神经营养因子介导的病症的处理转让专利
申请号 : CN201080012547.3
文献号 : CN102355902A
文献日 : 2012-02-15
发明人 : D·里斯 , 安东尼娅·奥尔西 , 帕特里克·豪森 , 夏宗勤 , 胡雅儿
申请人 : 植物药物公共有限公司
摘要 :
选自A/B-顺式呋甾烷、呋甾烯、螺甾烷和螺甾烯甾体皂甙元以及其酯、醚、酮和糖基化的形式的剂被用于通过在稳态控制下以无毒性的方式调节神经营养因子(NF)而在受治疗者中诱导NF的自身调节的稳态，所述NF例如具有有限并且可管理的副作用的NF BDNF和/或GDNF。有效量的至少一种这种剂被施用于受治疗者，尤其是在许多NF介导的病症，尤其是神经病学、精神病学、炎性、变应性、免疫和肿瘤性病症的处理和预防中以及任何损害或异常的组织中的或与任何损害或异常的组织相关的神经元和其他功能的复原或正常化中，包括当辅助组织(例如皮肤、骨、眼部和肌肉)愈合时和一般的皮肤、骨、眼部和肌肉健康中。
权利要求 :
1.一种通过在稳态控制下以无毒性的方式调节受治疗者的天然神经营养因子(NF)而在受治疗者中诱导NF例如BDNF和/或GDNF的自身调节的稳态的方法，所述方法包括向受治疗者施用有效量的选自A/B-顺式呋甾烷、呋甾烯、螺甾烷和螺甾烯甾体皂甙元以及其酯、醚、酮和糖基化的形式的一种或多种剂。
2.根据权利要求1所述的方法，其中NF的自身调节的稳态的所述诱导伴随与NF例如NGF的过量诱导、过量刺激或过量增强有关的有限并且可管理的副作用和与受体(拮抗)激动作用有关的副作用和与酶结合作用有关的副作用而发生。
3.根据权利要求1所述的方法，其中所述方法与用于NF介导的病症的处理或预防的方法在需要其的人类或非人类的哺乳动物中联合使用，所述NF介导的病症的处理或预防例如选自：(a)神经病学病症的处理或预防，所述神经病学病症例如选自：痴呆，年龄相关的认知缺损，阿尔茨海默氏病，阿尔茨海默氏病型的老年性痴呆(SDAT)，路易体痴呆，血管性痴呆，帕金森氏病，脑炎后帕金森氏综合征，具有除脑炎后的和帕金森氏病之外的致因的帕金森氏综合征，肌营养不良包括面肩肱肌营养不良(FSH)，杜氏肌营养不良症，贝克肌营养不良和布鲁斯氏肌营养不良，富克斯氏营养不良，强直性肌营养不良，角膜营养不良，反射交感性营养不良综合征(RSDSA)，神经血管营养不良，重症肌无力，兰伯特伊顿病，亨廷顿舞蹈病，运动神经元疾病包括肌萎缩侧索硬化(ALS)，婴儿脊髓肌萎缩，多发性硬化症，体位性低血压，疼痛，神经痛，外伤性神经退行性变例如在中风后或意外后(例如外伤性头部或脑损伤或脊髓损伤)，巴腾氏病，科凯恩综合征，唐氏综合征，皮质基底神经节变性，多系统萎缩，脑萎缩，橄榄体脑桥小脑萎缩，齿状核红核萎缩，苍白球丘脑底核萎缩，脊髓延髓萎缩，视神经炎，硬化性全脑炎(SSPE)，注意力缺陷障碍，病毒后脑炎，脊髓灰质炎后综合征，法尔氏综合征，Joubert综合征，格-巴二氏综合征，无脑回，烟雾病，神经元移行障碍，孤独综合征，多聚谷氨酰胺病，尼-皮二氏病，进行性多灶性白质脑病，脑假瘤，雷夫叙姆病，泽韦格综合征，核上性麻痹，弗里德赖希氏共济失调，2型脊髓小脑性共济失调，Rhett综合征，夏-德综合征，结节性硬化症，匹克氏病，慢性疲劳综合征，神经病变包括遗传性神经病变、糖尿病神经病变和有丝分裂神经病变，基于朊病毒的神经退行性变包括克罗伊茨费尔特-雅各布病(CJD)、变异型CJD、新变异型CJD、牛海绵状脑病(BSE)、GSS、FFI、库鲁病和Alper综合征，约瑟夫氏病，急性播散性脑脊髓炎，蛛网膜炎，中枢神经系统血管病变，肢体神经功能的丧失，夏科-马里-图思病，克腊比氏病，脑白质营养不良，易患心脏衰竭，哮喘，癫痫，听觉神经退行性变，黄斑变性，色素性视网膜炎和青光眼引起的视神经退化；(b)精神病学病症的处理或预防，所述精神病学病症例如选自：焦虑性障碍(例如急性应激障碍、惊恐性障碍、广场恐怖症、社交恐怖症、特定恐怖症、强制性障碍、创伤后应激障碍、躯体变形障碍和泛化性焦虑性障碍)，性焦虑性障碍(例如阴道痉挛、男性勃起功能障碍、男性性高潮障碍和女性性高潮障碍)，儿童期病症(例如注意力缺陷多动症(ADHD)、阿斯伯格综合症、孤独症、行为紊乱、对立违抗性障碍、分离焦虑性障碍和图雷特氏症)，进食障碍(例如神经性厌食症和神经性贪食症)，情绪障碍(例如抑郁、严重的抑郁性障碍、双相型障碍(躁狂抑郁)、季节性情感障碍(SAD)、循环情感性障碍和情绪恶劣性障碍)，睡眠障碍，认知精神病学病症(例如谵妄、遗忘症)，人格障碍(例如偏执型人格障碍、分裂样人格障碍、分裂型人格障碍、反社会型人格障碍、边缘型人格障碍、表演型人格障碍、自恋型人格障碍、回避型人格障碍、依赖型人格障碍和强迫型人格障碍)，精神障碍(例如精神分裂症、妄想性障碍、短时精神障碍、精神分裂症样精神障碍、情感分裂性精神障碍和分享性精神障碍)以及物质有关的病症(例如酒精依赖、安非他明类兴奋剂的依赖、大麻类依赖、可卡因依赖、致幻剂依赖、吸入剂依赖、尼古丁依赖、类阿片依赖、苯环利定依赖和镇静剂依赖)；(c)炎性或变应性病症的处理或预防，所述炎性或变应性病症例如选自：咳嗽，瘙痒，食物耐受不良，银屑病，哮吼，肠易激综合征，耳鸣，梅尼尔氏症，应激诱导的溃疡或乙酰水杨酸诱导的溃疡，变应性鼻炎，变应性皮炎，结膜炎，炎症，炎性肠病，回肠炎，胰腺炎，胆囊炎，非变应性鼻炎，食管炎，骨关节炎，类风湿性关节炎，花粉热，对房螨的变应反应，对宠物的变应反应，亨廷顿舞蹈病，急性炎性疼痛，内脏痛，牙齿疼痛和头痛，炎性痛觉过敏，触觉痛觉过敏，变应性皮肤反应，变应性眼部反应，哮喘，动脉粥样硬化，关节炎，慢性溃疡(例如与类风湿性关节炎相关的慢性血管溃疡)，湿疹；维持正常呼吸；减轻咽喉痛和咳嗽；帮助维持正常消化；
减轻胃部不适；帮助从感冒和流感复原；作为解充血药；减轻头疼；缓解肌肉疼痛；缓和轻微疼和痛；提供对牙痛的缓解；提供对口腔或胃溃疡的缓解和维持健康的关节；(d)免疫病症的处理或预防，所述免疫病症例如选自：免疫缺陷病况例如AIDS，免疫过度性病况和受损的免疫特异性的病况例如自身免疫疾病诸如系统性红斑狼疮(SLE)；和(e)肿瘤性病症的处理或预防，所述肿瘤性病症例如选自：乳腺，甲状腺，结肠，肺，卵巢，皮肤，肌肉，胰腺，前列腺，肾，生殖器，血液，免疫系统(例如脾脏、胸腺和骨髓)，脑，外周神经系统和皮肤(如黑色素瘤和卡波西氏肉瘤)的癌症。
4.根据权利要求1所述的方法，其中所述方法与用于修复或再生神经元、神经元功能或神经元网络，实现至神经元的血流的再生或正常化，受损害的组织的再生和愈合例如在神经的创伤后重建、组织移植、神经的手术后重建中，辅助从中风、TIA或其他缺血复原，辅助伤口、骨和肌肉的愈合，神经病学病况或神经元异常的正常化，或用于增加移植细胞的存活率、增加存活的细胞的效力的胎儿细胞、干细胞或其他细胞疗法，或其组合的方法联合使用。
5.根据权利要求1所述的方法，其中所述方法与用于处理或预防异常行为或人格特质的方法联合使用。
6.根据权利要求1所述的方法，其中所述方法与伤口愈合的辅助联合使用。
7.根据权利要求1所述的方法，其中所述方法与用于改善皮肤、骨、眼部、肌肉和其他组织健康例如促进皮肤从老化、起皱或对阳光、风、雨水、寒冷或其他损害介质的暴露的影响复原的非治疗方法，或为健康和安康的其他方面提供的包括肌肉和组织从锻炼、劳动或消耗中的复原，提高耐力并且减少疲劳的感觉的非治疗应用联合使用。
8.根据权利要求1所述的方法，其中所述方法与用于处理和预防人群正常范围中的并且不是可诊断的病症的神经病学和精神病学病况的非治疗方法联合使用。
9.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述方法被用于人类或动物中，所述人类或动物是天然过量表达BDNF或GDNF或对NF模拟或刺激药物的精神病学副作用敏感或对受体(拮抗)激动相互作用或酶相互作用药物的受体介导的或酶介导的副作用敏感的个体。
10.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中使用所述活性剂而无外源性施用的神经营养因子。
11.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述方法在没有对受治疗者的施用程序的临床控制的情况中使用。
12.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述活性剂选自菝葜皂甙元、异菝葜皂甙元、表菝葜皂甙元、表异菝葜皂甙元、知母皂甙BII、米他皂甙元、沙漠皂甙元、地奥惕皂甙元、异地奥惕皂甙元、丝兰肖配基、杨诺皂甙元、美克索皂甙元和马尔可皂甙元和它们相应的酯、醚、酮和皂甙(糖基化)衍生物。
13.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述活性剂选自菝葜皂甙元和异菝葜皂甙元和它们相应的酯、醚、酮和皂甙(糖基化)衍生物。
14.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述一种或多种活性剂与一种或多种辅剂联合使用，所述一种或多种辅剂选自代谢佐剂、增加酮体水平的化合物(生酮化合物)、三羧酸(TCA)循环中间体、体内可转化成TCA中间体的化合物、能量增强化合物和其任何混合物。
15.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述一种或多种活性剂在包含所述活性剂和任何适合的其他成分的组合物中施用，所述组合物例如药物组合物(药物)、食品、食品补充物或饮料(诸如碳酸饮料)或外用组合物诸如化妆品、眼部或皮肤(例如皮肤病学)组合物。
16.根据权利要求13所述的方法，其中所述一种或多种活性剂与一种或多种溶解剂和/或悬浮剂和/或分散剂例如中链甘油三酯(MCT)或中链脂肪酸(MCFA)一起存在于所述组合物中以维持所述活性剂在所述组合物中的溶解或悬浮或分散。
17.选自A/B-顺式呋甾烷、呋甾烯、螺甾烷和螺甾烯甾体皂甙元以及其酯、醚、酮和糖基化的形式的剂，所述剂用于通过向受治疗者施用有效量的一种或多种所述剂而在稳态控制下以无毒性的方式调节受治疗者的天然NF来在受治疗者中诱导NF的自身调节的稳态的方法。
18.根据权利要求17所述的剂，所述剂用于如权利要求2至16任一项所定义的方法。
19.一种包含选自A/B-顺式呋甾烷、呋甾烯、螺甾烷和螺甾烯甾体皂甙元以及其酯、醚、酮和糖基化的形式的一种或多种活性剂的组合物，其用于通过向受治疗者施用所述组合物中的有效量的一种或多种所述剂而在稳态控制下以无毒性的方式调节受治疗者的天然NF来在受治疗者中诱导NF的自身调节的稳态的方法。
20.根据权利要求15所述的组合物，所述组合物用于如权利要求2至16任一项所定义的方法。
21.选自A/B-顺式呋甾烷、呋甾烯、螺甾烷和螺甾烯甾体皂甙元以及其酯、醚、酮和糖基化的形式的一种或多种剂在制备通过在稳态控制下以无毒性的方式调节受治疗者的天然NF而在受治疗者中诱导NF的自身调节的稳态的药物中的用途。
22.根据权利要求21所述的用途，其中所述药物用于如权利要求2至16任一项所定义的方法。
说明书 :
神经营养因子介导的病症的处理
发明领域
[0001] 本发明涉及神经营养因子介导的病症，尤其是神经病学、精神病学、炎性、变应性、免疫和肿瘤性病症的处理和预防，和在任何损害或异常的组织中的或与任何损害或异常的组织相关的神经元和其他功能的复原或正常化，包括当辅助组织(例如皮肤、骨、眼部和肌肉)愈合和一般的皮肤、骨、眼部和肌肉健康时，涉及相关的非治疗方法以及涉及其中所用的化合物和组合物。
[0002] 发明背景
[0003] 神经营养因子(NF)包括神经营养蛋白、TGF-β-超家族、NF和神经节细胞因子，例如神经生长因子(NGF)、脑来源神经营养因子(BDNF)、睫状节神经营养因子(CNTF)、神经营养蛋白3(NT-3)、神经营养蛋白4(NT-4)和神经胶质来源的神经营养因子(GDNF)。神经营养因子与被称作神经营养因子受体(NFr)的细胞受体结合。NFr TrkA介导NGF的作用。NFr TrkB受BDNF、NT-3和NT-4活化。NFr TrkC仅受NT-3活化。NFr低亲和性NGF受体(LNGFR或p57)结合神经营养蛋白家族的所有成员。GDNF的NFr由两种成分组成，GDNF结合结构域(GDNF受体α1(GFRα1)和受体酪氨酸成分Ret。GDNF与GFRα1的结合活化Ret。
[0004] 天然NF的异常的表达涉及许多病症，并且已经在小分子非肽治疗剂的公认推定的NF模拟或活化活性的基础上设计了疗法。原则上，小分子非肽(包括非多肽和非蛋白)治疗剂通常具有超过肽剂的许多优点，包括与肽相比的低花费和相对简单的制备、更简单的处理和储藏、减少的固有毒性、相对简单的向患者尤其是向脑的递送和在研究和开发阶段相对简单的优化。尽管对作为潜在药物的肽NF、NF-拟物和NF增强剂非常感兴趣，但是已经发现它们固有的开发困难、潜在的毒性和其它问题严重限制它们的潜力。
[0005] 大量小分子非肽已经被建议用于处理某些神经病学和精神病学的病症。下列段落强调了出版物中的一些。然而，这些之前的建议都具有剂存在显著不利副作用的特征，这阻碍有效剂量的施用，使得在所有例子中化合物不能被开发以提供处理或预防神经病学和精神病学病症的推向市场的药物。
[0006] 例如，扎利罗登(Sanofi-Aventis)(1-(2-萘-2-基乙基)-4-[3-(三氟甲基)苯基]-3，6-二氢-2H-吡啶盐酸盐；盐的MW：417.5；游离碱的MW：381)，一种血清素5-HT1A受体激动剂，最近被发现也在某种程度上活化NGF。扎利罗登被报道作为对肌萎缩侧索硬化(ALS)的潜在疗法已经完成III期临床试验(Drugs R D.2003，4(6)，第386-388页)并且最近作为阿尔茨海默氏病的潜在疗法于III期试验中评估。然而，5-HT1A激动剂活性产生剂量依赖性的不利作用，其限制了扎利罗登作为药物的使用。
[0007] 4-甲基儿茶酚(MW 124)已经被报道刺激神经营养蛋白的合成并且由此理论上提供一种处理神经退行性变的方法(Furukawa等人，Advances in Behavioral Biology，2002，53，第233-236页)。然而，这一种剂已经被发现产生毒性副作用，可能归因于神经生长因子(NGF)表达的过度激活。
[0008] 视黄酸已经被报道增加NGF的血清和神经水平并且在糖尿病小鼠中预防神经病(Arrieta等人，European Journal of Clinical Investigation，2005，35，第201-207页)并且已被表明在神经退行性变病症中具有可能的治疗作用(Mey和McCaffery，The Neuroscientist，2004，10，第409-420页)。然而，这一种剂已知具有严重的剂量限制性毒性副作用。
[0009] AMPA受体增效剂(安帕金)是谷氨酸盐受体调节剂并且一些已经显示出在体内增强BDNF表达(Mackowiak等人，Neuropharmacology，2002，43，第1-10页)。而且，两种安帕金(CX614和CX546)已经显示在施用后6-12小时最大地增加BDNF mRNA水平并且之后在施用后48小时减少至接近对照水平，即使是连续的安帕金接触(Lauterborn等人，Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics，2003，307，第297-305页)。几种安帕金已经或者正在被开发用于神经病学病症(Price等人，Pharmacology and Therapeutics，2007，115，第292-306页)。然而，这些剂中的至少一些具有毒性副作用。
[0010] 某些抗抑郁药，包括具有作为血清素选择性再摄取抑制剂(SSRI)和单胺氧化酶抑制剂(MAOI)的原发作用的那些，已经显示在体内增加BDNFmRNA水平(Malberg和Blendy，Trends in Pharmacological Sciences，2005，26，第631-638页；Martinez-Turrillas等人，Neuropharmacology，2005，49，第1178-1188页)。还参见Castren，Current Opinion in Pharmacology，2004，4，第58-64页的标题为“Neurotrophic effects of antidepressant drugs(抗抑郁药物的神经营养性效应)”的综述。然而，所有这些剂都熟知为具有许多不期望的副作用。
[0011] 亲免素(immunophillin)是已经显示具有增强神经营养蛋白活性的一类免疫抑制剂(Price等人，Pharmacology and Therapeutics，2007，115，第292-306页)。FK506(Tacrolimus)已经显示在体内增加BDNF mRNA水平(Zawadzka和Kaminska，
Molecular and Cellular Neuroscience，2003，22，第202-209页)以及BDNF和GDNF蛋白水平(Tanaka等人，Brain Research，2003，970，第250-253页)。然而，整类具有严重的剂量限制性毒性副作用。
Molecular and Cellular Neuroscience，2003，22，第202-209页)以及BDNF和GDNF蛋白水平(Tanaka等人，Brain Research，2003，970，第250-253页)。然而，整类具有严重的剂量限制性毒性副作用。
[0012] N4-(7-氯代-2-[(E)-2-(2-氯代-苯基-乙烯基)]-喹啉-4-基)-N，N′-二乙基-戊烷-1，4-二酮(XIB4035)，一种GFR*-1受体激动剂，已经被报道为以浓度依赖性方式促进神经突增生(Tokugawa等人，Neurochemistry International，42，1，2003年1月，第81-86页)。然而，这一分子也具有剂量限制性副作用。
[0013] 这些已知的小分子剂由此具有某种程度的NF-模拟或活化作用，但是在临床前模型或临床中具有剂量依赖性的不利副作用。副作用可通常表明它们自身明显的毒性。这严重限制了疗法中所述剂的潜在效用。
[0014] 有对开发用于神经病学和精神病学病症的疗法的改进的，并且尤其是无毒性的，小分子非肽生物活性剂的普遍需要。
[0015] WO-A-99/16786、WO-A-99/48482、WO-A-99/48507、WO-A-01/23407、WO-A-01/23408、WO-A-02/079221、WO-A-03/082893、WO-A-2005/105108、WO-A-2005/105825和WO-A-2006/048665，其公开内容通过引用并入本文，涉及某些小分子类固醇在认知机能障碍和某些其他的神经病学和精神病学病症的处理中的用途。一般而言，这些活性剂是A/B-顺式呋甾烷、呋甾烯(furostene)、螺甾烷或螺甾烯(spirostene)甾体皂甙元和其酯、醚、酮和糖基化的形式，表述“皂甙元”被理解为包括所有E和/或F环开口的衍生物，例如所述皂甙元的伪皂甙元和二氢伪皂甙元形式。在化合物的不饱和(-烯)形式中，一个或多个双键存在于不影响A/B顺式基元(motif)的位置。
[0016] WO-A-03/082893，第25页，第5至18行报道所述化合物中的至少一些已被发现减缓或逆转神经元变性的某些方面，包括逆转不利的细胞体变化和神经突萎缩，减少NF例如神经营养蛋白、TGF-β-超家族NF和神经节细胞因子的释放以及减少神经元毒性和凋亡。这一段落还报道受体丧失作用的神经保护和反转是积极调节的作用，其中随着连续衰退的阻止，过去的衰退被逆转朝向正常或初期的状态。
[0017] 相同的文件，第26页，第8至15行还报道据信活性剂的一种生理效应是增加NF或它们的受体的合成或释放或者减少NF或它们的受体的降解的速率的能力。理论上对生长因子的这些作用“可能归因于化合物对胞质或细胞核受体的作用，或者化合物与启动子区的结合以及随之对生长因子的mRNA的生产速率的直接影响，或者是增加另一种物质因子的生产的结果”。
[0018] 相同的文件，第20页，第4行起描述了活性剂处理孤独综合征、抑郁和精神分裂症的精神病学病症的用途。
[0019] Zhang Y，等人，FEBS Letters，2008年3月19日，582，第6期，第956-960页，其+公开内容通过引用并入本文，报道异菝葜皂甙元显示增加用1-甲基-4-苯基吡啶(MPP)损害的大鼠中脑多巴胺能神经元中GDNFmRNA表达以及培养基中的GDNF含量，并且异菝葜皂+
甙元显示在这些神经元中抑制MPP 诱导的神经元损害和萎缩。这一出版物来自本发明人并且在所有指定国不是现有技术。
甙元显示在这些神经元中抑制MPP 诱导的神经元损害和萎缩。这一出版物来自本发明人并且在所有指定国不是现有技术。
[0020] 近年来免疫系统稳态中NF的作用已经是许多研究的主题(参见例如Vega，J A等人，J.Anat.2003，203，第1-19页和其中所引用的参考文献，其所有的公开内容通过引用并入本文)。如Vega等人的出版物中更加详细解释的和第8页表2中概括的，NF已经显示具有与免疫系统中涉及的大量细胞尤其是B淋巴细胞、T淋巴细胞、单核细胞/巨噬细胞、嗜中性粒细胞、嗜酸性细胞、嗜碱性粒细胞、肥大细胞和造血细胞以及血小板和血管组织相关的大量活性。NF的稳态调节提供可用于处理或预防免疫系统病症的很有价值的技术。
[0021] 炎症和炎性病症以及变态反应中的NF的作用也受到许多关注。已知在炎症和变态响应期间以及在免疫系统的疾病中NGF水平增加(参见Stanisz，AM & Stanisz，JA，Ann.N Y Acad.Sci.，2000，917，第268-272页；Otten，U等人，Ann.N.Y Acad.Sci，2000，917，第322-330页；还有Vega等人的第10页第2列和第11页第1和2列所引用的参考文献)。
NF的稳态调节提供可用于处理或预防炎症和炎性病症和变态响应的很有价值的技术。
NF的稳态调节提供可用于处理或预防炎症和炎性病症和变态响应的很有价值的技术。
[0022] 如大家所熟知的，炎性、变态性和免疫响应可同时并且以相互关联的方式发生，例如在自身免疫性疾病和对毒素、寄生虫和其他感染剂的激发的响应中。NF的稳态调节提供可用于处理或预防这些病况的很有价值的技术。
[0023] NGF已经显示在血管炎诱导的类风湿性关节炎中具有有用的作用(Tuveri，M.等人，Lancet，2000Nov 18，356，第1739-1740页；Aloe，L.，Arch.Physiol.Biochem.，2001，109，第354-356页)并且报道被认为是在变态或炎性过程期间阻止NF过表达的新的疗法策略(Vega等人，上文引用的出版物，第12页，第1列)。由于上文所解释的与神经病学病症相关的理由，NGF蛋白的使用不如小分子的使用更令人期待。用于调节NF过表达的小分子剂将是非常令人期待的。
[0024] WO-A-01/64247，其公开内容通过引用并入本文，描述了处理或预防由NF受体在+癌细胞表面尤其是trk 癌细胞上的表达所表征的肿瘤性病症(癌症)的方法。方法包括施用有效量的抗NF剂(在参考文献中被称为抗神经营养蛋白或抗NT剂)，例如抗NF抗体、抗NF反义多核苷酸或抗NF trk突变体。据称大量癌症，包括乳癌、甲状腺癌、结肠癌、肺癌、卵巢癌、皮肤癌、肌肉癌、胰腺癌、前列腺癌、肾癌、生殖器癌、血癌、免疫系统组织(例如脾脏、胸腺和骨髓)的癌、脑癌和外周神经系统组织的癌，可以这一方法处理或预防。作用的方式据称是经由活性剂与NF的高特异性结合，导致经由活化的NF配体的中和抑制trk受体(第
5页，第8至10行)。
5页，第8至10行)。
[0025] Innominato，P F等人，J.Pathol.，2001，194，第95-100页，其公开内容通过引用并入本文，描述了NF和NF受体在黑色素瘤细胞上的表达。皮肤癌细胞，尤其是黑色素瘤细胞，可因此被包含在上文NF-受体-阳性癌细胞的名单中。
[0026] 由于上文中说明的与神经病学病症相关的原因，抗体、多核苷酸和抗-NF受体突变蛋白的使用不如小分子的使用更令人期望(参见LeSauteur等人，Nature Biotech，1996，14，第1120页)。与NF蛋白的作用方式类似，用于NF的稳态调节以通过控制受体的结合配偶体抑制癌细胞的trk受体的小分子剂，将是非常期待的。
[0027] 本发明以如下文所描述的所述A/B-顺式呋甾烷、呋甾烯、螺甾烷或螺甾烯甾体皂甙元和其酯、醚、酮和糖基化的形式导致以非毒性方式调节NF并且保留受治疗者正常稳态控制过程不受损伤的我们的新发现为基础。因此，所述剂诱导NF的自身调节的稳态而几乎没有副作用，所述副作用如果存在也是可被管理的并且不妨碍有效量的施用。使用基本上无毒的、非肽的小分子诱导自身调节的稳态，借此将在非健康状态的一种或多种NF修复(通过增加或降低的水平)至健康状态而无不利的副作用的所述发现是意外并且令人吃惊的，并且提供显著的益处，如下文更详细地讨论的。
[0028] 而且，我们已经发现所述剂诱导一种或多种NF例如BDNF和GDNF的自身调节的稳态而无不利的副作用。通过一种活性剂获得多于一种NF一起的自身调节的稳态而无不利的副作用是令人吃惊的，并且据我们所知，在任何小分子剂中是唯一的。由于已知神经元通常需要多于一种的NF用于最佳的神经保护作用和神经修复作用，根据本发明的这一发现提供了NF介导的病症和相关病况的本质上改进的处理和预防。
