极细链格孢激活蛋白-井冈霉素可湿性粉剂及应用

摘要

本发明涉及农药技术领域，旨在提供一种用于防治水稻稻瘟病、稻曲病、病毒病和纹枯病，以及烟草病毒病等作物病害的有效药剂，即一种极细链格孢激活蛋白-井冈霉素可湿性粉剂及应用，该药剂组份中，极细链格孢激活蛋白与所述井冈霉素的质量比为3：1~5，最佳比在3：4。本发明还涉及到这种药剂在对付水稻条纹叶枯病毒病和烟草花叶病毒病时的有效应用，通过各项试验结果表明，本发明药剂能最大限度地发挥二者各自的药效，降低了水稻或烟草病害的发生程度，特别是解决了水稻条纹叶枯病和烟草花叶病毒病在目前无药可冶的技术问题；并且，本发明属纯生物农药，因此对作物、环境都很安全，没有残留，环保，其生产成本也低，推广范围很大。

权利要求

1.一种极细链格孢激活蛋白-井冈霉素可湿性粉剂，其组份包括极细链格孢激活蛋白和井冈霉素，其特征在于，所述极细链格孢激活蛋白与所述井冈霉素的质量比为3：1~5。

2.根据权利要求1所述极细链格孢激活蛋白-井冈霉素可湿性粉剂，其特征在于，所述极细链格孢激活蛋白与所述井冈霉素的质量比为3：4。

3.根据权利要求2所述极细链格孢激活蛋白-井冈霉素可湿性粉剂，其特征在于，所述极细链格孢激活蛋白的质量百分数为3%；所述井冈霉素的质量百分数为4%。

4.根据权利要求2所述极细链格孢激活蛋白-井冈霉素可湿性粉剂，其特征在于，所述极细链格孢激活蛋白的质量百分数为6%；所述井冈霉素的质量百分数为8%。

5.根据权利要求3或4所述极细链格孢激活蛋白-井冈霉素可湿性粉剂，其特征在于，还包括质量百分数23%的胶原蛋白和复合氨基酸、10%的乙二胺四乙酸二钠、0.5%的硫代硫酸钠、6.5%的磷酸氢二钠、1%的磷酸二氢钠，其余为300目细度硅藻土。

6.一种极细链格孢激活蛋白-井冈霉素可湿性粉剂在水稻条纹叶枯病毒病中的防冶应用，其特征在于，所述极细链格孢激活蛋白与所述井冈霉素的质量比为3：1~5。

7.根据权利要求6所述的防冶应用，其特征在于，在水稻上的喷施量为15-20g/亩。

8.一种极细链格孢激活蛋白-井冈霉素可湿性粉剂在烟草花叶病毒病中的防冶应用，其特征在于，所述极细链格孢激活蛋白与所述井冈霉素的质量比为3：1~5。

9.根据权利要求8所述的防冶应用，其特征在于，在烟草上为稀释800-1000倍液喷雾施用。

说明书

极细链格孢激活蛋白-井冈霉素可湿性粉剂及应用

技术领域

[0001] 本发明涉及农药技术领域，具体地说，是一种用于防治水稻稻瘟病、稻曲病、病毒病和纹枯病，以及烟草病毒病等作物病害的有效药剂，即一种极细链格孢激活蛋白-井冈霉素可湿性粉剂；本发明还涉及这种药剂在对付水稻条纹叶枯病毒病和烟草花叶病毒病时的有效应用。

