本发明提供了一种微生物发酵饲料的制备方法，其特征在于，包括：将植物乳杆菌菌种和酪酸梭菌菌种经过活化、第一次液体发酵培养、第二次液体发酵培养以及固体发酵培养后，将所得的植物乳杆菌固体发酵培养物和酪酸梭菌固体发酵培养物冷冻干燥，并混合得到微生物发酵饲料。本发明具有很好的生物学功能，能够维持肠道微生态平衡作用，改善肠道菌群，抗突变作用，对猪的生长速度有很大的提高，有效降低了猪的腹泻率及幼猪的死亡率，提高了产能并节约用药成本，大大提高了养猪效率。本发明的制备方法简单实用，功能强大，具有很好的市场前景。
1.一种微生物发酵饲料的制备方法，其特征在于，包括：将保藏编号为ACCC11118的植物乳杆菌菌种(Lactobacillus planta)和保藏编号为CGMCC 1.0209的酪酸梭菌菌种(Clostridium butyricum)经过活化、第一次液体发酵培养、第二次液体发酵培养以及固体发酵培养后，将所得的植物乳杆菌固体发酵培养物和酪酸梭菌固体发酵培养物冷冻干燥，并混合得到微生物发酵饲料。
2.如权利要求1所述的微生物发酵饲料的制备方法，其特征在于，所述的植物乳杆菌菌种的活化步骤为：将植物乳杆菌菌种接种到灭菌后的重量百分比浓度为0.5%～1.5%的生理盐水中，震荡使其充分混匀，静置活化。
3.如权利要求1所述的微生物发酵饲料的制备方法，其特征在于，所述的酪酸梭菌菌种的活化步骤为：将酪酸梭菌菌种接种到灭菌后的重量百分比浓度为0.5%～1.5%的生理盐水中，震荡使其充分混匀，静置活化。
4.如权利要求1所述的微生物发酵饲料的制备方法，其特征在于，所述的植物乳杆菌菌种的第一次液体发酵培养的步骤为：在麦芽汁中加入酵母膏和碳酸钙得到液体发酵培养基，麦芽汁、酵母膏和碳酸钙的重量比为100：0.1～1：0.1～1，将液体发酵培养基灭菌，将活化后的植物乳杆菌菌种接种到所述的液体发酵培养基中，在摇床上进行液体发酵培养。
5.如权利要求1所述的微生物发酵饲料的制备方法，其特征在于，所述的酪酸梭菌菌种的第一次液体发酵培养的步骤为：在蒸馏水中加入糖蜜、玉米淀粉和碳酸钙得到液体发酵培养基，蒸馏水、糖蜜、玉米淀粉和碳酸钙的重量比为100：0.5～4：0.5～3：0.1～1，将液体发酵培养基灭菌，将活化后的酪酸梭菌菌种接种到所述的液体发酵培养基中，在摇床上进行液体发酵培养。
6.如权利要求1所述的微生物发酵饲料的制备方法，其特征在于，所述的植物乳杆菌菌种的第二次液体发酵培养的步骤为：在麦芽汁中加入酵母膏和碳酸钙得到液体发酵培养基，麦芽汁、酵母膏和碳酸钙的重量比为100：0.1～1：0.1～1，将液体发酵培养基灭菌，将第一次液体发酵培养的产物接种到所述的液体发酵培养基中，在摇床上进行液体发酵培养。
7.如权利要求1所述的微生物发酵饲料的制备方法，其特征在于，所述的酪酸梭菌菌种的第二次液体发酵培养的步骤为：在蒸馏水中加入糖蜜、玉米淀粉和碳酸钙得到液体发酵培养基，蒸馏水、糖蜜、玉米淀粉和碳酸钙的重量比为100：0.5～4：0.5～3：0.1～1，将液体发酵培养基灭菌，将第一次液体发酵培养的产物接种到所述的液体发酵培养基中，在摇床上进行液体发酵培养。
