺通过引起动物在相反方向旋转的未损伤侧的完整神经元提高脑内多巴胺水平)。本研究中包括的所有动物满足大于350转/60min的标准。接着将大鼠随机分配到三个处理组中，以平衡各组的所述动物对苯丙胺的旋转响应。

[0154] 在实际运动障碍实验中，大鼠接受每日一次测试化合物皮下注射并在注射后观察3h。在整个3h期间内如前面所述使用异常不随意运动量表(AIMS)每20min观察各动物1分钟，观察运动障碍的存在(Lundblad等人，Eur.J Neurosci.，15，120，(2002))。大鼠接受药物连续14天并在第1、2、3、4、5、8、10和12对动物评分。两因素重复测定ANOVA显示存在明显的治疗效果、时间效果和治疗-时间相互作用(p＜0.001，在所用情况下)。使用Holm-Sidak方法的Post hoc比较表明：与用L-DOPA或阿扑吗啡(得分为约70)处理的动物相比，用化合物10处理的动物具有明显更低的运动障碍(得分为约30)。L-DOPA和阿扑吗啡处理组之间没有区别。此实验后，从第15-19天给所有大鼠皮下注射化合物10以确定实施例I如何影响阿扑吗啡和L-DOPA组中观察到的运动障碍严重度。在实验的第19天(对应化合物10的5天)进行运动障碍评分。数据显示L-DOPA和阿扑吗啡诱导的运动障碍的部分逆转至接近化合物10诱导的运动障碍水平(与处理12天后观察到的约30的得分相比，化合物10没有引起第1组中运动障碍的提高)。

[0155] 运动障碍大鼠模型

[0156] 针对用普拉克索或化合物10逆转L-DOPA诱导的运动障碍进行分开的运动障碍研究。简单而言，用L-DOPA/苄丝肼(6/15mg/kg皮下)处理18只动物7天。在第1、3和5天观察动物并对AIMS评分。然后使用第5天的得分将动物分成3组，每组6只动物。第1组继续每日L-DOPA处理。用化合物10(皮下给药)处理第2组。用普拉克索(0.16mg/kg皮下)处理第3组。继续每日处理10天并在第1、5、9、10天对运动障碍的量评分。两因素重复测定方差分析表明用化合物10处理的动物的运动障碍明显比普拉克索组和L-DOPA/苄丝肼组少。普拉克索组的运动障碍明显比L-DOPA/苄丝肼组少。因此，在逆转L-DOPA诱导的运动障碍方面，化合物10具有比普拉克索优异的特征。

[0157] 在MPTP处理的普通狨中的抗帕金森病作用

[0158] 使用6只MPTP处理的狨进行实验(每日2.0mg/kg，达连续5天，溶解于无菌0.9％盐水溶液中)。之前所有动物用L-DOPA(12.5mg/kg p.o.加上卡比多巴12.5mg/kg p.o.)每日给药达30天进行处理以诱导运动障碍。在研究之前，所有受试者展示稳定的运动缺陷，包括基础运动活力显著减少、较差的运动协调、异常和/或僵硬的姿势、减少的警觉和头部检查运动。在给药任何测试化合物之前60分钟给药多潘立酮。多潘立酮是抑制恶心和呕吐的抗多巴胺能药物。采用测试笼进行运动活力评估，所述测试笼由8个光电开关组成，所述8个光电开关由8个红外光束组成，所述光束策略性地放在笼内且将光束的中断记录为一次计数。接着将单位时间段内的光束计数的总数与时程作图或表示为用于总活力的曲线(AUC)下面积。由对处理不知情的训练过的观察员进行运动无能评估。

[0159] 如已经描述的，L-DOPA(12.5mg/kg，p.o.)提高运动活力并逆转运动无能(motor disability)(Smith，等人.Mov.Disord.2002，17(5)，887)。为此刺激选择的剂量在此药物的剂量响应曲线的顶部。化合物10(皮下给药)产生在运动活力方面的剂量相关提高和运动无能逆转，所述提高和逆转倾向于以比L-DOPA(12.5mg/kg，p.o.)所产生的更大的响应产生。与L-DOPA相比，两种测试化合物产生延长的运动无能逆转且功效与L-DOPA一样。与L-DOPA相比，化合物10产生延长的运动无能逆转且功效与L-DOPA一样。

