单唾液酸四己糖神经节苷脂钠脂质体注射剂

摘要

本发明公开了一种单唾液酸四己糖神经节苷脂钠脂质体注射剂及其制法，该脂质体注射剂由特定重量配比的单唾液酸四己糖神经节苷脂钠、氢化蛋黄卵磷脂、大豆甾醇、脱氧胆酸钠、泊洛沙姆188、亚硫酸氢钠和其他辅料制成。本发明的脂质体注射剂具有良好的稳定性，冷冻过程中脂质体不会因融合、冰晶等发生破裂，长期储存后，脂质体同样保持良好的包封率；本发明提高了制剂产品的质量，减少了毒副作用，增加了药物在体循环中的保留时间，提高了药物的生物利用度和血脑屏障通透性，疗效明显提高；并且制备方法简单，适合于工业化大生产。

权利要求

1.一种单唾液酸四己糖神经节苷脂钠脂质体注射液，其特征在于由基于重量份计以下成分制成：单唾液酸四己糖神经节苷脂钠1份、氢化蛋黄卵磷脂4-10份、大豆甾醇

1.2-5份、脱氧胆酸钠0.5-3份、0.8-5份泊洛沙姆188、亚硫酸氢钠0.02-0.04份、氯化钠

0.45-0.9份和注射用水适量。

2.一种单唾液酸四己糖神经节苷脂钠脂质体冻干粉针剂，其特征在于由基于重量份计以下成分制成：单唾液酸四己糖神经节苷脂钠1份、氢化蛋黄卵磷脂4-10份、大豆甾醇

1.2-5份、脱氧胆酸钠0.5-3份、0.8-5份泊洛沙姆188、亚硫酸氢钠0.02-0.04份、甘露醇

5-9份。

3.一种制备权利要求1所述的单唾液酸四己糖神经节苷脂钠脂质体注射液的方法，其特征在于包括如下步骤：（1）将氢化蛋黄卵磷脂、大豆甾醇、泊洛沙姆188和脱氧胆酸钠溶于适量的体积比为

1:3的异丙醇和乙醇混合溶剂中，得类脂溶液；

（2）将上述类脂溶液置于梨形瓶中，于55-65℃恒温水浴中，旋转蒸发除去混合溶剂，形成均匀类脂膜；

（3）将单唾液酸四己糖神经节苷脂钠、亚硫酸氢钠和氯化钠溶于注射用水中，加入梨形瓶中轻摇，使类脂膜洗脱并分散到水合介质溶解，即得脂质体混悬液；

（4）将上述混悬液置于超声仪中超声至半透明胶体溶液；

（5）将上述的混悬液用0.45μm的微孔滤膜过滤，灌装封口，灭菌，得单唾液酸四己糖神经节苷脂钠脂质体注射液。

4.一种制备权利要求2所述的单唾液酸四己糖神经节苷脂钠脂质体冻干粉针剂的方法，其特征在于包括如下步骤：（1）将氢化蛋黄卵磷脂、大豆甾醇、泊洛沙姆188和脱氧胆酸钠溶于适量的体积比为

1:3的异丙醇和乙醇混合溶剂中，得类脂溶液；

（2）将上述类脂溶液置于梨形瓶中，于55-65℃恒温水浴中，旋转蒸发除去混合溶剂，形成均匀类脂膜；

（3）将单唾液酸四己糖神经节苷脂钠、亚硫酸氢钠和甘露醇溶于注射用水中，加入梨形瓶中轻摇，使类脂膜洗脱并分散到水合介质溶解，即得脂质体混悬液；

（4）将上述混悬液置于超声仪中超声至半透明胶体溶液；

（5）将上述的混悬液用0.45μm的微孔滤膜过滤，将滤液置于-45℃条件下冷冻4小时，再以1.3℃/小时的速度升温至-13℃，保温3小时，再升温至30℃，保温3小时至干燥，得到单唾液酸四己糖神经节苷脂钠脂质体冻干制剂。

说明书

单唾液酸四己糖神经节苷脂钠脂质体注射剂

技术领域

[0001] 本发明涉及一种单唾液酸四己糖神经节苷脂钠脂质体及其注射剂和制法，属于医药技术领域。

背景技术

[0002] 单唾液酸四己糖神经节苷脂钠系自猪脑中提取制得的对神经细胞功能损伤具有作用的物质，能促进由于各种原因引起的中枢神经系统损伤的功能恢复。作用机理是促进“神经重构neuroplasticity”(包括神经细胞的生存、轴突生长和突触生长)。单唾液酸四己糖神经节苷脂对损伤后继发性神经退化有保护作用。单唾液酸四己糖神经节苷脂对脑血流动力学参数以及因损伤后导致脑水肿有积极的作用。单唾液酸四己糖神经节苷脂通过改善细胞膜酶的活性减轻神经细胞水肿。动物实验显示单唾液酸四己糖神经节苷脂可改善帕金森病所致的行为障碍。

