本发明公开了一种药物组合物的质量控制方法，特别涉及青鹏软膏及其制剂的质量控制方法。本发明相对于传统青鹏软膏，增加了亚大黄、安息香、没食子酸的薄层鉴别方法，增加了亚大黄的蒽醌类含量测定项，该方法简便快捷，且专属性强，在市场上使本领域技术人员能更快，更有把握对产品的真伪作出判断，有效地控制该制剂的质量及稳定性。提高后的质量标准可有效地控制产品的质量，真正体现药品安全有效、质量可控。
1.一种原料药组成为棘豆100重量份、亚大黄50重量份、铁棒棰75重量份、诃子100重量份、毛诃子100重量份、余甘子100重量份、安息香35重量份、宽筋藤150重量份、人工麝香25重量份的青鹏软膏的质量检测方法，其特征在于，该方法包括如下鉴别和/或含量测定方法中的一种或几种：鉴别：
取青鹏软膏3～10g，加入4-7g硅藻土，加甲醇45-55ml，超声处理20-40min，滤过，取滤液25ml，蒸干，残渣加水30ml溶解，加盐酸3ml，加热回流20-40min，冷却，用乙醚萃取2次，每次30ml，合并乙醚液，挥干，残渣加三氯甲烷2ml溶解，作为供试品溶液；另取亚大黄对照药材0.5g，加甲醇45-55ml，超声处理20-40min，滤过，取滤液25ml，蒸干，残渣加水30ml溶解，加盐酸3ml，加热回流20-40min，冷却，用乙醚萃取2-3次，每次20-40ml，合并乙醚液，挥干，残渣加三氯甲烷4-8ml溶解，作为对照药材溶液；另取按处方比例配制的缺亚大黄的阴性对照药材5g，按照同供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液；照《中华人民共和国药典》2010年版一部附录VI B的薄层色谱法进行试验，吸取上述3种溶液各5～
15μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积份数比5～10:1～4:0.3～0.7的60-90℃石油醚-甲酸乙酯-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外灯下检视,供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
取青鹏软膏3～10g，加入5g硅藻土，加甲醇20-40ml，超声处理20-40min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1-3ml溶解，作为供试品溶液；另取安息香对照药材0.5g，加甲醇
20-40ml，超声处理20-40min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇4-6ml溶解，作为对照药材溶液；
按处方配比，另取按处方比例配制的缺安息香的阴性对照药材5g，按照同供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液；照《中华人民共和国药典》2010年版一部附录VI B的薄层色谱法进行试验，分别吸取上述3种溶液5～15μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积份数比6～10：2～4正己烷-醋酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以体积百分比10%硫酸乙醇溶液，置365nm紫外灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
取青鹏软膏3～10g，加入硅藻土5g，加甲醇45-55ml，超声处理20-40min，滤过，取滤液25ml，蒸干，残渣加水20-40ml溶解，加盐酸3ml，加热回流20-40min，冷却，用乙醚萃取
2-3次，每次20-40ml，合并乙醚液，挥干，残渣加三氯甲烷2ml溶解，作为供试品溶液；另取没食子酸对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照《中华人民共和国药典》2010年版一部附录VI B的薄层色谱法进行试验，分别吸取上述2种溶液各5～15μL，点于同一硅胶G薄层板上，以体积份数比3～7：3～7：0.3～0.7二甲苯-醋酸乙酯-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以重量体积份数比1%三氯化铁乙醇溶液，加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
照中国药典2010年版一部附录VI D的高效液相法进行测定；
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-体积百分比为0.1%磷酸为流动相，甲醇-0.1%磷酸水溶液的体积份数比为70-90:10-30；检测波长为430nm；理论塔板数按大黄素峰计算应不低于3000；
对照品溶液的制备：精密称取大黄素对照品、大黄酚对照品、大黄素甲醚对照品适量，加甲醇分别制成每1ml含大黄素对照品、大黄酚对照品各50ug-150ug，大黄素甲醚
10ug-100ug的溶液，分别精密量取上述对照品溶液各2ml，至10ml容量瓶中，甲醇稀释至刻度，混匀，即得；
供试品溶液的制备：取青鹏软膏2g-6g，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入甲醇
40-60ml，密塞，称定重量，超声30-50min，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，量取续滤液20ml，置烧瓶中，挥去溶剂，加体积百分比为8%盐酸水溶液8-12ml，超声2分钟，再加三氯甲烷8-12ml，加热回流1-1.5小时，放冷，置分液漏斗内，分取三氯甲烷层，酸液再用三氯甲烷提取2-4次，每次10ml，合并三氯甲烷液，减压回收溶液至干，残渣加甲醇使溶解，转移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