[0160] 实施例3：化合物11的药理学测试

[0161] D1cAMP测定

[0162] 按照如下测定在稳定表达人重组D1受体的CHO细胞中所述化合物刺激或抑制D1受体介导的cAMP形成的能力。将细胞以11000细胞/孔的浓度接种于96孔板中，3天后进行实验。在实验的当天，在预热的G缓冲液(在PBS(磷酸盐缓冲盐水)中的1mM MgCl2、0.9mM CaCl2和1mM IBMX(3-异丁基-1-甲基黄嘌呤))中将细胞洗涤一次并通过加入30nM A68930和在G缓冲液中稀释的测试化合物的100微升混合物(拮抗)或100微升在G缓冲液中稀释的测试化合物(激动)启动该测定。

[0163] 将细胞在37℃孵育20分钟并通过加入100微升S缓冲液(0.1M HCl和0.1mMCaCl2)终止反应，将各板在4℃放置1h。加入68微升N缓冲液(0.15M NaOH和60mM NaOAc)并将各板摇晃10分钟。将60微升反应物转移至包含40微升60mM乙酸钠(pH 6.2)的cAMP FlashPlates(DuPont NEN)中并加入100微升IC mix(50mM乙酸钠，pH 6.2、0.1％
125
叠氮化钠、12mM CaCl2、1％BSA(牛血清白蛋白)和0.15μCi/mL I-cAMP)。在4℃孵育18h后，将各板洗涤一次并在Wallac TriLux计数仪中计数。在本测定中，发现活性代谢物或化合物10是D1激动剂。

[0164] D2cAMP测定

[0165] 按照如下测定在被人D2受体转染的CHO细胞中所述化合物刺激或抑制D2受体介导的抑制cAMP形成的能力。将细胞以8000细胞/孔的浓度接种于96孔板中，3天后进行实验。在实验的当天，在预热的G缓冲液(在PBS中的1mM MgCl2、0.9mM CaCl2和1mM IBMX)中将细胞洗涤一次并通过加入1μM喹吡罗、10μM毛喉素和在G缓冲液中的测试化合物的100微升混合物(拮抗)或10μM毛喉素和在G缓冲液中的测试化合物的100微升混合物(激动)启动该测定。

[0166] 将细胞在37℃孵育20分钟并通过加入100微升S缓冲液(0.1M HCl和0.1mMCaCl2)终止反应，将各板在4℃放置1h。加入68微升N缓冲液(0.15M NaOH和60mM乙酸钠)并将各板摇晃10分钟。将60微升反应物转移至包含40微升60mMNaOAc(pH 6.2)的cAMP FlashPlates(DuPont NEN)中并加入100微升IC mix(50mMNaOAc，pH 6.2、0.1％
125
叠氮化钠、12mM CaCl2、1％BSA和0.15μCi/ml I-cAMP)。在4℃孵育18h后，将各板洗涤一次并在Wallac TriLux计数仪中计数。在本测定中，发现活性代谢物或化合物10是D2激动剂。

[0167] D5测定

[0168] 在hD5转染的CHO-Ga16细胞中通过多巴胺作用浓度依赖性刺激胞内Ca2+释放。向细胞中加入氟-4(一种钙指示剂染料)，保持1h。通过FLIPR(荧光成像读数仪)监控钙反应(荧光变化)2.5min。将来自各数据点的两个孔的峰响应(EC50)平均并与药物浓度作图。在本测定中，发现活性代谢物或化合物10是D5激动剂。

