一种乙肝扶正胶囊的制备方法

摘要

本发明涉及一种乙肝扶正胶囊的制备方法，由下列步骤组成：取何首乌、虎杖，微波萃取，大孔吸附树脂柱分离纯化，得何虎提取物；取贯众、石榴皮，粉碎，混合，微波萃取，大孔吸附树脂柱、离子交换柱分离纯化，得贯石提取物；取肉桂、当归、丹参、沙苑子、人参、麻黄，CO2超临界萃取，得超临界萃取物；取明矾，粉碎，加入上述何虎提取物、贯石提取物、超临界萃取物混合，加入糊精，制粒，灌胶囊。采用本发明制备的乙肝扶正胶囊便于服用。

权利要求

1.一种乙肝扶正胶囊的制备方法，由何首乌15g、虎杖25g、贯众50g、肉桂5g、明矾

10g、石榴皮6g、当归10g、丹参15g、沙苑子10g、人参10g、麻黄6g作为原料药制成，其特征在于所述的方法由下列步骤组成：取何首乌、虎杖，粉碎，混合，加入0.5L的70%乙醇, 投入微波萃取装置中进行微波萃取，萃取功率400-600W，萃取2次，每次4-8分钟，合并萃取液，浓缩，加到D101大孔吸附树脂柱上，35%乙醇洗脱，收集5倍量柱体积洗脱液，继用60%乙醇洗脱，收集5倍量洗脱液，与上述洗脱液合并，减压回收乙醇，浓缩，干燥，得何虎提取物；取贯众、石榴皮，粉碎，混合，加入0.5L水，投入微波萃取装置中进行微波萃取，萃取功率500W，萃取2次，每次6分钟，合并萃取液，浓缩，加到D102大孔吸附树脂柱上，70%乙醇洗脱，收集5倍量柱体积洗脱液，减压回收乙醇，通过强碱性苯乙烯型阴离子交换树脂吸附，以0.5mol/L的NaOH溶液洗脱，收集洗脱液，滤过，通过强酸性苯乙烯型阳离子交换树脂，收集流出液，滤过，浓缩并干燥，得贯石提取物，备用；取肉桂、当归、丹参、沙苑子、人参、麻黄，加入到CO2超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为3-5%，萃取压力15-25MPa，温度50-70℃, CO2流量1-3ml/g生药·min，萃取时间120-140min，得超临界萃取物，备用；取明矾，粉碎，加入上述何虎提取物、贯石提取物、超临界萃取物混合，加入糊精，制粒，灌胶囊，制成250粒，每粒0.25g。

说明书

一种乙肝扶正胶囊的制备方法

技术领域

[0001] 本发明涉及一种药物的制备方法，尤其是一种中药的制备方法。

背景技术

[0002] 乙肝扶正胶囊是由由何首乌、虎杖、贯众、肉桂、明矾、石榴皮、当归、丹参、沙苑子、人参、麻黄作为原料药制成，收载于《卫生部药品标准中药成方制剂》第一册。补肝肾，益气活血。用于乙型肝炎，辨证属于肝肾两虚证候。临床表现为：肝区隐痛不适，全身乏力，腰膝酸软，气短心悸，自汗，头晕、纳少，舌淡脉弱。