青鹏软膏每克含亚大黄以大黄素、大黄酚、大黄素甲醚计，不得少于0.12mg。
2.如权利要求1所述的青鹏软膏的质量检测方法，其特征在于，该方法包括如下鉴别和/或含量测定方法中的一种或几种：鉴别：
取青鹏软膏5g，加入5g硅藻土，加甲醇50ml，超声处理30min，滤过，取滤液25ml，蒸干，残渣加水30ml溶解，加盐酸3ml，加热回流30min，冷却，用乙醚萃取2次，每次30ml，合并乙醚液，挥干，残渣加三氯甲烷2ml溶解，作为供试品溶液；另取亚大黄对照药材0.5g，加甲醇50ml，超声处理30min，滤过，取滤液25ml，蒸干，残渣加水30ml溶解，加盐酸3ml，加热回流30min，冷却，用乙醚萃取2次，每次30ml，合并乙醚液，挥干，残渣加三氯甲烷5ml溶解，作为对照药材溶液；照《中华人民共和国药典》2010年版一部附录VI B的薄层色谱法进行试验，吸取上述2种溶液各10μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积份数比
7.5:2.5:0.5的60-90℃石油醚-甲酸乙酯-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
取青鹏软膏5g，加入5g硅藻土，加甲醇30ml，超声处理30min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml溶解，作为供试品溶液；另取安息香对照药材0.5g，加甲醇30ml，超声处理30min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇5ml溶解，作为对照药材溶液；照《中华人民共和国药典》2010年版一部附录VI B的薄层色谱法进行试验，分别吸取上述供试品溶液15μL，对照药材溶液5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积份数比8：3正己烷-醋酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以体积百分比10%硫酸乙醇溶液，置365nm紫外灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
取青鹏软膏5g，加入硅藻土5g，加甲醇50ml，超声处理30min，滤过，取滤液25ml，蒸干，残渣加水30ml溶解，加盐酸3ml，加热回流30min，冷却，用乙醚萃取2次，每次30ml，合并乙醚液，挥干，残渣加三氯甲烷2ml溶解，作为供试品溶液；另取没食子酸对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照《中华人民共和国药典》2010年版一部附录VI B的薄层色谱法进行试验，分别吸取上述2种溶液各10μL，点于同一硅胶G薄层板上，以体积份数比5：5：0.5二甲苯-醋酸乙酯-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以重量体积份数比1%三氯化铁乙醇溶液，加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
照中国药典2010年版一部附录VI D高效液相法进行测定；
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-体积份数比为0.1%磷酸为流动相，甲醇-0.1%磷酸水溶液的体积份数比为85:15；检测波长为
430nm；理论塔板数按大黄素峰计算应不低于3000；
对照品溶液的制备：精密称取大黄素对照品、大黄酚对照品、大黄素甲醚对照品适量，加甲醇分别制成每1ml含大黄素对照品、大黄酚对照品各80ug，大黄素甲醚40ug的溶液，分别精密量取上述对照品溶液各2ml，至10ml容量瓶中，甲醇稀释至刻度，混匀，即得；
供试品溶液的制备：取青鹏软膏3g，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入甲醇
50ml，密塞，称定重量，超声40min，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液20ml，置烧瓶中，挥去溶剂，加体积百分比为8%盐酸水溶液10ml，超声2分钟，再加三氯甲烷10ml，加热回流1小时，放冷，置分液漏斗内，分取三氯甲烷层，酸液再用三氯甲烷提取
3次，每次10ml，合并三氯甲烷液，减压回收溶液至干，残渣加甲醇使溶解，转移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
青鹏软膏每克含亚大黄以大黄素、大黄酚、大黄素甲醚计，不得少于0.12mg。
一种青鹏软膏及其制剂的质量检测方法
技术领域
[0001] 本发明涉及一种药物组合物的质量控制方法，特别涉及青鹏软膏及其制剂的质量控制方法，属于医药技术领域。
背景技术
[0002] 青鹏软膏记载于国家药品标准里，标准编号：WS3-BC-0319-95-2009，是国家医保品种。由于效果良好，经临床验证，疗效显著，在临床上备受患者青睐。青鹏软膏由棘豆100g、亚大黄50g、铁棒棰75g、诃子（去核）100g、毛诃子100g、余甘子100g、安息香35g、宽筋藤150g、人工麝香25g制备而成，具有止痛消肿的作用，用于痛风、湿痹、“冈巴”、“黄水”病等引起的肿痛发热，疱疹，瘟疠发烧等。藏医：活血化瘀，消肿止痛。用于痛风、风湿、类风湿性关节炎、热性“冈巴”、“黄水”病变引起的关节肿痛、扭挫伤肿痛、皮肤瘙痒、湿疹。中医：
活血化瘀，消肿止痛。用于风湿性关节炎、类风湿性关节炎、骨关节炎、痛风、急慢性扭挫伤、肩周炎引起的关节、肌肉肿胀疼痛及皮肤瘙痒、湿疹。本品可用于骨伤科、皮肤科、外科、内科。