[0003] 单唾液酸四己糖神经节苷脂还可以通过维持中枢神经细胞膜上的Na+-K+-TTP酶2+ 2+
及Ca -Mg -ATP酶的活性，起到维持细胞内外离子平衡、减轻神经细胞水肿、防止细胞内Ca2+积聚的作用，具有对抗兴奋性氨基酸的神经毒性作用和减少自由基对神经细胞的损害等作用。外源性单唾液酸四己糖神经节苷脂能以稳定的方式与神经细胞膜结合，引起膜的功能变化。给药后2小时在脑和脊髓测得放射活性高峰。4-8小时后减半。药物的清除缓慢，主要通过肾脏排泄。临床上主要用于治疗血管性或外伤性中枢神经系统损伤；帕金森病。

[0004] 神经节苷脂分子亲水端与疏水端长度相近、极易在水中形成稳定的胶束状态，不利于注射制剂的制备。专利WO9317691是将单唾液酸四己糖神经节苷脂制成钠盐，注射液制剂用磷酸盐做缓冲液，氯化钠做等渗调节剂，有效的解决了单唾液酸四己糖神经节苷脂在水中形成胶束状状态、药品制剂困难的问题。然而该处方的钠盐影响单唾液酸四己糖神经节苷脂生物膜及血脑屏障通透性，从而脑部血药浓度低，并且无法长时间维持在治疗浓度以上，大大降低了临床使用疗效。因此急需寻找一种新的、能够提高单唾液酸四己糖神经节苷脂钠过生物膜及血脑屏障率、临床使用疗效高的方法。

[0005] 中国专利CN101899074A中公开了一种单唾液酸四己糖神经节苷脂的制备方法和相应的制剂，该专利主要保护了单唾液酸四己糖神经节苷脂的制备方法，而相应的制剂只是进行了简单的说明，而且相应制剂的制备也并没有采用特殊的方法，导致制剂的稳定性较差，因为单唾液酸四己糖神经节苷脂本身为提取物，稳定性很差，如果不采用特殊的方法，制剂的质量肯定会很差。

[0006] 中国专利CN101732331A中公开了一种单唾液酸四己糖神经节苷脂钠与谷氨酸的组合物，用谷氨酸代替专利WO9317691中的磷酸盐缓冲液和氯化钠，有利于单唾液酸四己糖神经节苷脂钠通过生物膜和血脑屏障率，提高临床疗效。但是谷氨酸同样不能对生物提取物单唾液酸四己糖神经节苷脂起到保护作用，制剂质量稳定性同样得不到保障。

[0007] 中国专利CN1799552A中公开了一种单唾液酸四己糖神经节苷脂钠制剂的制备方法，该专利从原始提取步骤开始，主要是对整个提取方法进行了保护，相应的制剂只是进行了简单的描述，而且制剂并没有添加任何物质，同样稳定性得不到保障。

[0008] 在药物载体输送系统中，微乳、微球、纳米粒、脂质体、药质体等亚微粒的研究已经成为药物新剂型研究中非常活跃的领域。将药物包封于这些亚微粒中可以改变药物在体内的分布，增加药物在靶器官的分布量，从而提高疗效，减轻毒副作用。

[0009] 在靶向给药系统中，脂质体的研究较为广泛，脂质体在体内具有良好的靶向性和生物相容性。

[0010] 作为一种新型药物制剂，脂质体制剂具有以下优点：

[0011] (1)具有缓释作用：活性成分缓慢释放，延缓肾排泄和代谢，从而延长作用时间，提高质量效果；

[0012] (2)降低药物毒性；

[0013] (3)增加药物的溶解性，提高制剂质量；

[0014] (4)具有靶向性：脂质体所载的药物在肝、脾网状内皮系统脏器局部维持高浓度，从而起到药物器官靶向性作用；

[0015] (5)具有对活性药物成分的保护作用。

[0016] 脂质体(Liposome)最初是由英国学者Bangham和Standlish将磷脂分散在水中进行电镜观察时发现的。磷脂分散在水中自然形成多层囊泡，每层均未脂质的双分子层；囊泡中央和各层之间被水相隔开，双分子层厚度约为4nm。后来，将这种具有类似生物膜结构的双分子小囊称为脂质体。脂质体可分为多室脂质体和胆识脂质体。单室脂质体又分为小单室脂质体和大单室脂质体。小单室脂质体为球形，尺寸一般为20-50纳米；大单室脂质体的尺寸为微米数量级。