[0029] 还已知NF在组织包括皮肤、角膜组织、骨和肌肉的愈合中起作用并且通常有利于皮肤、骨和肌肉健康。参见例如Albers，K.M.等人，Neuroscientist 2007，13，第317-382页；Asaumi，K.，等人，Bone，26(6)，2000年6月，第625-633页；You，L等人，Investigative Opthalmology & Visual Science，2001 年 10 月，42(11)， 第 2496-2504 页；Cruise，B.A.等人，Developmental Biology，271，(2004)，第1-10页；Jurjus，A.等 人，Burns33(2007)，892-907；Matsuda，H.，等人，J.Exp.Med.，187(3)，1998年2月2日，第297-306页；Menetrey，J等 人，J.Bone Joint Surg(Br)，82-B(1)，2000年1月，第131-137页；
Micera，A.，等人，Cytokine & Growth Factor reviews，18，(2007)，第245-256页；Nithya，M.，等人，Biochim.Biophys.Acta，1620，(2003)，第25-31页；Matsuda，H等人，J.Exp.Med.1998，187，第297-306页；Lambiase等人，Invest.Ophthalmol.Vision Sci，2000，41，第1063-1069页。这些出版物的内容通过引用并入本文。
Micera，A.，等人，Cytokine & Growth Factor reviews，18，(2007)，第245-256页；Nithya，M.，等人，Biochim.Biophys.Acta，1620，(2003)，第25-31页；Matsuda，H等人，J.Exp.Med.1998，187，第297-306页；Lambiase等人，Invest.Ophthalmol.Vision Sci，2000，41，第1063-1069页。这些出版物的内容通过引用并入本文。
[0030] 作为本发明的基础的这些发现因此还可被用于组织包括皮肤、骨、肌肉和眼部组织例如角膜组织的愈合和安康。因此，本发明还涉及在任何损害或异常的组织中的或与任何损害或异常的组织相关的神经元功能的复原或正常化以及组织(例如皮肤、骨、眼部和肌肉)愈合和一般的皮肤、骨和肌肉健康的辅助，包括肌肉和组织从锻炼、劳动或消耗中的复原，皮肤从阳光暴露、风暴露、雨水暴露、寒冷暴露、老化和起皱的复原、提高耐力并且减少疲劳的感觉。未受限制地，可由本发明辅助的组织愈合可包括创伤和烧伤的愈合，如下文中所更详细地描述的。
[0031] 发明简述
[0032] 根据本发明的第一方面，提供了通过在稳态控制下以无毒性的方式调节受治疗者的神经营养因子(NF)而在所述受治疗者中诱导NF的自身调节的稳态的方法，包括向受治疗者施用有效量的选自A/B-顺式呋甾烷、呋甾烯、螺甾烷和螺甾烯甾体皂甙元和其酯、醚、酮和糖基化的形式的一种或多种剂。受治疗者的天然NF可以是BDNF和GDNF中的一种或两者。
[0033] 本发明的第一方面的方法使得NF的自身调节的稳态的诱导以有限的并且可管理的副作用发生。
[0034] 在本发明的第一方面的一个特别优选的实施方案中，诱导的稳态一起调节受治疗者的天然NF中的两种或更多种，例如BDNF和GDNF。
[0035] 根据本发明的第二方面，提供了用于通过在稳态控制下以无毒性的方式调节受治疗者的天然NF而在所述受治疗者中诱导NF的自身调节的稳态的方法的选自A/B-顺式呋甾烷、呋甾烯、螺甾烷和螺甾烯甾体皂甙元和其酯、醚、酮和糖基化的形式的剂。
[0036] 根据本发明的第二方面的使用的剂使得NF的自身调节的稳态的诱导以有限的并且可管理的副作用或不利副作用发生。
[0037] 根据本发明的第三方面，提供了一种组合物，其包含用于通过在稳态控制下以无毒性的方式调节受治疗者的天然NF而在所述受治疗者中诱导NF的自身调节的稳态的方法的选自A/B-顺式呋甾烷、呋甾烯、螺甾烷和螺甾烯甾体皂甙元和其酯、醚、酮和糖基化的形式的活性剂。
[0038] 根据本发明第三方面的使用的组合物使得NF的自身调节的稳态的诱导以有限的并且可管理的副作用或不利副作用发生。
[0039] 根据本发明的第四方面，提供了选自A/B-顺式呋甾烷、呋甾烯、螺甾烷和螺甾烯甾体皂甙元和其酯、醚、酮和糖基化的形式的剂在制备通过在稳态控制下以无毒性的方式调节受治疗者的天然NF而在所述受治疗者中诱导NF的自身调节的稳态的药物中的用途。
[0040] 根据本发明的第四方面的用途使得NF的自身调节的稳态的诱导以有限的并且可管理的副作用或不利副作用发生。
[0041] 本发明限制了不利副作用，尤其是与NF例如NGF的过诱导、过度刺激或过增强有关的副作用，与受体(拮抗剂)激动剂作用相关的副作用和与酶结合作用相关的副作用。
[0042] 本发明可在人类和非人类动物受治疗者中与处理NF介导的病症尤其是神经病学、精神病学、炎性、变应性、免疫和肿瘤性病症的方法以及和在任何损害或异常的组织中的或与任何损害或异常的组织相关的神经元和其他功能的复原或正常化，包括当辅助组织(例如皮肤、骨、眼部和肌肉)愈合和一般的皮肤、骨、眼部和肌肉健康时，以及相关的非治疗方法联合使用。
[0043] 本文所用的术语“NF介导的”应以一般意义理解，包括其中神经营养因子被理解为对病症或病况的发展、进行或影响起贡献性作用的病症和病况。因此，例如，其中现有证据涉及NF受体、其(拮抗剂)激动剂或NF的其他活化剂或抑制剂的病症或病况，根据本发明这些病症或病况将被理解为“NF介导的”。根据本发明，这些病症和病况预期响应于人类或非人类动物受治疗者的天然NF的稳态调节。
[0044] 本发明因此可与任何损害或异常的组织例如通过损伤，通过缺血，通过老化或(在皮肤的例子中)通过起皱或通过暴露于阳光、风、雨水、寒冷或其他损害介质损害的组织(无论脑组织或其他组织例如皮肤、骨、眼部和肌肉)中的正常的神经元或其他功能的复原联合使用。正常神经元功能的复原通常根据本发明通过诱导NF的自身调节的稳态导致神经再生和改进的血流量以及神经病病况或神经元异常例如中枢神经系统(CNS)或外周神经系统(PNS)中的炎症的正常化来获得。
[0045] 本发明可由此与伤口愈合的辅助尤其是提高人类和其他哺乳动物的皮肤伤口的愈合的速度和质量联合使用。在这一背景下，“伤口”包括任何来源的所有损害，例如损伤诸如割伤和擦伤、刀伤、手术创伤、挫伤、烧伤、疡、痍。慢性和急性伤口都可根据本发明来处理。
[0046] 本发明可与胎儿细胞、干细胞或其他细胞疗法以及组织移植联合使用，特别地以提高移植材料的存活或疗法的功效或两者。实例包括提高脑功能或身体的其他器官中细胞功能的细胞疗法。
[0047] 还另外地，本发明可在非治疗的方法中使用以便由于组织中NF的自身调节的稳态的好处而促进或辅助这些组织例如皮肤、骨、眼部和肌肉的安康和一般健康，促进肌肉和组织从锻炼、劳动或消耗的复原，促进皮肤从老化、起皱或暴露于阳光、风、雨水、寒冷或其他损害介质的复原，提高耐力和肌肉持久力(例如在竞争性或非竞争性运动中)并且减少疲劳的感觉。
[0048] 根据本发明，所述剂可被系统或局部地施用，因为它们向作用部位的递送被发现通常是好的。尤其是，但非限制性地，发现口服和肠胃外(例如外用的(topical))施用路线是合适的，如下文中更详细地讨论的。
[0049] 本文所使用的表述“皂甙元”包括所有E和/或F环开口的衍生物，例如所述皂甙元的伪皂甙元和二氢伪皂甙元形式，对这些衍生物的过程的承受是可能的。在化合物的不饱和(-烯)形式中，一个或多个双键存在于不影响A/B顺式基元的位置。皂甙元的糖基化形式通常被称为皂甙。
[0050] 发明详述
[0051] 引言
[0052] 本申请中出示的证据显示所述剂与许多受体和酶不结合(参见实施例1)。
[0053] 本申请出示了支持活性剂对诱导NF或NF-受体的作用的证据。所述证据(参见下文实施例2和3)显示活性包括增强NF和NF-受体基因的表达。如可在实施例2中所见到的，其中所述神经元相对健康(基础培养基)。增强的基因表达是瞬时的并且时间量程强烈指示自身调节机制的参与。
[0054] 在实施例3的更加不健全的情况中，数据显示增强的基因表达的延长得多的时期，显示调节机制保持完整并且基因表达的增强的程度取决于系统的需要。
[0055] 本申请中出示的证据同样显示活性剂提供NF例如尤其是BDNF和GDNF的自身调节的稳态(参见下文实施例4至7和18)。不仅一种NF例如BDNF或GDNF通过非肽剂的自身调节的正常化是罕见的，而且两种NF例如BDNF和GDNF一起通过非肽剂的自身调节的正常化也是唯一的。两种NF一起的正常化显示导致特别有利的BDNF和GDNF的协同正常化的组合。
[0056] 本申请中出示的证据同样显示活性剂增加大量CNS和PNS神经元中的神经突发生(参见实施例8)。重要地，这一神经突发生作用不取决于外源性NF的存在。这显示本发明的剂的作用是NF诱导而不是增强。
[0057] 本申请中出示的证据同样显示活性剂激活与NF一样的细胞内转导通路(参见实施例9)。这提供所述剂的NF调节活性的支持证据。
[0058] 本申请中出示的证据同样显示许多A/B顺式活性剂减少谷氨酸盐诱导的对皮质神经元的损害和多巴胺能神经元的凋亡，然而具有大致相似的化学结构但不具有A/B顺式基元的皂甙元(薯蓣皂甙元)是非活性的(参见实施例10和11)。
[0059] 本申请中出示的证据同样显示所述剂逆转许多神经元中的神经元损害，即它们是神经复原或神经再生的(参见实施例12)。
[0060] 本申请中出示的证据同样显示所述剂是可口服施用的(参见实施例13和14)。所述实施例显示所述剂的口服施用改善运动神经元疾病或创伤后神经损伤的小鼠模型中神经功能的复原。
[0061] 本申请中出示的证据同样显示所述剂减少年老的大鼠中的焦虑并且修复认知(参见实施例15)。
[0062] 本申请中出示的证据同样显示口服施用的剂被递送至许多身体组织(参见实施例16)并且在有效剂量是无毒的(参见实施例17)。
[0063] 本申请中出示的证据同样显示所述剂减少猕猴中的帕金森氏综合征(参见实施例18)。
[0064] 本申请中出示的证据显示NF或NF-受体(NFr)介导的所述剂的活性不包括与许多受体和酶的直接结合相互作用。例如，活性与许多重要的受体的直接结合的激动、拮抗或非(拮抗)激动的直接结合无关，所述重要的受体包括激素受体例如雌激素、孕酮、睾酮和血清素受体，烟碱性受体，毒蕈碱受体，肾上腺素能受体，麻醉性受体例如大麻素和阿片受体，谷氨酸盐受体例如NMDA、AMPA和钾盐镁矾受体以及视黄酸受体例如视黄醇类X受体。作为结果，活性剂的生理效应不依赖于对之前已知的用于神经病学和精神病学病症的处理发现的受体和酶介导的副作用中的许多副作用。例如，使用所述剂时，对神经病学和精神病学病况的许多之前的处理发现的问题大量减少，其中成瘾性和依赖性，上瘾的人格类型，具有受体或酶副作用的之前的处理以及现有的打破成瘾或依赖性的处理每一种都可显示神经病学或精神病学病症的处理不当。
[0065] 精神病学病症的现有技术处理显示出长得多的时间量程的有利的精神病学作用，尽管它们立即发挥它们生物化学模式的作用。本发明的作用即时得多，提供在稳态控制下以非毒性的方式的NF的调节的证据。因此本发明与已知的用于精神病学和神经病学病症的小分子(非肽)处理不同。
[0066] 在实施例的测试中的所述剂的剂量响应概况显示之后为平高线的最大值，这为自身调节机制的特征(参见图1)。
[0067] 本发明中所使用的一种或多种活性剂可在不外源施用神经营养因子例如GDNF或BDNF下使用。
[0068] 与本发明相关的新用途
[0069] 本发明因此使有待确认的活性剂的新用途成为可能，例如在下列方面的新用途：(i)有待处理的病症，(ii)有待处理的个体的类型，(iii)有待使用的组合处理和(iv)安全使用的情况。
[0070] 就(i)而言，例如，经由药物制剂和功能性食品两者，活性剂在处理下述一系列中的用途现在是可确定的，如在下文中更加详细地讨论的：神经病学、精神病学、炎性、变应性、免疫和肿瘤性病症和病况以及人格和行为特征并且实现神经元，至神经元的血流量的再生和正常化，受损的组织(例如皮肤、骨、眼部或肌肉组织)的再生长和愈合，脑内部和外部组织(例如皮肤、骨、眼部或肌肉组织)的一般健康和安康，肌肉和组织从锻炼、劳动和消耗的复原，提高耐力并且减少疲劳的感觉，再生正常的神经元功能和正常的神经元网络。这一用途包括改进在人群正常范围中的个体的神经学或心理学功能或个体的一般健康和安康的非治疗用途，改进皮肤、骨、眼部、肌肉和其他组织健康的非治疗用途，例如促进皮肤从老化，起皱或暴露于阳光、风、雨水、寒冷或其他损害介质的作用复原，以及为健康和安康的其他方面而提供的非治疗用途，包括肌肉和组织从锻炼、劳动或消耗复原，提高耐力并且减少疲劳的感觉，并且术语“病症”、“病况”和“特质(trait)”应相应地理解。
[0071] 就(ii)而言，本发明的剂经由NF的自身调节稳态而不是对许多受体或酶的调节或结合来起作用的发现允许有待被处理的对不利副作用敏感的患者远离一些酶抑制药物或受体激动药物。例如，一些痴呆(阿尔茨海默氏病)患者不能耐受胆碱酯酶抑制剂。一些帕金森氏病患者不能耐受左旋多巴并且将受苦于包括运动障碍或神经精神病学问题例如冒险的副作用。
[0072] 就(iii)而言，例如，所述剂与用于特别的病症、病况和特质或特别类型的个体的其他辅剂的组合的用途现在是可确定的，如下文更加详细介绍的。这种组合中的许多的确定之前充其量是推测的。这一用途包括提高在人群正常范围内的个体的神经学或心理学功能的非治疗用途，提高皮肤、骨、眼部、肌肉和其他组织健康的非治疗用途，例如促进皮肤从老化、起皱或暴露于阳光、风、雨水、寒冷或其他损害介质的作用复原，以及为健康和安康的其他方面而提供的非治疗用途，包括肌肉和组织从锻炼、劳动或消耗复原，提高耐力并且减少疲劳的感觉，并且术语“病症”、“病况”和“特质”应相应地理解。
[0073] 就(iv)而言，例如，临床和制药情况之外使用的情况的新范围现在是可确定的，如下文更加详细介绍的。
[0074] 新用途(i)-新处理
[0075] 本发明可被用于下列方法(a)处理或预防神经病学、精神病学、炎性、变应性、免疫和肿瘤性病症，(b)再生和/或正常化神经元和至神经元的血流量，包括再生神经元功能或神经元网络，(c)损害的组织的再生长和愈合，(d)肌肉和组织从锻炼、劳动或消耗的复原，(e)提高耐力和减少疲劳的感觉或(f)在需要其的人类或非人类哺乳动物中处理或预防异常行为或人格特质。所述神经病学、精神病学、炎性、变应性、免疫和肿瘤性病症可以是前文所提及的现有技术中所公开的那些或可与那些病症不同。例如，神经病学方法可以是孤独综合征、抑郁和精神分裂症，或可以是不同于这些的病症。用于神经元和至神经元的血流量的再生或正常化，受损害的组织的再生长和愈合，神经元功能或神经元网络的方法包括例如神经的创伤后重建，组织移植和神经的手术(例如，用于四肢和手指的复置术)后重建，辅助从中风、瞬时脑缺血发作(TIA)或其他缺血复原，例如辅助神经功能和至缺血组织的血流量的复原，辅助伤口、骨和肌肉的愈合以及处理神经病和与CNS或PNS相关的任何炎性病况。
[0076] 考虑到活性剂的神经保护作用和神经修复(神经再生)作用，本发明可与胎儿细胞、干细胞或其他细胞疗法联合使用，所述疗法例如用于神经病学和精神病学病症或用于受损害或异常的组织或功能的复原或正常化。实例包括处理脑病症的细胞疗法。根据本发明的活性剂的使用可提高细胞疗法的效力，例如通过增加移植的细胞的存活率，通过增加处理中存活的细胞的效力或其组合。
[0077] 本发明可被用于患有或易患与一种或多种NF或NFr的异常表达相关的病症的人类或非人类动物中的这种病症的处理的方法。病症可以是前文所提及的现有技术中所公开的那些或可与那些病症不同。例如，神经病学方法可以是孤独综合征、抑郁和精神分裂症，或可以是不同于这些的病症。除了神经病学或精神病学病症或异常行为或人格特质之外的这些病症包括例如睡眠剥夺和应激的作用、炎性病症、变态反应、免疫病症和NF介导的癌症。
[0078] 如上文所提及的，在本申请中的证据显示本发明中所使用的活性剂可将脑中BDNF和GDNF的水平同时正常化或增强。本发明因此可被用于将患有BDNF和GDNF中的一种或两种的异常或减少的脑水平的人类或非人类动物的脑中的这些NF水平中的一种或两种同时正常化的方法。
[0079] 本发明提供诱导NF例如BDNF和GDNF的自身调节的稳态的方法。所述方法使得NF的自身调节的稳态的诱导以有限并且可管理的副作用发生。本申请包括这一诱导不要求肽NF或NFr的存在的证据。因此，与已知的剂相反，本发明避免了对肽NF或NFr与本发明的一种或多种非肽活性剂的共施用的需要。
[0080] 上文中所描述的新用途中的每一种可与本发明的方面中的每一种一起使用。
[0081] 本发明借以产生作用的方法可以是治疗或非治疗的并且组合物可以是药物或非药物组合物，如下文更加详细描述的。尽管提供了其他施用路线，但是活性剂优选地被口服施用，如下文更加详细描述的。
[0082] 新用途(ii)-可处理的个体的新类型
[0083] 作为本发明基础的新发现显示活性剂可被用于处理，至少在一定时间里，可天然过表达或异常表达一种或多种NF或NFr(例如BDNF和/或GDNF)的个体，例如剥夺睡眠或应激的人，而之前通过NF模拟或刺激剂处理这些个体是禁忌的。
[0084] 本发明可被用于处理或预防患有或易患与减少或异常的NF或NFr水平相关的病症或病况的人类或非人类动物中的这种病症或病况的方法，所述人类或动物是对天然过表达或异常表达一种或多种其他的NF或NFr敏感的个体。
[0085] 作为本发明基础的新发现还显示活性剂可被用于处理对NF-模拟或刺激药物的精神病学副作用敏感的个体，这些副作用通常是精神病学、心情、焦虑或其他人格或行为症状，之前通过NF模拟或刺激剂对所述个体的处理是禁忌的。
[0086] 本发明的剂经由NF的自身调节的稳态而不是对许多受体或酶的调节或结合来起作用的发现允许有待被处理的对不利副作用敏感的患者远离一些酶抑制药物或受体激动剂药物。例如，一些痴呆(阿尔茨海默氏病)患者不能耐受胆碱酯酶抑制剂。一些帕金森氏病患者不能耐受左旋多巴并且将受苦于包括运动障碍或神经精神病学问题例如冒险的副作用。
[0087] 本发明可被用于处理或预防与患有或易患减少或异常的NF或NFr水平相关的病症或病况的人类或非人类动物中的这种病症或病况的方法，所述人类或动物是对NF-模拟或刺激剂的精神病学或其他副作用敏感的个体。
[0088] 与减少或异常的NF或NFr水平相关的病症或病况包括例如神经病学、精神病学、炎性、变应性、免疫和肿瘤性病症或异常行为或人格特质，例如下文中更详细描述的那些。此外，这些病症和病况包括下文中描述皮肤、肌肉、眼部和骨病症和病况，包括与组织的安康和健康有关的病况和肌肉或其他组织的疲劳的病况。
[0089] 作为本发明基础的新发现还显示对大量激素和其他受体没有(拮抗)激动或结合能力并且对许多酶没有酶结合能力的活性剂可被用于处理对药物的受体或酶介导的副作用敏感的个体。这些个体可以例如包括，具有成瘾性或依赖性的个体，所述成瘾性或依赖性可以通过受所述成瘾性或依赖性影响的受体的(拮抗)激动作用加剧；在处理或自身处理过程中有待戒断成瘾性或依赖性的个体，其中因为同样的原因戒断过程可以通过受所述成瘾性或依赖性影响的受体的(拮抗)激动作用而退步；具有成瘾性或依赖性人格类型例如具有对受体上的(拮抗)激动或结合或酶结合特别敏感的某些受体或代谢过程的个体。而且，对受体或酶介导副作用的敏感性可在经受用于将受到这些受体或酶介导的作用的干扰的其他临床病况的处理的那些个体中出现，例如经受激素处理(例如在肿瘤学上的激素处理、生长激素处理、甲状腺激素处理、雌性激素替代疗法(HRT)或性别重整疗法)的个体。
[0090] 本发明可因此被用于处理或预防与患有或易患与减少的NF或NFr水平相关的病症或病况的人类或非人类动物中的这种病症或病况的方法，所述人类或动物是对药物的受体或酶介导的副作用敏感的个体。
[0091] 与个体对受体(或结合位点)介导的副作用的敏感性相关的受体或结合位点包括下列受体中的任何一种或多种：adensonine A1受体；adensonineA2A受体；adensonine A3受体；非选择性肾上腺素能α1受体，包括肾上腺素能α1A、肾上腺素能α1B或肾上腺素能α1D受体；非选择性肾上腺素能α2受体，包括肾上腺素能α2A或肾上腺素能α2C受体；非选择性肾上腺素能β受体，包括肾上腺素能β1、肾上腺素能β2或肾上腺素能β3受体；肾上腺髓质素AM1受体；肾上腺髓质素AM2受体；醛固酮受体；过敏毒素C5a受体；雄激素(睾酮)受体AR；血管紧张肽AT1受体；血管紧张肽AT2受体；apelin(APJ)受体；心房钠尿因子受体；铃蟾肽BB1受体；铃蟾肽BB2受体；铃蟾肽BB3受体；缓激肽B1受体；缓激肽B2受体；降钙素受体；降钙素基因相关肽(CGRP1)受体；苯并二氮卓L-型钙通道；二氢吡啶L-型钙通道；苯烷基胺L-型钙通道；钙通道N-型；大麻素CB1受体；大麻素CB2受体；趋化因子CCR1受体；趋化因子CCR2B受体；趋化因子CCR4受体；趋化因子CCR5受体；趋化因子CXCR1受体；趋化因子CXCR1(IL-8RB)受体；胆囊收缩素CCK1(CCKA)受体；胆囊收缩素CCK2(CCKB)受体；秋水仙素受体；促肾上腺皮质激素释放因子(CRF1)受体；多巴胺D1受体；多巴胺D2S受体；多巴胺D3受体；多巴胺D42受体；多巴胺D5受体；内皮素ETA受体；内皮素ETB受体；表皮生长因子(EGF)受体；促红细胞生成素EPOR受体；雌激素受体；雌激素(ERα)受体；雌激素(ERβ)受体；G蛋白偶联受体GPR103；G蛋白偶联受体GPR8；GABAA受体；TBOB氯化物通道GABAA受体；中枢氟硝西泮GABAA受体；中枢蝇蕈醇GABAA受体；GABAB1A；受体；GABAB1B受体；加巴喷丁受体；促生长激素神经肽GAL1受体；促生长激素神经肽GAL2受体；促糖皮质激素受体；谷氨酸盐受体；AMPA谷氨酸盐受体；红藻氨酸盐谷氨酸盐受体；激动NMDA谷氨酸盐受体；甘氨酸NMDA谷氨酸盐受体；苯环利定NMDA谷氨酸盐受体；多胺NMDA谷氨酸盐受体；生长激素促泌素(GHS，Ghrelin)受体；组胺H1受体；组胺H2受体；组胺H3受体；组胺H4受体；中枢咪唑啉I2受体；肌醇三磷酸IP3受体；胰岛素受体；白介素IL-1受体；白介素IL-2受体；白介素IL-6受体；来普汀受体；BLT白三烯(LTB4)受体；半胱氨酰白三烯CysLT1受体；半胱氨酰白三烯CysLT2受体；黑皮质素MC1受体；黑皮质素MC3受体；黑皮质素MC4受体；黑皮质素MC5受体；退黑激素MT1受体；退黑激素MT2受体；促胃动素受体；毒蕈碱的M1受体；毒蕈碱的M2受体；毒蕈碱的M3受体；毒蕈碱的M4受体；毒蕈碱的M5受体；
N-甲酰基肽受体FPR1；N-甲酰基肽受体样FPRL1受体；神经介素U MNU1受体；神经介素U MNU2受体；神经肽YY1受体；神经肽YY2受体；神经紧张肽NT1受体；烟碱乙酰胆碱受体；烟碱乙酰胆碱α1，银环蛇毒素受体；烟碱乙酰胆碱α7，银环蛇毒素受体；阿片δ(OP1，DOP)受体；阿片κ(OP2，KOP)受体；阿片μ(OP3，MOP)受体；痛敏肽ORL1受体；佛波酯受体；血小板活化因子(PAF)受体；血小板衍生的生长因子(PDGF)受体；钾通道[KA]；钾通道[KATP]；
钾通道[SKCA]；钾通道HERG；孕酮受体；孕酮PR-B受体；类前列腺素CRTH2受体；类前列腺素DP受体；类前列腺素EP2受体；类前列腺素EP4受体；类前列腺素血栓素A2(TP)受体；嘌呤能P2x受体；嘌呤能P2Y受体；破伤风样X受体RXRα；咯利普兰受体；利罗丁(ryandine)RyR3受体；血清素5-羟基色胺5-HT1受体；5-羟基色胺5-HT1A受体；5-羟基色胺5-HT1B受体；5-羟基色胺5-HT2B受体；5-羟基色胺5-HT2C受体；5-羟基色胺5-HT3受体；5-羟基色胺5-HT4受体；5-羟基色胺5-HT5A受体；5-羟基色胺5-HT6受体；σ(sigma)σ1受体；
σ(sigma)σ2受体；位点2钠通道受体；生长激素抑制素(somastatin)sst1受体；生长激素抑制素sst2受体；生长激素抑制素sst3受体；生长激素抑制素sst4受体；生长激素抑制素sst5受体；速激肽NK1受体；速激肽NK2受体；速激肽NK3受体；睾酮受体；甲状腺激素受体；促甲状腺激素释放激素(TRH)受体；转化生长因子-β(TGF-β)受体；阿糖腺苷运载体；胆碱运载体；多巴胺运载体(DAT)；GABA运载体；单胺运载体；去甲肾上腺素运载体(NET)；5-羟基色胺运载体(SERT)；非选择性肿瘤坏死因子(TNF)受体；乌洛滕生II受体；
香草素受体；血管内皮生长因子(VEGF)受体；肠道血管活性肽VIP1受体；加压素V1A受体；
加压素V1B受体；加压素V2受体和维生素D3受体。
N-甲酰基肽受体FPR1；N-甲酰基肽受体样FPRL1受体；神经介素U MNU1受体；神经介素U MNU2受体；神经肽YY1受体；神经肽YY2受体；神经紧张肽NT1受体；烟碱乙酰胆碱受体；烟碱乙酰胆碱α1，银环蛇毒素受体；烟碱乙酰胆碱α7，银环蛇毒素受体；阿片δ(OP1，DOP)受体；阿片κ(OP2，KOP)受体；阿片μ(OP3，MOP)受体；痛敏肽ORL1受体；佛波酯受体；血小板活化因子(PAF)受体；血小板衍生的生长因子(PDGF)受体；钾通道[KA]；钾通道[KATP]；
