一种植物或土壤线虫的氯化钾浮选方法

摘要

一种植物或土壤线虫的氯化钾浮选方法，涉及植物或土壤线虫的浮选方法。解决现有植物或土壤线虫的蔗糖离心浮选法步骤繁琐，用时较长，工作量大，耗水耗能的问题。将植物或土壤样品加入氯化钾溶液中，搅拌后，再静置得上清液和沉淀物，然后将沉淀物代替植物或土壤样品重复上述操作，将得到的上清液合并后注入网筛中，再用水反洗网筛即可。本发明采用高浓度氯化钾溶液浮选线虫，避免了繁琐的离心程序及繁重的工作量，大大节省植物或土壤样品水洗的用水和离心用电，分离时间缩短至1.5～6小时；与传统蔗糖分离方法相比，工作量减少了4/5，工作时间减少了70%～90%，工作成本降低了2/3。保证分离效率的同时还提高了分离结果的精确度。

权利要求

1.一种植物或土壤线虫的氯化钾浮选方法，其特征在于植物或土壤线虫的氯化钾浮选方法是通过以下步骤实现的：一、称取植物或土壤样品，然后加入浓度为5mol/L的氯化钾溶液中搅拌5～20min，得悬浊液，其中，氯化钾溶液与植物或土壤样品的质量比为5～10﹕1；二、将步骤一得到的悬浊液静置沉淀30～60min，得上清液和沉淀物；三、将步骤二得到的沉淀物代替步骤一中的植物或土壤样品，按步骤一和步骤二的方法重复操作2～5次，然后弃去沉淀物，得到3～6份上清液；四、将步骤三得到的3～6份上清液合并，然后注入套在一起的80目和500目的网筛，再用水反洗500目网筛，得线虫，完成植物或土壤线虫的氯化钾浮选方法。

2.根据权利要求1所述的一种植物或土壤线虫的氯化钾浮选方法，其特征在于步骤一中加入浓度为5mol/L的氯化钾溶液中搅拌8～15min。

3.根据权利要求1所述的一种植物或土壤线虫的氯化钾浮选方法，其特征在于步骤一中加入浓度为5mol/L的氯化钾溶液中搅拌10min。

4.根据权利要求1、2或3所述的一种植物或土壤线虫的氯化钾浮选方法，其特征在于步骤一中氯化钾溶液与植物或土壤样品的质量比为8﹕1。

5.根据权利要求1、2或3所述的一种植物或土壤线虫的氯化钾浮选方法，其特征在于步骤二中将步骤一得到的悬浊液静置沉淀50min。

说明书

一种植物或土壤线虫的氯化钾浮选方法

技术领域

[0001] 本发明涉及一种植物或土壤线虫的浮选方法，具体涉及氯化钾浮选方法。

背景技术

[0002] 线虫为地球上数量最大的动物类群，根据其生长介质分为植物线虫、动物线虫等。在生物学、地理学和环境科学领域被广泛研究。对生态系统中的线虫分离是线虫研究的最基本环节，也是至关重要环节。获取足量线虫是进行研究的根本保障。目前,土壤线虫的分离方法主要采用蔗糖离心浮选法、贝尔曼漏斗法和浅盘法。

[0003] 贝尔曼漏斗法和浅盘法只可用于活虫的分离，分离效率低于蔗糖离心浮选法。蔗糖离心浮选法是将含线虫的植物或土样用水搅匀后离心，将沉淀用蔗糖溶液搅匀,再离心、沉淀，过筛冲洗；该法可对含死亡线虫的长期保存样品进行分离，不受采样时间和操作受室温高低的限制，是线虫分离最为常用的方法。但蔗糖离心浮选法步骤繁琐，用时较长，工作量大，耗水耗能。作为线虫研究的基础，便捷、高效且省时节能的获取足量线虫的方法有待探究。

发明内容

[0004] 本发明的目的是为了解决现有植物或土壤线虫的蔗糖离心浮选法步骤繁琐，用时较长，工作量大，耗水耗能的问题，本发明提供了一种植物或土壤线虫的氯化钾浮选方法。

[0005] 本发明的植物或土壤线虫的氯化钾浮选方法是通过以下步骤实现的：一、称取植物或土壤样品，然后加入浓度为5mol/L的氯化钾溶液中搅拌5～20min，得悬浊液，其中，氯化钾溶液与植物或土壤样品的质量比为5～10﹕1；二、将步骤一得到的悬浊液静置沉淀30～60min，得上清液和沉淀物；三、将步骤二得到的沉淀物代替步骤一中的植物或土壤样品，按步骤一和步骤二的方法重复操作2～5次，然后弃去沉淀物，得到3～6份上清液；四、将步骤三得到的3～6份上清液合并，然后注入套在一起的80目和500目的网筛，再用水反洗500目网筛，得线虫，完成植物或土壤线虫的氯化钾浮选方法。