[0003] 现有技术中，尚未有乙肝扶正胶囊在治疗更年期综合征方面的报道。

[0004] 现有技术中，乙肝扶正胶囊的制备采用水煎煮的方法，工艺粗糙、落后，杂质多，导致患者日用量过大，不方便服用，严重影响了本品在临床上应用。

发明内容

[0005] 本发明所要解决的问题是提供一种乙肝扶正胶囊的制备方法，使其安全有效，方便服用。

[0006] 为了解决上述技术问题，本发明提出了下述技术方案。

[0007] 取何首乌15g、虎杖25g，粉碎，混合，加入0.5L的70%乙醇, 投入微波萃取装置中进行微波萃取，萃取功率400-600W，萃取2次，每次4-8分钟，合并萃取液，浓缩，加到D101大孔吸附树脂柱上，35%乙醇洗脱，收集5倍量柱体积洗脱液，继用60%乙醇洗脱，收集5倍量洗脱液，与上述洗脱液合并，减压回收乙醇，浓缩，干燥，得何虎提取物；取贯众50g、石榴皮6g，粉碎，混合，加入0.5L水，投入微波萃取装置中进行微波萃取，萃取功率500W，萃取2次，每次6分钟，合并萃取液，合并萃取液，浓缩，加到D102大孔吸附树脂柱上，70%乙醇洗脱，收集5倍量柱体积洗脱液，减压回收乙醇，通过强碱性苯乙烯型阴离子交换树脂吸附，以0.5mol/L的NaOH溶液洗脱，收集洗脱，滤过，通过强酸性苯乙烯型阳离子交换树脂，收集流出液，滤过，浓缩并干燥，得贯石提取物，备用；取肉桂5g、当归10g、丹参15g、沙苑子10g、人参10g、麻黄6g，加入到CO2超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为3-5%，萃取压力15-25MPa，温度50-70℃, CO2流量1-3ml/g生药·min，萃取时间120-140min，得超临界萃取物，备用；取明矾，粉碎，加入上述何虎提取物、贯石提取物、超临界萃取物混合，加入糊精，制粒，灌胶囊，制成250粒，每粒0.25g。

[0008] 何首乌、虎杖微波萃取功率500W，每次萃取6分钟。

[0009] 强碱性苯乙烯型阴离子交换树脂选自201×7型，201×4型，D201型强碱性苯乙烯型阴离子交换树脂中的一种。

[0010] 强酸性苯乙烯型阳离子交换树脂选自001×7型、001×4型、D001型强酸性苯乙烯型阳离子交换树脂中的一种。

[0011] CO2超临界萃取夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为4%。

[0012] CO2超临界萃取的萃取压力20MPa，温度60℃, CO2流量2ml/g生药·min，萃取时间130min。

[0013] 采用上述技术方案制备的乙肝扶正胶囊，其作为制备治疗更年期综合征药物的应用。

[0014] 现有技术中，乙肝扶正胶囊每次需服用4粒（相当于0.6g药材），而采用本发明制备而成的乙肝扶正胶囊每次仅需服用1粒（相当于0.6g药材），在保肝药理活性相似的情况下大大减少了服用量。此结论可以通过下述试验证明。

[0015] 试验一 不同方法制备的乙肝扶正胶囊中白藜芦醇含量的比较。

[0016] 1、仪器及试药

[0017] 乙肝扶正胶囊（超临界法，以下简称Y-LJ）：按实施例3方法制备。

[0018] 乙肝扶正胶囊（传统法，简称Y-CT），按《卫生部药品标准中药成方制剂》第一册方法制备。

[0019] Agilent 1200高效液相色谱仪；METTLER AE240电子分析天平。

[0020] 白藜芦醇对照品（中国药品生物制品检定所）。

[0021] 2、方法

[0022] 色谱条件 Kromasi C18色谱柱(4.6mm×200mm，5μm)；乙腈-水(22:78)流动相；－1
流速1.0mL·min ，检测波长306nm。精密量取对照品溶液、供试品溶液各10μL。

[0023] 溶液的制备 取白藜芦醇对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含10μg的对照品溶液。分别取供品10粒，取内容物，精密称定，研细，精密称取0.8g，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，称定重量，超声处理（功率220W，频率50kHz）30分钟，取出，放冷，再称定重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

[0024] 3、结果

[0025] 试验结果见表1，结果表明采用本发明制备的乙肝扶正胶囊中白藜芦醇的含量(149.5μg/粒 )是采用传统法(35.6μg/粒)的4.2倍。

[0026] 表1 不同方法制备的乙肝扶正胶囊中白藜芦醇的含量

[0027]样品 含量（μg/粒）
Y-LJ 149.5
Y-CT 35.6

[0028] 试验二 不同方法制备的乙肝扶正胶囊药效学比较。

[0029] 1、保肝作用

[0030] 1.1材料

[0031] 药品 乙肝扶正胶囊（超临界法，以下简称Y-LJ）：按实施例3方法制备。

[0032] 乙肝扶正胶囊（传统法，简称Y-CT），按《卫生部药品标准中药成方制剂》第一册方法制备。

[0033] 动物 SD大鼠，上海斯莱克实验动物有限公司提供。

[0034] 仪器试剂 Lisa 300 Dlus全自动生化仪；721双光束紫外可见分光光度计,上海。门冬氨酸氨基转换酶(AST)试剂盒、丙氨酸氨基转换酶(ALT)试剂盒,南京建成生物；a-32P-dCTP,北京福瑞生物；缺口翻译药盒由普洛卖格公司提供。

