一种去甲异波尔定单体的分离纯化方法

摘要

本发明涉及一种植物化合物单体的制备方法，具体涉及从乌药的块根中提取分离去甲异波尔定单体的方法，属于中药活性成分的分离纯化技术领域。以乌药为原料通过提取、萃取、结晶得到去甲异波尔定单体，具体包括下述主要步骤：A提取：将乌药粉碎成粗粉，以乙醇回流提取得浓浸膏；B萃取：浓浸膏以氯仿萃取得去甲异波尔定粗品；C结晶：用有机溶剂溶剂粗品，经过滤、干燥后得到纯度≥98%的去甲异波尔定单体产品。本发明的整个工艺过程操作简便、工艺稳定、成本低廉，适合工业化生产，且分离效率高、产品纯度高，即可大量实现去甲异波尔定单体的高纯度分离制备。

权利要求

1.一种去甲异波尔定单体的分离纯化方法，其特征在于：以乌药为原料通过提取、萃取、结晶得到去甲异波尔定单体，具体包括下述主要步骤：A、提取：

将乌药粉碎成粗粉，加入质量百分比浓度为95%的乙醇溶液，其加入量按照药材重量:乙醇溶液体积=1Kg:（8-12）L计算，回流提取3-5次，每次1.5-3小时，提取液过滤，合并过滤液，浓缩回收乙醇，得50℃下相对密度为1.20-1.40的浓浸膏待进行下一步萃取处理；

B、萃取：

将步骤A所得的浓浸膏加浓度为3%稀盐酸溶解，并调pH2-4，滤出酸水液，用氯仿萃取

3-5次，除去氯仿液，酸水液用浓氨水调pH至8-10，用氯仿萃取4-6次，合并氯仿萃取液，回收滤液至干，得黄色的去甲异波尔定粗品；

C、结晶：

按照黄色固体物:甲醇=1g:（10-1000）ml 计算，将步骤B得到的去甲异波尔定粗品用甲醇溶解完全后用纳米有机膜过滤，滤液加入2-5倍量体积的蒸馏水冷藏结晶，根据晶体具体纯度，重复结晶2～3次，直至纯度≥98%，于100℃干燥后即可得到去甲异波尔定单体产品。

2.如权利要求1所述去甲异波尔定单体的分离纯化方法，其特征在于：步骤B所述氯仿与酸水液的体积比为1：1。

说明书

一种去甲异波尔定单体的分离纯化方法

技术领域

[0001] 本发明涉及一种植物化合物单体的制备方法，具体涉及从乌药的块根中提取分离去甲异波尔定单体的方法，属于中药活性成分的分离纯化技术领域。

背景技术

[0002] 去甲异波尔定其化学名为1,9-二羟基-2,10-二甲氧基海罂粟碱，英文名Laurelliptine，Norisoboldine，分子式为C18H19NO4，分子量为313.35，结构式如下：

[0003]

[0004] 乌药作为传统常用中药，是一种重要的温胃理气止痛药之一。现代药理研究表明乌药具有广泛的药理活性，如乌药能增强消化液的分泌，还能对抗临床应用大黄引起的腹疼，有兴奋和增强运动节律作用，可以显著抑制溃疡的形成，明显对抗乙醇诱发的细胞损伤，具有细胞保护作用。近来又发现乌药具有较强的镇痛、抗炎作用和显著的抗风湿作用。

[0005] 《中国药典》2005年版一部中乌药的薄层鉴别和含量测定的指标成分都是乌药醚内酯。乌药醚内酯为倍半萜成分，是乌药的特征性成分，专属性强，作为乌药的真伪鉴别指标较为适宜。但乌药醚内酯为脂溶性成分，在水煎液中的煎出率较低，且含量也较低，作为含量测定的指标不是最佳的选择。乌药含有多种异喹啉类生物碱，且具有良好的生物活性，试验表明乌药总碱具有抗风湿关节炎的活性，口服给药能显著抑制大鼠佐剂关节炎、小鼠胶原关节炎，并能显著抑制Con A（刀豆蛋白A）引起的小鼠脾淋巴细胞增殖，LPS（脂多糖）所致小鼠腹腔巨噬细胞释放NO（一氧化氮）和IL-1（白细胞介素-1），而去甲异波尔定是其中主要成分。因此，从原植物中分离得到该化合物，对质量控制指标、阐明其药理作用以及为新药开发寻找先导化合物具有重要的意义。

发明内容

[0006] 本发明的目的是提供一种从中草药樟科山胡椒属乌药的干燥块根中提取、快速分离活性成分高纯度去甲异波尔定（Norisoboldine）的方法。

[0007] 为实现上述发明目的，本发明采用的具体技术方案如下：

[0008] 一种去甲异波尔定单体的分离纯化方法，其特征在于：以乌药为原料通过提取、萃取、结晶得到去甲异波尔定单体，具体包括下述主要步骤：

[0009] A、提取：

[0010] 将乌药粉碎成粗粉，加入质量百分比浓度为95%的乙醇溶液，其加入量按照药材重量:乙醇溶液体积=1Kg:（8-12）L计算，回流提取3-5次，每次1.5-3小时，提取液过滤，合并过滤液，浓缩回收乙醇，得50℃下相对密度为1.20-1.40的浓浸膏待进行下一步萃取处理；