[0017] 1971年英国莱门等人开始将脂质体用于药物载体，主要作用机理是将药物粉末或溶液包裹在脂质体双层脂质膜所封闭的水相中或嵌入脂质体双层脂质膜中，这种微粒具有类细胞结构，进入人体内主药被网状内皮系统吞噬而激活机体的自身免疫功能，并改变被包封药物的体内分布，使药物主要在肝、脾、肺和骨髓等组织器官中积蓄，从而提高药物的治疗指数，减少药物的治疗剂量和降低药物的毒性。

[0018] 近年来，随着生物技术的不断进展，脂质体制备工艺逐步完善，脂质体作用机制进一步阐明，加之脂质体适合体内降解、无毒性和无免疫原性，特别是大量试验数据证明脂质体作为药物载体可以提高药物治疗指数、降低药物毒性和减少药物副作用，并减少药物剂量，提高药物的稳定性等优点。

[0019] 综上所述，鉴于现有技术中单唾液酸四己糖神经节苷脂钠存在的物化性质以及在生物利用度和血脑屏障通透性方面中存在的问题，本发明人通过长期地研究，在付出创造性劳动之后，获得了优于现有技术的单唾液酸四己糖神经节苷脂钠脂质体注射剂。

发明内容

[0020] 本发明的目的是本发明所要解决的问题是克服现有技术的缺陷，提供一种单唾液酸四己糖神经节苷脂钠脂质体注射剂及其制法，目的是解决现有单唾液酸四己糖神经节苷脂钠制剂稳定性问题，脂质体对活性成分起到保护作用，提高其生物利用度，进一步有效地促进了单唾液酸四己糖神经节苷脂钠的血脑屏障通透性。

[0021] 为了形成品质优良的单唾液酸四己糖神经节苷脂钠脂质体注射剂，重要的是寻找能与单唾液酸四己糖神经节苷脂钠良好相容从而将其良好包封且不渗漏的成膜材料，以及寻找能使脂质体形成稳定注射剂的相应组分。

[0022] 为了实现上述目的，本发明人进行的大量研究和实验，发现特定重量配比的单唾液酸四己糖神经节苷脂钠、氢化蛋黄卵磷脂、大豆甾醇、脱氧胆酸钠、泊洛沙姆188能制成单唾液酸四己糖神经节苷脂钠脂质体注射剂，其中，作为药物活性成分的单唾液酸四己糖神经节苷脂钠的包封率高，脂质体粒径小且分布均匀，与现有技术中的单唾液酸四己糖神经节苷脂钠注射剂相比，本发明制剂的药物活性成分在体循环中的保留时间显著延长，稳定性好，药物的生物相容性高，生物利用度明显提高，疗效明显提高。

[0023] 本发明的目的之一在于提供一种单唾液酸四己糖神经节苷脂钠脂质体，其主要基于重量份计以下成分制成：单唾液酸四己糖神经节苷脂钠1份，氢化蛋黄卵磷脂3-14份，大豆甾醇0.8-7份，脱氧胆酸钠0.3-5份，0.5-10份泊洛沙姆188，亚硫酸氢钠0.01-0.05份。

[0024] 在优选的实施方案中，基于重量份计：单唾液酸四己糖神经节苷脂钠1份，氢化蛋黄卵磷脂4-10份，大豆甾醇1.2-5份，脱氧胆酸钠0.5-3份，0.8-5份泊洛沙姆188，亚硫酸氢钠0.02-0.04份。

[0025] 作为用于形成脂质体的磷脂，可以使用天然磷脂和合成磷脂。在本发明中，作为药物活性成分的单唾液酸四己糖神经节苷脂钠，其水溶性好。针对单唾液酸四己糖神经节苷脂钠的特点，本发明人通过研究发现氢化蛋黄卵磷脂特别适于作为基础磷脂成膜材料。当使用其他磷脂时，难以形成品质优良的脂质体，脂质体的包封率、稳定性、和渗漏率等性质差。

[0026] 在本发明的单唾液酸四己糖神经节苷脂钠脂质体注射剂中，相对于1重量份的单唾液酸四己糖神经节苷脂钠而言，氢化蛋黄卵磷脂的用量为3-14重量份。如果氢化蛋黄卵磷脂的用量低于3重量份，则无法形成稳定的脂质体；反之，如果氢化蛋黄卵磷脂的用量的用量高于14重量份，则作为药物活性成分的单唾液酸四己糖神经节苷脂钠的包封率下降，注射剂的品质以及疗效降低。

[0027] 在本发明的单唾液酸四己糖神经节苷脂钠脂质体注射剂中，大豆甾醇、脱氧胆酸钠以及泊洛沙姆188用于调节脂质体的膜稳定性。

[0028] 大豆甾醇(soybean sterol，SS)是大豆甾醇葡萄糖苷去葡萄糖残基的水解产物，所述大豆甾醇葡萄糖苷是从经提炼豆油的大豆残渣中分离出来的甾醇葡萄糖苷的混合物。大豆甾醇能调节氢化蛋黄卵磷脂膜的稳定性，且其对稳定性的调节作用效果优于胆固醇。

