一种妇康宁片的制备方法转让专利
申请号 : CN201110381416.9
文献号 : CN102397461B
文献日 : 2013-03-20
发明人 : 王峰 , 王琳 , 张发成
申请人 : 苏州派腾生物医药科技有限公司
摘要 :
本发明涉及一种妇康宁片的制备方法，由下列步骤组成：取白芍，微波萃取，D101大孔吸附树脂纯化，得白芍提取物；取醋艾炭，粉碎成细粉；取益母草，微波萃取，D101大孔吸附树脂纯化，得益母草提取物；取香附、当归、三七、麦冬、党参5味药材，粉碎，CO2超临界萃取，得超临界萃取物；将上述白芍提取物、醋艾炭细粉、益母草提取物、超临界萃取物混合，加入糊精，70%乙醇制颗粒，干燥，加入硬酯酸镁，混匀，压片，包薄膜衣。采用本发明制备的妇康宁片便于服用。
权利要求 :
1.一种妇康宁片的制备方法，由白芍196g、香附30g、当归25g、三七20g、醋艾炭4g、麦冬49g、党参30g、益母草147g作为原料药制成，其特征在于所述的方法由下列步骤组成：取白芍，粉碎，加入1.6L的75%乙醇，投入微波萃取装置中进行微波萃取，萃取功率300-600W，萃取2次，每次3-10分钟，合并萃取液，减压回收乙醇并浓缩，加到D101大孔吸附树脂柱上，50%乙醇洗脱，收集5倍量柱体积洗脱液，减压回收乙醇，浓缩并干燥，得白芍提取物，备用；取醋艾炭，粉碎成细粉，备用；取益母草，粉碎，加入1.5L的pH值2-3的盐酸水溶液, 投入微波萃取装置中进行微波萃取，萃取功率500W，萃取2次，每次5分钟，合并萃取液，浓缩，加到D101大孔吸附树脂柱上，70%乙醇洗脱，收集5倍量柱体积洗脱液，减压回收乙醇，浓缩并干燥，得益母草提取物，备用；取香附、当归、三七、麦冬、党参5味药材，粉碎，加入到CO2超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为1-3%，萃取压力15-25MPa，温度30-50℃, CO2流量1-3ml/g生药·min，萃取时间150-180min，得超临界萃取物，干燥，备用；将上述白芍提取物、醋艾炭细粉、益母草提取物、超临界萃取物混合，加入糊精，70%乙醇制颗粒，干燥，加入硬酯酸镁，混匀，压片，包薄膜衣，制成250片，每片重
0.26g。
2.根据权利要求1所述一种妇康宁片的制备方法，其特征在于所述白芍微波萃取功率
400W，每次萃取6分钟。
3.根据权利要求1所述一种妇康宁片的制备方法，其特征在于所述CO2超临界萃取夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为2%。
4.根据权利要求1所述一种妇康宁片的制备方法，其特征在于所述CO2超临界萃取的萃取压力20MPa，温度40℃, CO2流量2ml/g生药·min，萃取时间160min。
说明书 :
一种妇康宁片的制备方法
技术领域
[0001] 本发明涉及一种药物的制备方法，尤其是一种中药的制备方法。
背景技术
[0002] 妇康宁片是由白芍、香附、当归、三七、醋艾炭、麦冬、党参、益母草作为原料药制成，收载于《中华人民共和国药典》2010版一部。养血理气，活血调经。用于血虚气滞所致的月经不调。
[0003] 现有技术中，尚未有妇康宁片在治疗乳腺增生方面的报道。
[0004] 现有技术中，妇康宁片的制备采用水煎煮的方法，工艺粗糙、落后，杂质多，导致患者日用量过大，不方便服用，严重影响了本品在临床上应用。
发明内容
[0005] 本发明所要解决的问题是提供一种妇康宁片的制备方法，使其安全有效，方便服用。
[0006] 为了解决上述技术问题，本发明提出了下述技术方案。