背景技术

[0002] 众所周知，世界范围内，植物病毒病和系统性病害是“植物的癌症”。致使粮食、油料、蔬菜、果树、花卉等作物产量和品质大幅下降，损失之大难以计算。

[0003] 我国也是重灾区，农作物每年因此欠收20-30%。水稻作为我国重要的粮食作物，烟草是我国重要的经济作物，二者均由于病害常年造成了产量损失巨大。比如水稻纹枯病，长江以南稻区发生最为严重，危害水稻叶片、叶鞘从而使得叶片提早黄化枯死，水稻功能叶片受害后，水稻不能正常抽穗，导致结实率和千粒重下降，从而影响水稻产量。水稻纹枯病在整个水稻生育期内均可发病，在长江流域以7~9月份发病最为严重。现阶段主要是应用井冈霉素、三唑酮、禾穗宁、稻丰灵等在发病前或发病初期喷雾防冶。但单用这类杀菌剂在防冶水稻纹枯病时的共同缺陷是防冶效果不好，也不太稳定。由于水稻纹枯病在水稻分蘖期至抽穗成熟期只要温度、湿度适宜均可发生，发生期长，而防冶药剂的防治效果也不太理想，这样就需要多次加量地喷药，以维持对水稻纹枯病的控制效果，一方面增加生产成本，另一方面也对农作物质量和生态环境都构成不良影响。

[0004] 在水稻上的另一种重要病害是水稻条纹叶枯病，俗称水稻上的癌症，通常是由灰飞虱为媒介传播的病毒病。该病害造成病株常枯孕穗或穗小畸形不实，拔节后发病在剑叶下部出现黄绿色条纹，各类型稻均不枯心，但抽穗畸形，结实很少，一般地区发病率均在
5%~10%，损失产量3%~5%，早发、得发均可致大幅度减产，个别田块甚至是绝收改种。对于这种水稻条纹叶枯病的水稻病害，目前还没有找到有效的冶疗药剂，只能坚持“预防为主，综合防治”的植保方针，采取“切断毒源，治虫防病”的防治策略，即通过人工狠治灰飞虱来达到一种防冶效果。

[0005] 而在烟草上，烟草花叶病毒病（Tobacco mosaic virus，TMV）可以说是烟草的“癌症”， 由1886年首次由荷兰鉴定，属世界性病害。在我国各产烟省（区）发生普遍，以云南烟区发生较为普遍，是烟叶生产过程中最常见的病害，一旦发生无法治愈，且有大面积扩散的趋势，只有通过药剂防治或销毁病株遏制其扩散。得病的叶片短小或有病斑，失去烘烤价值，严重影响烟叶质量和产量。而且，烟草花叶病毒能浸染30个科的植物，寄主植物十分广泛。除烟草外，还危害番茄、辣椒、野生茄科植物。目前防冶烟草花叶病毒病没有特效药，最有效的防治方法还是使作物远离毒源，因为烟株一旦发病，难以治疗，所以防治主要还是以预防为主，从侵染途径入手，进行综合防治。

[0006] 目前在生产上防治作物病害的主要措施还是应用化学农药来进行控制。化学农药虽然具有效率高，见效快、实施简易等特点，但长期使用化学农药可能带来环境的污染，化学农药使用过多还会造成粮食食用不安全。我国每年有180万吨用量的农药，对生态造成的破坏早以触目惊心，而化肥对土壤和环境所造成的危害，也是农业生产与地球环境关系中亟待解决的一大难题。

[0007] 因此，运用生物农药防治水稻病害及烟草花叶病毒病对于安全生产会具有非常重要的意义。植物激活蛋白（极细链格孢激活蛋白）主要是通过提高植物自身的免疫系统而激活作物对于病害的抗性，比如水稻对于稻曲病、稻瘟病、病毒病、纹枯病等病害的抗性，烟草对于烟草花叶病毒病的抗性；井冈霉素则是一类开发较早的抗生素，属低毒杀菌剂，剂型有5%、10% 水剂和5%、20%、28%水溶性粉剂。其是一种放线菌产生的抗生素，具有较强的内吸性，易被菌体细胞吸收并在其内迅速传导，其能通过进入植物体内对感染植物的菌类进行抑制而达到杀菌的效果。但缺点是持效期较短，一般在10~15天之间。

[0008] 鉴于二者对作物病害的防治机理不同，极细链格孢激活蛋白主要是诱导作物对病害的抗性，一般多用在白菜等蔬菜类作物上，主要是作为生长调节剂起促进生长和提高产量的作用；而井冈霉素则是通过进入作物的体内进行杀菌，现阶段没有进行过二者的混配研究及应用。