[0029] 本发明人经过研究发现，在本发明的单唾液酸四己糖神经节苷脂钠脂质体注射剂中，相对于1重量份的单唾液酸四己糖神经节苷脂钠而言，大豆甾醇的用量为0.8-7重量份。如果大豆甾醇的用量低于0.8重量份，则形成的脂质体稳定性低，易于渗漏；反之，如果大豆甾醇的用量的用量高于7重量份，单唾液酸四己糖神经节苷脂钠的膜流动性过高，被包裹在脂质体内的单唾液酸四己糖神经节苷脂钠易于释放，包封率下降。

[0030] 另一方面，本发明人研究发现，在本发明的单唾液酸四己糖神经节苷脂钠脂质体注射剂中，相对于1重量份的单唾液酸四己糖神经节苷脂钠而言，氢化蛋黄卵磷脂的用量为4-10重量份，大豆甾醇的用量为1.2-5重量份，脱氧胆酸钠用量为0.5-3重量份，泊洛沙姆188的用量为0.8-5重量份，所形成的单唾液酸四己糖神经节苷脂钠脂质体注射剂的包封率高。

[0031] 在本发明的单唾液酸四己糖神经节苷脂钠脂质体注射剂中，使用泊洛沙姆188来进一步改进脂质体膜的稳定性。泊洛沙姆188是一种新型的非离子表面活性剂，当用于氢化蛋黄卵磷脂双层膜中时，能提高该双层膜之间的化学能，从而提高脂质体在水性液体中的化学稳定性，进而提高单唾液酸四己糖神经节苷脂钠脂质体注射剂的稳定性。

[0032] 在本发明的单唾液酸四己糖神经节苷脂钠脂质体注射剂中，相对于1重量份的单唾液酸四己糖神经节苷脂钠而言，泊洛沙姆188的用量为0.5-10重量份。如果泊洛沙姆188的用量低于0.5重量份，则由于其用量过低导致对单唾液酸四己糖神经节苷脂钠脂质体注射液的稳定性改进不够，反之，如果泊洛沙姆188的用量高于10重量份，则用于其用量过高而导致脂质体膜易于泄露。

[0033] 研究发现，当使用上述特定量的单唾液酸四己糖神经节苷脂钠、氢化蛋黄卵磷脂、脱氧胆酸钠、大豆甾醇和泊洛沙姆188时，可以得到品质优良的单唾液酸四己糖神经节苷脂钠脂质体，其包封率和稳定性都很高，毒性低，生物利用度高。

[0034] 本发明的目的之一在于提供一种单唾液酸四己糖神经节苷脂钠脂质体注射剂，所述的注射剂包括注射液和冻干粉针，其中注射液规格为2ml:20mg，2ml:40mg和5ml:100mg，冻干粉针的规格为40mg，100mg。

[0035] 本发明的目的之一在于提供一种单唾液酸四己糖神经节苷脂钠脂质体注射液，其主要基于重量份计以下成分制成：单唾液酸四己糖神经节苷脂钠1份、氢化蛋黄卵磷脂3-14份、大豆甾醇0.8-7份、脱氧胆酸钠0.3-5份、0.5-10份泊洛沙姆188、亚硫酸氢钠
0.01-0.05份、氯化钠0.4-0.8份和注射用水适量。

[0036] 在优选的实施方案中，基于重量份计：单唾液酸四己糖神经节苷脂钠1份、氢化蛋黄卵磷脂4-10份、大豆甾醇1.2-5份、脱氧胆酸钠0.5-3份、0.8-5份泊洛沙姆188、亚硫酸氢钠0.02-0.04份、氯化钠0.45-0.9份和注射用水适量。

[0037] 本发明的目的之一在于提供一种单唾液酸四己糖神经节苷脂钠脂质体冻干粉针剂，其主要基于重量份计以下成分制成：单唾液酸四己糖神经节苷脂钠1份、氢化蛋黄卵磷脂3-14份、大豆甾醇0.8-7份、脱氧胆酸钠0.3-5份、0.5-10份泊洛沙姆188、亚硫酸氢钠0.01-0.05份、甘露醇3-12份。

[0038] 在优选的实施方案中，基于重量份计：单唾液酸四己糖神经节苷脂钠1份、氢化蛋黄卵磷脂4-10份、大豆甾醇1.2-5份、脱氧胆酸钠0.5-3份、0.8-5份泊洛沙姆188、亚硫酸氢钠0.02-0.04份、甘露醇5-9份。