8.如权利要求1所述的微生物发酵饲料的制备方法，其特征在于，所述的植物乳杆菌菌种的固体发酵培养的步骤为：将玉米粉、麸皮和豆粕混合得到固体混合物，玉米粉、麸皮和豆粕的重量比为50～60：20～25：15～20，将固体混合物与脱脂奶粉按重量比100：
10～30混合，灭菌后，接种第二次液体发酵培养的产物，混合均匀，将所得的混合物摊平，厚度保持在15～20cm，盖上薄膜封好，在30～40℃下进行固体发酵培养。
9.如权利要求1所述的微生物发酵饲料的制备方法，其特征在于，所述的酪酸梭菌菌种的固体发酵培养的步骤为：将玉米粉、糖蜜、大豆饼粉和碳酸钙混合得到固体混合物，玉米粉、糖蜜、大豆饼粉和碳酸钙的重量比为30～40：30～40：10～15：5～10，将固体混合物与脱脂奶粉按重量比100：10～30混合，灭菌后，接种第二次液体发酵培养的产物，混合均匀，将所得的混合物摊平，厚度保持在15～20cm，盖上薄膜封好，在30～40℃下进行固体发酵培养。
10.如权利要求1所述的微生物发酵饲料的制备方法，其特征在于，所述的植物乳杆菌固体发酵培养物和酪酸梭菌固体发酵培养物的混合重量比为10～18：12～15。
一种能够保护猪肠道健康的微生物发酵饲料的制备方法
技术领域
[0001] 本发明涉及一种能够保护猪肠道健康的微生物发酵饲料的制备方法，主要用于改善猪肠道健康，属于微生态制剂技术领域。
背景技术
[0002] 随着人们生活水平的不断提高，畜产品的质量需求不断提高，养殖业正向规模化、标准化方向发展。在养猪业中，猪的抗病能力、消化能力非常关键。目前，猪饲料中抗生素和激素的添加非常普遍，饲料微生态添加剂对高温、胃酸和胆盐不稳定，致使只有少数菌株进入肠道后具有活性，从而达不到发挥作用所需要的活菌数量，另外还有一些不稳定，保质期短的这些问题，从而影响了猪的生长效果。正确的饲养猪和科学的实施好方法至关重要，要让猪体内得到正常的发育、生长，防止消化不良以及对营养物质吸收不充分。
发明内容
[0003] 本发明的目的是提供一种能够保护猪肠道健康的微生物发酵饲料的制备方法，所得的微生物发酵饲料具有有效改善猪肠道环境，促进消化，提高猪的生长速度，提高抗病能力的作用，对养猪业的发展有着重要的意义。
[0004] 为了达到上述目的，本发明提供了一种微生物发酵饲料的制备方法，其特征在于，包括：将植物乳杆菌菌种和酪酸梭菌菌种经过活化、第一次液体发酵培养、第二次液体发酵培养以及固体发酵培养后，将所得的植物乳杆菌固体发酵培养物和酪酸梭菌固体发酵培养物冷冻干燥，并混合得到微生物发酵饲料。
[0005] 优选地，所述的植物乳杆菌菌种的活化步骤为：将植物乳杆菌菌种接种到灭菌后的重量百分比浓度为0.5%～1.5%的生理盐水中，震荡使其充分混匀，静置活化。
[0006] 优选地，所述的酪酸梭菌菌种的活化步骤为：将酪酸梭菌菌种接种到灭菌后的重量百分比浓度为0.5%～1.5%的生理盐水中，震荡使其充分混匀，静置活化。
[0007] 优选地，所述的植物乳杆菌菌种的第一次液体发酵培养的步骤为：在麦芽汁中加入酵母膏和碳酸钙得到液体发酵培养基，麦芽汁、酵母膏和碳酸钙的重量比为100：0.1～1：0.1～1，将液体发酵培养基灭菌，将活化后的植物乳杆菌菌种接种到所述的液体发酵培养基中，在摇床上进行液体发酵培养。