[0007] 取白芍196g，粉碎，加入1.6L的75%乙醇，投入微波萃取装置中进行微波萃取，萃取功率300-600W，萃取2次，每次3-10分钟，合并萃取液，减压回收乙醇并浓缩，加到D101大孔吸附树脂柱上，50%乙醇洗脱，收集5倍量柱体积洗脱液，减压回收乙醇，浓缩并干燥，得白芍提取物，备用；取醋艾炭4g，粉碎成细粉，备用；取益母草147g，粉碎，加入1.5L的pH值2-3的盐酸水溶液, 投入微波萃取装置中进行微波萃取，萃取功率500W，萃取2次，每次5分钟，合并萃取液，浓缩，加到D101大孔吸附树脂柱上，70%乙醇洗脱，收集5倍量柱体积洗脱液，减压回收乙醇，浓缩并干燥，得益母草提取物，备用；取香附30g、当归25g、三七20g、麦冬49g、党参30g，粉碎，加入到CO2超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为1-3%，萃取压力15-25MPa，温度30-50℃, CO2流量1-3ml/g生药·min，萃取时间150-180min，得超临界萃取物，干燥，备用；将上述白芍提取物、醋艾炭细粉、益母草提取物、超临界萃取物混合，加入糊精，70%乙醇制颗粒，干燥，加入硬酯酸镁，混匀，压片，包薄膜衣，制成250片，每片重0.26g。
[0008] 白芍微波萃取功率400W，每次萃取6分钟。
[0009] CO2超临界萃取夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为2%。
[0010] CO2超临界萃取的萃取压力20MPa，温度40℃, CO2流量2ml/g生药·min，萃取时间160min。
[0011] 采用上述技术方案制备的妇康宁片，其作为制备治疗乳腺增生药物的应用。
[0012] 现有技术中，妇康宁片每次需服用8片（相当于4g药材），而采用本发明制备而成的妇康宁片每次仅需服用2片（相当于4g药材），在调经药理活性相似的情况下大大减少了服用量。此结论可以通过下述试验证明。
[0013] 试验一 不同方法制备的妇康宁片中芍药苷含量的比较。
[0014] 1、仪器及试药
[0015] 妇康宁片（超临界法，以下简称F-LJ，下同）：按实施例3方法制备。
[0016] 妇康宁片（传统法F-CT，下同），按《中华人民共和国药典》2010版一部方法制备，包薄膜衣。
[0017] Agilent 1200高效液相色谱仪；METTLER AE240电子分析天平。
[0018] 芍药苷对照品（中国药品生物制品检定所）。
[0019] 2、方法
[0020] 色谱条件 Kromasi C18色谱柱(4.6mm×200mm，5μm)；乙腈-冰醋酸-水－1(16:0.5:84)流动相；流速1.0mL·min ，检测波长230nm。精密量取对照品溶液、供试品溶液各5μL。
[0021] 溶液的制备 取黄芩苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含70μg的对照品溶液。分别取供品20片，除去包衣，精密称定，研细，精密称取0.5g，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇50ml，密塞，称定重量，超声处理（功率50W，频率50kHz）40分钟，取出，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，取续滤液，即得。
[0022] 3、结果
[0023] 试验结果见表1，结果表明采用本发明制备的妇康宁片中芍药苷的含量(10.1mg/片 )是采用传统法(2.4mg/片)的4.2倍。
[0024] 表1 不同方法制备的妇康宁片中芍药苷的含量
[0025]样品 含量（mg/片）
F-LJ 10.1
F-CT 2.4
F-LJ 10.1
F-CT 2.4
[0026] 试验二 不同方法制备的妇康宁片药效学比较。
[0027] 1、抗痛经作用
[0028] 1.1材料
[0029] 药品 妇康宁片（超临界法，以下简称F-LJ）：按实施例3方法制备。
[0030] 妇康宁片（传统法，简称F-CT），按《中华人民共和国药典》2010版一部方法制备，包薄膜衣。
[0031] 缩宫素注射液，上海禾丰制药有限公司提供；氯氟前列烯醇(PGF2α类似物)，上海市计划生育研究所提供；己烯雌酚注射液，广州明兴制药有限公司提供。
[0032] 动物 昆明种小鼠，SD大鼠。由上海斯莱克实验动物有限公司提供。