[0006] 本发明步骤三中将合并的上清液注入网筛时只要避免上清液溅出即可。

[0007] 本发明的有益效果是：本发明直接采用了高浓度氯化钾溶液（5mol/L）浮选线虫，避免了繁琐的离心程序以及繁重的工作量，大大节省了植物或土壤样品水洗的用水和离心用电，并将分离时间缩短为1.5小时～6小时；解决了蔗糖离心浮选法中两次离心和两次沉淀产生的线虫损伤问题；将体积与含水量不同的样品进行相同比例的盐液处理，减少了干扰因素，保证线虫样品采集的系统误差，保证分离效率的同时还提高了分离结果的精确度。

[0008] 本发明的氯化钾浮选方法与传统蔗糖分离方法相比，工作量减少了4/5，工作时间减少了70%～90%，工作成本降低了2/3。经过对测试结果的统计检验表明，本方法与蔗糖离心浮选法的分离效率无明显差异。本发明在科研工作中进行了应用，通过对国家自然科学基金“秀丽隐杆线虫HSPs对重金属胁迫的响应机制”的研究中进行的实际检测，取得了较好的技术效果。

具体实施方式

[0009] 本发明技术方案不局限于以下所列举具体实施方式，还包括各具体实施方式间的任意组合。

[0010] 具体实施方式一：本实施方式为植物或土壤线虫的氯化钾浮选方法是通过以下步骤实现的：一、称取植物或土壤样品，然后加入浓度为5mol/L的氯化钾溶液中搅拌5～20min，得悬浊液，其中，氯化钾溶液与植物或土壤样品的质量比为5～10﹕1；二、将步骤一得到的悬浊液静置沉淀30～60min，得上清液和沉淀物；三、将步骤二得到的沉淀物代替步骤一中的植物或土壤样品，按步骤一和步骤二的方法重复操作2～5次，然后弃去沉淀物，得到3～6份上清液；四、将步骤三得到的3～6份上清液合并，然后注入套在一起的80目和500目的网筛，再用水反洗500目网筛，得线虫，完成植物或土壤线虫的氯化钾浮选方法。

[0011] 本实施方式的有益效果是：本发明直接采用了高浓度氯化钾溶液（5mol/L）浮选线虫，避免了繁琐的离心程序以及繁重的工作量，大大节省了植物或土壤样品水洗的用水和离心用电，并将分离时间由2天缩短为2小时；解决了蔗糖离心浮选法中两次离心和两次沉淀产生的线虫损伤问题；将体积与含水量不同的样品进行相同比例的盐液处理，减少了干扰因素，保证线虫样品采集的系统误差，保证分离效率的同时还提高了分离结果的精确度。

[0012] 本实施方式中为了保证氯化钾的工作浓度，步骤一中的植物或土壤样品含水率大（≥80%）的时候，氯化钾溶液与植物或土壤样品的质量比高一些就可以，为8～10﹕1；植物或土壤样品中含水率小于80%时，氯化钾溶液与植物或土壤样品的质量比低一些就可以，为5～7﹕1。

[0013] 本实施方式步骤三中将合并的上清液注入网筛时只要避免上清液溅出即可。

[0014] 为了验证本实施方式的效果，进行如下试验：一、称取50g土壤样品（采自吉林长岭羊草草甸土壤），然后加入浓度为5mol/L的氯化钾溶液中搅拌20min，得悬浊液，其中，氯化钾溶液与土壤样品的质量比为10﹕1；二、将步骤一得到的悬浊液静置沉淀60min，得上清液和沉淀物；三、将步骤二得到的沉淀物代替步骤一中的50g土壤样品，按步骤一和步骤二的方法重复操作4次，然后弃去沉淀物，得到5份上清液；四、将步骤三得到的5份上清液合并，然后注入套在一起的80目和500目的网筛，再用水反洗500目网筛，得3287条线虫，完成壤线虫的氯化钾浮选方法。实施例中总共用了100min就完成了土壤线虫的氯化钾浮选。

[0015] 同时进行如下对比试验：采用传统的蔗糖分离方法，对50g土壤样品（与实施例中取自同一地方的土壤，采自吉林长岭羊草草甸土壤）进行浮选，具体的蔗糖分离方法为：将50g土壤样品加入约500mL水充分搅匀，静止5min后，分别依次通过60、400目筛网，上述过程重复3次，用清水冲400目的筛网中的物质至烧杯于20℃静止沉淀12h后，弃去上清液，-1 -1
加水搅拌沉淀物后置于离心机内以2000r·min 离心5分钟，弃上清液，加浓度为800g·L-1
蔗糖溶液搅匀，再次以2000r·min 离心5min，将上清液倒入500目筛网中用水冲洗，得到
3355条线虫。共花费了20余小时（2天）。

[0016] 可见，试验的氯化钾浮选方法与传统蔗糖分离方法相比，分离效率无明显差异，工