[0039] 在本发明的单唾液酸四己糖神经节苷脂钠脂质体注射剂中，使用亚硫酸氢钠作为抗氧剂，用于形成稳定的注射剂。氯化钠作为最常用的渗透压调节剂之一，甘露醇作为最常用的冻干骨架剂之一，对脂质体的稳定性也不会产生任何的不良影响。

[0040] 作为优选之一，上述所述的单唾液酸四己糖神经节苷脂钠脂质体注射液，其制备单位剂量的脂质体注射剂的各组分重量份数比为：

[0041]

[0042] 作为优选之一，上述所述的单唾液酸四己糖神经节苷脂钠脂质体注射液，其制备单位剂量的脂质体注射剂的各组分重量份数比为：

[0043]

[0044]

[0045] 作为优选之一，上述所述的单唾液酸四己糖神经节苷脂钠脂质体注射液，其制备单位剂量的脂质体注射剂的各组分重量份数比为：

[0046]

[0047] 作为优选之一，上述所述的单唾液酸四己糖神经节苷脂钠脂质体冻干粉针剂，其制备单位剂量的脂质体注射剂的各组分重量份数比为：

[0048]

[0049] 作为优选之一，上述所述的单唾液酸四己糖神经节苷脂钠脂质体冻干粉针剂，其制备单位剂量的脂质体注射剂的各组分重量份数比为：

[0050]

[0051] 本发明的目的之一还在于提供一种制备单唾液酸四己糖神经节苷脂钠脂质体注射液的方法，其包括如下步骤：

[0052] (1)将氢化蛋黄卵磷脂、大豆甾醇、泊洛沙姆188和脱氧胆酸钠溶于适量的体积比为1∶3的异丙醇和乙醇混合溶剂中，得类脂溶液；

[0053] (2)将上述类脂溶液置于梨形瓶中，于55-65℃恒温水浴中，旋转蒸发除去混合溶剂，形成均匀类脂膜；

[0054] (3)将单唾液酸四己糖神经节苷脂钠、亚硫酸氢钠和氯化钠溶于注射用水中，加入梨形瓶中轻摇，使类脂膜洗脱并分散到水合介质溶解，即得脂质体混悬液；

[0055] (4)将上述混悬液置于超声仪中超声至半透明胶体溶液；

[0056] (5)将上述的混悬液用0.45μm的微孔滤膜过滤，灌装封口，灭菌，得单唾液酸四己糖神经节苷脂钠脂质体注射液。

[0057] 本发明的目的之一还在于提供一种制备单唾液酸四己糖神经节苷脂钠脂质体冻干粉针剂的方法，其包括如下步骤：

[0058] (1)将氢化蛋黄卵磷脂、大豆甾醇、泊洛沙姆188和脱氧胆酸钠溶于适量的体积比为1∶3的异丙醇和乙醇混合溶剂中，得类脂溶液；

[0059] (2)将上述类脂溶液置于梨形瓶中，于55-65℃恒温水浴中，旋转蒸发除去混合溶剂，形成均匀类脂膜；

[0060] (3)将单唾液酸四己糖神经节苷脂钠、亚硫酸氢钠和甘露醇溶于注射用水中，加入梨形瓶中轻摇，使类脂膜洗脱并分散到水合介质溶解，即得脂质体混悬液；

[0061] (4)将上述混悬液置于超声仪中超声至半透明胶体溶液；

[0062] (5)将上述的混悬液用0.45μm的微孔滤膜过滤，将滤液置于-45℃条件下冷冻4小时，再以1.3℃/小时的速度升温至-13℃，保温3小时，再升温至30℃，保温3小时至干燥，得到单唾液酸四己糖神经节苷脂钠脂质体冻干制剂。

[0063] 有益效果

[0064] 本发明的脂质体注射剂提高了制剂产品质量，减少了毒副作用，具有良好的制剂稳定性，提高了药物的生物利用度，疗效明显提高；并且制备方法简单，适合于工业化大生产。冷冻过程中脂质体不会因脱水、融合、冰晶等发生破裂，长期储存后，脂质体同样保持良好的包封率。

附图说明

[0065] 以下，结合附图来详细说明本发明的实施方案，其中：

[0066] 图1表示血药浓度-时间的关系曲线。

[0067] 其中，

[0068] 曲线1表示实施例1血药浓度时间曲线。

[0069] 曲线2表示实施例2血药浓度时间曲线。

[0070] 曲线3表示实施例3血药浓度时间曲线。

[0071] 曲线4表示实施例4血药浓度时间曲线。

[0072] 曲线5表示实施例5血药浓度时间曲线。

[0073] 曲线6表示对比例1血药浓度时间曲线。

[0074] 曲线7表示对比例2血药浓度时间曲线。

[0075] 曲线8表示对比例3血药浓度时间曲线。

[0076] 曲线9表示上市例血药浓度时间曲线。

具体实施方式

[0077] 以下通过具体优选的实施例对本发明进行进一步说明。这些实施例仅是说明性的，并不应理解为对本发明的限制。

[0078] 实施例1单唾液酸四己糖神经节苷脂钠脂质体注射液的制备

[0079] 处方(1000支)