钾通道[SKCA]；钾通道HERG；孕酮受体；孕酮PR-B受体；类前列腺素CRTH2受体；类前列腺素DP受体；类前列腺素EP2受体；类前列腺素EP4受体；类前列腺素血栓素A2(TP)受体；嘌呤能P2x受体；嘌呤能P2Y受体；破伤风样X受体RXRα；咯利普兰受体；利罗丁(ryandine)RyR3受体；血清素5-羟基色胺5-HT1受体；5-羟基色胺5-HT1A受体；5-羟基色胺5-HT1B受体；5-羟基色胺5-HT2B受体；5-羟基色胺5-HT2C受体；5-羟基色胺5-HT3受体；5-羟基色胺5-HT4受体；5-羟基色胺5-HT5A受体；5-羟基色胺5-HT6受体；σ(sigma)σ1受体；
σ(sigma)σ2受体；位点2钠通道受体；生长激素抑制素(somastatin)sst1受体；生长激素抑制素sst2受体；生长激素抑制素sst3受体；生长激素抑制素sst4受体；生长激素抑制素sst5受体；速激肽NK1受体；速激肽NK2受体；速激肽NK3受体；睾酮受体；甲状腺激素受体；促甲状腺激素释放激素(TRH)受体；转化生长因子-β(TGF-β)受体；阿糖腺苷运载体；胆碱运载体；多巴胺运载体(DAT)；GABA运载体；单胺运载体；去甲肾上腺素运载体(NET)；5-羟基色胺运载体(SERT)；非选择性肿瘤坏死因子(TNF)受体；乌洛滕生II受体；
香草素受体；血管内皮生长因子(VEGF)受体；肠道血管活性肽VIP1受体；加压素V1A受体；
加压素V1B受体；加压素V2受体和维生素D3受体。
[0092] 与个体对副作用的敏感性有关的酶包括下列酶中的一种或多种：乙酰胆碱酯酶；乙酰CoA合成酶；胆碱乙酰转移酶；蛋白丝氨酸/苏氨酸激酶AKT1(PRKBA)；蛋白丝氨酸/苏氨酸激酶AKT3(PRKBG)；蛋白丝氨酸/苏氨酸激酶CAMK2D(KCC2D)；蛋白丝氨酸/苏氨酸激酶MAP2K1(MEK1)；蛋白质丝氨酸/苏氨酸激酶MAPK1(ERK2)；蛋白丝氨酸/苏氨酸激酶MAPK11(p38β)；蛋白丝氨酸/苏氨酸激酶MAPK12(p38γ)；蛋白丝氨酸/苏氨酸激酶MAPK13(p38δ)；蛋白丝氨酸/苏氨酸激酶MAPK3(ERK1)；丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶MAPK8(JNK1)；非选择性蛋白丝氨酸/苏氨酸激酶PKC；蛋白酪氨酸激酶NTRK1(trkA)；蛋白酪氨酸激酶NTRK2(trkB)；蛋白酪氨酸激酶SRC；醛糖还原酶；ABTS原子团自由基清除酶；
DPPH原子团自由基清除酶；SOD拟物自由基清除酶；和UDP葡萄糖苷酸转移酶UGT1A1。
DPPH原子团自由基清除酶；SOD拟物自由基清除酶；和UDP葡萄糖苷酸转移酶UGT1A1。
[0093] 因此，本发明首次使得小分子治疗剂可能用于这些个体而无发生自活性剂的受体和酶介导的活性的副作用或至少具有显著减少的发生这种副作用的风险。
[0094] 某些A/B顺式螺甾烷皂甙元和皂甙对雌激素、雄激素、孕酮、糖皮质激素和睾酮受体无活性之前已被公开于WO-A-99/48507、WO-A-99/48482、WO-A-01/23406、WO-A-01/23407、WO-A-01/23408和WO-A-01/49703中。尽管出示了毒蕈碱的受体数目和合成增加的证据，但是没有显示相同的剂对毒蕈碱的受体无活性/不结合。毒蕈碱和肾上腺素能β2受体的数目正常化的证据-没有与剂量依赖性或活性/结合有关的证据-出示于WO-A-02/079221和WO-A-03/082893中。
[0095] 烟碱受体的数目经由某些A/B顺式呋甾烷皂甙、知母皂甙BII剂量依赖性增加的证据之前已被公开于WO-A-99/16786(EP-A-1024146；US-A-6593301)中。所述剂对这些受体的活性/结合的的程度明显没有测量。现有的另外的证据表明现有技术中报道的作用来自于NF和/或它们的受体的合成或释放上调节的增加和/或降解速度上的减少。
[0096] 本发明可被用于处理或预防需要其的人类或非人类动物中的神经退行性变而不诱导涉及上文第16页第19行至第18页第29行中所列的受体和酶中的一种或多种的受体或酶介导的副作用。
[0097] 所述方法可以是治疗性或非治疗性的并且所述组合物可以是药物或非药物的组合物，如下文更详细地描述的。例如，非治疗性的用途可以是提高在人群正常范围中的个体的神经学或心理学功能。术语“病症”、“病况”和“特质”应相应地理解。尽管提供了其他施用路线，但是活性剂优选地被口服施用，如下文更加详细描述的。
[0098] 新用途(iii)-剂的新组合
[0099] 本发明中的活性剂可与已知或疑为可能导致受治疗者中的NF或NFr的异常水平(即异常低或异常高的水平)的其他生物学活性剂组合使用，或可在预防的基础上与未知或未怀疑或未被检测到导致这种异常水平的可能性的一种或多种其他生物学活性剂一起使用。这些其他的生物学活性剂包括活性化学剂例如药物制剂、抑制蛋白或多核苷酸(例如抗体、抗体片段诸如F(ab)或F(ab)2片段、siRNA或反义DNA)的特异性结合剂和活性组织例如干细胞。
[0100] 以这一方法，根据本发明的剂可被用于抵制所述其他生物学活性剂的任何不利作用。
[0101] 本发明可在用于施用至人类或非人类动物受治疗者以处理或预防患者的某一病症或病况的组合物或组合物套组(set)(搭配的组)中被使用，所述组合物或套组包含用于处理或预防所述病症或病况并具有导致受治疗者中NF或NFr的异常水平的潜力的第一种生物活性剂，和用于以自身调节的方式抵制受治疗者中诱导的任何这种异常的NF或NFr水平的本发明的活性剂，由此受治疗者中所述异常的NF或NFr水平被抵制，优选地趋向正常的NF或NFr水平。
[0102] 新用途(iv)-使用的新情况
[0103] 本发明可被用于其中施用或给药程序的密切临床控制不可得或不可实行的情况中。
[0104] 对过量给药的自身调节的处理的耐性和响应的时间延长的性质组合以利于在控制相对不充分的情况下活性剂的施用，例如自身施用或非治疗性施用。用于根据本发明的自身调节的处理方法的程序将是以比相应的现有技术处理更广的耐性而有效的。
[0105] 使用本发明的方法中的任一种因此可在没有施用程序的临床控制的情况中，尤其是自身施用或非治疗性施用的情况中使用。
[0106] 本发明的任何方面可以与本发明的其他方面中的任何一个或多个同时实行或使用，并且为本发明的一个方面说明的任何实例或优选将相同地应用于本发明任何其他方面。
[0107] “处理或预防”
[0108] 本文所使用的表述“处理或预防”和类似术语是指意欲去除或避免病症或缓解其症状的所有形式的医疗保健，包括预防性、治愈性和缓解性的，如根据依照流行的医学和精神病学实践可得的测试中的任何一种所判断的。旨在以合理期望获得特定结果的但不总是实现所述结果的介入包含在表述“处理或预防”中。成功减缓或停止病症的进程的介入包含在表述“处理或预防”中。
[0109] 某些神经病学、精神病学、炎性、变应性和免疫病症被看作“光谱(spectrum)”病况，其中个体可表现出许多可能症状中的一些或所有，或者可仅表现出轻微形式的所述病症。而且，许多神经病学、精神病学、炎性、变应性、免疫和肿瘤性病况是进行性的，始于相对轻微的异常症状并且进行至更加严重的异常症状。本发明包括所有NF介导的神经病学、精神病学、炎性、变应性、免疫和肿瘤性病况的处理和预防，而无论所述病况处于何种类型和阶段。
[0110] “易患”
[0111] 本文所使用的表述“易患”和类似术语尤其是指处于比发展医学、健康、安康或精神病学病症或人格改变的正常风险更高的风险的个体，如使用用于个体或病症的已知的风险因子来评估的。这些个体可，例如，被分类为具有发展一种或多种特定病症或人格改变的显著风险，达到将对该个体开具药物和/或给予特殊膳食、生活方式或相似推荐的程度。
[0112] 毒性和副作用
[0113] 根据本发明的剂具有有限并且可管理的副作用并且在使用中是无毒性或基本上无毒性的。
[0114] 在制药(包括兽医)用途的背景下，这暗示所述剂的生理学可接受性，以致，在良好的医学和兽医判断的范围内，所述剂适于以有效剂量与人类、哺乳动物和其他动物的细胞接触而无异常毒性、刺激、变应性响应、不期望的副作用来使用，并且可发生的这些不利作用被认为是过度的或不能通过辅助处理来管理，不能相当于合理的益处/风险比率。
[0115] 在功能性食品尤其是粮食、食品补充物(包括膳食补充物)、饮料和饮料补充物以及外用制剂例如功能性化妆品和皮肤病学或其他皮肤接触或眼部接触制品的背景下，这暗示益处/风险和副作用的相应评估，适于用于特定组合物或制品和其所提供的特定用途的安全和毒性标准。
[0116] “非治疗性方法”
[0117] 非治疗性用途通常由没有医学管理下人类受治疗者对组合物中生理学活性剂的选择性自身施用，通常是口服的，所表征。通常，由此而来的预期的益处是与以下病况或觉察到的病况相关的安康或一般健康益处，所述病况是(i)未正式诊断的，(ii)根据临床实践不可诊断的，或(iii)在健康人群正常范围中并且因此不被认为是病症的。
[0118] 非治疗性用途也可由在受治疗者购买或获得组合物的阶段医学介入或辅助的不存在来表征。
[0119] 还另外地，非治疗性用途可由不存在组合物的提供者的医学要求来表征，以致自身施用不是由处理已诊断的病症的特别意图所驱使的。
[0120] 例如，可适当地被非治疗性影响的神经病学功能可包括，例如，认知(包括思考、推理、记忆、回忆、想象和学习)，注意力和关注，特别是朝向病况量表更轻微的一端，和轻微的异常行为或人格特质。可适当地被非治疗性处理的心理学功能可包括例如人类行为、情绪、人格和社交功能，诸如性行为、性功能障碍、忧伤、焦虑、抑郁、心情易变、阴郁、青少年情绪、中断的睡眠模式、生动梦(vivid dreaming)、梦魇和梦游。
[0121] 除了上文给出的根据本发明的非治疗性方法可处理的神经病学和心理学功能之外，由于相关行为或思维没有导致个体的严重不良应激或他或她日常功能没有中断而根据临床实践不可诊断的神经病学和精神病学病症的轻微形式也可被认为是根据本发明可非治疗性处理的。
[0122] 炎性、变应性和免疫病症的轻微形式或者未知原因或由于其他原因没有接受正式诊断的炎性、变应性和免疫病症也可被认为是根据本发明可非治疗性处理的病况。
[0123] 良性肿瘤性病症或者未知原因或由于其他原因没有接受正式诊断的肿瘤性病症也可被认为是根据本发明可非治疗性处理的。
[0124] “正常化”
[0125] 本文所使用的表述“正常化”和类似术语(例如“稳态”)尤其是指朝向特征为一般正常健康的状况的生理调节。最佳正常状况可由健康年轻的成年人类或非人类动物的状况来示例。
[0126] “正常化”由此包括朝向正常状况调节的过程，无论实际上是否达到可被表征为正常的状况。
[0127] 神经病学病症
[0128] 本文所使用的表述“神经病学病症”和类似术语包括例如神经退行性变(包括具有受损的认知的症状的神经退行性变和不具有受损的认知的症状的神经退行性变)、神经肌肉的退化和运动感官神经退行性变。
[0129] 本发明关注的神经病学病症的实例包括但不限于：痴呆，年龄相关的认知缺损，阿尔茨海默氏病，阿尔茨海默氏病型的老年性痴呆(SDAT)，路易体痴呆，血管性痴呆，帕金森氏病，脑炎后帕金森氏综合征，具有除脑炎后的和帕金森氏病之外的致因的帕金森氏综合征，肌营养不良包括面肩肱肌营养不良(FSH)，杜氏肌营养不良症，贝克肌营养不良和布鲁斯氏肌营养不良，富克斯氏营养不良，强直性肌营养不良，角膜营养不良，反射交感性营养不良综合征(RSDSA)，神经血管营养不良，重症肌无力，兰伯特伊顿病，亨廷顿舞蹈病，运动神经元疾病包括肌萎缩侧索硬化(ALS)，婴儿脊髓肌萎缩，多发性硬化症，体位性低血压，疼痛，神经痛，外伤性神经退行性变例如在中风后或意外后(例如外伤性头部或脑损伤或脊髓损伤)，巴腾氏病，科凯恩综合征，唐氏综合征，皮质基底神经节变性，多系统萎缩，脑萎缩，橄榄体脑桥小脑萎缩，齿状核红核萎缩，苍白球丘脑底核萎缩(pallidoluysian atrophy)，脊髓延髓萎缩，视神经炎，硬化性全脑炎(SSPE)，注意力缺陷障碍，病毒后脑炎(post-viral encephalitis)，脊髓灰质炎后综合征，法尔氏综合征，Joubert综合征，格-巴二氏综合征，无脑回，烟雾病，神经元移行障碍，孤独综合征，多聚谷氨酰胺病，尼-皮二氏病，进行性多灶性白质脑病，脑假瘤，雷夫叙姆病，泽韦格综合征，核上性麻痹，弗里德赖希氏共济失调，2型脊髓小脑性共济失调，Rhett综合征，夏-德综合征，结节性硬化症，匹克氏病，慢性疲劳综合征，神经病包括遗传性神经病变、糖尿病神经病变和有丝分裂神经病变(mitotic neuropathy)，基于朊病毒的神经退行性变包括克罗伊茨费尔特-雅各布病(CJD)、变异型CJD、新变异型CJD、牛海绵状脑病(BSE)、GSS、FFI、库鲁病和Alper综合征，约瑟夫氏病，急性播散性脑脊髓炎，蛛网膜炎，中枢神经系统血管病变，肢体神经功能的丧失，夏科-马里-图思病，克腊比氏病，脑白质营养不良，易患心脏衰竭，哮喘，癫痫，听觉神经退行性变，黄斑变性，色素性视网膜炎和青光眼引起的视神经退化。
[0130] 精神病学病症
[0131] 表述“精神病学病症”包括所有人类精神病症，其对人格和行为有影响，尤其是与人类的思考、感觉、情绪和与其他人相处的能力有关。因此，“神经病学的”和“精神病学的”病症之间有一些重叠，并且在本发明中当有待通过本发明处理或预防的“精神病学病症”将与受NF或NFr直接或间接影响的潜在神经病学缺陷直接或间接相关时尤其如此。
[0132] 一般而言，精神病症不被诊断为“精神病学病症”，除非相关的行为或思维导致个体的严重不良应激或他或她日常功能中断。因此在可诊断的病症和相似但较不严重或中断的其处理应当被认为是非治疗性的生理学功能之间存在界限(参见下文)。
[0133] 本发明关注的精神病学病症的实例包括但不限于：焦虑性障碍(例如急性应激障碍、惊恐性障碍、广场恐怖症、社交恐怖症、特定恐怖症、强制性障碍、创伤后应激障碍、躯体变形障碍和泛化性焦虑性障碍)，性焦虑性障碍(例如阴道痉挛、男性勃起功能障碍、男性性高潮障碍和女性性高潮障碍)，儿童期病症(例如注意力缺陷多动症(ADHD)、阿斯伯格综合症、孤独症、行为紊乱、对立违抗性障碍、分离焦虑性障碍和图雷特氏症)，进食障碍(例如神经性厌食症和神经性贪食症)，情绪障碍(例如抑郁、严重的抑郁性障碍、双相型障碍(躁狂抑郁)、季节性情感障碍(SAD)、循环情感性障碍和情绪恶劣性障碍)，睡眠障碍，认知精神病学病症(例如谵妄、遗忘症)，人格障碍(例如偏执型人格障碍、分裂样人格障碍、分裂型人格障碍、反社会型人格障碍、边缘型人格障碍、表演型人格障碍、自恋型人格障碍、回避型人格障碍、依赖型人格障碍和强迫型人格障碍)，精神障碍(例如精神分裂症、妄想性障碍、短时精神障碍、精神分裂症样精神障碍、情感分裂性精神障碍和分享性精神障碍)以及物质有关的病症(substance-related disorder)(例如酒精依赖、安非他明类兴奋剂的依赖、大麻类依赖、可卡因依赖、致幻剂依赖、吸入剂依赖、尼古丁依赖、类阿片依赖、苯环利定依赖和镇静剂依赖)。
[0134] 炎性和变应性病症
[0135] 根据本发明可处理的炎性和变应性病症的实例包括咳嗽，瘙痒(参见Johansson，O等人，Arch.Dermatol.Res.，2002，293，第614-619页)，食物耐受不良，银屑病，哮吼，肠易激综合征，耳鸣，梅尼尔氏症，应激诱导的溃疡或乙酰水杨酸诱导的溃疡，变应性鼻炎，变应性皮炎，结膜炎，炎症，炎性肠病，回肠炎，胰腺炎，胆囊炎，非变应性鼻炎，食管炎，骨关节炎，类风湿性关节炎，花粉热，对房螨(house mite)的变应反应，对宠物的变应反应，亨廷顿舞蹈病，急性炎性疼痛，内脏痛，牙齿疼痛和头痛，炎性痛觉过敏，触觉痛觉过敏(参见例如Ma，QP等人，Neuroreport 1997，8，第807-810页)，变应性皮肤反应，变应性眼部反应，哮喘(参见Bonini，S等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，1996，93，第10955-10960页；Braun，A等人，Am.J.Respiratory Cell Mol.Biol.，1999，21，第537-546页)，动脉粥样硬化，关节炎，慢性溃疡(例如与类风湿性关节炎相关的慢性血管溃疡)和湿疹。
[0136] 根据本发明的相关的非治疗性处理包括维持正常呼吸(maintaining normal breathing)，减轻咽喉痛和咳嗽，帮助维持正常消化，减轻胃部不适，帮助从感冒和流感复原，作为解充血药，减轻头疼，缓解肌肉疼痛，缓和轻微疼和痛，提供对牙痛的缓解，提供对口腔或胃溃疡的缓解并且维持健康的关节。
[0137] 免疫病症
[0138] 根据本发明可处理的NF介导的免疫病症的实例包括可通过NF对上文引用的Vega等人出版物的表2(第8页)中所列的免疫细胞功能的作用的正常化来处理的病症。这些病症包括免疫缺陷病况例如AIDS(其中NF的正常化将提高受治疗者的免疫活性)，免疫过度性病况(其中NF的正常化将下调受治疗者的免疫系统)和受损的免疫特异性的病况(其中NF的正常化将辅助免疫系统对外来剂更加特异)，例如自身免疫疾病诸如系统性红斑狼疮(SLE)。
[0139] 肿瘤性病症
[0140] 根据本发明可处理的NF介导的恶性肿瘤性病症的实例包括乳腺、甲状腺、结肠、肺、卵巢、皮肤、肌肉、胰腺、前列腺、肾、生殖器、血液、免疫系统(例如脾脏、胸腺和骨髓)、脑、外周神经系统和皮肤(如黑色素瘤和卡波西氏肉瘤)的癌症。
[0141] 在损害或异常的组织中的或与损害或异常的组织相关的神经元功能的复原或正常化
[0142] 本发明在一个方面中提供了在损害或异常的组织中的或与损害或异常的组织相关的神经元功能的复原或正常化。所述组织可以是脑部组织或脑外的组织，例如皮肤、骨、眼部或肌肉组织。
[0143] 本发明的这一方面可，例如，与手术、割伤、创伤、意外伤害、挫伤、擦伤、烧伤、冻伤、骨折之后的神经的复原联合使用。
[0144] 伤口愈合
[0145] 本发明在一个方面中提供辅助伤口愈合。创伤可以是任何皮肤病损，包括慢性(例如溃疡性)皮肤病损和极性皮肤病损。这些病损的原因很多并且可变。一般来说所有的皮肤病损能够使用本发明有益处理。
[0146] 测量以评估愈合的质量的伤口愈合的方面包括伤口的闭合速度，伤口上皮肤组织的再生速度，与周围的皮肤色素沉着有关的愈合的伤口的颜色，与周围皮肤强度相关的愈合的伤口的机械强度，瘢痕组织或具有异常纹理或糙度的其他皮肤组织在最大限度的愈合之后保留在伤口上的程度，伤口停止渗出或渗出物流量减少所用的时间，伤口或流出物的物理外观和气味，以及愈合过程中不同时间的疼痛、搔痒或其他不舒服的程度。
[0147] 对照所有这些标准，本发明提供与现有技术处理相比的益处。没有外源NF的必然加入，受治疗者的天然NF的自身调节的稳态预期在所有所使用的标准下有益影响人类和非人类哺乳动物皮肤病损。
[0148] 根据本发明的剂可被外用或系统施用而用于伤口的处理。如果外用施用，它们可从任何适合的组合物或结构递送，例如用于伤口的敷料或应用于伤口的乳膏或其他制剂。递送系统的另外细节提供于下文。
[0149] 促进或辅助组织的安康和一般健康
[0150] 本发明在另一个方面提供促进肌肉和其他组织从锻炼、劳动或消耗复原和提高耐力和肌肉持久力(例如在竞争性或非竞争性运动中)和减少疲劳的感觉。
[0151] 而且通常，组织的安康和一般健康(在脑中和脑外部两者)可根据本发明来辅助。
[0152] 在一个实例中，根据本发明的剂对皮肤的化妆品、眼部或皮肤学应用将提高新皮肤细胞的补充并且将因此辅助皮肤或眼部的健康和安康的感觉。参见例如Alber，K.M.等人，Neuroscientist 2007，13，第371-382页。根据本发明的方法涉及皮肤NF的自身调节的稳态，其避免对身体施用毒性剂，取而代之的是调节受治疗者自己的天然NF以便进行处理。
[0153] 尽管不是专有地，但是这些用途通常是非治疗性的，主要靶向健康人类。
[0154] 哺乳动物
[0155] 除了对人类处理有用，本发明在同样可受到神经病学和心理学/精神病学病况影响的许多哺乳动物中同样有用。这些哺乳动物包括非人类的灵长类(例如猿类、猴类和狐猴类)例如在动物园中，伴侣动物例如猫类或犬类，劳作或运动动物例如犬类、马类、和小马类，农场动物例如猪类、绵羊、山羊类、鹿、牛类和家畜，以及实验室动物例如兔类或啮齿类(诸如大鼠、小鼠、仓鼠、沙鼠或豚鼠)。
[0156] 当有待被处理的病症、病况、特质或功能对人类来说是唯一的时，那么应当理解的是有待被处理的哺乳动物是人类。相同的理解分别应用于任何其他哺乳动物物种，如果有待被处理的病症、病况、特征或功能对那个物种来说是唯一的。
[0157] 剂
[0158] 本文使用的活性剂通常但不是基本上具有小于约800的分子量，例如小于约700、例如小于约600、例如小于约500、例如小于约450。
[0159] 按照来自甾类化学的标准命名，左手边的6元环被命名为A环，与A环邻接的环命名为B环。同样按照来自甾类化学的标准命名，碳原子如下文所示编号，以致环之间的稠合线存在于在5和10位碳原子之间。
[0160] 在A/B顺式甾体呋甾烷/呋甾烯或螺甾烷/螺甾烯皂甙元中，在5和10位碳原子的取代基或氢原子成β定位，其定位在分子的平面(上方)。
[0161] 这具有将分子的平面扭折以产生看起来如同下文在三维图画中的药效基团的作用。在10位碳原子上的取代基或氢原子在图画中被标记为“a”，而在5位碳原子上的取代基或氢原子被标记为“b”；C环仅部分展示：
[0162]
[0163] 这是A/B顺式基元。
[0164] 公 开 于 WO-A-99/48482、WO-A-99/48507、WO-A-01/23407、WO-A-01/23408、WO-A-02/079221、WO-A-03/082893、WO-A-2005/105825和WO-A-2006/048665中的A/B顺式呋甾烷/呋甾烯和螺甾烷/螺甾烯皂甙元和它们的衍生物形式的实例可作为用于本发明的用途的活性剂被特别提及。公开于这些出版物中的代表A/B顺式呋甾烷/呋甾烯或螺甾烷/螺甾烯皂甙元和其酯、醚、酮和糖基化的形式的所述类的化合物的特定套的化合物和单独的化合物通过引用并入本文。
[0165] A/B顺式呋甾烷/呋甾烯和螺甾烷/螺甾烯皂甙元的酯、醚、酮和糖基化的形式可以如此以致一个或多个酯、醚、酮和糖基化基团可存在于分子中。一般来说，酯、醚、酮或糖基化基团可使用传统的化学合成方法在A/B顺式螺甾烷/螺甾烯皂甙元的任何一个或多个OH部分形成。
[0166] 根据本发明的活性剂的实例是由下列式代表的A/B顺式化合物：WO-A-01/23406中的式I(公开的PCT申请的第6页)、WO-A-01/23406中的式II(公开的PCT申请的第7页)、WO-A-01/23407中的式I(公开的PCT申请的第6页)、WO-A-01/23407中的式II(公开的PCT申请的第6页)、WO-A-01/23408中的式I(公开的PCT申请的第6页)、WO-A-01/49703中的式I(公开的PCT申请的第7页)、WO-A-02/079221中的式II(公开的PCT申请的第6页)、WO-A-03/082893中的式I(参见公开的PCT申请的第4页)、WO-A-03/082893中的式II(参见公开的PCT申请的第4页)、WO-A-03/082893中的式III(参见公开的PCT申请的第5页)、EP-A-1024146中的式I(参见公开的EP申请的第4页)和EP-A-102416中的式II(参见公开的EP申请的第8页)。
[0167] 例如，分子菝葜皂甙元和异菝葜皂甙元和它们相应的酯、醚、酮和皂甙(糖基化)衍生物是对本发明来说有用的活性剂。是A/B顺式呋甾烷皂甙的化合物知母皂甙BII是对本发明来说有用的活性剂。
[0168] 用于本发明的其他有用的活性剂包括表菝葜皂甙元、表异菝葜皂甙元、米他皂甙元、沙漠皂甙元、地奥惕皂甙元(diotigenin)、异地奥惕皂甙元、丝兰肖配基(texogenin)、杨诺皂甙元、美克索皂甙元和马尔可皂甙元和它们相应的酯、醚、酮和皂甙衍生物。
[0169] 所述活性剂可以任何适合的晶体或非结晶形式和任何适合的无水、水合或溶剂化形式来使用。菝葜皂甙元和异菝葜皂甙元和它们的衍生物的这些形式的进一步的细节在特定参考文献指向的WO-A-2005/105825和WO-A-2006/048665中给出。
[0170] 脂类可以特别地包括3位酯例如羧酸酯(如cathylate(乙氧羰氧基)、乙酸酯、琥珀酸酯、肉桂酸酯、阿魏酸酯、丙酸酯、丁酸酯、异丁酸酯、戊酸酯、异戊酸酯、己酸酯、异己酸酯、二乙基乙酸酯、辛酸酯、癸酸酯、月桂酸酯、肉豆蔻酸酯、棕榈酸酯、硬脂酸酯、苯甲酸酯、苯乙酸酯、苯丙酸酯、肉桂酸酯、对硝基苯甲酸酯、3，5-二硝基苯甲酸酯、对氯代苯甲羧基酯、2，4-氯代苯甲羧基酯、对溴代苯甲羧基酯、间溴代苯甲羧基酯、对甲氧基苯甲羧基、邻苯二甲酰基酯、甘氨酸酯、丙氨酸酯、缬氨酸酯、苯丙氨酸酯、异亮氨酸酯、甲硫氨酸酯、精氨酸酯、天冬酰胺酯、天冬氨酸酯、半胱氨酸酯、谷氨酸酯、组氨酸酯、赖氨酸酯、脯氨酸酯、丝氨酸酯、苏氨酸酯、色氨酸酯、酪氨酸酯、富马酸酯、马来酸酯)，膦酸酯和磺酸酯。