发明内容

[0009] 本发明的目的是为了克服现有技术中的不足，提供一种新的生物型药剂，即一种极细链格孢激活蛋白-井冈霉素可湿性粉剂，可有效地防冶水稻、烟草等作物病害，而且节约成本；本发明还揭示了这种新药剂在水稻条纹叶枯病毒病及烟草花叶病毒病中的新应用，攻克了以往这二类病害目前无药可冶的技术难题。

[0010] 为了实现本发明的目的，本发明的技术方案如下：

[0011] 一种极细链格孢激活蛋白-井冈霉素可湿性粉剂，其组份包括极细链格孢激活蛋白和井冈霉素，所述极细链格孢激活蛋白与所述井冈霉素的质量比为3：1~5。

[0012] 作为本发明的更进一步，所述极细链格孢激活蛋白与所述井冈霉素的质量比为3：4。

[0013] 作为本发明的更进一步，所述极细链格孢激活蛋白的质量百分数为3%；所述井冈霉素的质量百分数为4%。

[0014] 作为本发明的更进一步，所述极细链格孢激活蛋白的质量百分数为6%；所述井冈霉素的质量百分数为8%。

[0015] 作为本发明的更进一步，还包括质量百分数23%的胶原蛋白和复合氨基酸、10%的乙二胺四乙酸二钠、0.5%的硫代硫酸钠、6.5%的磷酸氢二钠、1%的磷酸二氢钠，其余为加至100%后的300目细度硅藻土。

[0016] 本发明还公开了这种极细链格孢激活蛋白-井冈霉素可湿性粉剂在水稻条纹叶枯病毒病和烟草花叶病毒病中的防冶应用。具体为：在水稻上的喷施量为15-20g/亩；在烟草上为稀释800-1000倍液喷雾施用。

[0017] 本发明对极细链格孢激活蛋白和井冈霉素二者混配后的各项试验结果表明，可以最大限度地发挥二者各自的药效，降低了水稻或烟草病害的发生程度，特别是解决了水稻条纹叶枯病和烟草花叶病毒病在目前无药可冶的技术问题。并且，本发明属纯生物农药，因此对作物、环境都很安全，没有残留，环保，其生产成本也低，推广范围很大。

[0018] 具体实施方式：

[0019] 本发明的极细链格孢激活蛋白-井冈霉素可湿性粉剂，一般采用3%极细链格孢激活蛋白和60%井冈霉素原药组配而成，其中极细链格孢激活蛋白与井冈霉素的质量比在3：1~5，最佳质量比是3：4，各有效成分的理化性质为：

[0020] 1、极细链格孢激活蛋白：

[0021] ISO通用名：Activator protein

[0022] 化学名称：极细链格孢激活蛋白

[0023] 分子式： C963H1564O342N280S3

[0024] 相对分子量：22590（2005年相对原子量标准）

[0025] 生物活性：杀菌

[0026] 理化性质：外观为组成均匀的疏松粉末，不应有团块。

[0027] 2、井冈霉素：

[0028] ISO通用名：Jing gang mycin

[0029] 化学名称：N-[（1S）-（1,4,6/5）-3-羟甲基-4,5,6-三羟基-2-环乙烯基][0-β-D-吡喃葡萄糖基-（1→3）]-1S-（1,2,4/3,5）-2,3,4-三羟基-5-羟甲基环己基
胺。

[0030] 结构式：

[0031]

[0032] 分子式： C20H35O13N

[0033] 相对分子量：497.5

[0034] 生物活性：杀菌

[0035] 理化性质：是由水链霉素井冈变种产生的水溶性抗生素—葡萄糖苷类化合物，共有6个组分，主要活性物质为井冈霉素A和B。纯品为无色无味吸湿粉末；熔点：130-135℃（分解）；蒸汽压：室温下不计；溶解度：很快溶于水，溶于甲醇，二甲醛甲酸胺，二甲基亚砜，微溶于乙酸和丙酮，难溶于乙醚和乙酸乙酯，室温下中性和碱性介质中稳定，酸性介质中不太稳定，PKb8.0。