[0169] 6-OHDA大鼠模型

[0170] 多巴胺激动剂可对D1受体、D2受体或两者具有活性。可采用在具有单侧6-OHDA损伤的大鼠中的旋转响应来评估化合物刺激两种受体类型和诱导旋转的能力(Ungerstedt和 Arbuthnott，Brain Res.24，485(1970)；Setler 等 人，Eur.J.Pharmacol.，50(4)，419(1978)；和Ungerstedt，等人，“Advances in dopamine Research”(Kohsaka，Ed.)，Pergamon Press，1982，Oxford，p.219)。6-OHDA(6-羟基多巴胺)是神经生物学家用来在实验动物脑内的注射部位选择性地杀死多巴胺能神经元的神经毒素。在6-OHDA模型中，通过将6-OHDA注射到位于黑质前面的前脑内侧束内来破坏脑的一侧(单侧)的黑质纹状体多巴胺细胞。与诸如阿扑吗啡的多巴胺激动剂的刺激结合的这种单侧注射将诱导如同仅脑的一侧受到刺激的旋转行为。实验由确定讨论的化合物诱导旋转的最低有效剂量(MED)组成。一旦确定MED，进行第二实验以确定化合物克服奈莫必利阻断的MED(MED奈莫必利)。奈莫必利是阻断D2受体的D2拮抗剂，因此任何观察到的旋转可能取决于对D1受体的活性。
最后，一旦知道MED奈莫必利，使用该MED奈莫必利剂量并观察D1拮抗剂(单独的SCH 23390)、D2拮抗剂(单独的奈莫必利)的效果和最后SCH 23390和奈莫必利联合处理的效果来进行第三实验。此第三实验证实：作为任一单独的拮抗剂的化合物对两种受体的活性仅能部分抑制测试化合物诱导的旋转响应而联合处理完全阻断大鼠中的所有旋转(Arnt和Hyttel；
Psychopharmacology，85(3)，346(1985)；和 Sonsalla 等 人，J.Pharmacol Exp.THer.，
247(1)，180，(1988))。采用阿扑吗啡作为混合D1/D2激动剂的原理论证化合物验证了此模型。

[0171] 在此模型中，与阿扑吗啡的D1/D2比为约3相比，活性代谢物或化合物10和化合物11具有‘阿扑吗啡’样特征，其中D1/D2比为约2。此外，观察到的化合物作用时间为约18h，这明显高于使用L-DOPA/阿扑吗啡所看到的作用时间。对于D2-激动剂(以普拉克索和罗替戈汀为例)不能观察到D1组分。

[0172] 优化模型

[0173] 在严重多巴胺耗竭的小鼠模型中阿扑吗啡和L-DOPA能逆转运动缺陷。阿扑吗啡和L-DOPA都刺激D1和D2多巴胺受体。在此模型中普拉克索(D2样受体的激动剂)是无效的。

[0174] 按照如下进行实验：使用之前用MPTP(2x15mg/kg皮下)处理且有稳定损伤的小鼠并用载体处理的小鼠作为正常对照。MPTP(1-甲基-4-苯基-1，2，3，6-四氢吡啶)是通过杀死脑黑质中的某些神经元而引起永久性帕金森病症状的神经毒素。用它来研究猴和小鼠中的疾病。在实验的当天，用AMPT(250mg/kg皮下)处理小鼠然后使其回到饲养笼，在1.5小时后将它们放入运动装置的单个笼子中。AMPT(α-甲基-p-酪氨酸)是短暂降低脑儿茶酚胺活性(在这种情况下，尤其是多巴胺水平)的药物。注射AMPT后三小时，尝试用活性代谢物或化合物10挽救运动缺陷并记录活力另外1.5小时。如载体对照中水平提高所证实，由于处理和注射使动物紧张，挽救处理后收集的第一个30min数据被“污染”，因此，采用最后1小时的记录数据进行数据分析。对各种多巴胺能化合物逆转此模型中产生的运动缺陷的能力进行测试。在小鼠中L-DOPA/苄丝肼和阿扑吗啡都以剂量依赖性方式恢复运动。苄丝肼是不能穿过血脑屏障的DOPA脱羧酶抑制剂；它被用于在脑外部防止L-DOPA代谢成多巴胺。相反，在小鼠内D2激动剂(普拉克索和溴隐亭)没有恢复运动。

[0175] 使用此模型来评价活性代谢物或化合物10是否相对D2激动剂展示与L-DOPA和阿扑吗啡相同的优越性。进行剂量响应实验且存在逆转由内生多巴胺严重耗竭诱导的运动不足缺陷的剂量依赖性趋势。进行直接比较阿扑吗啡、普拉克索和化合物10效果的最终实验。已证实在MPTP处理的小鼠中化合物10能恢复运动且优于普拉克索。