[0003] 现有的青鹏软膏存在生产工艺落后、质量标准简单等问题，传统工艺是除人工麝香外，其余棘豆等八味混匀，粉碎成细粉，加入液体石蜡、甘油及适量乳化剂和水等在80℃左右搅拌脂膏，待降温至38℃时加入人工麝香，搅拌均匀，即得。原质量标准只有余甘子的对照药材薄层鉴别、乌头碱的限量检查，无含量测定项。因此，造成青鹏软膏产品质量控制不精准，质量标准都有待提高。虽然该药疗效较好、应用广泛，但其质量控制手段相对单薄，如薄层鉴别药材数量偏少，并且缺少关键药材的含量测定等技术手段。
发明内容
[0004] 本发明的目的是提供一种青鹏软膏及其制剂的质量控制方法。
[0005] 发明概述
[0006] 本发明对现有的青鹏软膏质量标准进行了相应提高，相对于传统青鹏软膏，增加了亚大黄、安息香、没食子酸的薄层鉴别方法，增加了亚大黄的蒽醌类含量测定项，该方法简便快捷，且专属性强，在市场上使本领域技术人员能更快，更有把握对产品的真伪作出判断，有效地控制该制剂的质量及稳定性。提高后的质量标准可有效地控制产品的质量，真正体现药品安全有效、质量可控。
[0007] 本发明的技术方案如下：
[0008] 一种青鹏软膏及其制剂的质量控制方法，其特征在于，该方法包括如下鉴别和/或含量测定方法中的一种或几种：
[0009] 鉴别：
[0010] a.亚大黄鉴别
[0011] 取青鹏软膏或其制剂3～10g，加入4-7g硅藻土，加甲醇45-55ml，超声处理20-40min，滤过，取滤液25ml，蒸干，残渣加水30ml溶解，加盐酸3ml，加热回流20-40min，冷却，用乙醚萃取2次，每次30ml，合并乙醚液，挥干，残渣加三氯甲烷2ml溶解，作为供试品溶液；另取亚大黄对照药材0.5g，加甲醇45-55ml，超声处理20-40min，滤过，取滤液25ml，蒸干，残渣加水30ml溶解，加盐酸3ml，加热回流20-40min，冷却，用乙醚萃取2-3次，每次
20-40ml，合并乙醚液，挥干，残渣加三氯甲烷4-8ml溶解，作为对照药材溶液；另取按处方比例配制的缺亚大黄的阴性对照药材5g，按照同供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液；
照薄层色谱法（《中华人民共和国药典》2010年版一部附录VI B试验，吸取上述3种溶液各
5～15μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积份数比5～10:1～4:0.3～0.760-90℃石油醚-甲酸乙酯-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外灯下检视,供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
[0012] b.安息香鉴别
[0013] 取青鹏软膏或其制剂3～10g，加入5g硅藻土，加甲醇20-40ml，超声处理20-40min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1-3ml溶解，作为供试品溶液；另取安息香对照药材
0.5g，加甲醇20-40ml，超声处理20-40min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇4-6ml溶解，作为对照药材溶液；按处方配比，另取按处方比例配制的缺安息香的阴性对照药材5g，按照同供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液；照薄层色谱法（《中华人民共和国药典》2010年版一部附录VI B试验，分别吸取上述3种溶液5～15μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积份数比6～10：2～4正己烷-醋酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以体积百分比
10%硫酸乙醇溶液，置365nm紫外灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
[0014] c.没食子酸的鉴别
[0015] 取青鹏软膏或其制剂3～10g，加入硅藻土5g，加甲醇45-55ml，超声处理20-40min，滤过，取滤液25ml，蒸干，残渣加水20-40ml溶解，加盐酸3ml，加热回流
20-40min，冷却，用乙醚萃取2-3次，每次20-40ml，合并乙醚液，挥干，残渣加三氯甲烷2ml溶解，作为供试品溶液；另取没食子酸对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；《中华人民共和国药典》2010年版一部附录VI B试验，分别吸取上述2种溶液各5～
15μL，点于同一硅胶G薄层板上，以体积份数比3～7：3～7：0.3～0.7二甲苯-醋酸乙酯-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以重量体积份数比1%三氯化铁乙醇溶液，加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
[0016] 含量测定：
[0017] 照高效液相法(中国药典2010年版一部附录VI D)测定；
[0018] 色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-体积百分比为0.1%磷酸为流动相，甲醇-0.1%磷酸水溶液的体积份数比为70-90:10-30；检测波长为430nm；理论塔板数按大黄素峰计算应不低于3000；
[0019] 对照品溶液的制备：精密称取大黄素对照品、大黄酚对照品、大黄素甲醚对照品适量，加甲醇分别制成每1ml含大黄素对照品、大黄酚对照品各50ug-150ug，大黄素甲醚10ug-100ug的溶液，分别精密量取上述对照品溶液各2ml，至10ml容量瓶中，甲醇稀释至刻度，混匀，即得。