[0033] 数据及统计 数据以mean±s表示，用SPSS11.0软件进行分析。记量资料用单因素方差分析进行统计学显著性分析，计数资料用卡方检验。
[0034] 1.2方法与结果
[0035] 1.2.1 抗模型动物痛经的作用
[0036] 抗缩宫素致小鼠痛经 雌性小鼠，随机分为正常对照组；模型对照组、F-CT组（给药剂量0.33g/kg，相当于人临床用量，即12g生药/日）；F-LJ低、中、高剂量组（给药剂量分别为0.05g/kg、0.09g/kg、0.17g/kg，其中中剂量组相当于人临床用量，即12g生药/日），ig-1给药，对照组给予等体积蒸馏水10 ml·kg ,每天1次，连续5 d。除正常对照组外，其他-1
各组每只小鼠从第2天开始sc己烯雌酚，连续4d，剂量依次为0.2，0.1，0.1,0.2 mg·d ,同时正常对照组ip等体积的生理盐水。末次给药或蒸馏水90 min后，正常对照组sc等体-1 -1
积的生理盐水,其余各组小鼠sc缩宫素20 u·kg (10 mL·kg )，观察记录30 min内小鼠扭体次数和扭体抑制百分率。
各组每只小鼠从第2天开始sc己烯雌酚，连续4d，剂量依次为0.2，0.1，0.1,0.2 mg·d ,同时正常对照组ip等体积的生理盐水。末次给药或蒸馏水90 min后，正常对照组sc等体-1 -1
积的生理盐水,其余各组小鼠sc缩宫素20 u·kg (10 mL·kg )，观察记录30 min内小鼠扭体次数和扭体抑制百分率。
[0037] 抗PGF2α致小鼠痛经 雌性小鼠,分组及给药方法同前，末次给药或蒸馏水1 h-1后，除正常对照组外，其他各组小鼠ip PGF2α2 mg·kg ,正常对照组ip等体积的生理盐水，观察记录20 min内小鼠扭体次数和扭体抑制百分率。
[0038] 试验结果（见表2）表明，与模型对照组相比，F-CT组、F-LJ各剂量组能显著减少缩宫素、PGF2α致痛经小鼠的扭体次数（P<0.05、0.01）。F-CT组与F-LJ中剂量组相比无显著性差异（P>0.05），表明在相应剂量下（均相当于人临床用量），两者作用相当。
[0039] 表2 不同方法制备的妇康宁片对痛经模型小鼠的影响（n=12）
[0040]
[0041] 与模型对照组相比，*P<0.05 ，**P<0.01。
[0042] 1.2.2对缩宫素所致大鼠痛经模型的血栓干重的影响 取雌性大鼠，180-120g，随机分为正常对照组；模型对照组；F-CT组（给药剂量0.16g/kg，相当于人临床用量，即12g生药/日）；F-LJ低、中、高剂量组（给药剂量分别为0.02g/kg、0.04g/kg、0.04g/kg，其中中剂量组相当于人临床用量，即12g生药/日）。除正常对照组外，各组从第1天开始ip己烯雌酚，连续10d，第1天和第10天剂量为每只0.4mg，其余天数为每只0.2mg。正常对照组-1sc等体积的生理盐水。第10天开始ig给药，对照组给予等体积蒸馏水10 mL·kg ，每天-1
1次，连续7d。末次给药1 h后，除正常对照组外,各组大鼠ip缩宫素10 u·kg ，正常对照组大鼠ig等体积生理盐水；1h后用25%乌来糖麻醉大鼠，腹主动脉取血，快速将1mL血注入血栓仪的塑胶管，开启血栓仪，10min后将塑胶管取下，取出血栓，滤纸吸干表面血液，称湿重。将血栓置80℃烘箱1 h，恒重后称血栓干重。
1次，连续7d。末次给药1 h后，除正常对照组外,各组大鼠ip缩宫素10 u·kg ，正常对照组大鼠ig等体积生理盐水；1h后用25%乌来糖麻醉大鼠，腹主动脉取血，快速将1mL血注入血栓仪的塑胶管，开启血栓仪，10min后将塑胶管取下，取出血栓，滤纸吸干表面血液，称湿重。将血栓置80℃烘箱1 h，恒重后称血栓干重。
[0043] 试验结果（见表3）表明，与模型对照组相比，F-CT组、F-LJ各剂量组能显著减少模型大鼠的血栓干重（P<0.05、0.01）。F-CT组与F-LJ中剂量组相比无显著性差异（P>0.05），表明在相应剂量下（均相当于人临床用量），两者作用相当。
[0044] 表3不同方法制备的妇康宁片对痛经模型大鼠血栓干重的影响（n=10）[0045]组别 剂量（g/Kg） 血栓干重（mg）