[0080]

[0081] 制备工艺：

[0082] (1)将140g氢化蛋黄卵磷脂、60g大豆甾醇、50g泊洛沙姆188和36g脱氧胆酸钠溶于2000ml体积比为1∶3的异丙醇和乙醇混合溶剂中，得类脂溶液；

[0083] (2)将上述类脂溶液置于梨形瓶中，于65℃恒温水浴中，旋转蒸发除去混合溶剂，形成均匀类脂膜；

[0084] (3)将20g单唾液酸四己糖神经节苷脂钠、0.6g亚硫酸氢钠和18g氯化钠溶于600ml水中，加入梨形瓶中轻摇，使类脂膜洗脱并分散到水合介质溶解，即得脂质体混悬液；

[0085] (4)将上述混悬液置于超声仪中超声至半透明胶体溶液；

[0086] (5)将上述的混悬液用0.45μm的微孔滤膜过滤，灌装封口，灭菌，得单唾液酸四己糖神经节苷脂钠脂质体注射液。

[0087] 实施例2单唾液酸四己糖神经节苷脂钠脂质体注射液的制备

[0088] 处方(1000支)

[0089]

[0090] 制备工艺：

[0091] (1)将400g氢化蛋黄卵磷脂、200g大豆甾醇、200g泊洛沙姆188和120g脱氧胆酸钠溶于6000ml体积比为1∶3的异丙醇和乙醇混合溶剂中，得类脂溶液；

[0092] (2)将上述类脂溶液置于梨形瓶中，于55℃恒温水浴中，旋转蒸发除去混合溶剂，形成均匀类脂膜；

[0093] (3)将40g单唾液酸四己糖神经节苷脂钠、1.6g亚硫酸氢钠和18g氯化钠溶于600ml水中，加入梨形瓶中轻摇，使类脂膜洗脱并分散到水合介质溶解，即得脂质体混悬液；

[0094] (4)将上述混悬液置于超声仪中超声至半透明胶体溶液；

[0095] (5)将上述的混悬液用0.45μm的微孔滤膜过滤，灌装封口，灭菌，得单唾液酸四己糖神经节苷脂钠脂质体注射液。

[0096] 实施例3单唾液酸四己糖神经节苷脂钠脂质体注射液的制备

[0097] 处方(1000支)

[0098]

[0099] 制备工艺：

[0100] (1)将800g氢化蛋黄卵磷脂、360g大豆甾醇、450g泊洛沙姆188和190g脱氧胆酸钠溶于15000ml体积比为1∶3的异丙醇和乙醇混合溶剂中，得类脂溶液；

[0101] (2)将上述类脂溶液置于梨形瓶中，于60℃恒温水浴中，旋转蒸发除去混合溶剂，形成均匀类脂膜；

[0102] (3)将100g单唾液酸四己糖神经节苷脂钠、2g亚硫酸氢钠和45g氯化钠溶于800ml水中，加入梨形瓶中轻摇，使类脂膜洗脱并分散到水合介质溶解，即得脂质体混悬液；

[0103] (4)将上述混悬液置于超声仪中超声至半透明胶体溶液；

[0104] (5)将上述的混悬液用0.45μm的微孔滤膜过滤，灌装封口，灭菌，得单唾液酸四己糖神经节苷脂钠脂质体注射液。

[0105] 实施例4单唾液酸四己糖神经节苷脂钠脂质体冻干粉针剂的制备[0106] 处方(1000瓶)

[0107]

[0108] 制备工艺：

[0109] (1)将160g氢化蛋黄卵磷脂、48g大豆甾醇、32g泊洛沙姆188和20g脱氧胆酸钠溶于4000ml体积比为1∶3的异丙醇和乙醇混合溶剂中，得类脂溶液；

[0110] (2)将上述类脂溶液置于梨形瓶中，于55℃恒温水浴中，旋转蒸发除去混合溶剂，形成均匀类脂膜；

[0111] (3)将40g单唾液酸四己糖神经节苷脂钠、0.8g亚硫酸氢钠和200g甘露醇溶于1200ml水中，加入梨形瓶中轻摇，使类脂膜洗脱并分散到水合介质溶解，即得脂质体混悬液；