[0020] 供试品溶液的制备：取青鹏软膏或其制剂2-6g，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入甲醇40-60ml，密塞，称定重量，超声30-50min，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，量取续滤液20ml，置烧瓶中，挥去溶剂，加体积百分比为8%盐酸溶液8-12ml，超声2分钟，再加三氯甲烷8-12ml，加热回流1-1.5小时，放冷，置分液漏斗内，分取三氯甲烷层，酸液再用三氯甲烷提取2-4次，每次10ml，合并三氯甲烷液，减压回收溶液至干，残渣加甲醇使溶解，转移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
[0021] 测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
[0022] 青鹏软膏或其制剂每克含亚大黄以大黄素、大黄酚、大黄素甲醚计，不得少于0.12mg。
[0023] 其中，上述青鹏软膏的原料药组成为：
[0024] 棘豆100重量份 亚大黄50重量份 铁棒棰75重量份
[0025] 诃子（去核）100重量份 毛诃子100重量份 余甘子100重量份[0026] 安息香35重量份 宽筋藤150重量份 人工麝香25重量份。
[0027] 所述的制剂是指取上述原料药，按常规工艺，加入常规辅料制备成临床可接受的任何一种剂型。
[0028] 优选的，一种青鹏软膏的质量控制方法，其特征在于，该方法包括如下鉴别和/或含量测定方法中的一种或几种：
[0029] 鉴别：
[0030] a、亚大黄鉴别
[0031] 取青鹏软膏5g，加入5g硅藻土，加甲醇50ml，超声处理30min，滤过，取滤液25ml，蒸干，残渣加水30ml溶解，加盐酸3ml，加热回流30min，冷却，用乙醚萃取2次，每次30ml，合并乙醚液，挥干，残渣加三氯甲烷2ml溶解，作为供试品溶液。另取亚大黄对照药材0.5g，加甲醇50ml，超声处理30min，滤过，取滤液25ml，蒸干，残渣加水30ml溶解，加盐酸3ml，加热回流30min，冷却，用乙醚萃取2次，每次30ml，合并乙醚液，挥干，残渣加三氯甲烷5ml溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法（《中华人民共和国药典》2010年版一部附录VI B试验，吸取上述2种溶液各10μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积份数比7.5:2.5:0.560-90℃石油醚-甲酸乙酯-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
[0032] b.安息香鉴别
[0033] 取青鹏软膏5g，加入5g硅藻土，加甲醇30ml，超声处理30min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml溶解，作为供试品溶液；另取安息香对照药材0.5g，加甲醇30ml，超声处理30min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇5ml溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法（《中华人民共和国药典》2010年版一部附录VI B试验，分别吸取上述供试品溶液15μL，对照药材溶液5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积份数比8：3正己烷-醋酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以体积百分比10%硫酸乙醇溶液，置365nm紫外灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
[0034] c.没食子酸的鉴别
[0035] 取青鹏软膏5g，加入硅藻土5g，加甲醇50ml，超声处理30min，滤过，取滤液25ml，蒸干，残渣加水30ml溶解，加盐酸3ml，加热回流30min，冷却，用乙醚萃取2次，每次30ml，合并乙醚液，挥干，残渣加三氯甲烷2ml溶解，作为供试品溶液。另取没食子酸对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；《中华人民共和国药典》2010年版一部附录VI B试验，分别吸取上述2种溶液各10μL，点于同一硅胶G薄层板上，以体积份数比5：5：0.5二甲苯-醋酸乙酯-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以重量体积份数比1%三氯化铁乙醇溶液，加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
[0036] 含量测定：
[0037] 照高效液相法(中国药典2010年版一部附录VI D)测定；
[0038] 色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-体积份数比为0.1%磷酸水溶液为流动相，甲醇-0.1%磷酸水溶液的体积份数比为85:15；检测波长为430nm；理论塔板数按大黄素峰计算应不低于3000；
[0039] 对照品溶液的制备：精密称取大黄素对照品、大黄酚对照品、大黄素甲醚对照品适量，加甲醇分别制成每1ml含大黄素对照品、大黄酚对照品各80ug，大黄素甲醚40ug的溶液，分别精密量取上述对照品溶液各2ml，至10ml容量瓶中，甲醇稀释至刻度，混匀，即得（即每1ml中含大黄素、大黄酚各16ug，含大黄素甲醚8ug）。
[0040] 供试品溶液的制备：取青鹏软膏3g，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，超声40min，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液20ml，置烧瓶中，挥去溶剂，加体积百分比为8%盐酸溶液10ml，超声2分钟，再加三氯甲烷10ml，加热回流1小时，放冷，置分液漏斗内，分取三氯甲烷层，酸液再用三氯甲烷提取3次，每次10ml，合并三氯甲烷液，减压回收溶液至干，残渣加甲醇使溶解，转移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