正常对照 — 14.3±10.2**
模型对照 — 36.5±14.7
F-CT 0.16 18.5±11.6**
F-LJ低 0.02 22.3±12.7*
F-LJ中 0.04 18.6±12.1**
F-LJ高 0.08 17.4±13.4**
正常对照 — 14.3±10.2**
模型对照 — 36.5±14.7
F-CT 0.16 18.5±11.6**
F-LJ低 0.02 22.3±12.7*
F-LJ中 0.04 18.6±12.1**
F-LJ高 0.08 17.4±13.4**
[0046] 与模型对照组相比，*P<0.05 ，**P<0.01。
[0047] 2、对雌二醇(E2)诱导的大鼠乳腺小叶增生的影响
[0048] 2.1 试验材料
[0049] 药品 妇康宁片（超临界法，以下简称F-LJ）：按实施例3方法制备。
[0050] 妇康宁片（传统法，简称F-CT），按《中华人民共和国药典》2010版一部方法制备，包薄膜衣。
[0051] 枸橼酸他莫昔芬，苏州第壹制药有限公司；苯甲酸雌二醇(E2)，浙江仙琚制药股份有限公司；雌二醇放射免疫分析药盒，北京北方技术研究所。
[0052] 仪器 GC-1500γ放射免疫计数器，科大创新股份有限公司中佳分公司。
[0053] 动物 SD大鼠。由上海斯莱克实验动物有限公司提供。
[0054] 数据及统计 数据以mean±s表示，用SPSS11.0软件进行分析。记量资料用单因素方差分析进行统计学显著性分析，计数资料用卡方检验。
[0055] 2.2 方法与结果
[0056] 取SD大鼠60只，雌性，体重180-200g，随机分为六组，每组10只：正常对照组、模型组、阳性对照组（枸橼酸他莫昔芬，4.0mg/kg），F-CT组（给药剂量0.16g/kg，相当于人临床用量，即12g生药/日）；F-LJ低、中、高剂量组（给药剂量分别为0.02g/kg、0.04g/kg、0.04g/kg，其中中剂量组相当于人临床用量，即12g生药/日）。除正常对照组外，其余组均隔日肌肉注射苯甲酸雌二醇(E2)0.5mg/kg，连续30天，肌注两周后开始灌胃给予受试药物，正常对照组给予对应体积的生理盐水，肌注E2结束后再给药两周，末次给药次日，取血，
3000rpm 10分钟离心，取血清，放免法测定血清中雌二醇含量。用游标卡尺测量大鼠第二对乳房直径变化，每只大鼠选取最大乳腺组织2个，10％福尔马林固定，常规石蜡包埋，切片，HE染色，由病理专业人员阅片，光镜下观察有无组织病理学改变及病变轻重程度。
3000rpm 10分钟离心，取血清，放免法测定血清中雌二醇含量。用游标卡尺测量大鼠第二对乳房直径变化，每只大鼠选取最大乳腺组织2个，10％福尔马林固定，常规石蜡包埋，切片，HE染色，由病理专业人员阅片，光镜下观察有无组织病理学改变及病变轻重程度。
[0057] 病理诊断标准：
[0058] 乳腺组织根据病理增生状况分为I～IV四级，又分别评分为1分、2分、3分、4分，各级标准如下。I级：(正常乳腺组织)，乳腺小叶不增生(-)，腺泡数量极少，腺泡和导管不扩张，处于静止期状态。II级：轻度增生(+)，乳腺小叶无明显增生，个别腺泡和导管有轻度增生，无扩张。III级：中度增生(++)，乳腺小叶大部分增生，部分腺泡和导管明显扩张。
[0059] IV：明显增生(+++)，乳腺小叶明显增生，腺泡和导管处于极度扩张状态，腺上皮细胞呈扁平状，腺泡内及导管内有大量的分泌物。
[0060] 累计每组动物乳腺评分，并计算出平均数±标准差，分值越高提示增生程度越重。
[0061] 试验结果（见表4）表明，与模型对照组相比，阳性对照组、F-LJ各剂量组能显著减少模型大鼠的小叶增生模型乳头直径、血清E2及乳腺评分（P<0.05、0.01）。F-CT组与F-LJ中剂量组相比有显著性差异（P<0.05），表明在相应剂量下（均相当于人临床用量），采用本发明制备的妇康宁片在抗乳腺增生方面的药理活性优于采用传统方法制备者。
[0062] 表4 本发明中药组合物对E2诱导大鼠乳腺小叶增生模型乳头直径、血清E2及乳腺评分的影响（n=10）