[0036] 本发明的极细链格孢激活蛋白-井冈霉素可湿性粉剂，可以制成如下表中配方的6种药剂产品（各组份配比均为质量百分比）：

[0037]成分名称 药剂1 药剂2 药剂3 药剂4 药剂5 药剂6
极细链格孢激活蛋白 3% 3% 3% 3% 3% 6%
井冈霉素 1% 2% 3% 4% 5% 8%
胶原蛋白和复合氨基酸 23% 23% 23% 23% 23% 23%
乙二胺四乙酸二钠 10% 10% 10% 10% 10% 10%
硫代硫酸钠 0.50% 0.50% 0.50% 0.50% 0.50% 0.50%
磷酸氢二钠 6.50% 6.50% 6.50% 6.50% 6.50% 6.50%
磷酸二氢钠 1% 1% 1% 1% 1% 1%
300目细度硅藻土 加至100% 加至100% 加至100% 加至100% 加至100% 加至100%

[0038] 其中，本发明的最佳实施方案是药剂4，又称作“7%极细链格孢激活蛋白-井冈霉素可湿性粉剂”；之所以将极细链格孢激活蛋白和井冈霉素的总含量定在7%，其包装后的产品优点是：

[0039] 1、农户使用方便，包装合理，适合大生产；

[0040] 2、方便销售，合理定价。

[0041] 下面针对药剂4的加工分析过程作进一步的说明：

[0042] 1、加工方法：

[0043] 先将符合加工要求的极细链格孢激活蛋白母粉、井冈霉素原药、助剂、填料按比例进行混合，然后经气流粉碎机粉碎，直至符合标准要求的细度，再混合成品直至标准的要求，最后经检验合格后包装成品。

[0044] 检测外观指标是：组成均匀的疏松粉末，不应有团块。

[0045] 其它检测的具体技术指标见下表：

[0046]检测项目 指标
极细链格孢激活蛋白质量分数，% 3.0±0.3
井冈霉素质量分数，% 4.0±0.4
水分，％ ≤ 4.0
pH值 6.5~8.0润湿时间，s ≤ 120
植物激活蛋白悬浮率，% ≥ 　 75细度（通过44μm试验筛），% ≥ 95热贮稳定性 合格

[0047] 2、分析方法：

[0048] 对极细链格孢激活蛋白：采用电泳方法，具体为：样品离心后，取上清液与已知质量分数的标样一起进行变性电泳（SDS-PAGE），然后在凝胶成像仪中根据蛋白条带面积和着色深浅得出样品中目的条带与标样蛋白条带植物激活蛋白含量比值，根据标样的质量计算样品中的植物激活蛋白的质量分数。

[0049] 对井冈霉素：采用液谱法。

[0050] 为了更进一步说明本发明的研究效果，发明人委托中国农业科学院植物保护研究药物工程研究室，为本发明分别针对水稻和烟草作物作出了室内生物活性测定的试验报告，具体过程如下：

[0051] 一、供试药剂

[0052] 3%极细链格孢激活蛋白：由丰汇华农（北京）生物科技股份有限公司提供（登记证号：LS20091262）；

[0053] 60%井冈霉素原药：由浙江桐庐汇丰生物化工有限公司提供（3%、5%井冈霉素可溶粉的登记证号：PD85132）；

[0054] 上述3%（质量比）极细链格孢激活蛋白与60%（质量比）井冈霉素原药，分别按质量比3：1、 3：2、 3：3、 3：4、 3：5称取后均匀混合，作为5种代表性的配比药剂。

[0055] 二、试验方法

[0056] 参照杀菌剂农药室内生物测定实验准则（农业行业标准NY/T1156.14-2008）和创制生物农药活性评价SOP（杀菌剂卷），均采用喷雾法。

[0057] 1、试验水稻幼苗用清毒土培育至2叶1心的水稻幼苗（长约3-4cm）；

[0058] 2、试验烟草幼苗用清毒土培育至3-4叶的烟草幼苗（长约6-8cm）；

[0059] 上述1、2分别用混合药剂进行喷雾处理，以清水为对照，和3%极细链格孢激活蛋白和60%井冈霉素单剂处理进行对比。喷药处理后3-5天，水稻分别接种稻瘟病、纹枯病和条纹叶枯病病毒，每处理3个重复；烟草分别接种烟草花叶病毒，每处理3个重复。