[0171] 醚可特别包括3位醚例如烷氧基衍生物(例如甲氧基、乙氧基、正丙氧基、仲丙氧基、正丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基)。
[0172] 酮(皂甙酮(sapogenone))通常是相应的皂甙元的3-酮衍生物，尽管在环系统的不同OH负载碳原子处形成的其他酮衍生物也是可能的。3-酮皂甙酮的实例包括洋菝葜皂甙酮(sarsasapogenone)、菝葜精酮、表洋菝葜皂甙酮(episarsasapogenone)和表菝葜精酮。
[0173] 适合的皂甙化合物的实例包括其中3-位的碳原子(即R3连接的碳)载有代替R3的O-糖部分，例如，单糖、二糖或三糖或更高的多糖或其酰化形式。这些糖基团的实例包括选自葡萄糖、甘露糖、果糖、半乳糖、麦芽糖、纤维二糖、蔗糖、鼠李糖、木糖、阿拉伯糖、岩藻糖、金鸡纳糖、芹糖、乳糖、半乳糖-葡萄糖、葡萄糖-阿拉伯糖、岩藻糖-葡萄糖、鼠李糖-葡萄糖、葡萄糖-葡萄糖-葡萄糖、葡萄糖-鼠李糖、甘露糖-葡萄糖、葡萄糖-(鼠李糖)-葡萄糖、葡萄糖-(鼠李糖)-鼠李糖、葡萄糖-(葡萄糖)-葡萄糖、半乳糖-(鼠李糖)-半乳糖和其酰化(例如乙酰化)衍生物的糖基团。
[0174] 伪皂苷(元)类是相应的螺甾烷/螺甾烯皂甙元或皂甙的环开口的衍生物，其中F环是开口并且锁定的。伪皂苷(元)类可具有C20-C22键处的饱和或不饱和。饱和形式有时被称为“二羟基伪皂苷(元)类”形式。
[0175] 用于本发明的活性剂可被单独或以所期望的组合来使用。
[0176] 其他的辅剂或辅成分
[0177] 本发明中使用的组合物如果需要可包括一种或多种辅剂和/或一种或多种辅成分，如与组合物和施用路线有关的下文中更详细描述的。
[0178] 尤其是，可使用代谢佐剂、增加酮体水平的化合物(生酮化合物)、三羧酸(TCA)循环中间体、体内可转化成TCA中间体的化合物、能量增强化合物或其任何混合物。
[0179] 代谢佐剂包括维生素(例如维生素E)，矿物质，抗氧化剂和其他相关的化合物(例如抗坏血酸、生物素、钙三醇、维生素B12、叶酸、烟酸、泛酸、维生素B6、维生素A、维生素A醛(视黄醛)、视黄酸、核黄素、硫胺素、α-生育酚、维生素K1、维生素K2、钙、镁、钠、铝、锌、钾、铬、钒、硒、磷、锰、铁、氟、铜、钴、钼、碘或其任何组合。
[0180] 生酮化合物通常增加受者的内源的脂肪代谢(氧化)并由此增加血酮水平，并且包含例如C3-8酮诸如丙酮，D-β-羟丁酸，D-β-羟丁酸的代谢前体(例如乙酰乙酰基前体诸如乙酰乙酰基-1，3-丁二醇、乙酰乙酰基-D-β-羟丁酸和乙酰乙酰基甘油；酯例如D-β-羟丁酸与一羟基、二羟基或三羟基醇的酯；或D-β-羟丁酸的多酯例如具有约2至约100个重复诸如约3至约10个重复的聚D-β-羟丁酸或末端氧化的聚D-β-羟丁酸)，乙酰乙酸的代谢前体或其任何组合。
[0181] TCA中间体包括柠檬酸、乌头酸、异柠檬酸、α-酮戊二酸、琥珀酸、富马酸、苹果酸、氧代乙酸或其任何组合。
[0182] 体内可转化成TCA中间体的化合物包括2-酮-羟基丙醇、2，4-二羟基丁醇、2-酮-4-羟基丁醇、2，4-羟基丁酸、2-酮-4-羟基丁酸、天冬氨酸酯、单和二-烷基-草酰乙酸酯、丙酮酸酯、葡萄糖-6磷酸酯或其任何组合。
[0183] 能量增强化合物包括例如辅酶CoQ-10、肌酸、肌酸衍生物、L-肉毒碱、n-乙酰-肉毒碱、L-肉毒碱衍生物或其任何组合。这些化合物通过许多方式增强能量产生。肉毒碱将增加脂肪酸的代谢。CoQ-10在线粒体中的电子传递过程中起到电子载体的作用。相应地，加入这些化合物和活性剂例如中链甘油三酯(MCT)将增加代谢效力，尤其是在可被除去营养的个体中。
[0184] 所述辅剂当存在时可以代谢前体的形式例如与一种或多种阳离子的络合物或作为盐来提供以在疗法或营养中使用。阳离子和典型的生理盐的实例包括钠、钾、镁、钙盐，在每个实例中阳离子通过形成盐络合物的生理平衡离子例如L-赖氨酸、L-精氨酸、甲基葡萄糖胺或本领域中已知的其他物质来平衡。这些代谢前体的制备和使用描述于WO-A-98/41201和WO-A-00/15216中，其公开方法通过引用并入本文。
[0185] 组合物和施用路线
[0186] 活性剂可以包含活性剂和任何适合的另外的成分的组合物的形式被施用。组合物可例如是药物组合物(药物)、食品、食品补充物或饮料。这种组合物可包含特定的化合物和/或它们的生理学可接受的酯、酰胺、盐、溶剂化物、类似物或其他适合的衍生物的混合物。通常，本文中提及一种活性剂和/或组合物的其他成分的存在在其范围内包括这些剂和/或成分的两种或多种的混合物的存在。
[0187] 药物组合物可通过任何适合的路线施用、包括但不限于口服的、鼻胃的、直肠的、透皮的、胃肠外的(例如皮下的、肌肉内的、静脉内的、髓内和皮内的注射或输注)、鼻内的、透粘膜的、灌输、阴道的、外用的、经颊的和舌下的。
[0188] 如同活性剂中的许多，施用位点可远离有待被处理的哺乳动物的脑部是某些小分子亲脂剂的使用的典型特征，所述剂通过血液迁移穿过血脑和/或血液神经屏障。
[0189] 在本发明的背景下术语“药物组合物”意指取决于施用方式和剂型的性质包含活性剂并且包含另外地药学上可接受的载体、稀释剂、佐剂、辅料或媒介物诸如保存剂、填充剂、崩解剂、缓冲剂、保存剂、渗透增强剂、增湿剂、乳化剂、悬浮剂、甜味剂、调味剂、芳香剂、抗细菌剂、抗真菌剂、润滑剂和分散剂的组合物。适合的剂型包括例如片剂、锭剂、粉末、酏剂、糖浆，液体制剂包括悬浮液，喷雾剂，吸入剂，片剂，糖锭剂，乳剂，溶液，颗粒，胶囊剂和栓剂以及用于注射的液体制剂包括脂质体制剂。技术和制剂通常可在Remington，Pharmaceutical Sciences(药学)，Mack Publishing Co.，Easton，PA，最新版中发现。
[0190] 本文所用的术语“食品”、“食品补充物”、“饮料”和“饮料补充物”具有这些术语的正常含义并且未被限制于药物制剂。这些组合物可适用于口服摄入。补充物组合物(例如食品补充物或饮料补充物)被安排加至食物和饮料并与它们一起被摄入。食品通常可包括生热物质例如脂肪、油脂和碳水化合物以及蛋白质以及矿物质和纤维源。组合物的实例包括以奶制品、谷类、蔬菜、肉、鱼、家禽或水果为基础的食品。饮料的实例包括含碳酸饮料和非碳酸饮料，果汁，浸泡饮料例如咖啡或茶诸如凉茶、果茶、日本绿茶或印度或中国茶。组合物可包含奶或奶来源的成分，例如奶粉和/或乳糖和/或酪蛋白。奶或奶来源的成分优选地来源于奶牛或山羊。可使用植物来源的奶例如豆奶。可食用的组合物可包含一种或多种发酵的组分。组合物可包含酸乳酪。食品补充物可例如含有维生素、矿物质、咖啡因、麻黄属生物碱。
[0191] 口服组合物
[0192] 适合的可摄入的形式的实例包括但不限于固体，具有液体、粉末或固体核的剂型；可咀嚼或口服的崩解片剂；薄贴片；树胶片剂；泡沫片剂以及包衣和/或成粒基质中具有唾液分泌诱导剂的包衣的颗粒。在一个实施方案中，剂型是设计以包含某一成分例如下文所定义的活性成分的特定的预定量(即剂量)的固体、半固体或液体组合物。适合的剂型可以是包含用于口服施用、经颊施用或粘膜递送的那些的药学药物递送系统；或用于递送矿物质、维生素和其他营养制品、口腔护理剂、调味剂和类似物的组合物。在一个实施方案中，本发明的剂型被看作是固体；然而它们可包含液体或半固体组分。在另一个实施方案中，剂型是用于向人类的胃肠道递送药物活性成分的口服施用系统。组合物中适合的辅剂可包括镇痛药、抗炎剂、抗关节炎药、麻醉剂、抗组胺剂、镇咳药、抗生素、抗癌剂、抗过敏剂、抗感染剂、抗病毒剂、抗凝血剂、抗抑郁药、抗糖尿病剂、止吐药、抗胃肠气胀药、抗真菌药、镇痉剂、食欲抑制剂、支气管扩张剂、心血管剂、中枢神经系统剂、中枢神经系统兴奋剂、免疫系统兴奋剂、减充血剂、利尿剂、祛痰剂、胃肠道剂、偏头痛制剂、晕车产品、粘液溶解药、肌肉松弛剂、骨质疏松症制剂、聚二甲基硅氧烷、呼吸剂、安眠药、尿路剂及其混合物。适合的口腔护理剂可存在，例如呼吸清新剂、牙齿漂白剂、抗微生物剂、牙矿化剂、蛀牙抑制剂、局部麻醉剂、粘膜保护剂(mucoprotectant)和类似物。适合的调味剂包括薄荷醇，薄荷油，薄荷香料，水果香料，巧克力，香草，泡泡糖香料，咖啡香料，甜酒香料和组合以及类似物。也可存在的适合的胃肠道剂的实例包括制酸剂例如碳酸钙、氢氧化镁、氧化镁、碳酸镁、氢氧化铝、碳酸氢钠、碳酸二羟铝钠；刺激性泻剂例如比沙可啶、美鼠李皮、丹蒽醌、番泻叶、酚酞、芦荟、蓖麻油、蓖麻油酸和去氢胆酸以及其混合物；H2受体拮抗剂例如法莫替丁、雷尼替丁、西米替丁、尼扎替丁；质子泵抑制剂例如奥美拉唑或兰索拉唑；胃肠细胞保护剂例如硫糖铝和米索前列醇；胃肠道促动剂例如普卢卡必利；用于幽门螺旋杆菌(H.pylori)的抗生素例如克拉霉素、阿莫西林、四环素和甲硝唑；止泻药例如地芬诺酯和洛哌丁胺；甘罗溴铵；止吐药例如奥坦西隆；镇痛药例如美沙拉嗪。选自镇痛药，抗炎药和退烧药的剂也可存在：例如非甾体抗炎药(NSAID)包括丙酸衍生物例如：布洛芬、萘普生、酮洛芬和类似物；乙酸衍生物例如吲哚美辛、双氯芬酸、舒林酸、托美汀和类似物；芬那酸衍生物例如：甲芬那酸，甲氯芬那酸，氟芬那酸和类似物；联苯基羧酸衍生物例如：二氟尼柳、氟苯柳和类似物以及昔康类例如：吡罗昔康、舒多昔康、伊索昔康、美洛昔康和类似物。在一个实施方案中，辅活性(coactive)成分可选自丙酸衍生物NSAID：例如布洛芬、萘普生、氟比洛芬、芬布芬、非诺洛芬、吲哚洛芬、酮洛芬、氟洛芬、吡洛芬、卡洛芬、奥沙普秦、普拉洛芬、舒洛芬和其药学上可接受的盐、衍生物及组合。在本发明另一实施方案中，活性成分可以选自对乙酰氨基酚、乙酰水杨酸、布洛芬、萘普生、酮洛芬、氟比洛芬、双氯芬酸、环苯扎林、美洛昔康、罗非考昔、塞来考昔和其药学上可接受的盐、酯、异构体和混合物。
[0193] 在另一个实施方案中，辅活性剂可选自伪麻黄碱、去氧肾上腺素、苯丙醇胺、扑尔敏、右美沙芬、苯海拉明、愈创木酚甘油醚、阿司咪唑、特非那定、非索非那定、氯雷他定、地氯雷他定、多西拉敏、诺阿斯米唑、西替利嗪、苯佐卡因、其混合物和其药学上可接受的盐、酯、异构体和混合物。在另一个实施方案中，辅活性成分可以是哌甲酯、莫达非尼和适合注意力缺陷多动症或注意缺陷障碍的其他活性剂；奥昔布宁；昔多芬和环苯扎林。活性成分以治疗有效的量存在于在本发明的剂型中，所述治疗有效的量是对口服施用产生所期望的治疗响应并且可以很容易地由本领域中熟练技术人员确定的量。在确定这些量时，如本领域中已知的，被施用的特定的活性成分，活性成分的生物利用度特征，给药方案，患者的年龄和体重以及其他因素必须考虑。在一个实施方案中，剂型包括至少约85重量百分比的活性成分。活性成分可以任何形式存在于剂型中。例如，活性成分可在分子水平上被分散例如熔融或溶解在剂型中，或可以颗粒的形式，其继而可是包衣或未包衣的。如果活性成分是颗粒的形式，颗粒(无论包衣或未包衣的)通常具有约1微米至约2000微米的平均微粒尺寸。在一个实施方案中，这些颗粒是具有约1微米至约300微米的平均微粒尺寸的晶体。在还有另一个实施方案中，这些颗粒是具有约50微米至约2000微米，例如从约50微米至约1000微米或从100微米至约800微米的平均微粒尺寸的粒料或团粒。
[0194] 在一个实施方案中，本发明的口服组合物是食品组合物，例如人类或宠物食品。在某些实施方案中，组合物是食品组合物，除了活性剂之外还包含每种以干重为基础的约
15-50％蛋白、约5-40％脂肪、约15-60％碳水化合物、5-10％灰分，并具有5-20％的含湿量。在某些实施方案中，食品预期提供完全的必要饮食需要。还提供的是作为零食、宠物小吃(例如饼干)、营养棒和用于食物产品或膳食补充物的其他形式有用的组合物，包括如下文所讨论的片剂、胶囊、凝胶、糊剂、乳剂、锭剂和类似物。任选地，食品组合物可以是无水组合物(例如用于宠物食品的粗粒)、半湿组合物、湿润组合物或其任何混合物。
15-50％蛋白、约5-40％脂肪、约15-60％碳水化合物、5-10％灰分，并具有5-20％的含湿量。在某些实施方案中，食品预期提供完全的必要饮食需要。还提供的是作为零食、宠物小吃(例如饼干)、营养棒和用于食物产品或膳食补充物的其他形式有用的组合物，包括如下文所讨论的片剂、胶囊、凝胶、糊剂、乳剂、锭剂和类似物。任选地，食品组合物可以是无水组合物(例如用于宠物食品的粗粒)、半湿组合物、湿润组合物或其任何混合物。
[0195] 本发明的组合物可以是特别为人类消耗配制的食物产品。这些将包括预期供应人类的必要饮食需要以及其他人类膳食补充物的食物和营养品。在一个实施方案中，为人类消耗配制的食物产品是完全的并且营养平衡的，而在其他中，它们预期作为与平衡好的或者配制的饮食相关使用的膳食补充物。
[0196] 组合物可以是食品补充物，例如肉汁、饮用水、饮料、浓缩液、凝胶、酸奶、粉末、颗粒、贴片、悬浮液、咀嚼物、佳肴(morsel)、小吃、零食、丸剂、药丸、胶囊、片剂或任何其他递送形式。术语“食品补充物”包括膳食补充物。膳食补充物可为特定物种或者甚至个体动物例如伴侣动物或人类的消耗而特别配制。在一个实施方案中，膳食补充物可包含相对浓缩剂量的活性剂以致补充物可以小量施用于动物或可在施用于动物之前稀释。在某些实施方案中，膳食补充物或其他包含活性的组合物可需要在施用于动物之前与水或类似物混合，例如以调整剂量，以使其更可口或允许以更小的剂量更频繁的施用。
[0197] 本发明的组合物可被冷却或冷冻。活性剂可以与组合物的其他成分预混以提供所需要的有利的量，可以被乳化，包衣至宠物食品组合物、膳食补充物或为人类消耗配制的食物产品上，或可在消耗其或将其提供给动物(例如使用粉末或混合物)之前加至组合物。
[0198] 在一个实施方案中，组合物以有效在组合物所施用的动物或人类中具有所期望的生理学或心理学或行为学的作用的量包含活性剂。对于宠物食品和为人类消耗配制的食物产品，作为组合物的百分比的活性剂的量在以干物质为基础的组合物的约1％至30％，尽管可提供更小或更高的百分比。在不同的实施方案中，量是以干物质为基础的组合物的约1.0％、1.5％、2.0％、2.5％、3.0％、3.5％、4.0％、4.5％、5.0％、5.5％、6％、6.5％、7％、7.5％、8％、8.5％、9％、9.5％、10％、10.5％、11％、11.5％、12％、12.5％，13％、13.5％、
14％、14.5％、15％、15.5％、16％、16.5％、17％、17.5％、18％、18.5％、19％、19.5％、20％、
20.5％、21％、21.5％、22％、22.5％、23％、23.5％、24％、24.5％、25％、25.5％、26％、
26.5％、27％、27.5％、28％、28.5％、29％、29.5％、30％或更多。可将膳食补充物配制以包含几倍高浓度的活性剂，以能够以片剂、胶囊、浓缩液或其他相似的剂型施用于动物或人类或在施用之前稀释，例如通过在水中稀释，喷雾或喷洒在宠物或人类食品上和其他相似方式的施用。对于膳食补充物，活性剂可单独被直接施用于动物或人类或者直接应用于动物或人类的常规食物。
14％、14.5％、15％、15.5％、16％、16.5％、17％、17.5％、18％、18.5％、19％、19.5％、20％、
20.5％、21％、21.5％、22％、22.5％、23％、23.5％、24％、24.5％、25％、25.5％、26％、
26.5％、27％、27.5％、28％、28.5％、29％、29.5％、30％或更多。可将膳食补充物配制以包含几倍高浓度的活性剂，以能够以片剂、胶囊、浓缩液或其他相似的剂型施用于动物或人类或在施用之前稀释，例如通过在水中稀释，喷雾或喷洒在宠物或人类食品上和其他相似方式的施用。对于膳食补充物，活性剂可单独被直接施用于动物或人类或者直接应用于动物或人类的常规食物。
[0199] 组合物可任选地包含补充物质例如矿物质、维生素、盐、佐料、色素和防腐剂。补充的矿物质的非限制性实例包括钙、磷、钾、钠、铁、氯化物、硼、铜、锌、镁、锰、碘、硒和类似物。补充的维生素的非限制性实例包括维生素A、B类维生素中的任一种、维生素C、维生素D、维生素E和维生素K，包括前述的各种盐、酯或其他衍生物。还可包括另外的膳食补充物，例如烟酸、泛酸、菊粉、叶酸、生物素、氨基酸和类似物的任何形式，以及其盐和衍生物。另外，组合物可包含有利的长链多不饱和脂肪酸例如(n-3)和/或(n-6)脂肪酸、花生四烯酸、二十碳五烯酸、二十二碳五烯酸和二十二碳六烯酸以及其组合。
[0200] 本文提供的组合物任选地包含促进或维持一般神经病学健康或进一步增强认知功能的一种或多种补充物质。这些物质包括例如胆碱、磷脂酰丝氨酸、α-硫辛酸、CoQ10、乙酰-L-肉毒碱和包含例如来自诸如银杏(Ginko biloba)、假马齿苋(Bacopa monniera)、匍蜈蚣(Convolvulus pluricaulis)和/或雪滴花(Leucojum aestivum)的植物的一种或多种成分的草药成分或萃取物。
[0201] 在不同的实施方案中，本文提供的食品或食物/膳食补充物组合物优选地包含以干物质为基础的从15％至约50％的粗蛋白。粗蛋白物质包含来自无论动物、植物或其他的任何来源的一种或多种蛋白。例如，蔬菜蛋白例如黄豆、棉籽和花生是适于本文的用途的。动物和牛奶蛋白例如酪蛋白、白蛋白和肉类蛋白，包括猪肉、羔羊肉、马肉、家禽肉、鱼肉或其混合物是有用的。
[0202] 组合物可进一步包含以干物质为基础的约5％至约40％的脂肪。组合物还可进一步包含碳水化合物源。组合物通常包含以干物质为基础的约15％至约60％的碳水化合物。这些碳水化合物的实例包括谷物或粮食例如水稻、玉米、高粱、苜蓿、大麦、大豆、油菜、燕麦、小麦或其混合物。组合物还任选地包含其他成分，其包括碳水化合物例如无水的乳清和其他乳制产品或副产品。
[0203] 组合物还可包含至少一种纤维源。适于在食物或饲料中使用的各种可溶的或不可溶的纤维中的任一种可以被利用并且这些是本领域中技术人员已知的。适合的纤维源包括甜菜浆(来自甜菜)、阿拉伯树胶、塔尔哈胶、欧车前、米糠、角豆胶、柑橘浆、果胶、短链低聚果糖之外的低聚果糖、甘露聚糖低聚果糖、黄豆纤维、阿拉伯半乳聚糖、半乳寡聚糖、阿拉伯木聚糖或其混合物。可选择地，纤维源可以是可发酵的纤维。可发酵的纤维之前被描述提供对伴侣动物的免疫系统的好处。提供益生元(prebiotic)组合物以增强肠中益生元微生物的生长的可发酵的纤维或本领域的技术人员已知的其他组合物同样可被掺入组合物以帮助增强由本发明向动物的免疫系统提供的好处。另外，益生元微生物诸如乳酸菌(Lactobacillus)或双歧杆菌(Bifidobacterium)物种，例如，可被加至组合物。
[0204] 在另一个实施方案中，本发明的口服组合物是碳酸饮料组合物，由此包括浓缩物。这些组合物可以通过本领域中熟知的方法来制备。
[0205] 在这一实施方案中，由于二氧化碳(在水中形成碳酸)，饮料通常是酸性的。然而，对于这种饮料来说可能的是“被酸化”，即被调节以致其包含有待在“强烈的”饮料中发现的所述类型的另外的酸。实例可包括磷酸和食品酸味剂(有时称作“有益健康的酸”)诸如柠檬酸、马来酸、富马酸和酒石酸。水果、果汁和水果提取物包含食品酸味剂，因此含有这些成分的饮料可被认为是酸化的。
[0206] 饮料可以是不含酒精的。实例包括可乐饮品，柑橘饮品、柠檬饮品、柠檬水、滋补水、根啤酒、生姜麦芽酒和生姜啤酒。
[0207] 饮料可以是含酒精的，通常具有3-9％wt/wt乙醇。实例包括苹果酒和所谓“水果酒”，其具有果味，通常是伏特加或其他酒精饮料的含二氧化碳的掺和物。饮料可以是稍微含酒精的，通常具有0.1-3％wt/wt乙醇。实例包括混合酒(shandy)和某些发酵类型的根啤酒、生姜啤酒和柠檬水。
[0208] 碳酸饮料可以是非乳制产品，例如无奶或无酸奶的饮料。碳酸饮料可以是基本上无脂肪的。
[0209] 饮料可以是以调味的水为基础的饮料。
[0210] 碳酸饮料可以是澄清的或混浊的或浑沌的或不透明的。
[0211] 碳酸饮料可含有维生素，例如A、B、C、D、E和K组维生素中的一种或多种。可加入除了其他组分例如果汁中存在的维生素之外的维生素。可水溶的维生素B和C是非常适合的饮料组分。可脂溶的维生素A、D、E和K稍差。优选地维生素E或其衍生物不存在于饮料中。优选地维生素A和K或其衍生物在饮料中不存在。
[0212] 碳酸饮料可含有甜味剂。甜味剂可以是天然或合成的甜味剂，例如糖、玉米糖浆、糖醇(例如山梨糖醇、木糖醇、甘露醇、麦芽糖醇或异麦芽糖醇)或强烈的增甜剂(例如糖精、三氯蔗糖、纽甜、乙酰氨基磺酸钾或阿司帕坦)或其任何组合。
[0213] 外用组合物
[0214] 在另一个实施方案中，本发明的组合物是外用组合物，例如化妆品、眼部或皮肤病学的组合物。
[0215] 以任何适合的方式配制用于活性剂的递送的外用组合物。外用组合物可以传统方式配制为伤口辅料或其他医疗应用系统。
[0216] 本文描述的活性剂化合物可与一种或多种化妆品和/或皮肤病学上可接受的载体以及因此任选地其他治疗成分一起制备和递送。载体应当是可被接受的，因为它们是与组合物的任何其他成分相容并且对其受者是无害的。载体还可减少所述剂的任何不期望的副作用。这些载体或媒介物成分是本领域中已知的。参见Handbook of Cosmetic Science and Technology(化妆品科学和技术手册)Taylor & Francis Group，2006，其通过引用全文并入本文。
[0217] 用于根据本发明的外用施用的组合物可用于局部和/或系统使用，取决于其中所提供的活性成分以及施用的区域和频率。因此，针对外用制剂的下列讨论应当被看做是以其中包括能够外用系统施用的活性剂的程度描述系统制剂。
[0218] 用于在本发明的组合中使用的外用施用的组合物可被掺入通常所用并且可以多种形式存在的任何药物、化妆品、眼部或皮肤学制剂。例如，用于外用施用的组合物可以是溶液、油包水(W/O)型乳液、水包油(O/W)型乳液或多重乳液例如水包油包水(W/O/W)或油包水包油(O/W/O)乳液、水分散液或脂分散液、凝胶、乳膏、固体棒或气溶胶。根据本发明的乳剂，例如，以乳膏、洗剂或化妆乳的形式，是方便的并且包含例如脂肪、油、蜡和/或其他脂质，以及水和如它们通常被用于这一类型的制剂的一种或多种乳化剂。
[0219] 在某些实施方案中，用于根据本发明的外用施用的组合物可取决于它们的组成而被用作例如护肤霜、洁面乳、防晒洗剂、营养霜、日霜或晚霜以及类似物。
[0220] 用于外用施用的组合物可包含通常用于这些制剂的化妆品上的有效成分、化妆品辅助品和/或化妆品添加剂。这些包括例如抗氧化剂、防腐剂、杀菌剂、增稠剂、填充剂、消泡剂、香料、精油、颜料(例如烟雾硅胶、微泡沫颜料诸如氧化物和硅酸盐，包括任选包衣的氧化铁、二氧化钛、氮化硼和硫酸钡)、神经酰胺(无论是天然材料或天然神经酰的功能拟物)、表面活性剂、乳化剂、磷脂、胆固醇、植物鞘氨醇、另外的活性成分例如维生素或蛋白质(诸如棕榈酸视黄酯或乙酸视黄酯、为泛醇及其衍生物的维生素B、为生育酚乙酸酯的维生素E、为多不饱和脂肪酸酯诸如γ-亚麻酸酯的维生素F)、遮光剂(包括化学遮光剂和分散的物理遮光剂)、稳定剂、驱虫剂、醇类、增塑剂、多元醇、聚合物、泡沫稳定剂、电解质、有机溶剂、硅酮衍生物、增湿剂和/或保湿剂、油脂、油、蜡、水、盐、蛋白质水解或角质水解活性物质和类似物。这些添加剂可存在于用于外用施用的皮肤学或化妆品组合物中。
[0221] 如上文所记录的，除了用于外用递送的活性剂之外，本发明的外用组合物还可包含提供有益作用的一种或多种另外的活性剂或材料。例如，在特定的实施方案中，外用组合物可包含防晒产品。这些除了根据本发明使用的活性成分之外优选地包含至少一种另外的UVA过滤物和/或至少一种UVB过滤物和/或至少一种无机颜料。
[0222] UVB过滤物可以是在油或水中可溶的。在油中可溶的物质的实例是例如：3-苯亚甲基樟脑及其衍生物，例如3-(4-甲基苯亚甲基)樟脑，4-氨基苯甲酸衍生物，优选地2-乙基己基4-二甲氨基苯甲酸酯、戊基4-二甲氨基苯甲酸酯；肉桂酸酯，优选地2-乙基己基4-甲氧基肉桂酸酯、异戊基4-甲氧基肉桂酸酯；水杨酸酯，优选地2-乙基己基水杨酸酯、
4-异丙基苄基水杨酸酯、甲基水杨醇(homomethyl salicylate)；二苯甲酮衍生物，优选地
2-羟基-4-甲氧基二苯甲酮、2-羟基-4-甲氧基-4’-薄荷基二苯甲酮、2，2’-二羟基-4-甲氧基二苯甲酮；苯亚甲基丙二酸酯，优选地二(2-乙基己基)4-甲氧基苯亚甲基丙二酸酯；
2，4，6-三苯胺基-(对羰基-2’-乙基-1’-己氧基)-1，3，5-trizane。
4-异丙基苄基水杨酸酯、甲基水杨醇(homomethyl salicylate)；二苯甲酮衍生物，优选地
2-羟基-4-甲氧基二苯甲酮、2-羟基-4-甲氧基-4’-薄荷基二苯甲酮、2，2’-二羟基-4-甲氧基二苯甲酮；苯亚甲基丙二酸酯，优选地二(2-乙基己基)4-甲氧基苯亚甲基丙二酸酯；
2，4，6-三苯胺基-(对羰基-2’-乙基-1’-己氧基)-1，3，5-trizane。
[0223] 在水中可溶的有利物质是：2-苯基苯并咪唑-5-磺酸和其盐，例如钠、钾或三乙醇胺盐，二苯甲酮的磺酸衍生物，优选地2-羟基-4-甲氧基二苯甲酮-5-磺酸和其盐；3-苯亚甲基樟脑的磺酸衍生物例如诸如4-(2-氧代-3-冰片基亚基-甲基)苯磺酸、2-甲基-5-(2-氧代-3-冰片基亚基甲基)磺酸和它们的盐。天然地，上文提及的可根据本发明使用的UVB过滤物的列表并非意指限制性的。
[0224] 可根据本发明使用的UVA过滤物的实例包括二苯酰甲烷衍生物，尤其是1-(4′-叔丁基苯基)-3-(4′-甲氧基苯基)丙烷-1，3-二酮和1-苯基-3-(4′-异丙基苯基)丙烷-1，3-二酮。