[0035] 数据处理 数据以mean±s表示，用SPSS11.0软件进行分析。记量资料用单因素方差分析进行统计学显著性分析，计数资料用卡方检验。

[0036] 1.2方法与结果

[0037] 对四氯化碳慢性肝损伤的治疗作用　选用健康SD大鼠，随机取出15只为空白对照组。其余大鼠皮下注射40%四氯化碳油溶液，1周内注射2次，连续15次。注射CCL4 50d后将大鼠按体重随机分为5组：模型对照组，Y-CT组（给药剂量0.24g/kg，相当于人临床用量，即1.9g生药/日）；Y-LJ低、中、高剂量组（给药剂量分别为0.03g/kg、0.06g/kg、0.12g/kg，其中中剂量组相当于人临床用量，即1.9g生药/日），灌胃给药，每天1次，连续30 d。空白对照组和模型组给同体积0.5% CMC溶液。于末次给药后1h，取血，测定血清中ALT、AST含量。另取肝大叶同一部位的肝脏0.5g，制备肝匀浆，测定羟脯氨酸含量，另取肝大叶相同部位的肝组织做常规病理组织学检查。

[0038] 试验结果（见表2、3）表明，Y-CT组、Y-LJ各剂量组能显著降低四氯化碳致慢性肝损伤大鼠血清AST、ALT、羟脯氨酸含量，减轻其肝组织损伤（P<0.05、0.01）。Y-CT组与Y-LJ中剂量组相比无显著性差异（P>0.05），表明在相应剂量下（均相当于人临床用量），两者护肝作用相当。

[0039] 表2 不同方法制备的乙肝扶正胶囊对慢性肝损伤大鼠血清生化指标的影响（n=15）

[0040]

[0041] 与模型对照组相比，*p<0.05、**p<0.01。

[0042] 表3 不同方法制备的乙肝扶正胶囊对模型大鼠肝损伤的影响（n=15）[0043]

[0044] 与模型对照组相比，*p<0.05、**p<0.01。

[0045] 病理分级:

[0046] “0”级正常肝组织：肝索排列整齐，肝窦明显，细胞大小正常，胞浆均匀，核仁、核膜清楚。

[0047] “+”级　为肝细胞轻度变性，肝索基本整齐，肝窦可见，肝细胞稍大。病变在1/3以下。

[0048] “++”级　为肝细胞中度变性，以肝细胞气球样变性为主，肝索排列紊乱，病变在1/2以下。

[0049] “+++”级　为肝细胞重度变性，以肝细胞气球样变性为主，肝小叶结构消失,肝索排列紊乱，小区可见点状坏死,病变在2/3以上。

[0050] 2、治疗更年期综合征的药理作用

[0051] 2.1材料

[0052] 药品 乙肝扶正胶囊（超临界法，以下简称Y-LJ）：按实施例3方法制备。

[0053] 乙肝扶正胶囊（传统法，简称Y-CT），按《卫生部药品标准中药成方制剂》第一册方法制备。

[0054] 动物 ICR小鼠，上海斯莱克实验动物有限公司提供。

[0055] XZC-4型小鼠自主活动测定仪，黑龙江省牡丹江市电器厂。

[0056] 2.2方法与结果

[0057] 对去势小鼠自主活动的影响 去势方法：取健康小鼠，在乙醚麻醉下，摘除双侧卵巢后第5天逐只进行阴道涂片检查，每天1次，连续5天，取卵巢摘除完全无动情变化者(去势组)用于实验。假去势组动物手术除不摘除卵巢外，余均同去势组。

[0058] 雌性小鼠，取12只做假去势组，余下去势后检查合格动物用于实验。将去势小鼠随机分为5组，每组12只。假去势组、去势组，均给予生理盐水；Y-CT组（给药剂量0.48g/kg，相当于人临床用量，即1.9g生药/日）；Y-LJ低、中、高剂量组（给药剂量分别为0.06g/kg、0.12g/kg、0.24g/kg，其中中剂量组相当于人临床用量，即1.9g生药/日），于手术后第9天开始给药，每日1次，连续30日，于末次给药后1小时，将小鼠放人XZC-4型小鼠自主活动测定仪中，测定10分钟内的自主活动次数。组间试验数据采用采用t检验进行统计分析。

[0059] 试验结果（见表4）表明，Y-LJ各剂量组能显著降低去势小鼠的自主活动次数（P<0.05、0.01）。Y-CT组与Y-LJ中剂量组相比有显著性差异（P<0.05），表明在相应剂量下（均相当于人临床用量），采用本发明制备的乙肝扶正胶囊在治疗更年期综合征方面的药理活性优于采用传统方法制备者。