[0060] 三、数据统计分析

[0061] 上述5种配比药剂，均按设计要求进行试验，均采用均匀喷雾施药的方法。喷药使用器械均为1000ml手动喷雾器，

[0062] 1、 在施药后3天接种水稻病害病菌，接种后12天分别调查各个防治病害的效果；

[0063] 2、 在施药后5天接种烟草花叶病毒，接种后10天分别调查各个防治病害的效果；

[0064] 实测（混用）毒力指数（ATI）= 100

[0065] 理论混用毒力指数（TTI）=A的毒力指数 A在混用中的含量（%）+B的毒力指数B在混用中的含量（%）

[0066] 共毒系数（CTC）=

[0067] 共毒系数若大于120，表明有增效作用；若小于80，表明为拮抗作用；若大于80小于120，表明为相加作用。

[0068] 四、结果与分析

[0069] 1、对水稻纹枯病作用的测定结果

[0070] 单剂生物活性测定结果表明，3%极细链格孢激活蛋白对纹枯菌的防效达到35.0% ~ 38.5%，60%井冈霉素单剂对纹枯菌的防效达到62.50% ~ 68.0%。设定的五个配比生物活性测定结果见下表：

[0071]处理 处理一 处理二 处理三
3%极细链格孢激活蛋白 36.0% 38.5% 35.0%
60%井冈霉素 62.0% 68.0% 65.0%
配比3：5 79.0% 81.0% 82.5%
配比3：4 86.0% 79.5% 80.2%
配比3：3 66.0% 70.0% 68.0%
配比3：2 46.0% 45.0% 42.0%
配比3：1 38.0% 43.0% 40.0%
CK 0.0% 0.0% 0.0%

[0072] 毒力指数和共毒系数的分析结果见下表：

[0073]药剂（配比） 3%极细链格孢激活蛋白/60%井冈霉素（M/M） LD50 实测毒指 理论毒指 共毒系数 结论
3%极细链格孢激活蛋白 1/0 30.56 93.62 - - -
60%井冈霉素 0/1 65.12 21.85 - - -
配比1 3/5 41.66 76.51 60.64 126.17 增效
配比2 3/4 21.35 106.53 76.33 139.57 增效
配比3 3/3 18.44 109.40 79.12 138.27 增效
配比4 3/2 16.28 112.62 83.65 134.63 增效
配比5 3/1 14.76 114.21 84.32 135.45 增效

[0074] 2、对水稻条纹叶枯病毒病作用的测定结果

[0075] 单剂生物活性测定结果表明，3%极细链格孢激活蛋白对水稻条纹叶枯病毒病的防效达到58.0% ~ 65.0%，60%井冈霉素单剂对病毒病的防效达到32.0% ~ 36.0%。设定的五个配比生物活性测定结果见下表：

[0076]处理 处理一 处理二 处理三
3%极细链格孢激活蛋白 58.0% 62.0% 65.0%
60%井冈霉素 32.0% 35.0% 36.0%
配比3：5 76.0% 72.0% 75.0%
配比3：4 75.0% 79.0% 72.0%
配比3：3 70.0% 68.0% 69.0%
配比3：2 66.0% 65.0% 62.0%
配比3：1 64.0% 63.0% 56.0%
CK 0.0% 0.0% 0.0%

[0077] 毒力指数和共毒系数的分析结果见下表：

[0078]药剂（配比） 3%极细链格孢激活蛋白/60%井冈霉素（M/M） LD50 实测毒指 理论毒指 共毒系数 结论
3%极细链格孢激活蛋白 1/0 31.32 93.62 - - -
60%井冈霉素 0/1 52.12 66.65 - - -
配比1 3/5 43.67 76.51 63.43 120.62 增效
配比2 3/4 23.35 107.47 79.27 135.57 增效
配比3 3/3 18.44 108.97 81.02 134.50 增效
配比4 3/2 16.28 110.34 82.61 133.57 增效
配比5 3/1 14.76 113.65 84.49 134.51 增效