[0041] 测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
[0042] 青鹏软膏每克含亚大黄以大黄素、大黄酚、大黄素甲醚计，不得少于0.12mg。
[0043] 其中，上述青鹏软膏的原料药组成为：
[0044] 棘豆100重量份 亚大黄50重量份 铁棒棰75重量份
[0045] 诃子（去核）100重量份 毛诃子100重量份 余甘子100重量份[0046] 安息香35重量份 宽筋藤150重量份 人工麝香25重量份。
[0047] 上述青鹏软膏由如下方法制备而成：
[0048] 以上九味，除人工麝香外，其余棘豆等八味混匀，粉碎成细粉，加入液体石蜡、甘油及适量乳化剂和水等在80℃左右搅拌制膏，待降温至38℃时加入人工麝香，搅拌均匀，制成5000g,即得。
[0049] 青鹏软膏原质量标准只有余干子的对照药材薄层鉴别、乌头碱的限量检查，无含量测定项。本发明增加了亚大黄、安息香、没食子酸的薄层鉴别，该方法简便快捷，且专属性强，在市场上使本领域技术人员能更快，更有把握对产品的真伪作出判断。增加了亚大黄的蒽醌类含量测定项，可以有效地控制该制剂的质量及稳定性。提高后的质量标准可有效地控制产品的质量，真正体现药品安全有效、质量可控。从而确保了其临床疗效和广大患者的身体健康。
[0050] 下述实验例和实施例用于进一步说明但不限于本发明。
[0051] 实验例1 鉴别实验
[0052] 1.亚大黄鉴别
[0053] 取青鹏软膏3～10g，加入5g硅藻土，加甲醇50ml，超声处理30min，滤过，取滤液25ml，蒸干，残渣加水30ml溶解，加盐酸3ml，加热回流30min，冷却，用乙醚萃取2次，每次
30ml，合并乙醚液，挥干，残渣加三氯甲烷2ml溶解，作为供试品溶液。另取亚大黄对照药材
0.5g，加甲醇50ml，超声处理30min，滤过，取滤液25ml，蒸干，残渣加水30ml溶解，加盐酸
3ml，加热回流30min，冷却，用乙醚萃取2次，每次30ml，合并乙醚液，挥干，残渣加三氯甲烷
5ml溶解，作为对照药材溶液。另取按处方比例配制的缺亚大黄的阴性对照药材5g，同供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法（《中华人民共和国药典》2010年版一部附录VI B）试验，吸取上述3种溶液各5～15μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积份数比5～10:1～4:0.3～0.7的石油醚（60-90℃）-甲酸乙酯-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯（365nm）下检视,供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性无干扰。
[0054] 结果表明，亚大黄TLC结果显示，在以体积份数比5～10:1～4:0.3～0.7石油醚（60-90℃）-甲酸乙酯-甲酸为展开剂条件下，均有较好的展开效果。供试品色谱中，置紫外灯光下检视(365nm)，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性无干扰。此方法可作为青鹏软膏亚大黄药材的鉴别方法。
[0055] 2、安息香鉴别
[0056] 取青鹏软膏3～10g，加入5g硅藻土，加甲醇30ml，超声处理30min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml溶解，作为供试品溶液。另取安息香对照药材0.5g，加甲醇30ml，超声处理30min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇5ml溶解，作为对照药材溶液。按处方配比，另取按处方比例配制的缺安息香的阴性对照药材5g，同供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法（《中华人民共和国药典》2010年版一部附录VI B）试验，分别吸取上述3种溶液5～15μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积份数比为6～10：2～4的正己烷-醋酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，置紫外灯（365nm）下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性无干扰。
[0057] 结果分析：安息香TLC结果显示，以体积份数比6～10：2～4的正己烷-醋酸乙酯为展开剂条件下，均有较好的展开效果。供试品色谱中，置紫外灯光下检视(365nm)，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性无干扰。此方法可作为青鹏软膏安息香药材的鉴别方法。
[0058] 3、没食子酸的鉴别
[0059] 取青鹏软膏3～10g，加入硅藻土5g，加甲醇50ml，超声处理30min，滤过，取滤液25ml，蒸干，残渣加水30ml溶解，加盐酸3ml，加热回流30min，冷却，用乙醚萃取2次，每次
30ml，合并乙醚液，挥干，残渣加三氯甲烷2ml溶解，作为供试品溶液。另取没食子酸对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。（《中华人民共和国药典》2010年版一部附录VI B）试验，分别吸取上述2种溶液各5～15μL，点于同一硅胶G薄层板上，以体积份数比为3～7：3～7：0.3～0.7的二甲苯-醋酸乙酯-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以重量体积份数比1%三氯化铁乙醇溶液，加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