[0176] 运动障碍大鼠模型

[0177] 使用文献中报道的大鼠运动障碍模型(Lundblad等人，Eur.J Neurosci.，2002，15，120)测定在‘帕金森’大鼠中活性代谢物与L-DOPA/苄丝肼针对被评估为异常不随意运动(AIM)的运动障碍的作用。

[0178] 研究设计

[0179] 在整个研究中，动物在t＝-20min.0-180min每天一次接受L-DOPA/苄丝肼(6mg/kg和15mg/kg皮下)或活性代谢物(化合物10)(B组)。对动物进行运动障碍评分。第1-14天：用L-DOPA/苄丝肼(A组)或活性代谢物(化合物10)(B组)对所有动物给药。

[0180] 在第1、3、5、8和12天，如已经描述的，按照AIM-评分通过使用异常不随意运动量度(AIMS)记录运动障碍给动物评分(Lundblad等人，Eur.J Neurosci.，2002，15，120)。第15-26天：用测试药物(与B组一样)代替L-DOPA/苄丝肼处理A组动物。第15、16、17、
19、22、24和26天：按照AIM-评分给动物评分。

[0181] 6-OHDA大鼠中L-DOPA诱导的运动障碍的逆转

[0182] 处理8天后，A组动物的运动障碍得分为10-12，直到第12天，其保持恒定。相比之下，B组动物具有明显较少的运动障碍(得分为2-4)。对B组而言，在研究过程中，运动障碍的程度没有变化。将A组动物从L-dopa/苄丝肼转变为测试药物之后，它们的运动障碍水平逐渐下降到在另一组动物上观察到的水平。因此，化合物11比L-DOPA诱导明显更少的运动障碍且能减少由L-DOPA诱导的运动障碍。

[0183] 在MPTP处理的普通狨中的抗帕金森病作用

[0184] 使用6只MPTP处理的狨进行实验(每日2.0mg/kg，达连续5天，溶解于无菌0.9％盐水溶液中)。之前用L-DOPA(12.5mg/kg p.o.加上卡比多巴12.5mg/kg p.o.)每日给药达30天处理所有动物以诱导运动障碍。在研究之前，所有受试者展示稳定的运动缺陷，包括基础运动活力显著减少、较差的运动协调、异常和/或僵硬的姿势、减少的警觉和头部检查运动。在给药任何测试化合物之前60分钟给药多潘立酮。多潘立酮是抑制恶心和呕吐的抗多巴胺能药物。采用测试笼进行运动活力评估，所述测试笼由8个光电开关组成，所述8个光电开关由8个红外光束组成，所述光束策略性地放在笼内且将光束的中断记录为一次计数。接着将单位时间段内的光束计数的总数与时程作图或表示为用于总活力的曲线(AUC)下面积。由对处理不知情的训练过的观察员进行运动无能评估。

[0185] 如已经描述的，L-DOPA(12.5mg/kg，p.o.)提高运动活力并逆转运动无能(Smith等人.Mov.Disord.2002，17(5)，887)。为此刺激选择的剂量在此药物的剂量响应曲线的顶部。化合物11(口服给药)及化合物10(皮下给药)产生在运动活力方面的剂量相关提高和运动无能逆转，所述提高和逆转倾向于以比L-DOPA(12.5mg/kg，p.o.)所产生的更大的响应产生。与L-DOPA相比，两种测试化合物产生延长的运动无能逆转且功效与L-DOPA一样。