[0225] 可根据本发明使用的无机颜料的实例包括钛、锌、铁、锆、硅、锰、铝、铈的氧化物和它们的混合物和其中氧化物是活性剂的修饰。尤其是，优选地，它们是以二氧化钛为基础的颜料。
[0226] 可根据本发明使用的有利的抗氧化剂是对化妆品和/或眼部和/或皮肤学应用来说适合的或常规的所有那些抗氧化剂。抗氧化剂有利地选自由下列组成的组：氨基酸(例如甘氨酸、组氨酸、酪氨酸、色氨酸)和它们的衍生物，咪唑类(例如尿狗酸)和它们的衍生物，肽例如D，L-肌肽(D，L0肌肽)、D-肌肽、L-肌肽和它们的衍生物(例如鹅肌肽)，类胡萝卜素，胡萝卜素类(例如α-胡萝卜素、β-胡萝卜素、番茄红素)和它们的衍生物，金硫代葡萄糖，丙硫氧嘧啶和其他硫醇(例如硫氧还蛋白、谷胱甘肽、半胱氨酸、胱氨酸、胱胺和它们的糖基、N-乙酰基、甲基、乙基、丙基、戊基、丁基和月桂基、棕榈酰基、油基、γ-亚油基、胆固醇基和甘油基的酯)和它们的盐，硫二丙酸双十二酯，硫二丙酸双十八酯，硫二丙酸和其衍生物(例如酯、醚、肽、脂、核苷酸、核苷和盐)和非常低耐受剂量(例如pmol至μmol/kg)的磺肟(sulphoxime)化合物(例如丁硫氨酸磺肟，高半胱氨酸磺肟，丁硫氨酸砜，戊、己、庚硫氨酸磺肟)，此外的(金属)螯合剂(例如α-羟基脂肪酸、棕榈酸、植酸、乳铁蛋白)，α-羟酸(例如柠檬酸、乳酸、苹果酸)，胡敏酸，胆汁酸，胆汁提取物，胆红素，胆绿素，EDTA，EGTA和它们的衍生物，不饱和脂肪酸和它们的衍生物(例如γ-亚麻酸、亚油酸、油酸)，叶酸及其衍生物，丙氨酸乙酰乙酸，黄酮类，多酚，儿茶酚，泛醌和泛醇以及它们的衍生物，维生素C和衍生物(例如抗坏血酸棕榈酸酯、镁抗坏血酸磷酸酯、抗坏血酸乙酸酯)，生育酚和衍生物(例如维生素E乙酸酯)和安息香树脂的苯甲酸松酯，芸香亭酸和其衍生物，阿魏酸和其衍生物，丁基羟甲苯，丁基羟基茴香醚，去甲二氢愈创木脂酸，去甲二氢愈创木酸，三羟基苯丁酮，尿酸和其衍生物，甘露糖和其衍生物，锌和其衍生物(例如ZnO、ZnSO4)，硒和衍生物(例如甲硫氨酸硒)，均二苯乙烯和其衍生物(例如均二苯乙烯氧化物，反式均二苯乙烯氧化物)和根据本发明适合的上述提及的活性成分的那些衍生物(例如盐、酯、醚、糖、核苷酸、核苷、肽和脂质)。
[0227] 当作为溶液、乳液或分散液提供时，用于外用施用的组合物可包含由下列示例说明的溶剂：水或水溶液；油例如癸酸或辛酸的甘油三酯，优选地蓖麻油；脂肪、蜡和其他天然和合成脂类，优选地脂肪酸与低C数的醇，例如与异丙醇，丙二醇或甘油的酯；脂肪醇与低C数链烷酸或与脂肪酸(fatty accord)的酯；低C数的醇，二醇或聚醇和它们的醚，优选地乙醇、异丙醇、丙二醇、甘油、乙二醇、乙二醇单乙醚或乙二醇单丁醚、丙二醇单甲醚、丙二醇单乙醚或丙二醇单丁醚，二乙二醇单甲醚或二乙二醇单乙醚和类似产品。而且，可使用上述提及的溶剂的混合物。尤其是提及含酒精的溶剂时，水可以是另外的成份。
[0228] 根据本发明的乳液、油凝胶或者水分散液或脂分散液的油相有利地选自具有3至30个碳原子的链长的饱和和/或不饱和的、支链和/或无支链的链烷羧酸和具有3至30个碳原子的链长的饱和和/或不饱和的、支链和/或无支链的醇的酯组成的组，选自芳香族羧酸和具有3至30个碳原子的链长的饱和和/或不饱和的、支链和/或无支链的醇的酯组成的组。在这种情况下，这些酯类油可有利地选自由下列组成的组：异丙基肉豆蔻酸酯、棕榈酸异丙酯、硬脂酸异丙酯、油酸异丙酯、硬脂酸正丁酯、月桂酸正己酯、油酸正癸酯、硬脂酸异辛酯、硬脂酸异壬酯，异壬酸异壬酯、2-乙基己基棕榈酸酯、2-乙基己基月桂酸酯、2-己基癸基硬脂酸酯、2-辛基月桂基棕榈酸酯，油酸油酯，芥酸油酯，瓢儿菜醇油酸酯，瓢儿菜醇芥酸酯和这些酯的合成、半合成和天然的混合物，例如希蒙得木油。
[0229] 而且，油相可有利地选自支链和无支链的碳氢化合物和碳氢化合物蜡，硅酮油、二烃基醚的组，饱和或不饱和的支链或无支链的醇的组和脂肪酸甘油三酯(即具有8至24尤其是12-18个C原子的链长的饱和和/或不饱和、支链和/或无支链的链烷羧酸的三甘油酯)的组。例如，脂肪酸甘油三酯可有利地选自合成的、半合成的和天然的油例如橄榄油、葵花籽油、豆油、花生油、菜籽油、杏仁油、棕榈油、椰子油、棕榈仁油和类似物的组。这些油和蜡组分的任何混合物也可根据本发明有利地使用。如果适合，使用蜡、例如鲸蜡醇十六醇酯，作为油相的唯一脂类成分同样是有利的。
[0230] 油相有利地选自由下列组成的组：2-乙基己基异硬脂酸酯、辛基十二烷醇、异三癸基异壬酸酯、异十二烷、2-乙基己基椰油酸酯，C12-15-烷基苯甲酸酯、辛酸/癸酸甘油三酯、二辛酰基醚。特别有利的混合物是C12-15-烷基苯甲酸酯和2-乙基己基异硬脂酸酯的那些、C12-15烷基苯甲酸酯和异三癸基异壬酸酯的那些和C12-15烷基苯甲酸、2-乙基己基异硬脂酸酯和异三癸基异壬酸酯的那些。与碳氢化合物有关，液体石蜡，角鲨烷和角鲨烯可根据本发明有利地使用。油相可另外有利地包含环或线性硅油或完全由这些油组成，但优选的是使用与所述硅油不同的另一个油相成分的另外的内容物。环甲硅油(八甲基环四硅氧烷)有利地用作有待根据本发明使用的硅油。然而，可有利地根据本发明使用其他硅油，例如六甲基环三硅氧烷、聚二甲基硅氧烷、聚(甲基苯基硅氧烷)。而且，特别有利的混合物是环甲硅油和异三癸基异壬酸酯的那些和环甲硅油和2-乙基己基异硬脂酸酯的那些。
[0231] 如果适合，根据本发明的制剂的含水相在每个实例中单独或组合地有利地包含低C数目的醇、二醇或多醇和它们的醚，优选地乙醇，异丙醇，丙二醇，甘油，乙二醇，乙二醇单乙醚或乙二醇单丁醚，丙二醇单甲醚，丙二醇单乙醚或丙二醇单丁醚，二乙二醇单甲醚或二乙二醇单乙醚和类似产品，此外的低C数目的醇，例如乙醇、异丙醇、1，2-丙二醇、甘油以及特别地一种或多种增稠剂，其有利地选自由二氧化硅、硅酸铝、多糖和它们的衍生物例如透明质酸、黄胞胶、羟丙基甲基纤维素所组成的组，特别有利地选自聚丙烯酸酯的组，优选地选自所谓Carbopol例如980、981、1382、2984和5984型Carbopol组成的组的聚丙烯酸酯。
[0232] 根据本发明使用的凝胶通常包含低C数的醇，例如乙醇、异丙醇、1，2-丙二醇、甘油和水，或在增稠剂存在的情况下的上文提及的油，在含油-含酒精凝胶的实例中其优选地是二氧化硅或硅酸铝，以及在含水-含酒精或含酒精的凝胶的实例中其优选地是聚丙烯酸酯。
[0233] 固体棒包括例如天然或合成的蜡、脂肪醇或脂肪酸酯。适于用作根据本发明的化妆棒的常规的基本物质是液体油(例如液体石蜡、蓖麻油、异丙基肉豆蔻酸酯)、半固体成份(例如凡士林油、羊毛脂)、固体成份(例如蜜蜡、地蜡和微晶蜡或石蜡(ozocerite))和高熔点的蜡(例如加拿巴蜡、小烛树蜡)。
[0234] 用于根据本发明的化妆品和/或皮肤病学制剂的可从气溶胶容器喷出的适合的推进剂是常规已知的挥发性的、液化的推进剂例如碳氢化合物(丙烷、丁烷、异丁烯)，其可单独或作为彼此的混合物使用。加压的空气也可有利地使用。当然，本领域中熟练的技术人员熟悉有原则上适合于以气溶胶制剂的形式付诸于本发明的实践的无毒的推进剂的事实；然而，由于它们对环境不可接受的影响或其他附随的情况，建议不用这些-特别是氟代烃和氟代氯代烃(FCHC)-处理。
[0235] 用于根据本发明的外用施用的组合物也可以是凝胶的形式，其不仅包含有效量的根据本发明的活性成分和由此常规使用的溶剂，还包含有机增稠剂。这些增稠剂的实例包括阿拉伯胶、黄胞胶、海藻酸钠、纤维素衍生物，优选地甲基纤维素、羟甲基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素或无机增稠剂，例如硅酸铝例如诸如膨润土或聚乙二醇和聚乙二醇硬脂酸酯或聚乙二醇二硬脂酸酯的混合物。
[0236] 包含上文记录的活性成分的可接受的化妆品/皮肤病学载体制剂的实例可包括下列成分：黄胞胶、丙三醇99.7％、依地酸四钠、硬脂酸甘油酯和PEG-100硬脂酸酯TM(ARLACEL 165)、十六烷基醇、棕榈酸异丙酯、二叔丁对甲酚(BHT)、对羟基苯甲酸甲酯、尼泊金丙酯和去离子水。包含上文记录的活性成分的可接受的化妆品/皮肤病学载体制剂的另一个实例可包括下列惰性成分：硬脂酸、十六烷基醇、聚乙二醇单十二醚(Laureth)4、TM TM
CARSONOL Sles、对羟基苯甲酸丙酯、抗坏血酸棕榈酸酯、丙二醇、CARBOPOL 974P、尼泊金甲酯、KOH(10％)和H2O。
CARSONOL Sles、对羟基苯甲酸丙酯、抗坏血酸棕榈酸酯、丙二醇、CARBOPOL 974P、尼泊金甲酯、KOH(10％)和H2O。
[0237] 上文记录的组合物可通过例如如下文的过程来制备：
[0238] 1.组合并融化油相：硬脂酸、十六烷基醇、聚乙二醇单十二醚4、对羟基苯甲酸丙酯和抗坏血酸棕榈酸酯；
[0239] 2.在玻璃烧杯中，将丙二醇和水组合，用高速螺旋搅拌分散尼泊金甲酯和TMCARBOPOL ；
[0240] 3.将CARSONOLTM Sles加至步骤(2)的产物；
[0241] 4.加热步骤(3)的产物至65℃-70℃；
[0242] 5.在混合下，将步骤(1)的产物加至步骤(4)的产物并且混合好；
[0243] 6.将混合物冷却至40℃；
[0244] 7.加入溶剂部分并且手工混合好；
[0245] 8.加入KOH溶液以中和；并且
[0246] 9.避光。
[0247] 概述
[0248] 在每个实例中，组合物可适合地含有一种或多种其他的活性剂，其可选自A/B-顺式螺甾烷或螺甾烯甾体皂甙元和其酯、醚、酮和糖基化的形式，其他的皂甙(元)，其他的非皂甙(元)活性剂或其任何组合。组合物可含有一种或多种生物上惰性的成分，例如稀释剂、载体和赋形剂，其为了与生理学上有效的成分的配制、施用或递送有关的目的而服务，或向受治疗者提供与活性成份的生理学作用不同的联合的益处。载体可包含植物材料例如黄豆蛋白。取决于施用的方式和剂型的性质，组合物可例如还包含保存剂、填充剂、崩解剂、增湿剂、乳化剂、悬浮剂、甜味剂、调味剂、芳香剂、抗细菌剂、抗真菌剂、润滑剂和分散剂中的任何一种或多种。
[0249] 用于在本发明中使用的组合物，尤其是药物组合物，可以是单位剂型，由此某一数量的这些剂型可根据有待处理或预防的病况在某一时间段内施用于受治疗者。可选择地，组合物可以是散装形式的，由此根据有待处理或预防的病况量出某一重量或体积的散装组合物并且在某一时间段内施用于受治疗者。
[0250] 然而，不认为毒性是这些活性剂的问题，即使是在较高的剂量。适当的剂量的选择因此在本领域中的一般技术人员的能力中，而无过度的负担。所施用的活性剂的剂量约0.3mg/kg体重，优选地每日施用一次。更通常地，剂量将在约0.1和约25mg/kg之间，例如约1和约10mg/kg之间，优选地每天施用一次或两次。为了成年人类使用，剂量可常规在约
10和约700mg每天之间。
10和约700mg每天之间。
[0251] 用于在本发明中使用的组合物可适合地包含另外的治疗和/或非治疗生物活性剂，如上文讨论的。
[0252] 用于在本发明中使用的组合物可以是单位剂型，由此，某一数量的这些剂型可根据有待处理或预防的病况在某一时间段内施用于受治疗者。可选择地，组合物可以是散装形式的，由此根据有待处理或预防的病况量出某一重量或体积的散装组合物并且在某一时间段内施用于受治疗者。
[0253] 活性剂所需要的剂量将取决于有待处理或预防的症状的严重度在很大程度上变化。飞摩尔至微摩尔范围内的浓度是有效的，例如约1fM至约5μM。实施例12中报道的实验性工作显示培养物中抗神经损害的异菝葜皂甙元的体外EC50为13.4fM。通常，皮摩尔至微摩尔范围(例如在纳摩尔至微摩尔范围)内的体内血浆浓度通常是优选的，例如高于约1pM，例如在约1pM至约5μM内、例如约1pM至约3μM、例如约10pM至约700nM、例如约0.1nM至约500nM的范围内。在皮摩尔以下，活性剂的体内活性往往降低。在微摩尔以上，受治疗者对过剂量的自身调节和相关的抗性将简单意指活性剂被浪费。然而，如本申请中的实施例所显示的，不认为毒性是这些活性剂的问题，即使是在较高的剂量。适合的剂量的选择因此在本领域中的一般技术人员的能力中，而无过度的负担。活性剂的施用剂量可以是例如高于约0.1mg/kg体重，例如高于约0.3mg/kg体重，优选地每天施用一次。更通常地，剂量在约0.1和约25mg/kg之间，例如在约1和约10mg/kg之间，优选地每天施用一次。为了成年人类使用，剂量常规上在约10和约700mg每天之间。
[0254] 对于适合的组合物形式和剂量以及根据本发明可处理的病况和疾病的实例的进一步的细节，请参考WO-A-99/48482、WO-A-99/48507、WO-A-01/23407、WO-A-01/23408、WO-A-02/079221、WO-A-03/082893、WO-A-2005/105825和WO-A-2006/048665。
[0255] 活性剂是适合在组合物中与一种或多种载体、赋形剂和/或稀释剂一起配制的。一般而言，可使用用于药物组合物，口服组合物例如食品、食品补充物和饮料，或外用组合物例如化妆品、眼部或皮肤制剂的任何常规载体、赋形剂和/或稀释剂。
[0256] 活性剂中的许多是相对亲脂的并且在这一实例中溶解和/或悬浮和/或分散剂可适用于维持活性剂在组合物中的溶解或悬浮或分散。
[0257] 可特别提及的两组溶解和/或悬浮和/或分散剂是MCT和中链脂肪酸(MCFA)。这些是具有链长在约4和约12个碳原子之间的脂肪酸链的亲脂化合物。
[0258] MCT的优选的实例由下列通式(I)表示：
[0259]
[0260] 其中，Ra、Rb和Rc彼此独立地选自在碳主链中具有4至12个碳原子的饱和或不饱和脂肪酸残基。
[0261] MCFA的优选的实例由下列通式(II)表示：
[0262] HO-CO-Rd
[0263] (Ⅱ)
[0264] 其中Rd是在碳主链中具有4至12个碳原子的饱和或不饱和脂肪酸残基。
[0265] Ra、Rb、Rc和Rd的实例包括己酸(C6:0)、辛酸(C8:0)、癸酸(C10:0)和月桂酸(C12:0)的残基。在标准的命名系统中，字母C之后的数字表示碳链的长度而冒号(:)之后的数字表示不饱和键的数目。这些MCT和MCFA可以已知的方式从天然来源例如椰子油、棕榈仁油和樟脑核果(水果)获得。商业上可获得的MCT或MCFA产品中可存在一种或多于一种脂肪酸的残基。
[0266] 用于在本发明中使用的MCT可例如选自三 -C6:0MCT、三-C8:0MCT和三-C10:0MCT。
[0267] 工业适用性和功用
[0268] 本发明首次使人类和非人类哺乳动物中NF介导的病症和功能的治疗性和非治疗性处理的自身调节的方法可得，其中生理学响应在活性剂的剂量的相对广泛的范围内不是剂量依赖性的而是自身调节的，同时以可预期的有益的生理学作用而无不利的副作用或毒性的方式提供相对狭窄的“治疗窗”。所述处理因此能在相对广泛的范围内耐受过剂量。这一性质使得所述处理适合于自身施用或临床情形之外的其他情况，这是神经学和其他处理迄今无法实现的一种特点。所述剂是小分子而不是肽(例如蛋白)的事实进一步支持本发明在临床情形之外的潜在功用，其中用于肽活性剂向脑或CNS的直接施用的精心制作的递送装置可能不可得。
[0269] 由于患有神经病学、精神病学、炎性、变应性、免疫或肿瘤性病症的许多患者可以是相对年老或处于相对不好的一般健康，他们常常易患这些分类中的一些其他病症。通常无法以任何确定性预期许多其他病症或病况中的哪些将会出现。在本发明之前，这些其他的病症或病况或个体对它们的易患性使得原发病症的处理成为禁忌，因为非常频繁的处理将具有促进这样的患者中这些其他病症或病况的重大风险。因此，本发明以比之前更加容易和简单的、并且可以应用于更广泛的组的患者的方式在处理病症和病况中的效用代表了人类和动物健康的这些重要领域中医学和保健实践方面的重要进步。
[0270] 附图简述
[0271] 为了进一步示例性说明，现在将描述支持本发明的数据，其仅是示例性而非限制性的。
[0272] 在随附的附图中：
[0273] 图1显示神经元的异菝葜皂甙元预处理对保护神经元抗MPP+诱导的损害的作用；
[0274] 图2显示进行性运动神经病(pmn)小鼠中菝葜皂甙元对(a)复合肌肉动作潜势(CMAP)振幅，(b)网格测试和(c)存活率的影响；和
[0275] 图3显示神经受损害的小鼠中菝葜皂甙元、异菝葜皂甙元和4-甲基儿茶酚随时间对CMAP(a)振幅、(b)潜伏期和(c)持续时间的影响。
[0276] 实施例和附图详述
[0277] 在下列实施例和附图详述中，使用下列缩写：h＝小时；min＝分钟；s＝秒；s.c＝皮下，p.o＝口服。固体包固体(solid in solid)或液体包固体(solid in liquid)或固体包液体(liquid in solid)的组合物的成份的百分比是重量计的。液体包液体(liquid in liquid)的组合物的成份的百分比是体积计的。
[0278] 实施例1
[0279] 菝葜皂甙元和异菝葜皂甙元与几种酶和受体不结合
[0280] 研究菝葜皂甙元对下文表1中所列的酶的活性的影响和菝葜皂甙元与下文表1中所列的受体的结合。
[0281] 使用下列方法研究酶活性调节：将菝葜皂甙元与每种酶加上每种酶的特异性底物一起孵育。孵育期之后将反应停止，并且测量菝葜皂甙元不存在和存在的情况下特异性底物的减少或特异性产物的增加，并且计算菝葜皂甙元存在的情况下反应的百分比抑制。所使用的酶的量、孵育条件、所使用的底物和定量的方法取决于每种特定测定而变化。
[0282] 使用下列方法调查受体结合：将菝葜皂甙元与表达所感兴趣的受体的组织或细胞匀浆以及具有对所感兴趣的受体的亲和性的已知浓度的放射性标记的化合物一起孵育。孵育期之后将没有结合的放射性标记的化合物除去并且定量特异性结合的量。比较菝葜皂甙元存在和不存在的情况下特异性结合的量，并且计算菝葜皂甙元对放射性标记的化合物的结合的百分比抑制。受体的来源、孵育条件、所使用的放射性标记的化合物取决于每种特定测定而变化。
[0283] 结果示于下文表1中。
[0284] 表1菝葜皂甙元对酶和受体结合测定的影响
[0285]
[0286]
[0287] NS＝无显著响应。显著性采用为＞30％刺激或抑制。
[0288] 使用与上文描述一样的方法，研究异菝葜皂甙元(1μM)与下文表2中所列的受体的结合和异菝葜皂甙元对下文表2中所列的酶的活性的影响。
[0289] 表2异菝葜皂甙元对受体结合测定和酶的影响
[0290]靶 物种 影响(％)
结合测定
Adensonine A1 人类 NS
Adensonine A2A 人类 NS
Adensonine A3 人类 NS
肾上腺素能α1A 大鼠 NS
肾上腺素能α1B 大鼠 NS
肾上腺素能α1D 人类 NS
肾上腺素能α2A 人类 NS
肾上腺素能α2C 人类 NS
肾上腺素能β1 人类 NS
肾上腺素能β2 人类 NS
靶 物种 影响(％)
肾上腺素能β3 人类 NS
肾上腺髓质素AM1 人类 NS
肾上腺髓质素AM2 人类 NS
醛固酮 大鼠 NS
过敏毒素C5a 人类 NS
雄激素(睾酮)AR 大鼠 NS
血管紧张肽AT1 人类 NS
血管紧张肽AT2 人类 NS
APJ 人类 NS
心房钠尿因子 豚鼠 NS
铃蟾肽BB1 人类 NS
铃蟾肽BB2 人类 NS
铃蟾肽BB3 人类 NS
缓激肽B1 人类 NS
缓激肽B2 人类 NS
降钙素 人类 NS
降钙素基因相关肽CGRP1 人类 NS
钙通道L-型，苯并噻氮卓类 大鼠 NS
钙通道L-型，二氢吡啶 大鼠 NS
钙通道L-型，苯烷基胺 大鼠 NS
钙通道N-型 大鼠 NS
大麻素CB1 人类 NS
大麻素CB2 人类 NS
靶 物种 影响(％)
趋化因子CCR1 人类 NS
趋化因子CCR2B 人类 NS
趋化因子CCR4 人类 NS
趋化因子CCR5 人类 NS
趋化因子CXCR1 人类 NS
趋化因子CXCR1(IL-8RB) 人类 NS
胆囊收缩素CCK1(CCKA) 人类 NS
胆囊收缩素CCK2(CCKB) 人类 NS
秋水仙素 NS
促肾上腺皮质激素释放因子(CRF1) 人类 NS
多巴胺D1 人类 NS
多巴胺D2S 人类 NS
多巴胺D3 人类 NS
多巴胺D42 人类 NS
多巴胺D5 人类 NS
内皮素ETA 人类 NS
内皮素ETB 人类 NS
表皮生长因子(EGF) 人类 NS
促红细胞生成素EPOR 人类 NS
雌激素(ERα) 人类 NS
雌激素(Erβ) 人类 NS
G蛋白偶联受体GPR103 人类 NS
G蛋白偶联受体GPR8 人类 NS
靶 物种 影响(％)
GABAA氯化物通道，TBOB 大鼠 NS
GABAA氟硝西泮，中枢 大鼠 NS
GABAA蝇蕈醇，中枢， 大鼠 NS
GABAB1A 人类 NS
GABAB1B 人类 NS
加巴喷丁 大鼠 NS
促生长激素神经肽GAL1 人类 NS
促生长激素神经肽GAL2 人类 NS
谷氨酸盐，AMPA 大鼠 NS
谷氨酸盐，红藻氨酸盐 大鼠 NS
谷氨酸盐，NMDA，激动 大鼠 NS
谷氨酸盐，NMDA，甘氨酸 大鼠 NS
谷氨酸盐，NMDA，苯环利定 大鼠 NS
谷氨酸盐，NMDA，多胺 大鼠 NS
甘氨酸，士的宁-敏感性 大鼠 NS
生长激素促泌素(GHS，Ghrelin) 人类 NS
组胺H1 人类 NS
组胺H2 人类 NS
组胺H3 人类 NS
组胺H4 人类 NS
咪唑啉I2，中枢 大鼠 NS
肌醇三磷酸IP3 大鼠 NS
胰岛素 大鼠 NS
靶 物种 影响(％)
白介素IL-1 小鼠 NS
白介素IL-2 小鼠 NS
白介素IL-6 人类 NS
来普汀 小鼠 NS
白三烯，BLT(LTB4) 人类 NS
白三烯，半胱氨酰CysLT1 人类 NS
白三烯，半胱氨酰CysLT2 人类 NS
黑皮质素MC1 人类 NS
黑皮质素MC3 人类 NS
黑皮质素MC4 人类 NS
黑皮质素MC5 人类 NS
退黑激素MT1 人类 NS
退黑激素MT2 人类 NS
促胃动素 人类 NS
毒蕈碱M1 人类 NS
毒蕈碱M2 人类 NS
毒蕈碱M3 人类 NS
毒蕈碱M4 人类 NS
毒蕈碱M5 人类 NS
N-甲酰基肽受体FPR1 人类 NS
N-甲酰基肽受体样FPRL1 人类 NS
神经介素U MNU1 人类 NS
神经介素U MNU2 人类 NS
靶 物种 影响(％)
神经肽Y Y1 人类 NS
神经肽Y Y2 人类 NS
神经紧张肽NT1 人类 NS
烟碱乙酰胆碱 人类 NS
烟碱乙酰胆碱α1，银环蛇毒 人类 NS
烟碱乙酰胆碱α7，银环蛇毒 大鼠 NS
阿片δ(OP1，DOP) 人类 NS
阿片κ(OP2，KOP) 人类 NS
阿片μ(OP3，MOP) 人类 NS
痛敏肽ORL1 人类 NS
佛波酯 小鼠 NS
血小板活化因子(PAF) 人类 NS
血小板衍生的生长因子(PDGF) 小鼠 NS
钾通道[KA] 大鼠 NS
钾通道[KATP] NS
钾通道[SKCA] 大鼠 NS
钾通道HERG 人类 NS
孕酮PR-B 人类 NS
类前列腺素CRTH2 人类 NS
类前列腺素DP 人类 NS
类前列腺素EP2 人类 NS
类前列腺素EP4 人类 NS
类前列腺素血栓素A2(TP) 人类 NS
靶 物种 影响(％)
嘌呤能P2X NS
嘌呤能P2Y 大鼠 NS
破伤风样X受体RXRα 人类 NS
咯利普兰受体 大鼠 NS
利罗丁RyR3 大鼠 NS
5-羟基色胺，5-HT1A 人类 NS
5-羟基色胺，5-HT1B 大鼠 NS
5-羟基色胺，5-HT2B 人类 NS
5-羟基色胺，5-HT2C 人类 NS
5-羟基色胺，5-HT3 人类 NS
5-羟基色胺，5-HT4 豚鼠 NS
5-羟基色胺，5-HT5A 人类 NS
5-羟基色胺，5-HT6 人类 NS
σ(sigma)σ1 NS
σ(sigma)σ2 大鼠 NS
钠通道受体，位点2 大鼠 NS
生长激素抑制素sst1 人类 NS
生长激素抑制素sst2 人类 NS
生长激素抑制素sst3 人类 NS
生长激素抑制素sst4 人类 NS
生长激素抑制素sst5 人类 NS
速激肽NK1 人类 NS
速激肽NK2 人类 NS
靶 物种 影响(％)
速激肽NK3 人类 NS
甲状腺激素 大鼠 NS
促甲状腺激素释放激素(TRH) 大鼠 NS
转化生长因子-β(TGF-β) 小鼠 NS
运载体，阿糖腺苷 豚鼠 NS
运载体，胆碱 大鼠 NS
运载体，多巴胺(DAT) 人类 NS
运载体，GABA 大鼠 NS
运载体，单胺 兔 NS
运载体，去甲肾上腺素运载体(NET) 人类 NS
运载体，5-羟基色胺(SERT) 人类 NS
肿瘤坏死因子(TNF)，非选择性 人类 NS
乌洛滕生II 人类 NS
香草素 大鼠 NS
血管内皮生长因子(VEGF) 人类 NS
肠道血管活性肽，VIP1 人类 NS
加压素V1A 人类 NS
加压素V1B 人类 NS
加压素V2 人类 NS
维生素D3 人类 NS
功能测定 NS
蛋白丝氨酸/苏氨酸激酶，AKT1(PRKBA) 人类 NS
蛋白丝氨酸/苏氨酸激酶，AKT3(PRKBG) 人类 NS
结合测定
Adensonine A1 人类 NS
Adensonine A2A 人类 NS
Adensonine A3 人类 NS
肾上腺素能α1A 大鼠 NS
肾上腺素能α1B 大鼠 NS
肾上腺素能α1D 人类 NS
肾上腺素能α2A 人类 NS
肾上腺素能α2C 人类 NS
肾上腺素能β1 人类 NS