[0079] 3、对水稻稻瘟病作用的测定结果

[0080] 单剂生物活性测定结果表明，3%极细链格孢激活蛋白对稻瘟病的防效达到46.0% ~ 52.0%，60%井冈霉素单剂对稻瘟病的防效达到40.0% ~ 42.0%。设定的五个配比生物活性测定结果见下表：

[0081]处理 处理一 处理二 处理三
3%极细链格孢激活蛋白 46.0% 52.0% 50.0%
60%井冈霉素 40.0% 42.0% 40.0%
配比3：5 72.0% 78.0% 76.0%
配比3：4 76.0% 79.0% 78.0%
配比3：3 70.0% 67.0% 69.0%
配比3：2 56.0% 55.0% 55.0%
配比3：1 44.0% 50.0% 46.0%
CK 0.0% 0.0% 0.0%

[0082] 毒力指数和共毒系数的分析结果见下表：

[0083]药剂（配比） 3%极细链格孢激活蛋白/60%井冈霉素（M/M） LD50 实测毒指 理论毒指 共毒系数 结论
3%极细链格孢激活蛋白 1/0 32.56 96.62 - - -
60%井冈霉素 0/1 55.16 19.67 - - -
配比1 3/5 46.57 76.51 60.64 126.17 增效
配比2 3/4 22.09 109.33 76.33 143.23 增效
配比3 3/3 19.23 112.10 79.12 141.68 增效
配比4 3/2 17.14 113.72 83.65 135.95 增效
配比5 3/1 15.22 115.11 84.32 136.52 增效
~ 60.0%，60%井冈霉素单剂对稻瘟病的防效达到30.0% ~ 35.0%。设定的五个配比生物活性测定结果见下表：

[0086]处理 处理一 处理二 处理三
3%激活蛋白 50.0% 60.0% 56.0%
60%井冈霉素 30.0% 32.0% 35.0%
配比3:5 71.0% 76.0% 73.0%
配比3:4 74.0% 75.0% 72.0%
配比3:3 63.0% 66.0% 65.0%
配比3:2 56.0% 58.0% 55.0%
配比3:1 54.0% 51.0% 56.0%
CK 0.0% 0.0% 0.0%

[0087] 毒力指数和共毒系数的分析结果见下表：

[0088]药剂（配比） 3%激活蛋白/60%井冈霉素（M/M） LD 实测毒指 理论毒指 共毒系数 结论
3%激活蛋白 1/0 59.64 93.62 - - -
60%井冈霉素 0/1 76.13 24.93 - - -
配比1 3/5 39.36 79.67 65.64 121.37 增效
配比2 3/4 24.65 104.56 66.33 157.64 增效
配比3 3/3 17.44 110.21 79.12 139.29 增效
配比4 3/2 15.89 113.52 83.65 135.71 增效
配比5 3/1 12.37 125.21 97.67 128.20 增效

[0089] 五、结论

[0090] 经3%极细链格孢激活蛋白和60%井冈霉素不同配比对水稻纹枯病、水稻条纹叶枯病毒病、水稻稻瘟病以及烟草花叶病毒病的室内联合测定，结果显示3%极细链格孢激活蛋白和60%井冈霉素质量比为3：1、 3：2、 3：3、 3：4、 3：5时，均表现为增效作用，其中配比为3：4时增效作用性价比最好。

[0091] 通过第2组试验（水稻条纹叶枯病毒病）的作用测定结果表明，极细链格孢激活蛋白和井冈霉素混合使用后，可以产生对水稻条纹叶枯病毒病良好的冶疗效果，普遍防效在56%以上，最高至79%，解决以往没有药物有效防冶该病害的难题。

[0092] 通过第4组试验（烟草花叶病毒病）的作用测定结果表明，极细链格孢激活蛋白和井冈霉素混合使用后，可以产生对烟草花叶病毒病良好的冶疗效果，普遍防效在51%以上，最高至76%，解决以往没有药物有效防冶该病害的难题。

[0093] 发明人委托的中国农科院植物保护所，对试验作物云烟87所作的烟草试验总结如下：

[0094] 1、抑制枯癍：“免疫激活增产蛋白”对大田烟草花叶病毒枯癍抑制率为65.12%-70.18%。