[0186] 体外肝细胞测定

[0187] 冷藏的汇集雄性大鼠肝细胞(Sprague Dawley)和来自10个供体(男性和女性)的汇集人肝细胞购自In Vitro Technologies Inc.，BA，USA。在水浴中将细胞在37℃解冻，对活细胞计数并在96板中以总共100微升接种于含有5mM Hepes缓冲液的Dulbecco改进的Eagle培养基(高葡萄糖)，各孔中分别包含250.000细胞/mL大鼠肝细胞和500.000细胞/mL人肝细胞。预孵育15min后开始孵育，对于大鼠肝细胞在0、5、15、30和60min时间点终止而对于人肝细胞在0、30、60、90和120min时间点终止。通过加入包含10％1M HCl的等量的冰冷却的乙腈终止孵育。离心分离后，将20微升上清液注射到HPLC Column Atlantis dC18 3μm，150x 2.1mm i.d.(Waters，MA，USA)中。流动相具有以下组分：A：5％乙腈、95％H2O，3.7ml/l 25％NH3水溶液，1.8mL/L甲酸。流动相B：100％乙腈和0.1％甲酸。流速为0.3ml/min。5min-20min内运行的梯度为0％-75％B并使用Q-TOFmicro质谱仪(Waters，MA，USA)分析洗脱液。通过精确质量测定并与产生相同保留时间的合成标准比较来确认产物/代谢物的形成。在本测定中，证实了化合物11代谢成化合物10。

[0188] 实施例4：化合物12的药理学测试

[0189] D1cAMP测定

[0190] 按照如下测定在稳定表达人重组D1受体的CHO细胞中所述化合物刺激或抑制D1受体介导的cAMP形成的能力。将细胞以11000细胞/孔的浓度接种于96孔板中，3天后进行实验。在实验的当天，在预热的G缓冲液(在PBS(磷酸盐缓冲盐水)中的1mM MgCl2、0.9mM CaCl2和1mM IBMX(3-异丁基-1-甲基黄嘌呤))中将细胞洗涤一次并通过加入100微升30nM A68930和在G缓冲液中稀释的测试化合物的混合物(拮抗)或100微升在G缓冲液中稀释的测试化合物(激动)启动该测定。

[0191] 将细胞在37℃孵育20分钟并通过加入100微升S缓冲液(0.1M HCl和0.1mM CaCl2)终止反应，将各板在4℃放置1h。加入68微升N缓冲液(0.15MNaOH和60mM NaOAc)并将各板摇晃10分钟。将60微升反应物转移至包含40微升60mM乙酸钠(pH 6.2)的cAMP FlashPlates(DuPont NEN)中并加入100微升IC mix(50mM乙酸钠，pH 6.2、0.1％叠氮化125
钠、12mM CaCl2、1％BSA(牛血清白蛋白)和0.15μCi/mL I-cAMP)。在4℃孵育18h后，将各板洗涤一次并在Wallac TriLux计数仪中计数。在本测定中，发现活性代谢物(即化合物10)是D1激动剂。

[0192] D2cAMP测定

[0193] 按照如下测定在被人D2受体转染的CHO细胞中所述化合物刺激或抑制D2受体介导抑制cAMP形成的能力。将细胞以8000细胞/孔的浓度接种于96孔板中，3天后进行实验。在实验的当天，在预热的G缓冲液(在PBS中的1mM MgCl2、0.9mM CaCl2和1mM IBMX)中将细胞洗涤一次并通过加入1μM喹吡罗、10μM毛喉素和在G缓冲液中的测试化合物的100微升混合物(拮抗)或10μM毛喉素和在G缓冲液中的测试化合物的100微升混合物(激动)启动该测定。

[0194] 将细胞在37℃孵育20分钟并通过加入100微升S缓冲液(0.1M HCl和0.1mMCaCl2)终止反应，将各板在4℃放置1h。加入68微升N缓冲液(0.15M NaOH和60mM乙酸钠)并将各板摇晃10分钟。将60微升反应物转移至包含40微升60mMNaOAc(pH 6.2)的cAMP FlashPlates(DuPont NEN)中并加入100微升IC mix(50mMNaOAc，pH 6.2、0.1％
125
叠氮化钠、12mM CaCl2、1％BSA和0.15μCi/ml I-cAMP)。在4℃孵育18h后，将各板洗涤一次并在Wallac TriLux计数仪中计数。在本测定中，发现活性代谢物(即化合物10)是D2激动剂。