肾上腺素能β2 人类 NS
靶 物种 影响(％)
肾上腺素能β3 人类 NS
肾上腺髓质素AM1 人类 NS
肾上腺髓质素AM2 人类 NS
醛固酮 大鼠 NS
过敏毒素C5a 人类 NS
雄激素(睾酮)AR 大鼠 NS
血管紧张肽AT1 人类 NS
血管紧张肽AT2 人类 NS
APJ 人类 NS
心房钠尿因子 豚鼠 NS
铃蟾肽BB1 人类 NS
铃蟾肽BB2 人类 NS
铃蟾肽BB3 人类 NS
缓激肽B1 人类 NS
缓激肽B2 人类 NS
降钙素 人类 NS
降钙素基因相关肽CGRP1 人类 NS
钙通道L-型，苯并噻氮卓类 大鼠 NS
钙通道L-型，二氢吡啶 大鼠 NS
钙通道L-型，苯烷基胺 大鼠 NS
钙通道N-型 大鼠 NS
大麻素CB1 人类 NS
大麻素CB2 人类 NS
靶 物种 影响(％)
趋化因子CCR1 人类 NS
趋化因子CCR2B 人类 NS
趋化因子CCR4 人类 NS
趋化因子CCR5 人类 NS
趋化因子CXCR1 人类 NS
趋化因子CXCR1(IL-8RB) 人类 NS
胆囊收缩素CCK1(CCKA) 人类 NS
胆囊收缩素CCK2(CCKB) 人类 NS
秋水仙素 NS
促肾上腺皮质激素释放因子(CRF1) 人类 NS
多巴胺D1 人类 NS
多巴胺D2S 人类 NS
多巴胺D3 人类 NS
多巴胺D42 人类 NS
多巴胺D5 人类 NS
内皮素ETA 人类 NS
内皮素ETB 人类 NS
表皮生长因子(EGF) 人类 NS
促红细胞生成素EPOR 人类 NS
雌激素(ERα) 人类 NS
雌激素(Erβ) 人类 NS
G蛋白偶联受体GPR103 人类 NS
G蛋白偶联受体GPR8 人类 NS
靶 物种 影响(％)
GABAA氯化物通道，TBOB 大鼠 NS
GABAA氟硝西泮，中枢 大鼠 NS
GABAA蝇蕈醇，中枢， 大鼠 NS
GABAB1A 人类 NS
GABAB1B 人类 NS
加巴喷丁 大鼠 NS
促生长激素神经肽GAL1 人类 NS
促生长激素神经肽GAL2 人类 NS
谷氨酸盐，AMPA 大鼠 NS
谷氨酸盐，红藻氨酸盐 大鼠 NS
谷氨酸盐，NMDA，激动 大鼠 NS
谷氨酸盐，NMDA，甘氨酸 大鼠 NS
谷氨酸盐，NMDA，苯环利定 大鼠 NS
谷氨酸盐，NMDA，多胺 大鼠 NS
甘氨酸，士的宁-敏感性 大鼠 NS
生长激素促泌素(GHS，Ghrelin) 人类 NS
组胺H1 人类 NS
组胺H2 人类 NS
组胺H3 人类 NS
组胺H4 人类 NS
咪唑啉I2，中枢 大鼠 NS
肌醇三磷酸IP3 大鼠 NS
胰岛素 大鼠 NS
靶 物种 影响(％)
白介素IL-1 小鼠 NS
白介素IL-2 小鼠 NS
白介素IL-6 人类 NS
来普汀 小鼠 NS
白三烯，BLT(LTB4) 人类 NS
白三烯，半胱氨酰CysLT1 人类 NS
白三烯，半胱氨酰CysLT2 人类 NS
黑皮质素MC1 人类 NS
黑皮质素MC3 人类 NS
黑皮质素MC4 人类 NS
黑皮质素MC5 人类 NS
退黑激素MT1 人类 NS
退黑激素MT2 人类 NS
促胃动素 人类 NS
毒蕈碱M1 人类 NS
毒蕈碱M2 人类 NS
毒蕈碱M3 人类 NS
毒蕈碱M4 人类 NS
毒蕈碱M5 人类 NS
N-甲酰基肽受体FPR1 人类 NS
N-甲酰基肽受体样FPRL1 人类 NS
神经介素U MNU1 人类 NS
神经介素U MNU2 人类 NS
靶 物种 影响(％)
神经肽Y Y1 人类 NS
神经肽Y Y2 人类 NS
神经紧张肽NT1 人类 NS
烟碱乙酰胆碱 人类 NS
烟碱乙酰胆碱α1，银环蛇毒 人类 NS
烟碱乙酰胆碱α7，银环蛇毒 大鼠 NS
阿片δ(OP1，DOP) 人类 NS
阿片κ(OP2，KOP) 人类 NS
阿片μ(OP3，MOP) 人类 NS
痛敏肽ORL1 人类 NS
佛波酯 小鼠 NS
血小板活化因子(PAF) 人类 NS
血小板衍生的生长因子(PDGF) 小鼠 NS
钾通道[KA] 大鼠 NS
钾通道[KATP] NS
钾通道[SKCA] 大鼠 NS
钾通道HERG 人类 NS
孕酮PR-B 人类 NS
类前列腺素CRTH2 人类 NS
类前列腺素DP 人类 NS
类前列腺素EP2 人类 NS
类前列腺素EP4 人类 NS
类前列腺素血栓素A2(TP) 人类 NS
靶 物种 影响(％)
嘌呤能P2X NS
嘌呤能P2Y 大鼠 NS
破伤风样X受体RXRα 人类 NS
咯利普兰受体 大鼠 NS
利罗丁RyR3 大鼠 NS
5-羟基色胺，5-HT1A 人类 NS
5-羟基色胺，5-HT1B 大鼠 NS
5-羟基色胺，5-HT2B 人类 NS
5-羟基色胺，5-HT2C 人类 NS
5-羟基色胺，5-HT3 人类 NS
5-羟基色胺，5-HT4 豚鼠 NS
5-羟基色胺，5-HT5A 人类 NS
5-羟基色胺，5-HT6 人类 NS
σ(sigma)σ1 NS
σ(sigma)σ2 大鼠 NS
钠通道受体，位点2 大鼠 NS
生长激素抑制素sst1 人类 NS
生长激素抑制素sst2 人类 NS
生长激素抑制素sst3 人类 NS
生长激素抑制素sst4 人类 NS
生长激素抑制素sst5 人类 NS
速激肽NK1 人类 NS
速激肽NK2 人类 NS
靶 物种 影响(％)
速激肽NK3 人类 NS
甲状腺激素 大鼠 NS
促甲状腺激素释放激素(TRH) 大鼠 NS
转化生长因子-β(TGF-β) 小鼠 NS
运载体，阿糖腺苷 豚鼠 NS
运载体，胆碱 大鼠 NS
运载体，多巴胺(DAT) 人类 NS
运载体，GABA 大鼠 NS
运载体，单胺 兔 NS
运载体，去甲肾上腺素运载体(NET) 人类 NS
运载体，5-羟基色胺(SERT) 人类 NS
肿瘤坏死因子(TNF)，非选择性 人类 NS
乌洛滕生II 人类 NS
香草素 大鼠 NS
血管内皮生长因子(VEGF) 人类 NS
肠道血管活性肽，VIP1 人类 NS
加压素V1A 人类 NS
加压素V1B 人类 NS
加压素V2 人类 NS
维生素D3 人类 NS
功能测定 NS
蛋白丝氨酸/苏氨酸激酶，AKT1(PRKBA) 人类 NS
蛋白丝氨酸/苏氨酸激酶，AKT3(PRKBG) 人类 NS
[0291]
[0292]
[0293]
[0294]
[0295]
[0296]
[0297]
[0298]
[0299] NS＝无显著响应。显著性采用为≥30％刺激或抑制。
[0300] 菝葜皂甙元和异菝葜皂甙元与许多受体不结合并且不调节许多酶的活性。由于已知这些受体和酶参与神经、知觉和运动通路，推理出在这些实验获得的知识的范围内，菝葜皂甙元和异菝葜皂甙元抗具有神经、知觉和运动来源的病况和病症的活性不是经由受体结合或酶调节而发生。
[0301] 实施例2
[0302] 菝葜皂甙元和异菝葜皂甙元在体外基本条件下在培养的神经元中瞬时增加神经营养因子mRNA
[0303] 使用专门的培养基和条件，新鲜分离的神经元是可以体外培养的；体外环境与生理环境不同，导致神经元是更加应激的并且遭受神经元损害。神经元损害的水平将取决于所使用的精确条件而在培养基和培养基之间变化。神经元损害的水平之后可通过加入病理+学剂(例如β-淀粉状蛋白或MPP)而显著增加。
[0304] 通过修改的之前描述的方法培养大鼠皮质神经元(Singer，等人，Neuroscience Letters，1996，212，第13-16页)。培养开始之后十二天，加入菝葜皂甙元(30nM)、异菝葜皂甙元(30nM)、NGF和BDNF释放的诱导剂4-甲基儿茶酚(0.5mM)(Saporito等人，Experimental Neurology.，1993，123， 第 295-302 页；Nitta 等 人，Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics，1999，291，第1276-1283页)或媒介物(二甲基亚砜，DMSO，0.25％)1、3或6h。在孵育之后，使用实时逆转录聚合酶链式反应(rtRT-PCR)定量总信使核糖核酸(mRNA)。
[0305] 结果示于下文表3中。
[0306] 表31、3和6h孵育后菝葜皂甙元、异菝葜皂甙元和4-甲基儿茶酚对大鼠皮质神经元中BDNF和trkB mRNA表达的影响
[0307]
[0308] 菝葜皂甙元和异菝葜皂甙元都在新鲜分离的皮质神经元中瞬时(3h后)增加BDNF和BDNF受体trk-B(酪氨酸受体激酶神经营养蛋白受体)的mRNA的水平。
[0309] 在不同的实验中，通过修改的之前描述的方法培养大鼠皮质神经元(Eckenstein和Sofroniew，Journal of Neuroscience，1983，3，第2286-2291页)。在第8天，将培养基换为含有媒介物(DMSO，0.5％)或异菝葜皂甙元(10μM)的培养基48小时并且通过rt RT-PCR测定皮质神经元中的BDNF mRNA的水平。
[0310] 结果示于下文表4中。
[0311] 表4使用菝葜皂甙元孵育48小时对大鼠皮质神经元中BDNF mRNA表达的影响[0312]条件 BDNF mRNA的相对量(对照的％)
对照(DMSO，0.5％) 100.0±0.0
异菝葜皂甙元(10μM) 103.9±6.5
对照(DMSO，0.5％) 100.0±0.0
异菝葜皂甙元(10μM) 103.9±6.5
[0313] 平均值±均值标准误差；n＝3。
[0314] 用异菝葜皂甙元(10μM)孵育48小时没有增加新鲜分离的皮质神经元中BDNF mRNA的水平。这与表3中出示的数据一致，显示异菝葜皂甙元和菝葜皂甙元在3h而不是6h增加BDNF mRNA。此外，异菝葜皂甙元的瞬时作用(表3)没有被高浓度的异菝葜皂甙元(表4)克服。
[0315] 实施例3
[0316] 异菝葜皂甙元导致体外暴露于病理学剂的培养的神经元中神经营养因子mRNA表达显著增加
[0317] 异菝葜皂甙元增加之前暴露于β-淀粉样蛋白的皮质神经元中的BDNFmRNA。
[0318] 通过修改的之前描述的方法培养大鼠皮质神经元(Eckenstein和Sofroniew，Journal of Neuroscience，1983，3，第2286-2291页)。在第8天，将培养基换为含有媒介物(DMSO，0.5％)或异菝葜皂甙元(10μM)的培养基。在第10天，将大鼠原生皮质神经元于37℃暴露于β-淀粉样蛋白多达48小时并且在接下来48小时通过rt RT-PCR测定皮质神经元中的BDNF mRNA的水平。
[0319] 结果示于下文表5中。
[0320] 表5用异菝葜皂甙元预孵育48h之后暴露于β-淀粉样蛋白增加大鼠皮质神经元中的BDNF mRNA
[0321]
[0322] 平均值±均值标准误差；n＝3，**＝p＜0.01，*＝p＜0.05与单独的β-淀粉样蛋白的相应的时间点相比。通过学生t检验进行统计学分析。
[0323] 用异菝葜皂甙元预孵育48h以及之后的β-淀粉样蛋白暴露在大鼠皮质神经元中的BDNF mRNA的表达上产生显著并且持续的增加。
[0324] 异菝葜皂甙元增加之前暴露于MPP+的多巴胺能神经元中的GDNF mRNA
[0325] 使用稍微修改的之前描述的方法制备大鼠多巴胺能神经元(Brouard等人，+Journal of Neuroscience，1992，12，第1409-1415页)。在培养基MPP(2μM)中5天后，加入特异的多巴胺能神经毒素或媒介物(盐水)48小时。之后将培养基用含有异菝葜皂甙元(10μM)或媒介物(DMSO，0.5％)的新鲜培养基替换，并且在10min和2、24、48h之后通过rt RT-PCR测定多巴胺能神经元中的GDNF mRNA的水平。
[0326] 结果示于下文表6中。
[0327] 表6异菝葜皂甙元增加暴露于MPP+后大鼠多巴胺能神经元中的GDNF mRNA表达[0328]
[0329] 平均值±均值标准误差；n＝3，**＝p＜0.01，*＝p＜0.05与对照相比。通过学生t检验进行每个时间点对照和异菝葜皂甙元之间的GDNF mRNA的统计学分析。
[0330] 暴露于MPP+后使用异菝葜皂甙元处理导致大鼠多巴胺能神经元中的GDNF mRNA表达的显著增加。增加在24h时最大并且之后在48和72h之后降低。
[0331] 实施例2和3证明异菝葜皂甙元和菝葜皂甙元增加神经营养因子mRNA表达。而且异菝葜皂甙元和菝葜皂甙元对神经营养因子mRNA表达的影响取决于神经元的状况而在其程度(持续时间和强度)上有所变化。在于基本情况下培养的神经元中，异菝葜皂甙元和菝葜皂甙元产生神经营养因子RNA水平的瞬时增加(多达对照的140％)，其在3h(表3)时被观察到但是在6h(表3)时或48h(表4)时没有观察到。相反地，在暴露于病理学剂(例+如β-淀粉样蛋白或MPP)的培养的神经元中，异菝葜皂甙元产生神经营养因子mRNA表达和(表5和表6)的更显著(高达对照的3319％)并且持续更长时间(多达72小时)的增
加。结果证明取决于系统的损害的程度异菝葜皂甙元和菝葜皂甙元的神经营养诱导物作用自身调节它们自己，即异菝葜皂甙元和菝葜皂甙元没有将神经营养因子的自身调节机制中断或过载。
加。结果证明取决于系统的损害的程度异菝葜皂甙元和菝葜皂甙元的神经营养诱导物作用自身调节它们自己，即异菝葜皂甙元和菝葜皂甙元没有将神经营养因子的自身调节机制中断或过载。
[0332] 实施例4
[0333] 异菝葜皂甙元没有改变体外于基本条件下的培养的神经元中神经营养因子蛋白的表达
[0334] 通过修改的之前描述的方法培养大鼠皮质神经元(Eckenstein和Sofroniew，Journal of Neuroscience，1983，3，第2286-2291页)。在第8天，将培养基换为含有媒介物(DMSO，0.5％)或异菝葜皂甙元(10μM)的培养基。在第12天，测量培养基中BDNF的浓度。
[0335] 结果示于下文表7中。
[0336] 表7用异菝葜皂甙元孵育没有改变体外基本条件下培养的神经元中的BDNF蛋白水平
[0337]条件 BDNF浓度(pg/ml)
对照(DMSO，0.5％) 3.66±0.05
对照+异菝葜皂甙元(10μM) 3.67±0.05
对照(DMSO，0.5％) 3.66±0.05
对照+异菝葜皂甙元(10μM) 3.67±0.05
[0338] 平均值±均值标准误差；n＝6
[0339] 异菝葜皂甙元没有增加体外基本条件下培养的神经元中的BDNF水平。
[0340] 实施例5
[0341] 异菝葜皂甙元增加体外暴露于病理学剂的培养的神经元中神经营养因子蛋白的表达
[0342] 菝葜皂甙元和异菝葜皂甙元在之前暴露于β-淀粉样蛋白的皮质神经元中增加BDNF蛋白并增加神经元存活和神经突增生
[0343] 通过修改的之前描述的方法培养大鼠皮质神经元(Eckenstein和Sofroniew，Journal of Neuroscience，1983，3，第2286-2291页)。在第8天，将培养基换为含有媒介物(DMSO，0.5％)或者异菝葜皂甙元或菝葜皂甙元(10μM)的培养基。在第10天，将大鼠原生皮质神经元于37℃暴露于β-淀粉样蛋白(10μg/ml)48h并且测量培养基中BDNF的浓度、胆碱乙酰基转移酶(ChAT)阳性细胞的数目和神经突增生(仅异菝葜皂甙元)。
[0344] 结果示于下文表8中。
[0345] 表8体外用异菝葜皂甙元或菝葜皂甙元预孵育48h之后暴露于β-淀粉样蛋白增加BDNF蛋白水平并预防神经元损害和神经元萎缩
[0346]
[0347] n.m.＝未测量；平均值±均值标准误差；n＝4-8，++++＝p＜0.001与对照相**** **比， ＝p＜0.001， ＝p＜0.005与单独的β-淀粉样蛋白相比。使用单向方差分析(ANOVA)以及之后的Fisher事后检验进行统计学分析。
[0348] 菝葜皂甙元和异菝葜皂甙元在皮质神经元中增加BDNF水平超过对照水平并且预防β-淀粉样蛋白诱导的神经元损害。
[0349] 异菝葜皂甙元在之前暴露于MPP+的多巴胺能神经元中增加GDNF蛋白并且增加神经元存活和神经突增生
[0350] 使用稍微修改的之前描述的方法制备大鼠多巴胺能神经元(Brouard等人，Journal of Neuroscience，1992，12，第1409-1415页)。在第6天，将培养基用新鲜培养基或含有异菝葜皂甙元(10μM)或媒介物(DMSO，0.25％)的新鲜培养基替换。在第8天，加+入MPP(2μM)或媒介物(盐水)并且48小时之后将多巴胺能神经元染色并测量培养基中GDNF的浓度、神经元损害和神经突增生。
[0351] 结果示于下文表9中。
[0352] 表9异菝葜皂甙元增加培养基中GDNF的量并且预防MPP+暴露之后大鼠多巴胺能神经元中神经元损害和神经元萎缩
[0353]
[0354] n.m.＝未测量；平均值±均值标准误差；n＝5-6，++++＝p＜0.001与对照相比，* +＝p＜0.05与单独的MPP 相比。使用单向方差分析以及之后的Fisher事后检验进行TH阳性神经元的数目和神经突增生的统计学分析。通过学生t检验来进行GDNF浓度的统计学分析。
[0355] 异菝葜皂甙元增加多巴胺能神经元中GDNF的量并且预防MPP+诱导的神经元损害。
[0356] 实施例4中出示的数据显示异菝葜皂甙元没有增加体外基本条件下的培养的神经元中神经营养因子蛋白表达。相反地，实施例5显示菝葜皂甙元和异菝葜皂甙元都增加体外暴露于病理学剂的培养的神经元中神经营养因子蛋白表达。因此，菝葜皂甙元和异菝葜皂甙元对神经营养因子蛋白的影响与它们对神经营养因子mRNA的影响相似，即菝葜皂甙元和异菝葜皂甙元没有将神经营养因子的自身调节机制中断或过载，而是实际上取决于神经元的需求而经受它们。
[0357] 由于已知BDNF、trk-B和GDNF参与神经、知觉和运动通路，推理出在这些实验获得的知识的范围内，菝葜皂甙元和异菝葜皂甙元抗具有神经、知觉和运动来源的病况和病症的活性包括增强神经营养因子和它们的受体的基因表达。
[0358] 实施例6
[0359] 菝葜皂甙元和异菝葜皂甙元修复年老动物中的BDNF浓度
[0360] 将年长的Sprague Dawley(SD)大鼠(20个月大)口服施用菝葜皂甙元或异菝葜皂甙元(18mg/kg/天)3个月。与年轻的大鼠的脑相比BDNF在年老的大鼠脑中显著减少。将年轻的SD大鼠(4个月大)用作健康的阳性对照。在处理的结束时，将脑移出以便使用ELISA定量BDNF。
[0361] 结果示于下文表11中。
[0362] 表11菝葜皂甙元和异菝葜皂甙元逆转年老的大鼠中的BDNF水平的下降并且将BDNF水平向年轻状态修复
[0363]条件 BDNF(ng/g组织)
年轻 1.65±0.09
年老的 1.21±0.07++++
年老的+菝葜皂甙元(18mg/kg/天) 1.41±0.07*
年老的+异菝葜皂甙元(18mg/kg/天) 1.34±0.07*
年轻 1.65±0.09
年老的 1.21±0.07++++
年老的+菝葜皂甙元(18mg/kg/天) 1.41±0.07*
年老的+异菝葜皂甙元(18mg/kg/天) 1.34±0.07*
[0364] 平均值±均值标准误差；n＝9-10，使用成对的单尾学生t检验进行统计学分析。++++＝p＜0.001与年轻大鼠相比，*＝p＜0.05与年老大鼠相比。
[0365] 向年老的大鼠口服施用菝葜皂甙元或异菝葜皂甙元3个月，将年老动物的BDNF的下降向年轻健康大鼠中观察到的水平逆转，即，与年老对照大鼠相比，所述剂显著增加BDNF水平。
[0366] 这一数据表明所述剂对BDNF表达的影响是在长期施用下的正常化作用，即，有通过将复原限制于大致的正常状态而保护被处理的动物免受对所述剂的过量暴露的长期调节影响。
[0367] 这一实施例补充了通过引用并入本文的PCT专利申请第WO-A-03/082893号的实施例9中的实验。那个实验证明异菝葜皂甙元或菝葜皂甙元显著降低或逆转大鼠中年龄相关的BDNF、多巴胺受体和毒蕈碱的乙酰胆碱受体的减少。
[0368] 实施例7
[0369] 异菝葜皂甙元增加MPTP-损害的小鼠的纹状体中的BDNF和GDNF浓度
[0370] 七周大的雄性C57bl/6RJ小鼠(C57小鼠)接受日常注射1-甲基-4-苯基-1，2，3，6-四氢吡啶(MPTP，25mg/kg/天，腹腔注射，连续5天)和口服施用异菝葜皂甙元(10mg/kg/天)或媒介物(羟基丙甲基纤维素，含有吐温-800.2％v/v的HPMC 0.5％w/v)60天，之后将它们的脑移出用于使用ELISA定量GDNF和BDNF的纹状体水平以及使用[I125]-RTI结合定量多巴胺运载体(DAT)水平。DAT是用于多巴胺能神经元的神经元损害的标志。
[0371] 由神经毒素MPP+，MPTP的代谢产物，导致的损害模拟神经退行性变疾病例如帕金森氏病中观察到的黑质纹状体的的多巴胺能神经元的退化(Mytinlineou等人，Science，225，529-531(1984))。由这一毒素诱导的最显著的生物化学变化包括黑质致密部和尾状核中多巴胺和其代谢产物的增加的水平(Burns等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，80，
4546-4550(1983))以及黑质纹状体的突触小体制品中多巴胺摄入的减少(Heikkila等人，J.Neurochem.，44，310-313(1985))。
4546-4550(1983))以及黑质纹状体的突触小体制品中多巴胺摄入的减少(Heikkila等人，J.Neurochem.，44，310-313(1985))。
[0372] 在这一实验中所使用的MPTP处理的小鼠因此提供了帕金森氏病和相似的运动-知觉神经退行性变病况的可接受的模型。
[0373] 结果示于下文表12和13中。
[0374] 表12异菝葜皂甙元增加MPTP损害的小鼠中的纹状体GDNF和BDNF
[0375]
[0376] 平均值±均值标准误差；n＝8-11 **＝p＜0.01与MPTP损害的小鼠相比。使用单向方差分析以及之后的Tukey事后多重比较检验进行统计学分析。
[0377] 表13异菝葜皂甙元增加MPTP损害的小鼠中的纹状体DAT水平
[0378]
[0379] 平均值±均值标准误差；n＝6-8 ++＝p＜0.01与对照小鼠相比 **＝p＜0.01与MPTP损害的小鼠相比。使用单向方差分析以及之后的Tukey事后多重比较检验进行统计学分析。
[0380] 向MPTP损害的小鼠口服施用异菝葜皂甙元60天显著增加纹状体GDNF和BDNF水平并且显著防止MPTP诱导的DAT结合的损失。
[0381] 这一实施例补充了通过引用并入本文的PCT专利申请第WO-A-03/082893号的实施例6和7中的体外实验。那些实验证明用异菝葜皂甙元和菝葜皂甙元对大鼠中脑多巴胺能神经元的预处理体外显著预防或逆转MPP+诱导的神经退行性变。
[0382] 在相似的实验中，10周大的雄性C57小鼠接受每日注射盐水或MPTP(25mg/kg/天，腹腔注射)连续5天(第1-5天)和口服施用异菝葜皂甙元(10mg/kg/天)或媒介物(含有吐温-800.2％v/v的HPMC 0.5％w/v)61天(第12-72天)或71天(第2-72天)，之后
将它们的脑移出用于DAT的纹状体水平的定量，DAT是对多巴胺能神经元的神经元损害的程度的标志。
将它们的脑移出用于DAT的纹状体水平的定量，DAT是对多巴胺能神经元的神经元损害的程度的标志。
[0383] 结果示于下文表14中。
[0384] 表14异菝葜皂甙元逆转小鼠中纹状体DAT水平的MPTP诱导的减少
[0385]**** ++++
[0386] 平均值±均值标准误差；n＝8-12， ＝p＜0.001与对照小鼠相比， ＝p＜0.001与MPTP小鼠相比。使用单向方差分析以及之后的Fisher事后多重比较检验进行统计学分析。
[0387] 与仅接受媒介物的对照小鼠相比，向对照小鼠口服施用异菝葜皂甙元71天没有改变纹状体DAT水平。向MPTP-损害的小鼠口服施用异菝葜皂甙元61或71天显著逆转纹状体DAT水平的MPTP诱导的减少。
[0388] 实施例8
[0389] 菝葜皂甙元和异菝葜皂甙元增加皮质、脊椎运动和认知神经元中的神经突发生[0390] 皮质神经元
[0391] 使用修改的之前描述的方法培养大鼠皮质神经元(Singer，等人，Neuroscience Letters，1996，212，第13-16页)。用菝葜皂甙元、异菝葜皂甙元、媒介物(DMSO，0.25％)、GDNF、BDNF或NGF培养细胞24h。对于每一组，在每个视野中随机选择显示展示神经突的神经元的15张照片并且测量对于每个神经元最长的神经突。通过计数展示神经突的神经元的数目、没有展示神经突的神经元的数目和每个视野中总的神经元的数目来测量神经突数目。检测每孔六个视野。
[0392] 结果示于下文表15中，表示为每个视野具有神经突的神经元的数目占每个视野神经元的总数目的百分比。
[0393] 表15菝葜皂甙元和异菝葜皂甙元增加皮质神经元中的神经突发生
[0394]
[0395] 平均值±均值标准误差；一次培养，n＝3，使用单向方差分析以及之后的Fisher** *** ****事后检验进行统计学分析。 ＝p＜0.01； ＝p＜0.005， ＝p＜0.001与对照相比。
[0396] 菝葜皂甙元和异菝葜皂甙元显著增加大鼠原生皮质神经元中现有的神经突的长度和展示神经突的神经元的百分比。暴露于菝葜皂甙元和异菝葜皂甙元之后增加神经突增生的影响可与用阳性对照GDNF、BDNF和NGF观察到的相比。