[0112] (4)将上述混悬液置于超声仪中超声至半透明胶体溶液；

[0113] (5)将上述的混悬液用0.45μm的微孔滤膜过滤，将滤液置于-45℃条件下冷冻4小时，再以1.3℃/小时的速度升温至-13℃，保温3小时，再升温至30℃，保温3小时至干燥，得到单唾液酸四己糖神经节苷脂钠脂质体冻干制剂。

[0114] 实施例5单唾液酸四己糖神经节苷脂钠脂质体冻干粉针剂的制备[0115] 处方(1000瓶)

[0116]

[0117] 制备工艺：

[0118] (1)将500g氢化蛋黄卵磷脂、150g大豆甾醇、100g泊洛沙姆188和60g脱氧胆酸钠溶于8000ml体积比为1∶3的异丙醇和乙醇混合溶剂中，得类脂溶液；

[0119] (2)将上述类脂溶液置于梨形瓶中，于65℃恒温水浴中，旋转蒸发除去混合溶剂，形成均匀类脂膜；

[0120] (3)将100g单唾液酸四己糖神经节苷脂钠、3g亚硫酸氢钠和900g甘露醇溶于2000ml水中，加入梨形瓶中轻摇，使类脂膜洗脱并分散到水合介质溶解，即得脂质体混悬液；

[0121] (4)将上述混悬液置于超声仪中超声至半透明胶体溶液；

[0122] (5)将上述的混悬液用0.45μm的微孔滤膜过滤，将滤液置于-45℃条件下冷冻4小时，再以1.3℃/小时的速度升温至-13℃，保温3小时，再升温至30℃，保温3小时至干燥，得到单唾液酸四己糖神经节苷脂钠脂质体冻干制剂。

[0123] 对比例1-3单唾液酸四己糖神经节苷脂钠脂质体注射剂的制备

[0124] 采用与实施例1相同的生产工艺，将如下表所示的对比例1-2中的组分和用量分别制成单唾液酸四己糖神经节苷脂钠脂质体注射液，采用类似实施例4的生产工艺，将下表对比例3中的组分和用量分别制成单唾液酸四己糖神经节苷脂钠脂质体冻干粉针剂。

[0125] 表1对比例1-3组分

[0126]

[0127] 其中，“/”表示未使用。

[0128] 试验例1脂质体粒径的测定

[0129] 室温条件下，取实施例1-5和对比例1-3中的单唾液酸四己糖神经节苷脂钠脂质体注射液，置于Submicron Particle Sizer Model 370粒径检测仪的样品管中，测定粒径大小分布及平均粒径；用投射电子显微镜观察粒子形态。结果示于下表2中。

[0130] 表2粒径的测定

[0131]

[0132] 从表2可知，实施例1-5制得的脂质体粒径均匀，显球形，大小均一；对比例1-3制得的脂质体粒径不均匀，形状不定，杂乱无章，大小不一。

[0133] 具体而言，即使在采用同样的生产工艺时，实施例1-5中制得的单唾液酸四己糖神经节苷脂钠脂质体的颗粒外观及其平均粒径明显优于对比例1-3中制得的单唾液酸四己糖神经节苷脂钠脂质体。说明当使用本发明所用成分以外的成分时，或者当成分用量在本发明限定的成分用量范围外时，所得单唾液酸四己糖神经节苷脂钠脂质体的外观劣于本发明，平均粒径明显大出很多。

[0134] 试验例2包封率的测定

[0135] 将实施例1-5和对比例1-3中制备的单唾液酸四己糖神经节苷脂钠脂质体注射液以5000r/min的转速高速离心，离心20分钟，取上清液，用甲醇溶解，HPLC法测单唾液酸四己糖神经节苷脂钠含量，计算包封率，结果示于下表3中。

[0136] 表3包封率测定结果

[0137]

[0138] 由表3可知，实施例1-5制备的脂质体制剂的包封率显著的高于对比例1-3的脂质体制剂的包封率。说明当使用本发明所用成分以外的成分时，或者当成分用量在本发明限定的成分用量范围外时，所得脂质体的脂质体包封率低于本发明。

[0139] 试验例3稳定性考察

[0140] 将本发明实施例1-5制备的样品和对比例1-3制备的样品、上市的单唾液酸四己糖神经节苷脂钠注射液(批号20100303-1，北京四环制药有限公司)分别置于高温40℃、相对湿度75％的条件下6个月，进行加速试验考察，试验结果见表4。

[0141] 表4加速试验结果

[0142]

[0143]

[0144] 由表4可知，加速6月时，对比例1-3制备的样品和上市制剂含量降低，有关物质升高，pH值下降明显；而本发明实施例1-5的样品性状、pH值、含量和有关物质变化均不明显，说明本发明的产品稳定性好。

[0145] 试验例4渗漏率试验

[0146] 取试验例1-5和对比例1-3制备的样品，在室温条件下，分别于0天、30天、60天、90天和180天，定期检查，测定包封率，与0天包封的药量比较，计算渗漏率，结果示于下表
5中。