[0195] D5测定

[0196] 在hD5转染的CHO-Ga16细胞中通过多巴胺浓度依赖性刺激胞内Ca2+释放。向细胞中加入氟-4(一种钙指示剂染料)，保持1h。通过FLIPR(荧光成像读数仪)监控钙反应(荧光变化)2.5min。将来自各数据点的两个孔的峰响应(EC50)平均并与药物浓度作图(针对多巴胺，参见图1)。在本测定中，发现活性代谢物(即化合物10)是D5激动剂。

[0197] 6-OHDA大鼠模型

[0198] 多巴胺激动剂可对D1受体、D2受体或两者具有活性。可采用在具有单侧6-OHDA损伤的大鼠中的旋转响应来评估化合物刺激两种受体类型和诱导旋转的能力(Ungerstedt和 Arbuthnott；Brain Res.，24，485(1970)；Setler 等 人，Eur.J.Pharmacol.，50(4)，419(1978)；和 Ungerstedt等人，“Advances in Dopamine Research”(Kohsaka，Ed.)，Pergamon Press，1982，Oxford，p.219)。6-OHDA(6-羟基多巴胺)是神经生物学家用来在实验动物脑内的注射部位选择性地杀死多巴胺能神经元的神经毒素。在6-OHDA模型中，通过将6-OHDA注射到位于黑质前面的前脑内侧束内来破坏脑的一侧(单侧)的黑质纹状体多巴胺细胞。与诸如阿扑吗啡的多巴胺激动剂的刺激结合的这种单侧注射将诱导如同仅脑的一侧受到刺激的旋转行为。实验由确定讨论的化合物诱导旋转的最低有效剂量(MED)组成。一旦确定MED，进行第二实验以确定化合物克服奈莫必利阻断的MED(MED奈莫必利)。奈莫必利是阻断D2受体的D2拮抗剂，因此任何观察到的旋转可能取决于对D1受体的活性。
最后，一旦知道MED奈莫必利，使用该MED奈莫必利剂量并观察D1拮抗剂(单独的SCH 23390)、D2拮抗剂(单独的奈莫必利)的效果和最后SCH 23390和奈莫必利联合处理的效果来进行第三实验。此第三实验证实：作为任一单独的拮抗剂的化合物对两种受体的活性仅能部分抑制测试化合物诱导的旋转响应而联合处理完全阻断大鼠中的所有旋转[Arnt和Hyttel，Psychopharmacology，1985，85(3)，346；和Sonsalla等人J.Pharmacol Exp.Ther.，1988，
247(1)，180]。采用阿扑吗啡作为混合D1/D2激动剂的原理论证化合物验证了此模型。

[0199] 在此模型中，与阿扑吗啡的D1/D2比为约3相比，化合物10和12具有‘阿扑吗啡’样特征，其D1/D2比为约2-4。此外，观察到的化合物作用时间为约18h，这明显高于使用L-DOPA/阿扑吗啡所看到的作用时间。对于D2-激动剂(以普拉克索和罗替戈汀为例)不能观察到D1组分。

[0200] 优化模型

[0201] 在严重多巴胺耗竭的小鼠模型中阿扑吗啡和L-DOPA能逆转运动缺陷。阿扑吗啡和L-DOPA都刺激D1和D2多巴胺受体。在此模型中普拉克索(D2受体的激动剂)是无效的。

[0202] 按照如下进行实验：使用之前用MPTP(2x15mg/kg皮下)处理且有稳定损伤的小鼠并用载体处理的小鼠作为正常对照。MPTP(1-甲基-4-苯基-1，2，3，6-四氢吡啶)是通过杀死脑黑质中的某些神经元而引起永久性帕金森病症状的神经毒素。用它来研究猴和小鼠中的疾病。在实验的当天，用AMPT(250mg/kg皮下)处理小鼠然后使其回到饲养笼，保持1.5小时，之后将它们放入运动装置的单个笼子中。AMPT(α-甲基-p-酪氨酸)是短暂降低脑儿茶酚胺活性(在这种情况下，尤其是多巴胺水平)的药物。注射AMPT后三小时，尝试用化合物10挽救运动缺陷并记录活力另外1.5小时。如载体对照中水平提高所证实，由于处理和注射使动物紧张，挽救处理后收集的第一个30min数据被“污染”，因此，采用最后
1小时的记录数据进行数据分析。对各种多巴胺能化合物逆转此模型中产生的运动缺陷的能力进行测试。在小鼠中L-DOPA/苄丝肼和阿扑吗啡都以剂量依赖性方式恢复运动。苄丝肼是不能穿过血脑屏障的DOPA脱羧酶抑制剂；它被用于在脑外部防止L-DOPA代谢成多巴胺。相反，在小鼠内D2激动剂普拉克索和溴隐亭没有恢复运动。