[0060] 结果分析：没食子酸TLC结果显示，以体积份数比为3～7：3～7：0.3～0.7的二甲苯-醋酸乙酯-甲酸为展开剂，均有较好的展开效果。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。此方法可以作为青鹏软膏中没食子酸的鉴别方法。
[0061] 实验例2：含量测定实验
[0062] 1.仪器、试药和供试样品
[0063] 仪器：高效液相色谱仪：日立L-2100泵，日立检测器L-2400检测器；岛津AUW220D电子天平
[0064] 对照品：大黄素对照品（110756-200100）、大黄酚对照品（110796-201017）、大黄素甲醚对照品（110758-201013）
[0065] 样品：青鹏软膏（青海金诃藏药药业股份有限公司）批号：20100729、20110513、20110729
[0066] 2.色谱条件选择
[0067] 相关文献中均无亚大黄中蒽醌类成分的测定，以甲醇-体积份数比为0.1%磷酸为流动相，甲醇-0.1%磷酸水溶液体积份数比为70-90:10-30均能达到含量检查要求，其中以甲醇-0.1%磷酸体积份数比为85:15为优。通过紫外图谱选择430nm，为检测波长。
[0068] 3.对照品制备
[0069] 精密称取大黄素对照品、大黄酚对照品、大黄素甲醚对照品适量，加甲醇分别制成每1ml含大黄素对照、大黄酚对照品各80ug，大黄素甲醚40ug的溶液，分别精密量取上述对照品溶液各2ml，混匀，即得（即每1ml中含大黄素、大黄酚各16ug，含大黄素甲醚8ug）。
[0070] 4.供试品制备
[0071] 青鹏软膏研细后，取粉末3g，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，超声40min，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取取续滤液5ml，置烧瓶中，挥去溶剂，加体积百分比为8%盐酸水溶液10ml，超声2分钟，再加三氯甲烷
10ml，加热回流1小时，放冷，置分液漏斗内，分取三氯甲烷层，酸液再用三氯甲烷提取3次，每次10ml，合并三氯甲烷液，减压回收溶液至干，残渣加甲醇使溶解，转移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
[0072] 通过测定知本法的蒽醌提取转移率为98.7%，可用于供试品的制备。
[0073] 5.系统适用性试验及阴性干扰的考察
[0074] 在上述色谱条件下，分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液及阴性对照溶液各10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。结果表明，供试品色谱中主峰与其相邻色谱峰的分离度大于1.5，且阴性对照无干扰。见图1-1、图1-2、图1-3。
[0075] 6.标准曲线的制备和线性关系的考察
[0076] 精密量取对照品贮备液溶液（大黄素32.4ug/ml、大黄酚各33.6ug/ml，大黄素甲醚17.8ug/ml）1ml、3ml、5ml、8ml、10ml，分别置10ml容量瓶中，无水乙醇稀释至刻度，摇匀，各精密进样10μl，以峰面积(A)对对照品浓度（C）进行线性回归。
[0077] 表1 大黄素标准曲线结果
[0078]序号 浓度(ug/ml) 峰面积（A）
1 3.24 29585
2 9.72 90511
3 16.2 165571
4 25.92 264300
5 32.4 339096
[0079] 线性方程：A=10637C-8283.7 相关系数：R=0.9996
[0080] 在3.24ug/ml-32.4ug/ml范围内，大黄素的峰面积(A)与浓度(C)线性关系良好。见图2。
[0081] 表2 大黄酚标准曲线结果
[0082]序号 浓度(ug/ml) 峰面积（A）
1 3.36 41607
2 10.08 126579
3 16.8 225684
4 26.88 360481
5 33.6 459322
[0083] 线性方程：A=13835C-8284 相关系数：R=0.9998
[0084] 在3.36ug/ml-33.6ug/ml范围内，大黄酚的峰面积(A)与浓度(C)线性关系良好。见图3。
[0085] 表3 大黄素甲醚标准曲线结果
[0086]序号 浓度(ug/ml) 峰面积（A）
1 1.78 7476
2 5.34 25184
3 8.9 40025
4 14.24 69093
5 17.8 88009
[0087] 线性方程：A=5017.5C-2270.8 相关系数：R=0.9991
[0088] 在1.78ug/ml-17.8ug/ml范围内，大黄素甲醚的峰面积(A)与浓度(C)线性关系良好。见图4。
[0089] 7.精密度试验
[0090] 分别精密吸取对照品溶液10μl，注入液相色谱仪，各连续测定6次，记录峰面积并计算相对标准偏差。结果表明，仪器精密度良好。
[0091] 表4 精密度试验结果
[0092]名称 RSD% 结论
大黄素 0.86 精密度良好
大黄酚 1.35 精密度良好
大黄素甲醚 1.54 精密度良好
[0093] 8.稳定性试验
[0094] 供试品溶液制备完成后，精密吸取10μl，注入液相色谱仪，记录峰面积，以后每隔2小时测定一次，考察6小时，计算峰面积的相对标准偏差。结果表明：供试品中大黄素、大黄酚、大黄素甲醚在6小时内测定结果稳定。
[0095] 表5 稳定性试验结果
[0096]名称 RSD% 结论
大黄素 0.21 6小时稳定
大黄酚 0.35 6小时稳定
大黄素甲醚 1.02 6小时稳定
[0097] 9.重复性试验
[0098] 取青鹏软膏，重复测定6次，计算样品中大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的总量，RSD=0.716%。表明分析方法重复性良好。