[0008] 优选地，所述的酪酸梭菌菌种的第一次液体发酵培养的步骤为：在蒸馏水中加入糖蜜、玉米淀粉和碳酸钙得到液体发酵培养基，蒸馏水、糖蜜、玉米淀粉和碳酸钙的重量比为100：0.5～4：0.5～3：0.1～1，将液体发酵培养基灭菌，将活化后的酪酸梭菌菌种接种到所述的液体发酵培养基中，在摇床上进行液体发酵培养。
[0009] 优选地，所述的植物乳杆菌菌种的第二次液体发酵培养的步骤为：在麦芽汁中加入酵母膏和碳酸钙得到液体发酵培养基，麦芽汁、酵母膏和碳酸钙的重量比为100：0.1～1：0.1～1，将液体发酵培养基灭菌，将第一次液体发酵培养的产物接种到所述的液体发酵培养基中，在摇床上进行液体发酵培养。
[0010] 优选地，所述的酪酸梭菌菌种的第二次液体发酵培养的步骤为：在蒸馏水中加入糖蜜、玉米淀粉和碳酸钙得到液体发酵培养基，蒸馏水、糖蜜、玉米淀粉和碳酸钙的重量比为100：0.5～4：0.5～3：0.1～1，将液体发酵培养基灭菌，将第一次液体发酵培养的产物接种到所述的液体发酵培养基中，在摇床上进行液体发酵培养。
[0011] 优选地，所述的植物乳杆菌菌种的固体发酵培养的步骤为：将玉米粉、麸皮和豆粕混合得到固体混合物，玉米粉、麸皮和豆粕的重量比为50～60：20～25：15～20，将固体混合物与脱脂奶粉按重量比100：10～30混合，灭菌后，接种第二次液体发酵培养的产物，混合均匀，将所得的混合物摊平，厚度保持在15～20cm，盖上薄膜封好，在30～40℃下进行固体发酵培养。
[0012] 优选地，所述的酪酸梭菌菌种的固体发酵培养的步骤为：将玉米粉、糖蜜、大豆饼粉和碳酸钙混合得到固体混合物，玉米粉、糖蜜、大豆饼粉和碳酸钙的重量比为30～40：30～40：10～15：5～10，将固体混合物与脱脂奶粉按重量比100：10～30混合，灭菌后，接种第二次液体发酵培养的产物，混合均匀，将所得的混合物摊平，厚度保持在15～20cm，盖上薄膜封好，在30～40℃下进行固体发酵培养。
[0013] 优选地，所述的冷冻干燥后，植物乳杆菌固体发酵培养物和酪酸梭菌固体发酵培养物的水分重量含量皆低于10%。
[0014] 优选地，所述的植物乳杆菌固体发酵培养物和酪酸梭菌固体发酵培养物的混合重量比为10～18：12～15。
[0015] 本发明具有很好的生物学功能，能够维持肠道微生态平衡作用，改善肠道菌群，抗突变作用，对猪的生长速度有很大的提高，有效降低了猪的腹泻率及幼猪的死亡率，提高了产能并节约用药成本，大大提高了养猪效率。本发明的制备方法简单实用，功能强大，具有很好的市场前景。
具体实施方式
[0016] 下面结合实施例来具体说明本发明。
[0017] 实施例1：微生物发酵饲料的制备方法
[0018] （1）活化：将植物乳杆菌菌种（Lactobacillus planta，购自中国农业微生物保藏管理中心，保藏编号ACCC11118）以体积比2：100接种到经121℃灭菌20分钟并冷却至25℃的重量百分比浓度为0.9%的生理盐水10ml中，震荡使其充分混匀，静置活化30分钟。将酪酸梭菌菌种（Clostridium butyricum，购自中国微生物菌种保藏中心，保藏编号CGMCC1.0209）以体积比2：100接种到经121℃灭菌20分钟并冷却至25℃的重量百分比浓度为
0.9%的生理盐水10ml中，震荡使其充分混匀，静置活化30分钟。