[0397] 这一实施例补充了通过引用并入本文的PCT专利申请第WO-A-03/082893号的实施例5中的实验。那一实验证明用菝葜皂甙元或异菝葜皂甙元处理大鼠原生皮质神经元显著增加现有的神经突的长度和展示神经突的神经元的百分比。
[0398] 为了测试菝葜皂甙元和异菝葜皂甙元的神经营养、神经保护和神经修复活性是否依赖于神经营养因子例如BDNF或GDNF的存在，进行了下列实验：
[0399] 按照上文描述的方法培养大鼠皮质神经元。
[0400] 与之前的研究不同，培养基中没有加入胎牛血清(FBS)或胎小牛血清(FCS)，显示培养基中不存在神经营养因子。加入测试化合物24h。
[0401] 在不存在FBS或FCS的情况下将大鼠皮质神经元暴露于菝葜皂甙元、异菝葜皂甙元(30nM)或媒介物(DMSO，0.25％)一天。使用稀释的抗β-微管蛋白单克隆抗体和稀释的抗小鼠免疫球蛋白G染色皮质神经元。这些抗体染色神经元细胞体(定量神经保护作用)和神经突(定量神经营养作用)。用带有照相机的落射荧光显微镜(放大率x20)每孔获取2张照片(每种情况10张照片)。使用LUCIA 6.0软件进行用抗β-微管蛋白抗体标记的细胞的数目和细胞的总数的分析。
[0402] 结果示于下文表16中。
[0403] 表16菝葜皂甙元和异菝葜皂甙元对在血清和任何另外的神经营养因子不存在的情况下培养的皮质神经元的神经元存活率和神经突增生的影响
[0404]
[0405]
[0406] 平均值±均值标准误差；使用每次培养n＝12孔，n＝2次培养。使用单向方差分析以及之后的Fisher事后检验进行统计学分析，****＝p＜0.001与对照相比。
[0407] 菝葜皂甙元和异菝葜皂甙元不需要另外的神经营养因子以发挥它们的神经营养、神经保护和神经修复活性。
[0408] 脊柱运动神经元
[0409] 扎利罗登(1-[2-(萘-2-基)乙基]-4-(3-三氟甲基苯基)-1，2，5，6-四氢吡啶盐酸盐)，也称为SR 57746A，是由Sanofi-Aventis开发的用于治疗神经退行性变疾病的口服活性的、合成的非肽的化合物。扎利罗登穿透血脑屏障并且具有体外神经营养活性，其中其使得NGF能够影响PC12细胞中的神经突增生(Fournier等人，Neuroscience，1993，55，第629-641页；Pradines等人，Journal of Neurochemistry，1995，64，第1954-1964页)并且增加小鼠脊柱运动神经元的存活率(Duong等人，British Journal of Pharmacology，1999，128，第1385-1392页)。而且，扎利罗登增加平均存活时间和进行性运动神经病小鼠的运动表现(Duong等人，British Journal of Pharmacology，1998，124，第811-817页)。
扎利罗登的作用方式理解甚少。然而扎利罗登的神经保护作用似乎不依赖于其对5-羟基色胺1A受体的激动作用(Labie等人，British Journal of Pharmacology，1999，127，第
139-144页)。
扎利罗登的作用方式理解甚少。然而扎利罗登的神经保护作用似乎不依赖于其对5-羟基色胺1A受体的激动作用(Labie等人，British Journal of Pharmacology，1999，127，第
139-144页)。
[0410] 下列实验对比菝葜皂甙元或异菝葜皂甙元抗扎利罗登的神经发生和神经突发生作用。
[0411] 根据之前描述的方法制备大鼠脊柱运动神经元(Martinou等人，Neuron，8，737-744，1992)。用菝葜皂甙元、异菝葜皂甙元、媒介物(DMSO，0.25％)、扎利罗登或BDNF培养3天后，将脊柱运动神经元在PBS中清洗两次，在酒精(95％)和乙酸(5％)的冰溶液中固定5min并且之后在PBS中漂洗3次。使用抗β-微管蛋白单克隆抗体和抗小鼠免疫球蛋白G染色神经元。这些抗体染色神经元细胞体(定量神经保护作用)和神经突(定量神经营养作用)。用荧光标记染色细胞核。孵育1h后，将细胞在PBS中清洗3次。用具有
20倍放大率的落射荧光显微镜观察培养物。使用通过计算机软件控制的照相机获取一系列照片。在相同情况下取得所有图片。使用LUCIA 6.0软件进行用抗β-微管蛋白抗体标记的细胞的数目和细胞的总数(染色的细胞核数目)的分析。
20倍放大率的落射荧光显微镜观察培养物。使用通过计算机软件控制的照相机获取一系列照片。在相同情况下取得所有图片。使用LUCIA 6.0软件进行用抗β-微管蛋白抗体标记的细胞的数目和细胞的总数(染色的细胞核数目)的分析。
[0412] 结果示于下文表17中。
[0413] 表17菝葜皂甙元和异菝葜皂甙元增加脊柱神经运动中的神经发生和神经突发生[0414]
[0415] 平均值±均值标准误差；使用每次培养n＝12孔，n＝2次培养。使用单向方差分析以及之后的Fisher事后检验进行统计学分析，*＝p＜0.05，**＝p＜0.01，***＝p＜0.005和****＝p＜0.001与对照相比。
[0416] 数据显示与对照相比暴露于扎利罗登显著增加神经元存活率和神经突增生。菝葜皂甙元和异菝葜皂甙元还显著增加大鼠原生脊柱运动神经元中神经元存活率和神经突增生。增加神经突发生的作用是与用阳性对照BDNF观察到的那些可相比的。
[0417] 菝葜皂甙元和异菝葜皂甙元促进神经发生的作用似乎比扎利罗登的作用稍微显著一些；尽管与之前的研究相比菝葜皂甙元和异菝葜皂甙元的作用在这一研究中似乎减少了。
[0418] 已经使用肌萎缩侧索硬化(ALS)患者在两个III期临床试验中评估了扎利罗登(1和2mg/天)的效力和安全性(Meininger等人，Amyotrophic Lateral Sclerosis and Other Motor Neuron Disorders，2004，5，第107-117页)。此外，最近在III期试验中评估了扎利罗登用于阿尔茨海默氏病(对于此适应症，目前不再使用扎利罗登来进行(progress))的潜力。剂量依赖的副作用主要与扎利罗登的5-羟基色胺(5-HT)激动性质有关。
[0419] 在本实施例中，菝葜皂甙元和异菝葜皂甙显示与扎利罗登相比改善或相似的活性概况。重要地，菝葜皂甙元和异菝葜皂甙不是5-HT激动剂并且没有显示扎利罗登的相应的副作用。
[0420] 这一实施例补充了通过引用并入本文的PCT专利申请第WO-A-03/082893号的实施例8的体外实验。该实验证明用异菝葜皂甙元或菝葜皂甙元显著减少或逆转体外大鼠原生脊柱运动神经元的谷氨酸盐诱导的神经退行性变。
[0421] 认知神经无
[0422] 从怀孕第15天的Wistar大鼠胚胎获得大鼠认知神经元。于37℃在5％CO2/95％空气的气氛中培养细胞。用菝葜皂甙元、异菝葜皂甙元、媒介物(DMSO，0.25％)或NGF培养2天后，将认知神经元用PBS漂洗两次并且于4℃在溶于PBS的低聚甲醛(4％)中固定30min。用Triton X-100(0.1％)透化细胞并且用胎牛血清将非特异性位点饱和。在染色之前，将细胞与溶于含有胎牛血清5％的PBS的初级抗体抗神经丝68和200的混合物一起于室温孵育2h。清洗之前，卸下载玻片并且用PBS清洗细胞两次5min，放置于暗室中1h并且用溶于含有胎牛血清(5％)的PBS的与花青3(Cy3；1/1600)偶联的二级抗体：抗小鼠抗体和与氟代异硫氰酸酯(FITC；1/200)偶联的抗兔抗体孵育。用PBS清洗载玻片两次5min并且在盖玻片上用溶于甘油(22％)用Tris/HCl(0.2mM；pH 8.5)缓冲的抗氧化性溶液(9％w/v)Mowiol包埋。将载玻片于室温静置过夜以变硬并且储存于避光的环境中。使用具有x20目镜的DAPI/FITC/Cy3三重滤光片显微镜观看载玻片。使用数码照相机随机每孔获取一系列照片。
[0423] 结果示于下文表18中。
[0424] 表18菝葜皂甙元和异菝葜皂甙元增加认知神经元中的神经元存活率
[0425]
[0426] 平均值±均值标准误差；使用n＝40-49孔，n＝2次培养。使用单向方差分析以及之后的Fisher事后检验进行统计学分析，*＝p＜0.05和****＝p＜0.001与对照相比。
[0427] 菝葜皂甙元和异菝葜皂甙元显著增加大鼠原生认知神经元中的神经元存活率。
[0428] 实施例9
[0429] 菝葜皂甙元和异菝葜皂甙元活化与神经营养因子相同的细胞内转导通路
[0430] 菝葜皂甙元和异菝葜皂甙元诱导的神经突发生受trk抑制剂K252a抑制，表示菝葜皂甙元和异菝葜皂甙元的神经营养作用是由trk受体直接或间接介导的。这一抑制实验描述于下文并且结果示于下文表19中。
[0431] 如上文详细描述的培养皮质神经元。神经元被暴露于媒介物(DMSO，0.25％)或K252a(100nM)1h。1h后，在K252a持续存在的情况下，将媒介物、菝葜皂甙元、异菝葜皂甙元(30nM)或BDNF(1.85nM)加至培养基。暴露于菝葜皂甙元或异菝葜皂甙元(30nM)、媒介物(DMSO，0.25％)或BDNF(1.85nM)24h之后，将神经元用磷酸缓冲的盐水(PBS)清洗并在溶于PBS的戊二醛(2.5％)中固定。用固定在显微镜上的照相机(物镜x20，Nikon)获取展示神经突的40-60个神经元的照片。通过照片的分析测量神经突长度。
[0432] 结果示于下文表19中。
[0433] 表19菝葜皂甙元和异菝葜皂甙元诱导的大鼠原生皮质神经元的神经突增生的抑制
[0434]
[0435] 平均值±均值标准误差；使用每次培养n＝81-105个神经元，n＝2次培养，使用单向方差分析以及之后的Fisher事后检验进行统计学分析，++++＝p＜0.001与对照相比；****＝p＜0.001与没有K252a的相同的情况相比。
[0436] 在皮质和中脑神经元中的使用K252a、抗BDNF抗体或抗GDNF抗体的独立的实验中获得相似的结果。
[0437] trk受体活化之后，导致神经元存活的特定信号传导通路被激活，并且已经显示MEK1/2参与这一通路(Finkbeiner，Neuron，2000，25，第11-14页)。异菝葜皂甙元诱导的神经突增生部分地受到MEK1/2抑制剂PD98059抑制，显示异菝葜皂甙元的神经营养作用部分通过MEK1/2介导。这一抑制实验描述于下文并且结果示于下文表20中。
[0438] 如上文详细描述的培养皮质神经元。将神经元暴露于媒介物(DMSO，0.25％)或PD98059(10μM)1h。1h之后，将媒介物、异菝葜皂甙元(30nM)或BDNF(1.85nM)在PD98059持续存在的情况下加至培养基。暴露于异菝葜皂甙元(30nM)、媒介物(DMSO，0.25％)或BDNF(1.85nM)24h之后，将神经元用PBS清洗并且在溶于PBS的戊二醛(2.5％)中固定。用固定在显微镜上的照相机(物镜x20，Nikon)获取展示神经突的40-60个神经元的照片。
通过照片的分析测量神经突长度。
通过照片的分析测量神经突长度。
[0439] 结果示于下文表20中。
[0440] 表20异菝葜皂甙元诱导的大鼠原生皮质神经元的神经突增生的抑制
[0441]
[0442] 平均值±均值标准误差；使用每次培养n＝86-109个神经元，n＝2次培养，使++++用单向方差分析以及之后的Fisher事后检验进行统计学分析。 ＝p＜0.001与对照相****
比； ＝p＜0.001与没有PD98059的相同的情况相比。
比； ＝p＜0.001与没有PD98059的相同的情况相比。
[0443] 使用产生相似结果的菝葜皂甙元进行相似的实验。
[0444] cAMP响应元件结合蛋白(CREB)属于转录因子家族并且在调节神经元存活中很重要。另外，在trk受体活化之后，CREB被上调(Finkbeiner，Neuron，2000，25，第11-14页)。菝葜皂甙元显著增加中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中磷酸化的CREB(pCREB，CREB的活性形式)的量。这一实验描述于下文并且结果示于下文表21中。
[0445] 将CHO用DMSO(0.5％)或菝葜皂甙元(10μM)孵育24h。之后将细胞用冷PBS清洗，在十二烷基硫酸盐(SDS)缓冲液中溶解，煮沸5min并且通过Bradford法测量蛋白含量。之后将样品在SDS聚丙烯酰胺凝胶上分离并且转移至PVDF(Bio-Rad)膜。在5％脱脂奶粉中暴露1h之后，将膜于4℃在初级抗体小鼠pCREB(Upsdate，1∶1000)和小鼠β-肌动蛋白(Santa Cruz，1∶1000)中孵育过夜。之后将膜于室温在过氧化物酶轭合的二级抗体(Wuhan Boster Biology Technology，China.1∶2000)中孵育1小时并且用ECL试剂(Pierce)显色。将膜通过于pH 6.8和50℃在2-巯基乙醇(100mM)、SDS(2％)、Tris HCl(62.5mM)中孵育30min而分带。使用Image J分析系统用图片分析仪(Gel Doc 2000，Bio-Rad)进行免疫染色的密度定量。将每条带的pCREB的免疫染色的相对量对在相同实验中运行的β-肌动蛋白条带标准化并且表示为任意单位。
[0446] 表21在CHO细胞中暴露于菝葜皂甙元24h后磷酸化的CREB的表达
[0447]++
[0448] 平均值±均值标准误差；n＝5，通过成对的t检验进行统计学分析， ＝p＜0.001与对照相比。
[0449] 实施例10
[0450] 用菝葜皂甙元、异菝葜皂甙元、表菝葜皂甙元和表异菝葜皂甙元的预处理减少谷氨酸盐诱导的对皮质神经元的损害
[0451] 大鼠原生皮质神经元暴露于谷氨酸盐增加谷氨酸盐暴露之后24h测量的乳酸脱氢酶(LDH)活性，显示显著的神经元损害。使用修改的之前描述的方法培养大鼠皮质神经元(Singer，等人，Neuroscience Letters，1996，212，第13-16页)。在培养的第10天，将培养基换为无血清的确定成分培养基。在第12天，将培养物清洗并放置于含有测试化合物或媒介物(DMSO，0.25％)的新鲜培养基中24h。在第13天，将神经元于37℃暴露于谷氨酸盐(100μM；10min)。之后在测量LDH之前，将培养物用补充有测试化合物或媒介物的新鲜培养基清洗并放置于补充有测试化合物或媒介物的新鲜培养基中另外24h。通过在谷氨酸盐暴露之后24h测量培养基中的LDH活性来评估神经元损害。
[0452] 结果示于下文表22至26中。
[0453] 表22菝葜皂甙元减少皮质神经元中谷氨酸盐诱导的损害
[0454]皮质神经元
条件 神经元存活率(对照的％)
对照 100.00±2.23
谷氨酸盐(100μM) 65.83±2.46+++
谷氨酸盐+菝葜皂甙元(1nM) 76.88±2.79***
谷氨酸盐+菝葜皂甙元(3nM) 77.23±2.62***
谷氨酸盐+菝葜皂甙元(10nM) 73.50±3.05*
谷氨酸盐+菝葜皂甙元(30nM) 78.91±2.97***
谷氨酸盐+菝葜皂甙元(100nM) 76.30±4.15***
条件 神经元存活率(对照的％)
对照 100.00±2.23
谷氨酸盐(100μM) 65.83±2.46+++
谷氨酸盐+菝葜皂甙元(1nM) 76.88±2.79***
谷氨酸盐+菝葜皂甙元(3nM) 77.23±2.62***
谷氨酸盐+菝葜皂甙元(10nM) 73.50±3.05*
谷氨酸盐+菝葜皂甙元(30nM) 78.91±2.97***
谷氨酸盐+菝葜皂甙元(100nM) 76.30±4.15***
[0455] 平均值±均值标准误差；使用每次培养n＝4孔，3次培养，使用单向方差分析以及之后的Fisher事后检验进行统计学分析。+++＝p＜0.005与对照相比*＝p＜0.05；**＝p＜0.01；***＝p＜0.005；与谷氨酸盐相比。
[0456] 表23异菝葜皂甙元减少皮质神经元中谷氨酸盐诱导的损害
[0457]皮质神经元
条件 神经元存活率(对照的％)
对照 100.00±4.17
谷氨酸盐 67.09±3.46+++
谷氨酸盐+异菝葜皂甙元(1nM) 81.53±1.66***
谷氨酸盐+异菝葜皂甙元(3nM) 78.19±1.85**
谷氨酸盐+异菝葜皂甙元(10nM) 82.50±1.00***
谷氨酸盐+异菝葜皂甙元(30nM) 89.86±3.55***
谷氨酸盐+异菝葜皂甙元(100nM) 82.45±2.18***
条件 神经元存活率(对照的％)
对照 100.00±4.17
谷氨酸盐 67.09±3.46+++
谷氨酸盐+异菝葜皂甙元(1nM) 81.53±1.66***
谷氨酸盐+异菝葜皂甙元(3nM) 78.19±1.85**
谷氨酸盐+异菝葜皂甙元(10nM) 82.50±1.00***
谷氨酸盐+异菝葜皂甙元(30nM) 89.86±3.55***
谷氨酸盐+异菝葜皂甙元(100nM) 82.45±2.18***
[0458] 平均值±均值标准误差；使用n＝4孔，1次培养。
[0459] 表24表菝葜皂甙元减少皮质神经元中谷氨酸盐诱导的损害
[0460]皮质神经元
条件 神经元存活率(对照的％)
对照 100.00±4.17
谷氨酸盐 67.09±3.46+++
谷氨酸盐+表菝葜皂甙元(1nM) 84.79±2.40***
谷氨酸盐+表菝葜皂甙元(3nM) 80.39±5.18*
谷氨酸盐+表菝葜皂甙元(10nM) 83.80±4.18***
谷氨酸盐+表菝葜皂甙元(30nM) 87.17±2.51***
谷氨酸盐+表菝葜皂甙元(100nM) 86.42±2.95***
条件 神经元存活率(对照的％)
对照 100.00±4.17
谷氨酸盐 67.09±3.46+++
谷氨酸盐+表菝葜皂甙元(1nM) 84.79±2.40***
谷氨酸盐+表菝葜皂甙元(3nM) 80.39±5.18*
谷氨酸盐+表菝葜皂甙元(10nM) 83.80±4.18***
谷氨酸盐+表菝葜皂甙元(30nM) 87.17±2.51***
谷氨酸盐+表菝葜皂甙元(100nM) 86.42±2.95***
[0461] 平均值±均值标准误差；使用n＝4孔，1次培养。
[0462] 表25表异菝葜皂甙元减少皮质神经元中谷氨酸盐诱导的损害
[0463]皮质神经元
条件 神经元存活率(对照的％)
对照 100.00±5.18
谷氨酸盐 70.15±1.07+++
谷氨酸盐+表异菝葜皂甙元(3nM) 82.49±3.93**
谷氨酸盐+表异菝葜皂甙元(10nM) 78.57±2.15
谷氨酸盐+表异菝葜皂甙元(30nM) 81.76±2.09**
谷氨酸盐+表异菝葜皂甙元(100nM) 78.39±1.75
谷氨酸盐+表异菝葜皂甙元(300nM) 78.86±1.80*
条件 神经元存活率(对照的％)
对照 100.00±5.18
谷氨酸盐 70.15±1.07+++
谷氨酸盐+表异菝葜皂甙元(3nM) 82.49±3.93**
谷氨酸盐+表异菝葜皂甙元(10nM) 78.57±2.15
谷氨酸盐+表异菝葜皂甙元(30nM) 81.76±2.09**
谷氨酸盐+表异菝葜皂甙元(100nM) 78.39±1.75
谷氨酸盐+表异菝葜皂甙元(300nM) 78.86±1.80*
[0464] 平均值±均值标准误差；使用n＝4孔，1次培养。
[0465] 表26薯蓣皂甙元未减少皮质神经元中谷氨酸盐诱导的损害
[0466]皮质神经元
条件 神经元存活率(对照的％)
对照 100.00±4.20
谷氨酸盐 67.67±4.54+++
谷氨酸盐+薯蓣皂甙元(3nM) 69.43±1.76
谷氨酸盐+薯蓣皂甙元(10nM) 66.51±5.13
谷氨酸盐+薯蓣皂甙元(30nM) 68.98±5.39
谷氨酸盐+薯蓣皂甙元(100nM) 70.95±5.03
谷氨酸盐+薯蓣皂甙元(300nM) 75.02±2.68
条件 神经元存活率(对照的％)
对照 100.00±4.20
谷氨酸盐 67.67±4.54+++
谷氨酸盐+薯蓣皂甙元(3nM) 69.43±1.76
谷氨酸盐+薯蓣皂甙元(10nM) 66.51±5.13
谷氨酸盐+薯蓣皂甙元(30nM) 68.98±5.39
谷氨酸盐+薯蓣皂甙元(100nM) 70.95±5.03
谷氨酸盐+薯蓣皂甙元(300nM) 75.02±2.68
[0467] 平均值±均值标准误差；使用n＝4孔，1次培养。
[0468] 在大鼠原生皮质神经元中，与只暴露于谷氨酸盐的神经元相比，谷氨酸盐暴露之前24h使用菝葜皂甙元、异菝葜皂甙元、表菝葜皂甙元(1-100nM)和表异菝葜皂甙元(3-300nM)预处理显著减少谷氨酸盐诱导的LDH释放。
[0469] 相反，谷氨酸盐暴露之前24h使用薯蓣皂甙元(3-300nM)预处理未预防神经元损害。
[0470] 菝葜皂甙元、异菝葜皂甙元、表菝葜皂甙元和表异菝葜皂甙元的活性在纳摩尔浓度达到平高线但不导致任何毒性。在这些实验条件下微摩尔浓度的测试化合物从溶液中沉淀出。
[0471] 这一实施例补充了通过引用并入本文的PCT专利申请第WO-A-03/082893号的实施例2至4的体外实验，那些实验证明使用菝葜皂甙元、表菝葜皂甙元、异菝葜皂甙元、表异菝葜皂甙元或其3-酮或3-酯的预处理显著预防或逆转谷氨酸盐诱导的神经退行性变，然而薯蓣皂甙元没有显示这样的活性。
[0472] 实施例11
[0473] 多巴胺能神经元中菝葜皂甙元、表菝葜皂甙元、异菝葜皂甙元和表异菝葜皂甙元的抗凋亡作用
[0474] 如上文详细描述的培养大鼠多巴胺能神经元(Schinelli等人，Journal of Neurochemistry，1988，50，第1900-1907页)。在第5天，将培养物用补充有测试化合物(30nM)、媒介物(DMSO，0.25％)或BDNF(1.85nM)和GDNF(0.17nM)的组合的新鲜培养基清洗并放置于补充有测试化合物(30nM)、媒介物(DMSO，0.25％)或BDNF(1.85nM)和GDNF(0.17nM)的组合的新鲜培养基中另外24h。
[0475] 与对照相比，大鼠原生多巴胺能神经元暴露于MPP+(2μM，24h)导致多巴胺能神经元数目上的降低。在第6天，在测试化合物、媒介物或BDNF和GDNF的组合存在的情况下将+ +MPP(2μM)加至培养物另外48小时。MPP 通过在线粒体中抑制复合体I和随后的ATP缺失诱导神经元死亡，导致游离原子团产生和凋亡的诱导。孵育期之后，将培养物用溶于PBS的低聚甲醛(4％)固定。固定之后，将神经元用Triton x 100(0.05％)透化30min。之后将神经元与抗酪氨酸羟化酶(TH)抗体一起于37℃孵育2h。将神经元用PBS清洗三次并且之后用山羊抗小鼠抗体/Cy3于37℃孵育2h。将神经元包埋并用荧光显微镜检查。
[0476] 结果示于下文表27中。
[0477] 表27菝葜皂甙元、异菝葜皂甙元、表菝葜皂甙元和表异菝葜皂甙元减少MPP+诱导中脑多巴胺能神经元的损失
[0478]多巴胺能神经元
条件 神经元存活率(对照的％)
对照 100.00±3.20
+MPP+(2μM) 55.31±3.15++++
+MPP++菝葜皂甙元(30nM) 88.73±4.39****
+MPP++异菝葜皂甙元(30nM) 97.91±3.63****
+MPP++表菝葜皂甙元(30nM) 95.01±4.52****
+MPP++表异菝葜皂甙元(30nM) 115.12±4.73****
+MPP++BDNF(1.85nM)&GDNF(0.17nM) 121.94±6.51****
条件 神经元存活率(对照的％)
对照 100.00±3.20
+MPP+(2μM) 55.31±3.15++++
+MPP++菝葜皂甙元(30nM) 88.73±4.39****
+MPP++异菝葜皂甙元(30nM) 97.91±3.63****
+MPP++表菝葜皂甙元(30nM) 95.01±4.52****
+MPP++表异菝葜皂甙元(30nM) 115.12±4.73****
+MPP++BDNF(1.85nM)&GDNF(0.17nM) 121.94±6.51****
[0479] 平均值±均值标准误差；使用每次培养n＝40或80个视野、孔，n＝1或2次培++++养。使用单向方差分析以及之后的Dunnett事后检验进行统计学分析； ＝p＜0.005与**** +
对照相比， ＝p＜0.005；与MPP 相比。
对照相比， ＝p＜0.005；与MPP 相比。
[0480] 菝葜皂甙元、异菝葜皂甙元、表菝葜皂甙元和表异菝葜皂甙元显著预防MPP+诱导+多巴胺能神经元的减少。暴露于神经营养因子BDNF和GDNF的组合也显著预防MPP 诱导多巴胺能神经元的减少。
[0481] 实施例12
[0482] 谷氨酸盐或MPP+诱导的损害之后菝葜皂甙元和异菝葜皂甙元的神经修复性[0483] 皮质神经元
[0484] 神经退行性变病症的处理的重要目标不仅仅是防止发展还有逆转患者中发生的神经元损失。大鼠原生皮质神经元暴露于谷氨酸盐(100μM；10min)之后，菝葜皂甙元和异菝葜皂甙元(30nM)在处理之后24h显著逆转谷氨酸盐诱导的损害。这一实施例发展了PCT专利申请第WO-A-03/082893号的实施例2至4中报道的工作。
[0485] 如上文详细介绍的制备大鼠皮质神经元。在第13天，将培养物在确定成分的培养基中于37℃在5％CO2/95％空气气氛中暴露于谷氨酸盐(100μM)10min。孵育期之后，将培养物在含有菝葜皂甙元、异菝葜皂甙元或媒介物的新鲜培养基中清洗并保持。将细胞在谷氨酸盐暴露之后培养另外24h并且之后如上文详细描述的评估神经元损害。