[0099] 表6 重复性试验结果
[0100]
[0101] 10.回收率试验
[0102] 精密称取同一批样品6份，精密加入对照品，测定其含量，计算回收率，蒽醌平均回收率为98.5%，RSD=1.38%。表明该测定方法测定结果准确。
[0103] 表7 回收率试验结果
[0104]
[0105] 11.样品测定
[0106] 取青鹏软膏3批，测定并计算蒽醌含量，结果如下。
[0107] 表8 样品含量测定结果
[0108]批号 含量(mg/g)
20100729 0.150
20110513 0.142
20110729 0.146
[0109] 下述实施例均能实现上述实验例所述的效果。附图说明：
[0110] 图1-1：大黄素、大黄酚、大黄素甲醚对照品图谱；
[0111] 图1-2：青鹏软膏样品图谱；
[0112] 图1-3：青鹏软膏阴性对照图谱；
[0113] 图2是大黄素对照品标准曲线图；
[0114] 图3是大黄酚对照品标准曲线图；
[0115] 图4是大黄素甲醚对照品标准曲线图。
具体实施方式
[0116] 下面结合实施例对本发明作详细的阐述,但不限于这些具体记载的实施例。所检测的青鹏软膏为青海金诃藏药药业股份有限公司产售。
[0117] 实施例1：青鹏软膏的质量控制方法
[0118] 鉴别：
[0119] a、亚大黄鉴别
[0120] 取青鹏软膏5g，加入5g硅藻土，加甲醇50ml，超声处理30min，滤过，取滤液25ml，蒸干，残渣加水30ml溶解，加盐酸3ml，加热回流30min，冷却，用乙醚萃取2次，每次30ml，合并乙醚液，挥干，残渣加三氯甲烷2ml溶解，作为供试品溶液。另取亚大黄对照药材0.5g，加甲醇50ml，超声处理30min，滤过，取滤液25ml，蒸干，残渣加水30ml溶解，加盐酸3ml，加热回流30min，冷却，用乙醚萃取2次，每次30ml，合并乙醚液，挥干，残渣加三氯甲烷5ml溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法（《中华人民共和国药典》2010年版一部附录VI B试验，吸取上述2种溶液各10μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积份数比7.5:2.5:0.5的60-90℃石油醚-甲酸乙酯-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
[0121] b.安息香鉴别
[0122] 取青鹏软膏5g，加入5g硅藻土，加甲醇30ml，超声处理30min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml溶解，作为供试品溶液；另取安息香对照药材0.5g，加甲醇30ml，超声处理30min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇5ml溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法（《中华人民共和国药典》2010年版一部附录VI B试验，分别吸取上述供试品溶液15μL，对照药材溶液5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积份数比8：3正己烷-醋酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以体积百分比10%硫酸乙醇溶液，置365nm紫外灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
[0123] c.没食子酸的鉴别
[0124] 取青鹏软膏5g，加入硅藻土5g，加甲醇50ml，超声处理30min，滤过，取滤液25ml，蒸干，残渣加水30ml溶解，加盐酸3ml，加热回流30min，冷却，用乙醚萃取2次，每次30ml，合并乙醚液，挥干，残渣加三氯甲烷2ml溶解，作为供试品溶液。另取没食子酸对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；《中华人民共和国药典》2010年版一部附录VI B试验，分别吸取上述2种溶液各10μL，点于同一硅胶G薄层板上，以体积份数比5：5：0.5二甲苯-醋酸乙酯-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以重量体积份数比1%三氯化铁乙醇溶液，加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
[0125] 含量测定：
[0126] 照高效液相法(中国药典2010年版一部附录VI D)测定；
[0127] 色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-体积份数比为0.1%磷酸为流动相，甲醇-0.1%磷酸的体积份数比为85:15；检测波长为430nm；理论塔板数按大黄素峰计算应不低于3000；
[0128] 对照品溶液的制备：精密称取大黄素对照品、大黄酚对照品、大黄素甲醚对照品适量，加甲醇分别制成每1ml含大黄素对照品、大黄酚对照品各80ug，大黄素甲醚40ug的溶液，分别精密量取上述对照品溶液各2ml，至10ml容量瓶中，甲醇稀释至刻度，混匀，即得（即每1ml中含大黄素、大黄酚各16ug，含大黄素甲醚8ug）。
[0129] 供试品溶液的制备：取青鹏软膏3g，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，超声40min，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液20ml，置烧瓶中，挥去溶剂，加体积百分比为8%盐酸水溶液10ml，超声2分钟，再加三氯甲烷10ml，加热回流1小时，放冷，置分液漏斗内，分取三氯甲烷层，酸液再用三氯甲烷提取