[0019] （2）一级种子的制备：在麦芽汁中加入酵母膏和碳酸钙得到液体发酵培养基，麦芽汁、酵母膏和碳酸钙的重量比为100：0.1：0.1，将液体发酵培养基100ml置于250ml三角瓶内，经121℃灭菌20分钟并冷却至25℃，将活化后的植物乳杆菌菌种以体积比1：10接种到所述的液体发酵培养基中，在摇床上以37℃，摇床转速180转/分钟厌氧培养24小时作为一级种子。
[0020] 在蒸馏水中加入糖蜜、玉米淀粉和碳酸钙得到液体发酵培养基，蒸馏水、糖蜜、玉米淀粉和碳酸钙的重量比为100：0.5：0.5：0.1，将液体发酵培养基100ml置于250ml三角瓶内，经121℃灭菌20分钟并冷却至25℃，将活化后的酪酸梭菌菌种以体积比1：10接种到所述的液体发酵培养基中，在摇床上以37℃，摇床转速180转/分钟厌氧培养24小时作为一级种子。
[0021] （3）二级种子的制备：在麦芽汁中加入酵母膏和碳酸钙得到液体发酵培养基，麦芽汁、酵母膏和碳酸钙的重量比为100：0.1：0.1，将液体发酵培养基100ml置于250ml三角瓶内，经121℃灭菌20分钟并冷却至25℃，将植物乳杆菌一级种子以体积比1：10接种到所述的液体发酵培养基中，在摇床上以37℃，摇床转速180转/分钟厌氧培养24小时作为二级种子。
[0022] 在蒸馏水中加入糖蜜、玉米淀粉和碳酸钙得到液体发酵培养基，蒸馏水、糖蜜、玉米淀粉和碳酸钙的重量比为100：0.5：0.5：0.1，将液体发酵培养基100ml置于250ml三角瓶内，经121℃灭菌20分钟并冷却至25℃，将酪酸梭菌一级种子以体积比1：10接种到所述的液体发酵培养基中，在摇床上以37℃，摇床转速180转/分钟厌氧培养24小时作为二级种子。
[0023] （4）固体发酵培养：将玉米粉、麸皮和豆粕混合得到固体混合物，玉米粉、麸皮和豆粕的重量比为50：25：20，将固体混合物与脱脂奶粉按重量比100：10混合，在100℃温度下蒸40分钟，然后冷却至25℃，按照体积比100：5接种植物乳杆菌二级种子，混合均匀，将所得的混合物摊平，厚度保持在15cm，盖上薄膜封好，在30℃下进行培养48h。
[0024] 将玉米粉、糖蜜、大豆饼粉和碳酸钙混合得到固体混合物，玉米粉、糖蜜、大豆饼粉和碳酸钙的重量比为30：40：15：10，将固体混合物与脱脂奶粉按重量比100：10混合，在100℃温度下蒸40分钟，然后冷却至25℃，以体积比100：10接种酪酸梭菌二级种子，混合均匀，将所得的混合物摊平，厚度保持在15cm，盖上薄膜封好，在30℃下进行培养48h。
[0025] （5）植物乳杆菌固体发酵产物和酪酸梭菌固体发酵产物分别在冷冻干燥机里面冻干，直至固态混合物中的水分重量含量皆低于10%，即可停止干燥，经粉碎后，将植物乳杆菌固体发酵产物和酪酸梭菌固体发酵产物按重量比1.5：2混合，得到微生物发酵饲料。
[0026] 实施例2：微生物发酵饲料的制备方法
[0027] （1）活化：将植物乳杆菌菌种（Lactobacillus planta，购自中国农业微生物保藏管理中心，保藏编号ACCC11118）以体积比2：100接种到经121℃灭菌20分钟并冷却至25℃的重量百分比浓度为1.5%的生理盐水10ml中，震荡使其充分混匀，静置活化30分钟。将酪酸梭菌菌种（Clostridium butyricum，购自中国微生物菌种保藏中心，保藏编号CGMCC1.0209）以体积比2：100接种到经121℃灭菌20分钟并冷却至25℃的重量百分比浓度为