[0203] 使用此模型来评价化合物10相对D2激动剂是否展示与L-DOPA和阿扑吗啡相同的优越性。进行剂量响应实验且存在逆转由内生多巴胺严重耗竭诱导的运动不足缺陷的剂量依赖性趋势。进行直接比较阿扑吗啡、普拉克索和化合物10效果的最终实验。证实了在MPTP处理的小鼠中化合物10能恢复运动且优于普拉克索。

[0204] 运动障碍大鼠模型

[0205] 使用文献中报道的大鼠运动障碍模型(Lundblad等人，Eur.J Neurosci.，2002，15，120)测定在‘帕金森’大鼠中化合物12相对于L-DOPA/苄丝肼针对被检测为异常不随意运动(AIM)的运动障碍的作用。

[0206] 研究设计

[0207] 在整个研究中，动物在t＝-20min.0-180min每天一次接受L-DOPA/苄丝肼(6mg/kg和15mg/kg皮下)或化合物12(B组)。对动物进行运动障碍评分。第1-14天：用L-DOPA/苄丝肼(A组)或化合物12(B组)对所有动物给药。

[0208] 在第1、3、5、8和12天，如已经描述的，按照AIM-评分通过使用异常不随意运动量度(AIMS)记录运动障碍给动物评分。第15-26天：用化合物12(与B组一样)代替L-DOPA/苄丝肼处理A组动物。第15、16、17、19、22、24和26天：按照AIM-评分给动物评分。

[0209] 结果

[0210] 处理8天后，A组动物的运动障碍得分为70-80，直到第15天，其保持恒定。相比之下，B组动物具有明显较少的运动障碍(得分为10-25)。对B组而言，在研究过程中，运动障碍的程度没有变化。将A组动物从L-dopa/苄丝肼转变为化合物1210天后，它们的运动障碍水平逐渐下降到得分为30-35。因此，化合物12比L-DOPA诱导明显更少的运动障碍且能减少由L-DOPA诱导的运动障碍。

[0211] 在MPTP处理的普通狨中的抗帕金森病作用

[0212] 使用6只MPTP处理的狨进行实验(2.0mg/kg，达连续5天，溶解于无菌0.9％盐水溶液中)。之前用L-DOPA(12.5mg/kg p.o.加上卡比多巴12.5mg/kg p.o.)每日给药达30天处理所有动物以诱导运动障碍。在研究之前，所有受试者展示稳定的运动缺陷，包括基础运动活力显著减少、较差的运动协调、异常和/或僵硬的姿势、减少的警觉和头部检查运动。在给药任何测试化合物之前60分钟给药多潘立酮。采用测试笼进行运动活力评估，所述测试笼由8个光电开关组成，所述8个光电开关由8个红外光束组成，所述光束有策略地放在笼内且将光束的中断记录为一次计数。接着将单位时间段内的光束计数的总数与时程作图或表示为用于总活力的曲线(AUC)下面积。由对处理不知情的训练过的观察员进行运动无能评估。

[0213] 如已经描述的，L-DOPA(12.5mg/kg，p.o.)提高运动活力并逆转运动无能(Smith等人.Mov.Disord.2002，17(5)，887)。为此刺激选择的剂量在此药物的剂量响应曲线的顶部。化合物12(口服给药)及化合物10(口服给药)产生在运动活力方面的剂量相关性提高和运动无能逆转，所述提高和逆转倾向于以比L-DOPA(12.5mg/kg，p.o.)所产生的更大的响应产生。与L-DOPA相比，两种测试化合物产生延长的运动无能逆转且功效与L-DOPA一样。