[0011] B、萃取：

[0012] 将步骤A所得的浓浸膏加质量百分比浓度为3-4%的稀盐酸溶解，并调pH2-4，滤出酸水液，用氯仿萃取3-5次，除去氯仿液，酸水液用浓氨水调pH至8-10，再用氯仿萃取4-6次，合并氯仿萃取液，回收滤液至干，得黄色的去甲异波尔定粗品；

[0013] C、结晶：

[0014] 按照黄色固体物:甲醇=1g:（10-1000）ml 计算，将步骤B得到的去甲异波尔定粗品用甲醇、乙醇或丙酮完全溶解，溶解完全后用纳米有机膜过滤，滤液加入2-5倍量体积的蒸馏水冷藏结晶，根据晶体具体纯度，重复结晶2～3次，直至纯度≥98%，于100℃干燥后即可得到去甲异波尔定单体产品。

[0015] 所述氯仿与酸水液的体积比为1：1。

附图说明

[0016] 图1是本发明实施例1去甲异波尔定单体产品的HPLC图谱。

具体实施方式

[0017] 下面结合具体实施方式对本发明作进一步的详细描述。

[0018] 但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于下述实施例。

[0019] 下述各实施例中，终产品去甲异波尔定单体的纯度复检均采用反相分析型液相色谱（RP-HPLC）法，色谱条件如下：

[0020] 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈:水（0.5%甲酸、0.1%三乙胺）（1:85）为流动相；柱温30℃；流速1.0ml/min；检测波长为280 nm。

[0021] 实施例1

[0022] 一种去甲异波尔定单体的分离纯化方法，以乌药（樟科山胡椒属乌药Lindera aggregata (Sims) Kosterm的干燥块根）为原料通过提取、萃取、结晶得到去甲异波尔定单体，具体包括下述主要步骤：

[0023] A、提取：

[0024] 将乌药200g粉碎成粗粉，加入质量百分比浓度为95%的乙醇溶液1.6L，回流提取3次，每次1.5小时，将提取液过滤，合并过滤液，减压浓缩回收乙醇，得浓浸膏相对密度为
1.22（50℃）。

[0025] B、萃取：

[0026] 将步骤A所得浓浸膏加浓度为3%稀盐酸溶解，并调节溶液的pH为2，滤出酸水液，每次用2L氯仿萃取3次，除去氯仿液，酸水液用浓氨水调pH至8，用氯仿萃取4次，每次2L，合并氯仿萃取液，回收滤液至干，得黄色的去甲异波尔定粗品4.5g。

[0027] C、结晶：

[0028] 将步骤B得到的黄色固体用55ml甲醇完全溶解，溶解完全后用纳米有机膜过滤，滤液加入20ml蒸馏水冷藏结晶，重复结晶2次，在100℃干燥得到去甲异波尔定2.2g，纯度>98%。

[0029] 实施例2

[0030] 一种去甲异波尔定单体的分离纯化方法，以乌药（樟科山胡椒属乌药Lindera aggregata (Sims) Kosterm的干燥块根）为原料通过提取、萃取、结晶得到去甲异波尔定单体，具体包括下述主要步骤：

[0031] A、提取：

[0032] 将乌药200g粉碎成粗粉，加入质量百分比浓度为95%的乙醇溶液2L，回流提取4次，每次2小时，将提取液过滤，合并过滤液，减压浓缩回收乙醇，得浓浸膏相对密度为1.35（50℃）。

[0033] B、萃取：

[0034] 将步骤A所得浓浸膏加4%稀盐酸溶解，并调溶液的pH为3，滤出酸水液，每次用2L氯仿萃取4次，除去氯仿液，酸水液用浓氨水调pH至9，用氯仿萃取5次，每次2L;合并氯仿萃取液，回收滤液至干，得黄色的去甲异波尔定粗品4.8g。

[0035] C、结晶：

[0036] 将步骤B得到的黄色固体用90ml乙醇溶解，溶解完全后用纳米有机膜过滤，滤液加入30ml蒸馏水冷藏结晶，重复结晶3次，在100℃干燥得到去甲异波尔定2.3g，纯度>98%。

[0037] 实施例3

[0038] 一种去甲异波尔定单体的分离纯化方法，以乌药（樟科山胡椒属乌药Lindera aggregata (Sims) Kosterm的干燥块根）为原料通过提取、萃取、结晶得到去甲异波尔定单体，具体包括下述主要步骤：

[0039] A、提取：

[0040] 将乌药200g粉碎成粗粉，加入质量百分比浓度为95%的乙醇溶液2L，回流提取4次，每次3小时，将提取液过滤，合并过滤液，减压浓缩回收乙醇，得浓浸膏相对密度为1.38（50℃）。

[0041] B、萃取：

[0042] 将步骤A所得相对密度为1.38的浓浸膏加5%稀盐酸溶解，并调溶液的pH为4，滤出酸水液，用氯仿萃取4次，每次2L除去氯仿液，酸水液用浓氨水调pH至10，用氯仿萃取5次，每次2L;合并氯仿萃取液，回收滤液至干，得黄色的去甲异波尔定粗品5.1g。

[0043] C、结晶：

[0044] 将步骤B得到的黄色固体用500ml丙酮溶解，溶解完全后用纳米有机膜过滤，滤液加入35ml蒸馏水冷藏结晶，重复结晶4次，在100℃干燥得到去甲异波尔定1.8g，纯度>98%。