[0486] 结果示于下文表28中。
[0487] 表28菝葜皂甙元和异菝葜皂甙元逆转皮质神经元中谷氨酸盐诱导的损害
[0488]皮质神经元
条件 神经元存活率(对照的％)
对照 100.00±4.03
+谷氨酸盐(100μM) 66.32±2.36++++
+谷氨酸盐+菝葜皂甙元(30nM) 103.43±5.10****
+谷氨酸盐+异菝葜皂甙元(30nM) 111.06±3.40****
条件 神经元存活率(对照的％)
对照 100.00±4.03
+谷氨酸盐(100μM) 66.32±2.36++++
+谷氨酸盐+菝葜皂甙元(30nM) 103.43±5.10****
+谷氨酸盐+异菝葜皂甙元(30nM) 111.06±3.40****
[0489] 平均值±均值标准误差；使用每次培养n＝4孔，2次培养，使用单向方差分析以及之后的Fisher事后检验进行统计学分析；++++＝p＜0.001与对照相比，****＝p＜O.001与谷氨酸盐相比。
[0490] 脊柱运动神经元
[0491] 如上文详细介绍的制备大鼠脊柱运动神经元。在第10天，将培养基除去并且将培养物在确定成分的培养基中于37℃在5％CO2/95％空气气氛中暴露于谷氨酸盐(4μM)10min。谷氨酸盐暴露之后，将培养物于37℃用DMEM清洗之后放置于含有菝葜皂甙元、异菝葜皂甙元、媒介物或BDNF的新鲜培养基中。48h之后，如上文所详细描述的确定运动神经元损害的程度。这一实施例发展了PCT专利申请第WO-A-03/082893号的实施例8中报道的工作。
[0492] 结果示于下文表29中。
[0493] 表29菝葜皂甙元和异菝葜皂甙元逆转脊柱运动神经元中谷氨酸盐诱导的损害[0494]脊柱神经运动
条件 神经元存活率(对照的％)
对照 100.00±8.87
+谷氨酸盐(4μM) 75.52±2.58+
+谷氨酸盐+菝葜皂甙元(0.03nM) 101.09±4.12****
+谷氨酸盐+菝葜皂甙元(3nM) 108.10±3.56****
+谷氨酸盐+菝葜皂甙元(300nM) 120.43±7.46****
+谷氨酸盐+异菝葜皂甙元(0.03nM) 90.98±2.46*
+谷氨酸盐+异菝葜皂甙元(3nM) 101.53±3.18****
+谷氨酸盐+异菝葜皂甙元(300nM) 106.61±4.24****
+谷氨酸盐+BDNF(3nM) 106.60±6.14****
条件 神经元存活率(对照的％)
对照 100.00±8.87
+谷氨酸盐(4μM) 75.52±2.58+
+谷氨酸盐+菝葜皂甙元(0.03nM) 101.09±4.12****
+谷氨酸盐+菝葜皂甙元(3nM) 108.10±3.56****
+谷氨酸盐+菝葜皂甙元(300nM) 120.43±7.46****
+谷氨酸盐+异菝葜皂甙元(0.03nM) 90.98±2.46*
+谷氨酸盐+异菝葜皂甙元(3nM) 101.53±3.18****
+谷氨酸盐+异菝葜皂甙元(300nM) 106.61±4.24****
+谷氨酸盐+BDNF(3nM) 106.60±6.14****
[0495] 平均值±均值标准误差；使用每次培养n＝6孔，2次培养和用于BDNF的n＝1+次培养，使用单向方差分析以及之后的Fisher事后检验进行统计学分析。 ＝p＜0.005**** *
与对照相比， ＝p＜0.001，＝p＜0.05与谷氨酸盐相比。
与对照相比， ＝p＜0.001，＝p＜0.05与谷氨酸盐相比。
[0496] 将大鼠原生脊柱运动神经元暴露于谷氨酸盐(4μM；10min)增加谷氨酸盐暴露之后48h测量的LDH活性，显示显著的神经元损害。菝葜皂甙元和异菝葜皂甙元(0.03-300nM)在处理后48h显著逆转谷氨酸盐诱导的损害。
[0497] 然而，由最低浓度的菝葜皂甙元和异菝葜皂甙元提供的损害的逆转在培养物之间是不同的，表示0.03nM可以是这一模型中活性的下限。将脑源神经营养因子(3nM)用作阳性对照并且与仅暴露于谷氨酸盐的脊柱运动神经元相比显著逆转谷氨酸盐诱导的LDH活性。
[0498] 多巴胺能神经元
[0499] 如上文描述的制备大鼠原生多巴胺能神经元。在第5天，在培养基中于37℃在5％+CO2/95％空气气氛中将MPP(2μM)加至培养物24h。与对照相比，大鼠原生多巴胺能神经+
元暴露于MPP(2μM，24h)导致多巴胺能神经元数目的显著降低。第6天，将培养基除去并且加入含有媒介物(DMSO，0.25％)、菝葜皂甙元、异菝葜皂甙元或BDNF和GDNF的组合的新鲜培养基。48h之后，如上文所详细描述的确定多巴胺能损害的程度。
元暴露于MPP(2μM，24h)导致多巴胺能神经元数目的显著降低。第6天，将培养基除去并且加入含有媒介物(DMSO，0.25％)、菝葜皂甙元、异菝葜皂甙元或BDNF和GDNF的组合的新鲜培养基。48h之后，如上文所详细描述的确定多巴胺能损害的程度。
[0500] 结果示于下文表30中。
[0501] 表30菝葜皂甙元和异菝葜皂甙元逆转多巴胺能神经元中MPP+诱导的损害
[0502]多巴胺能神经元
条件 神经元存活率(对照的％)
对照 100.00±5.79
+MPP+(2μM) 75.81±4.00+++
+MPP++菝葜皂甙元(30nM) 104.30±5.63****
+MPP++异菝葜皂甙元(30nM) 113.44±4.62****
+MPP++BDNF(1.85nM)&GDNF(0.17nM) 97.85±4.68***
条件 神经元存活率(对照的％)
对照 100.00±5.79
+MPP+(2μM) 75.81±4.00+++
+MPP++菝葜皂甙元(30nM) 104.30±5.63****
+MPP++异菝葜皂甙元(30nM) 113.44±4.62****
+MPP++BDNF(1.85nM)&GDNF(0.17nM) 97.85±4.68***
[0503] 平均值±均值标准误差；使用n＝40个视野，n＝1次培养，使用单向方差分析以+++ ***及之后的Fisher事后检验进行统计学分析。 ＝p＜0.005与对照相比， ＝p＜0.005，**** +
＝p＜0.001与MPP 相比。
＝p＜0.001与MPP 相比。
[0504] 数据显示暴露于菝葜皂甙元和异菝葜皂甙元(30nM)显著逆转多巴胺能神经元中+MPP 诱导的下降。暴露于神经营养因子BDNF(1.85nM)和GDNF(0.17nM)的组合同样显著逆+
转多巴胺能神经元中MPP 诱导的下降。
转多巴胺能神经元中MPP 诱导的下降。
[0505] 在相似的实验中，其结果示于图1中，检查异菝葜皂甙元的不同浓度逆转大鼠原+生多巴胺能神经元中MPP(2μM，24h)诱导的神经元损害的作用。BDNF、GDNF和媒介物的浓度如上所述。将多巴胺能培养物在含有异菝葜皂甙元(0.3fM至30nM)，BDNF(1.85nM)和+
GDNF(0.17nM)的组合或媒介物(DMSO，0.25％)的培养基中孵育24小时。之后将MPP(2μM)或媒介物加至培养基并且将培养物孵育另外48h。将每个视野中多巴胺能(TH阳性)神经元的数目通过免疫组织化学和荧光显微镜定量并且之后对其自身的对照标准化以致数据+ +
可被组合。暴露于MPP24h之后使用异菝葜皂甙元(3fM-30nM)处理48h显著逆转MPP 诱导的神经元损害，具有13.4fM的EC50。
GDNF(0.17nM)的组合或媒介物(DMSO，0.25％)的培养基中孵育24小时。之后将MPP(2μM)或媒介物加至培养基并且将培养物孵育另外48h。将每个视野中多巴胺能(TH阳性)神经元的数目通过免疫组织化学和荧光显微镜定量并且之后对其自身的对照标准化以致数据+ +
可被组合。暴露于MPP24h之后使用异菝葜皂甙元(3fM-30nM)处理48h显著逆转MPP 诱导的神经元损害，具有13.4fM的EC50。
[0506] 实施例13
[0507] 菝葜皂甙元和异菝葜皂甙元的口服施用改进神经受损害的小鼠模型中神经功能的复原(pmn小鼠)
[0508] 进行性运动神经病(pmn)小鼠是退化性运动神经元疾病的遗传模型，包括伴随远端轴突退化的萎缩(dying-back)过程以及近端轴突和细胞体的相对保留(Schmalbruch等人，Journal of Neuropathology and Experimental Neurology，1991，50，第192-204页)。pmn/pmn纯合型患有运动轴突的颅尾(caudio-cranial)退化并且在出生之后几周死亡，可能由于呼吸肌除神经支配(Schmalbruch等人，Journal of Neuropathology and Experimental Neurology，1991，50，第192-204页；Sendtner等人，Nature，1992，358，第502-504页)。尽管pmn小鼠不能被认为是任何特殊的人类运动神经元疾病的任何复本的精确的动物模型(Kennel等人，Neurobiology of Disease，1996，3，第137-147页)，但其代表评估用于神经退行性变疾病的新的药物候选物潜力的有用的模型。这一小鼠模型已经被用于确定运动神经元退化之下潜在的致病机制(Sagot等人，Journal of Neuroscience，
1995，15，第7727-7733页)以及提高用于处理运动神经元疾病例如ALS、进行性肌萎缩、脊髓性肌萎缩、进行性延髓性麻痹、假延髓病型麻痹和原发性侧索硬化的潜在的治疗策略(Haase等人，Nature Medicine，1997，3，第429-436页；Sendtner等人，Nature，1992，358，第502-504页；Sagot等人，Journal of Neuroscience，1995，15，第7727-7733页；Sagot等人，Journal of Neuroscience，1996，16，第2335-2341页)。这一实施例发展了通过引用并入本文的PCT专利申请第WO-A-03/082893号的实施例11中报道的工作。
1995，15，第7727-7733页)以及提高用于处理运动神经元疾病例如ALS、进行性肌萎缩、脊髓性肌萎缩、进行性延髓性麻痹、假延髓病型麻痹和原发性侧索硬化的潜在的治疗策略(Haase等人，Nature Medicine，1997，3，第429-436页；Sendtner等人，Nature，1992，358，第502-504页；Sagot等人，Journal of Neuroscience，1995，15，第7727-7733页；Sagot等人，Journal of Neuroscience，1996，16，第2335-2341页)。这一实施例发展了通过引用并入本文的PCT专利申请第WO-A-03/082893号的实施例11中报道的工作。
[0509] 受影响的纯合型+/+pmn(“pmn小鼠”)小鼠从在Neurofit(Illkirch，France)繁育的额外的toe基因座(Xt)+/+pmn双杂合型小鼠的繁殖集落获得。从出生后10天开始刚好在疾病的始发症状显现之后，通过每天的口服强饲对pmn小鼠给药。将菝葜皂甙元(0.03、0.3和3μg/kg/天)作为在油中的悬浮液(10ml/kg)施用于pmn小鼠。使用标准的Neuromatic 2000M肌电图仪仪器根据美国电诊断协会(American Association of Electrodiagnostic Medicine)的指南进行肌电图(EMG)记录。从第8天开始每周进行标准行为测试(网格、旋转和悬挂测试)评估pmn小鼠的运动表现。
[0510] 菝葜皂甙元对运动功能的影响通过记录腓肠肌诱发的运动响应的振幅来评估(CMAP，功能运动神经元的数目的间接测量)
[0511] 结果示于附图的图2中。
[0512] pmn对照组显示12天大时CMAP振幅的迅速降低。向pmn小鼠每日口服施用菝葜皂甙元(0.3μg/kg/天)延迟神经元功能的退化(p＜0.001)。对照小鼠表现的摔倒的次数从12天大时迅速增加。与pmn对照组相比，向pmn小鼠每日口服施用菝葜皂甙元(0.3μg/kg/天)显著延迟旋转和网格测试行为上的退化(p＝0.02方差多变量分析)。与pmn对照组相比，每日口服施用菝葜皂甙元(0.3μg/kg/天)显著增加pmn小鼠的存活率(与对2
照相比高达62％，对数秩，χ ＝7.36，p＝0.006)。
照相比高达62％，对数秩，χ ＝7.36，p＝0.006)。
[0513] 相比之下，临床症状发作之后以最低测试剂量(0.3μg/kg/天)每日口服施用菝葜皂甙元没有延迟这一遗传模型中运动神经元退化的进行。
[0514] 这些结果显示口服活性的、非肽的神经营养因子诱导物菝葜皂甙元能够延迟这一遗传模型中运动神经元退化的进行。已经在pmn小鼠模型中测试神经营养因子(睫状神经营养因子；CNTF；Sagot等人，Journal of Neuroscience，1995，15，第7727-7733页)和GDNF(Sagot等人，Journal of Neuroscience，1996，16，第2335-2341页)。这些研究显示CNTF(CNTF分泌细胞的腹腔注射施用)增加存活时间40％并且提高运动功能，然而GDNF提高运动神经元存活但是没有减缓疾病(Sagot等人，Journal of Neuroscience，1996，16，第2335-2341页)。神经营养因子已经被认为是可能用于运动神经元疾病的处理；然而，作为蛋白质它们广泛的临床使用是非常有问题的。从出生起向pmn小鼠口服施用的非肽的神经营养化合物SR 57746A(扎利罗登)延迟运动神经退行性变的进行，改善小鼠运动表现和寿命(～50％；Duong等人，British Journal of Pharmacology，1998，124，第811-817页)。
而且，在疾病发作时口服施用的CGP 3466B(抗凋亡剂)延迟疾病的进行并且提高pmn小鼠寿命57％(Sagot等人，British Journal of Pharmacology，2000，131，第721-728页)；
分子BN 80933(神经元一氧化氮合酶和脂质过氧化反应抑制剂)提高pmn小鼠寿命40％(Sagot等人，British Journal of Pharmacology，2000，131，第721-728页)
而且，在疾病发作时口服施用的CGP 3466B(抗凋亡剂)延迟疾病的进行并且提高pmn小鼠寿命57％(Sagot等人，British Journal of Pharmacology，2000，131，第721-728页)；
分子BN 80933(神经元一氧化氮合酶和脂质过氧化反应抑制剂)提高pmn小鼠寿命40％(Sagot等人，British Journal of Pharmacology，2000，131，第721-728页)
[0515] 重要的是，当在疾病的症状之后口服施用菝葜皂甙元时，菝葜皂甙元在这一模型中体内延迟疾病的进行并且提高pmn小鼠寿命高达62％。用异菝葜皂甙元获得相似的结果。
[0516] 实施例14
[0517] 菝葜皂甙元和异菝葜皂甙元的口服施用改进神经受损害的另外的小鼠模型中神经功能的复原(神经挤压模型)
[0518] 坐骨神经挤压模型是用于运动神经元疾病和创伤后神经损伤的良好表征的可逆的模型(McMahon和Priestley，Current Opinion in Neurobiology，1995，5，第616-624页)。神经受损害通过使用止血钳(使用两次，距这些小鼠的右边坐骨神经的三根分叉部5mm)的机械压迫产生。这导致两周时间的神经退化以及之后持续多达四周的神经的局部炎症。神经功能的损失在机械损伤后4-5周时间逐渐复原。
[0519] 坐骨神经受损害之后，向C57小鼠每日口服施用菝葜皂甙元(3mg/kg/天，溶于油中口服强饲)和异菝葜皂甙元(0.3和3mg/kg/天，溶于油中口服强饲)6周显著提高神经功能的复原，如腓肠肌中通过CMAP参数(振幅、潜伏期和持续时间，分别是活性运动纤维、运动神经传导速度和神经纤维功能性的间接标志)以及坐骨神经的形态学分析(变性的纤维的比例)所测量的。4-甲基儿茶酚被用作阳性对照(Kaechi等人，Journal of Phamacology和Experimental Therapeutics，1995，272，第1300-1304页)。
[0520] 结果示于附图的图3中。
[0521] 用氯胺酮盐酸盐(60mg/kg，腹腔注射)将C57bl/6 RJ小鼠麻醉。将坐骨神经在中股水平手术暴露并且在距坐骨神经的三根分叉部约5mm处挤压。将神经用止血钳挤压两次30秒，并且在每次挤压之间90度旋转。这导致两周时间的神经退化以及之后持续多达四周的神经的局部炎症。神经功能的损失在机械损伤后4-5周时间逐渐复原。如上文所描述的评估肌电图记录。
[0522] 结果示于下文表31中。
[0523] 表31菝葜皂甙元和异菝葜皂甙元降低神经受损害的小鼠模型中退化的纤维的数目
[0524]组 退化的纤维(对照的％)
对照 0.00±6.71
神经挤压 10910+265++++
菝葜皂甙元(3mg/kg/天) 33.50±12.60****
异菝葜皂甙元(0.3mg/kg/天) 16.70±4.23****
异菝葜皂甙元(3mg/kg/天) -8.10±6.03****
4-甲基儿茶酚(10μg/kg/天) -7.48±1.62****
对照 0.00±6.71
神经挤压 10910+265++++
菝葜皂甙元(3mg/kg/天) 33.50±12.60****
异菝葜皂甙元(0.3mg/kg/天) 16.70±4.23****
异菝葜皂甙元(3mg/kg/天) -8.10±6.03****
4-甲基儿茶酚(10μg/kg/天) -7.48±1.62****
[0525] 平均值±均值标准误差；使用单向方差分析以及之后的Dunnett事后检验进行变性纤维的统计学分析，n＝3-4。++++＝p＜0.001与对照相比，****＝p＜0.001与神经挤压相比。
[0526] 菝葜皂甙元和异菝葜皂甙元是口服活性的并且能够提高神经功能的复原并且刺激坐骨神经挤压模型中的神经再生。
[0527] 实施例15
[0528] 菝葜皂甙元和异菝葜皂甙元在年老的动物中减少焦虑并修复认知能力和BDNF的下降
[0529] 对年长的Sprague Dawley(SD)大鼠(20个月大)口服施用菝葜皂甙元或异菝葜皂甙元(18mg/kg/天)3个月。将年轻的SD大鼠(4个月大)用作健康的阳性对照而将年老的SD大鼠(20个月大)用作神经退行性变的对照。Y型迷宫被用来评估学习和记忆，并且按照导致对动物的不良应激的测试的性质也同样被考虑为焦虑的模型。在Y型迷宫的每个臂的底部是当需要时可调节电压的电流被应用于其的铜柱的阵列(2mmx140mm)。每个臂是450mm长，在末端具有15w灯泡。两个月的处理之后，将每只大鼠训练连续7天，每天一次。在每次训练期间，将大鼠放在Y型迷宫的一个臂中并且2min之后将电流用于逆时针臂的铜柱并点亮顺时针的灯泡表示非通电的区域。如果大鼠跑进点亮的臂，记录一次正确的响应，否则记录一次错误的响应。这一刺激-响应测试每天重复20次，每次测试之间具有5s的停顿。记录正确响应的次数和20次测试的总的时间段。计算正确响应的次数除以总的响应时间的商并且用作学习能力的指数，商越高学习能力越高。学习测试后一个月(3个月的处理)，再次实行Y迷宫测试并且将获得的商用作记忆能力的指数。在处理结束时，将小鼠杀死并且将脑移出用于使用ELISA定量BDNF(BDNF的数据于上文实施例3中)。
[0530] Y型迷宫实验的结果示于下文表32中。
[0531] 表32菝葜皂甙元和异菝葜皂甙元修复年老的大鼠中的认知能力(学习和记忆)以及BDNF水平的下降
[0532]
[0533]
[0534] 平均值±均值标准误差；n＝9-10，使用成对的单尾学生t检验进行统计学分析，++++ ****＝p＜0.001与对照相比， ＝p＜0.001与年老的大鼠相比。
[0535] 口服施用于年老的大鼠多达3个月的菝葜皂甙元和异菝葜皂甙元(18mg/kg/天)减少焦虑、将认知能力(学习和记忆能力)向在年轻大鼠中观察到的修复。
[0536] 实施例16
[0537] 口服施用的菝葜皂甙元和异菝葜皂甙元被递送至许多身体组织
[0538] 菝葜皂甙元和异菝葜皂甙元已经被证实是口服活性的并且已经在于啮齿类和非啮齿类中的口服施用之后测量了它们的血浆、脑、脊髓(和其他组织)的浓度
[0539] 结果示于下文表33中。
[0540] 表33单次口服施用之后菝葜皂甙元和异菝葜皂甙元分散至血浆、脑和脊髓[0541]
[0542]
[0543]
[0544] 口服施用的菝葜皂甙元和异菝葜皂甙元移行至身体的神经元部位和血浆。
[0545] 实施例17
[0546] 口服施用的菝葜皂甙元和异菝葜皂甙元在有效剂量是无毒的
[0547] 菝葜皂甙元和异菝葜皂甙元体外在纳摩尔浓度是有活性的而更低的浓度是无活性的或者在神经元中表现可变的活性。在更高的浓度的菝葜皂甙元和异菝葜皂甙元没有显示在神经营养因子的更高浓度体外观察到的毒性。
[0548] 已经用菝葜皂甙元(大鼠中高达26周和非啮齿类中高达39周)和异菝葜皂甙元(小鼠和非啮齿类中高达52周)进行了高剂量的口服施用之后长期的毒性研究，没有显示一旦达到神经营养因子的高水平就会显现的毒性或不利事件的任何迹象。
[0549] 实施例18
[0550] 异菝葜皂甙元减少MPTP损害的猕猴中的帕金森氏综合征并调节壳核中的GDNF和BDNF浓度
[0551] 使十九只雌性食蟹猴(Macaca fascicularis，3.0-4.5kg，4-6岁大)适应实验环境和程序3个月并且在所有动物中评估基线行为。十四只雌性猕猴接受MPTP(0.2mg/kg/天，皮下)直到发展出显著稳定的帕金森病症状。将动物(n＝7/组)随机设置为两组；异菝葜皂甙元(20mg/kg/天，口服)或媒介物对照(HPMC，0.5％w/v含有吐温80，0.2％v/v)。向没有接受MPTP的5只猕猴施用媒介物并且用作对照组。
[0552] MPTP施用和之后18个星期的异菝葜皂甙元或媒介物施用之后进行帕金森病的失能的评估。由对处理不知情的神经病学家通过DVD记录的事后分析来评价帕金森病失能。在研究结束时，将脑移出并且使用多重ELISA/Aushon测定测量壳核中未结合的GDNF和BDNF的水平。这一实验中使用的MPTP处理的猕猴由此提供用于帕金森氏病和相似的运动-感觉神经退行性变病况的公认的模型。
[0553] 结果示于下文表34中。
[0554] 表34异菝葜皂甙元在MPTP损害的猕猴中改善行为并调节GDNF和BDNF的壳核水平
[0555]
[0556] ###＝p＜0.001与MPTP施用后帕金森病失能相比。使用非配对的双向方差分析**以及Bonferroni多重比较事后检验进行统计学分析。 ＝p＜0.01与MPTP损害的猕猴相比。使用单向方差分析以及之后的Tukey事后多重比较检验进行统计学分析。
[0557] 向MPTP损害的猕猴口服施用异菝葜皂甙元18周显著降低MPTP损害的猕猴中帕金森综合征的水平。与接收媒介物的猕猴相比异菝葜皂甙元同样显著降低MPTP损害的猕猴的壳核中的GDNF和BDNF水平至与对照未损害的猕猴中观察到的没有显著不同的水平。
[0558] 这一数据表明异菝葜皂甙元对GDNF和BDNF表达的作用是在长期施用下的正常化作用，即，有通过将水平复原至大约正常的状态而保护动物免受对GDNF和BDNF的过量暴露的长期的调节作用。这一变化与猕猴中帕金森综合征水平上的显著降低非常有关。
[0559] 讨论
[0560] 上文实施例证明A/B顺式螺甾烷甾体皂甙元菝葜皂甙元和异菝葜皂甙元是神经营养因子诱导剂，如通过体外和离体数据所证明的；口服施用后它们是体外和体内神经保护和神经修复性的。它们作为诱导剂不需要神经营养因子的存在而起作用，并且因此似乎是真正的NF诱导剂而不是NF增强剂。
[0561] 神经营养因子(例如BDNF和GDNF)的施用已经是抑郁、精神分裂症、帕金森氏病和其他病症中疾病调节的策略，并且这一策略具有坚实的科学理论。然而已经证明很难将科学理论转变至临床。这是从神经营养因子的蛋白质性质和基于手术、病毒载体以及细胞的基因/蛋白质递送方法中固有的困难得出的。神经元复杂的营养需要可能限制通过单独的因子获得的效力并且所需的营养因子的量和获得临床益处所需要的处理的持续时间目前同样未知。
[0562] 口服活性的神经营养因子诱导剂菝葜皂甙元和异菝葜皂甙元和本申请中定义的相关分子克服了这些困难中的许多。我们在这已经显示菝葜皂甙元和异菝葜皂甙元体外在皮摩尔和纳摩尔浓度是有活性的。它们没有显示体外在神经营养因子的更高浓度所观察到的毒性。
[0563] 本申请中的证据和本文引用的参考文献中之前公开的证据一起显示，以有限并且可管理的副作用诱导NF例如BDNF和/或GDNF的自身调节的稳态将通过向受治疗者施用有效的量的选自A/B-顺式呋甾烷、呋甾烯、螺甾烷和螺甾烯甾体皂甙元和其酯、醚、酮和糖基化的形式的至少一种剂而获得，并且这将在许多用于处理和预防NF介导的病症和病况例如神经病学、精神病学、炎性、变应性、免疫、肿瘤性和相关病况的治疗和非治疗的方法中提供新的并且意想不到的益处。
[0564] 上文广泛并且非限制性地描述了本发明。对本领域技术人员来说非常明显的变化和修改预期包含在由所附的权利要求所定义的本发明的范围内。