3次，每次10ml，合并三氯甲烷液，减压回收溶液至干，残渣加甲醇使溶解，转移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
[0130] 测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
[0131] 青鹏软膏每克含亚大黄以大黄素、大黄酚、大黄素甲醚计，不得少于0.12mg。
[0132] 实施例2：青鹏软膏的质量控制方法
[0133] 鉴别：
[0134] a、亚大黄鉴别
[0135] 取青鹏软膏3～10g，加入5g硅藻土，加甲醇55ml，超声处理25min，滤过，取滤液25ml，蒸干，残渣加水30ml溶解，加盐酸3ml，加热回流35min，冷却，用乙醚萃取2次，每次
30ml，合并乙醚液，挥干，残渣加三氯甲烷2ml溶解，作为供试品溶液；另取亚大黄对照药材
0.5g，加甲醇55ml，超声处理35min，滤过，取滤液25ml，蒸干，残渣加水30ml溶解，加盐酸
3ml，加热回流35min，冷却，用乙醚萃取3次，每次40ml，合并乙醚液，挥干，残渣加三氯甲烷
4ml溶解，作为对照药材溶液；另取按处方比例配制的缺亚大黄的阴性对照药材5g，按照同供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液；照薄层色谱法（《中华人民共和国药典》2010年版一部附录VI B试验，吸取上述3种溶液各15μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积份数比8:3:0.5的60-90℃石油醚-甲酸乙酯-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外灯下检视,供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
[0136] b.安息香鉴别
[0137] 取青鹏软膏3～10g，加入5g硅藻土，加甲醇35ml，超声处理35min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇3ml溶解，作为供试品溶液；另取安息香对照药材0.5g，加甲醇25ml，超声处理25min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇6ml溶解，作为对照药材溶液；按处方配比，另取按处方比例配制的缺安息香的阴性对照药材5g，按照同供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液；照薄层色谱法（《中华人民共和国药典》2010年版一部附录VI B试验，分别吸取上述3种溶液15μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积份数比7:4的正己烷-醋酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以体积百分比10%硫酸乙醇溶液，置365nm紫外灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
[0138] c.没食子酸的鉴别
[0139] 取青鹏软膏3～10g，加入硅藻土5g，加甲醇45-55ml，超声处理35min，滤过，取滤液25ml，蒸干，残渣加水35ml溶解，加盐酸3ml，加热回流35min，冷却，用乙醚萃取3次，每次30ml，合并乙醚液，挥干，残渣加三氯甲烷2ml溶解，作为供试品溶液；另取没食子酸对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；《中华人民共和国药典》2010年版一部附录VI B试验，分别吸取上述2种溶液各10μL，点于同一硅胶G薄层板上，以体积份数比7:3:0.5二甲苯-醋酸乙酯-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以重量体积份数比1%三氯化铁乙醇溶液，加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
[0140] 含量测定：
[0141] 照高效液相法(中国药典2010年版一部附录VI D)测定；
[0142] 色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-体积百分比为0.1%磷酸为流动相，甲醇-0.1%磷酸水溶液的体积份数比为70:30；检测波长为430nm；理论塔板数按大黄素峰计算应不低于3000；
[0143] 对照品溶液的制备：精密称取大黄素对照品、大黄酚对照品、大黄素甲醚对照品适量，加甲醇分别制成每1ml含大黄素对照品、大黄酚对照品各100ug，大黄素甲醚100ug的溶液，分别精密量取上述对照品溶液各2ml，至10ml容量瓶中，甲醇稀释至刻度，混匀，即得（即每1ml中含大黄素、大黄酚各20ug，含大黄素甲醚20ug）。
[0144] 供试品溶液的制备：取青鹏软膏6g，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入甲醇40ml，密塞，称定重量，超声50min，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，量取续滤液
20ml，置烧瓶中，挥去溶剂，加体积百分比为8%盐酸溶液12ml，超声2分钟，再加三氯甲烷
8ml，加热回流1.5小时，放冷，置分液漏斗内，分取三氯甲烷层，酸液再用三氯甲烷提取2次，每次10ml，合并三氯甲烷液，减压回收溶液至干，残渣加甲醇使溶解，转移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
[0145] 测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
[0146] 青鹏软膏每克含亚大黄以大黄素、大黄酚、大黄素甲醚计，不得少于0.12mg。