[0147] 表5渗漏率试验结果

[0148]

[0149] 由表5可知，长期储存时，本发明实施例1-5中制备的单唾液酸四己糖神经节苷脂钠脂质体注射液渗漏率变化不大，而对比例1-3中制备的注射液渗漏率逐渐增大，脂质体渗漏严重，这说明本发明方法制备的单唾液酸四己糖神经节苷脂钠脂质体注射液具有更高的稳定性。

[0150] 试验例5血药浓度的测定

[0151] 将90只大鼠随机分成9组，每组分别注射给药实施例1-5及对比例1-3中制备的样品，以及市售单唾液酸四己糖神经节苷脂钠注射液(批号20100303-1，北京四环制药有限公司)，注射量为20mg单唾液酸四己糖神经节苷脂钠。给药后分别于0h、0.5h、1h、1.5h、2h、3h、6h、8h，采血，血样经处理后，以HPLC-MS法测定血药浓度。绘制实施例1-5中制备的单唾液酸四己糖神经节苷脂钠脂质体注射剂、对比例1-3中制备的单唾液酸四己糖神经节苷脂钠脂质体注射液和市售单唾液酸四己糖神经节苷脂钠注射液的血药浓度与时间的关系曲线，示于附图1中。

[0152] 其中，

[0153] 曲线1表示实施例1血药浓度时间曲线。

[0154] 曲线2表示实施例2血药浓度时间曲线。

[0155] 曲线3表示实施例3血药浓度时间曲线。

[0156] 曲线4表示实施例4血药浓度时间曲线。

[0157] 曲线5表示实施例5血药浓度时间曲线。

[0158] 曲线6表示对比例1血药浓度时间曲线。

[0159] 曲线7表示对比例2血药浓度时间曲线。

[0160] 曲线8表示对比例3血药浓度时间曲线。

[0161] 曲线9表示上市例血药浓度时间曲线。

[0162] 由图1可知，与对比例1-3中制备的单唾液酸四己糖神经节苷脂钠脂质体注射液和市售单唾液酸四己糖神经节苷脂钠脂质体注射液相比，本发明实施例1-5中制备的单唾液酸四己糖神经节苷脂钠脂质体注射液具有以下优点：在体内的消除速度减缓，在体循环中分布时间延长，达到了改进的缓释效果，生物利用度增加。

[0163] 试验例6血脑屏障通透性实验

[0164] 取新西兰家兔30只，体重约2.5kg，雌雄不限，随机分成6组，1-5组静脉注射本发明的实施例1-5的单唾液酸四己糖神经节苷脂钠脂质体注射液，第6组静脉注射市售单唾液酸四己糖神经节苷脂钠注射液(批号20100303-1，北京四环制药有限公司)，注射量为20mg单唾液酸四己糖神经节苷脂钠。于给药后不同时间抽取0.2ml脑脊液进行试验，取样时间分别为注射药物后的0.5h、1h、2h、4h、8h。取脑脊液0.1ml，加适量溶剂混悬15min，以
10000rpm离心1min，取上层清液20ul进样，用高效液相色谱测定。结果见表6。

[0165] 表6脑脊液中药物浓度的测定

[0166]

[0167] 注：与上市例相比*表示差异显著。

[0168] 由表6试验结果可知，本发明单唾液酸四己糖神经节苷脂钠脂质体注射液通过血脑屏障的药物量比上市例注射液有明显提高，说明本发明单唾液酸四己糖神经节苷脂钠脂质体注射液透过血脑屏障的药物量明显增加，提高了脑组织中的血药浓度，提高了治疗效果。试验结果还表明，本发明单唾液酸四己糖神经节苷脂钠脂质体注射液给药后，靶组织的药物浓度升高快速且稳定，在组织中具有长效作用，因此本发明的单唾液酸四己糖神经节苷脂钠脂质体注射液可以减少给药次数。并且相同的给药剂量下，实施例制剂的效果明显优于上市例制剂和对比例。

[0169] 工业实用性

[0170] 由上述实施例以及试验例的结果可知，本发明的单唾液酸四己糖神经节苷脂钠脂质体具有良好的外观，颗粒小，粒径均匀，包封率高，稳定性高，渗漏率低，在体内的停留时间长，生物利用度高，具有良好的工业应用价值。

[0171] 以上通过具体实施方式和试验例对本发明进行了详细说明，不过应理解，这些说明并不对本发明的范围构成任何限制，在不偏离本发明的精神和保护范围的情况下，可以对本发明的技术方案及其实施方式进行多种修饰、改进和替换，这些均因落入本发明的保护范围内。

[0172] 本申请中提及或引用的各个参考文献，在此全文引入作为参考。