[0060] 表4 不同方法制备的乙肝扶正胶囊对去势小鼠自主活动的影响(n=12)[0061]组别 剂量（g/kg） 10min内自主活动次数（次）
去势组 — 388±98.6
假去势组 — 194±77.5**
Y-CT组 0.48 366±87.4△
Y-LJ低剂量组 0.06 363±56.5
Y-LJ中剂量组 0.12 287±88.3*
Y-LJ高剂量组 0.24 225±72.2**

[0062] 与去势组相比，*P＜0.05；**p＜0.01；与Y-LJ中剂量组相比，△P＜0.05。

[0063] 上述研究表明，采用本发明制备的乙肝扶正胶囊，有效成分含量是传统法制备的乙肝扶正胶囊的4.2倍。在服用量减少3/4的情况下，两者在护肝方面的药理活性相当。而前者在抗更年期综合征方面的活性明显优于后者。前者可以在制备治疗更年期综合征药物中应用。

[0064] 为了更好的说明本发明的技术方案，下文将对其具体实施方式做进一步的表述，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。

具体实施方式

[0065] 实施例1

[0066] 取何首乌15g、虎杖25g，粉碎，混合，加入0.5L的70%乙醇, 投入微波萃取装置中进行微波萃取，萃取功率400W，萃取2次，每次4分钟，合并萃取液，浓缩，加到D101大孔吸附树脂柱上，35%乙醇洗脱，收集5倍量柱体积洗脱液，继用60%乙醇洗脱，收集5倍量洗脱液，与上述洗脱液合并，减压回收乙醇，浓缩，干燥，得何虎提取物；取贯众50g、石榴皮6g，粉碎，混合，加入0.5L水，投入微波萃取装置中进行微波萃取，萃取功率500W，萃取2次，每次6分钟，合并萃取液，合并萃取液，浓缩，加到D102大孔吸附树脂柱上，70%乙醇洗脱，收集5倍量柱体积洗脱液，减压回收乙醇，通过201×7型强碱性苯乙烯型阴离子交换树脂吸附，以0.5mol/L的NaOH溶液洗脱，收集洗脱，滤过，通过001×7型强酸性苯乙烯型阳离子交换树脂，收集流出液，滤过，浓缩并干燥，得贯石提取物，备用；取肉桂5g、当归10g、丹参15g、沙苑子10g、人参10g、麻黄6g，加入到CO2超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为3%，萃取压力15MPa，温度50℃, CO2流量1ml/g生药·min，萃取时间120min，得超临界萃取物，备用；取明矾，粉碎，加入上述何虎提取物、贯石提取物、超临界萃取物混合，加入糊精，制粒，灌胶囊，制成250粒，每粒0.25g。

[0067] 经检测，成品中白藜芦醇的含量133.4μg/粒。

[0068] 成品保肝的药理作用见表5。

[0069] 表5对慢性肝损伤大鼠血清生化指标的影响（n=15）

[0070]组别 剂量g/Kg ALT(U·L-1)
空白对照 - 63.7±14.5**
模型对照 - 334.6±213.8
实施例1 0.06 125.3±65.3**

[0071] 与模型对照组相比，*p<0.05、**p<0.01。

[0072] 实施例2

[0073] 取何首乌15g、虎杖25g，粉碎，混合，加入0.5L的70%乙醇, 投入微波萃取装置中进行微波萃取，萃取功率600W，萃取2次，每次8分钟，合并萃取液，浓缩，加到D101大孔吸附树脂柱上，35%乙醇洗脱，收集5倍量柱体积洗脱液，继用60%乙醇洗脱，收集5倍量洗脱液，与上述洗脱液合并，减压回收乙醇，浓缩，干燥，得何虎提取物；取贯众50g、石榴皮6g，粉碎，混合，加入0.5L水，投入微波萃取装置中进行微波萃取，萃取功率500W，萃取2次，每次6分钟，合并萃取液，合并萃取液，浓缩，加到D102大孔吸附树脂柱上，70%乙醇洗脱，收集5倍量柱体积洗脱液，减压回收乙醇，通过201×4型强碱性苯乙烯型阴离子交换树脂吸附，以0.5mol/L的NaOH溶液洗脱，收集洗脱，滤过，通过001×4型强酸性苯乙烯型阳离子交换树脂，收集流出液，滤过，浓缩并干燥，得贯石提取物，备用；取肉桂5g、当归10g、丹参15g、沙苑子10g、人参10g、麻黄6g，加入到CO2超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为5%，萃取压力25MPa，温度70℃, CO2流量3ml/g生药·min，萃取时