[0063]组别 剂量（g/Kg） 乳头直径 (mm) 雌二醇(pg/ml) 乳腺增生评分
正常对照组 - 0.96±0.25** 36.3±13.9** 1.0±0.0**
模型组 - 1.61±0.31 97.2±22.8 4.3±0.5
阳性对照组 4.0×10-3 1.15±0.27** 55.4±29.2** 2.1±0.3**
F-LJ低 0.02 1.44±0.23 76.2±15.5* 3.2±0.1
F-LJ中 0.04 1.18±0.19* 57.9±27.8** 2.3±0.2*
F-LJ高 0.08 0.97±0.36** 49.5±13.3** 1.7±0.2**
F-CT 0.16 1.42±0.29△ 86.3±24.4△ 4.0±0.4△
正常对照组 - 0.96±0.25** 36.3±13.9** 1.0±0.0**
模型组 - 1.61±0.31 97.2±22.8 4.3±0.5
阳性对照组 4.0×10-3 1.15±0.27** 55.4±29.2** 2.1±0.3**
F-LJ低 0.02 1.44±0.23 76.2±15.5* 3.2±0.1
F-LJ中 0.04 1.18±0.19* 57.9±27.8** 2.3±0.2*
F-LJ高 0.08 0.97±0.36** 49.5±13.3** 1.7±0.2**
F-CT 0.16 1.42±0.29△ 86.3±24.4△ 4.0±0.4△
[0064] 与模型对照组相比，*P<0.05 ，**P<0.01；与F-LJ中剂量组相比，△P<0.05。
[0065] 上述研究表明，采用本发明制备的妇康宁片，有效成分含量是传统法制备的妇康宁片的4.2倍。在服用量减少3/4的情况下，两者在调经方面的药理活性相当。而前者在抗乳腺增生方面的活性明显优于后者。前者可以在制备治疗乳腺增生的药物中应用。
[0066] 为了更好的说明本发明的技术方案，下文将对其具体实施方式做进一步的表述，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。
具体实施方式
[0067] 实施例1
[0068] 取白芍196g，粉碎，加入1.6L的75%乙醇，投入微波萃取装置中进行微波萃取，萃取功率300W，萃取2次，每次3分钟，合并萃取液，减压回收乙醇并浓缩，加到D101大孔吸附树脂柱上，50%乙醇洗脱，收集5倍量柱体积洗脱液，减压回收乙醇，浓缩并干燥，得白芍提取物，备用；取醋艾炭4g，粉碎成细粉，备用；取益母草147g，粉碎，加入1.5L的pH值2-3的盐酸水溶液, 投入微波萃取装置中进行微波萃取，萃取功率500W，萃取2次，每次5分钟，合并萃取液，浓缩，加到D101大孔吸附树脂柱上，70%乙醇洗脱，收集5倍量柱体积洗脱液，减压回收乙醇，浓缩并干燥，得益母草提取物，备用；取香附30g、当归25g、三七20g、麦冬49g、党参30g，粉碎，加入到CO2超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为1%，萃取压力15MPa，温度30℃, CO2流量1ml/g生药·min，萃取时间150-180min，得超临界萃取物，干燥，备用；将上述白芍提取物、醋艾炭细粉、益母草提取物、超临界萃取物混合，加入糊精，70%乙醇制颗粒，干燥，加入硬酯酸镁，混匀，压片，包薄膜衣，制成250片，每片重0.26g。
[0069] 经检测，成品中芍药苷的含量9.3mg/片。
[0070] 成品抗痛经的药理作用见表5。
[0071] 表5 对缩宫素致小鼠痛经的影响 (n=12)
[0072]
[0073] 与模型对照组比较：*P<0.05 ，**P<0.01。
[0074] 实施例2
[0075] 取白芍196g，粉碎，加入1.6L的75%乙醇，投入微波萃取装置中进行微波萃取，萃取功率600W，萃取2次，每次10分钟，合并萃取液，减压回收乙醇并浓缩，加到D101大孔吸附树脂柱上，50%乙醇洗脱，收集5倍量柱体积洗脱液，减压回收乙醇，浓缩并干燥，得白芍