1.5%的生理盐水10ml中，震荡使其充分混匀，静置活化30分钟。
[0028] （2）一级种子的制备：在麦芽汁中加入酵母膏和碳酸钙得到液体发酵培养基，麦芽汁、酵母膏和碳酸钙的重量比为100：1：1，将液体发酵培养基100ml置于250ml三角瓶内，经121℃灭菌20分钟并冷却至25℃，将活化后的植物乳杆菌菌种以体积比1：10接种到所述的液体发酵培养基中，在摇床上以37℃，摇床转速180转/分钟厌氧培养24小时作为一级种子。
[0029] 在蒸馏水中加入糖蜜、玉米淀粉和碳酸钙得到液体发酵培养基，蒸馏水、糖蜜、玉米淀粉和碳酸钙的重量比为100：4：3：1，将液体发酵培养基100ml置于250ml三角瓶内，经121℃灭菌20分钟并冷却至25℃，将活化后的酪酸梭菌菌种以体积比1：10接种到所述的液体发酵培养基中，在摇床上以37℃，摇床转速180转/分钟厌氧培养24小时作为一级种子。
[0030] （3）二级种子的制备：在麦芽汁中加入酵母膏和碳酸钙得到液体发酵培养基，麦芽汁、酵母膏和碳酸钙的重量比为100：1：1，将液体发酵培养基100ml置于250ml三角瓶内，经121℃灭菌20分钟并冷却至25℃，将植物乳杆菌一级种子以体积比1：10接种到所述的液体发酵培养基中，在摇床上以37℃，摇床转速180转/分钟厌氧培养24小时作为二级种子。
[0031] 在蒸馏水中加入糖蜜、玉米淀粉和碳酸钙得到液体发酵培养基，蒸馏水、糖蜜、玉米淀粉和碳酸钙的重量比为100：4：3：1，将液体发酵培养基100ml置于250ml三角瓶内，经121℃灭菌20分钟并冷却至25℃，将酪酸梭菌一级种子以体积比1：10接种到所述的液体发酵培养基中，在摇床上以37℃，摇床转速180转/分钟厌氧培养24小时作为二级种子。
[0032] （4）固体发酵培养：将玉米粉、麸皮和豆粕混合得到固体混合物，玉米粉、麸皮和豆粕的重量比为60：20：15，将固体混合物与脱脂奶粉按重量比100：30混合，在100℃温度下蒸40分钟，然后冷却至25℃，按照体积比100：5接种植物乳杆菌二级种子，混合均匀，将所得的混合物摊平，厚度保持在20cm，盖上薄膜封好，在40℃下进行培养48h。
[0033] 将玉米粉、糖蜜、大豆饼粉和碳酸钙混合得到固体混合物，玉米粉、糖蜜、大豆饼粉和碳酸钙的重量比为40：30：10：5，将固体混合物与脱脂奶粉按重量比100：30混合，在100℃温度下蒸40分钟，然后冷却至25℃，以体积比100：10接种酪酸梭菌二级种子，混合均匀，将所得的混合物摊平，厚度保持在20cm，盖上薄膜封好，在40℃下进行培养48h。
[0034] （5）植物乳杆菌固体发酵产物和酪酸梭菌固体发酵产物分别在冷冻干燥机里面冻干，直至固态混合物中的水分重量含量皆低于10%，即可停止干燥，经粉碎后，将植物乳杆菌固体发酵产物和酪酸梭菌固体发酵产物按重量比1.8：1.5混合，得到微生物发酵饲料。
[0035] 实施例3：微生物发酵饲料的制备方法
[0036] （1）活化：将植物乳杆菌菌种（Lactobacillus planta，购自中国农业微生物保藏管理中心，保藏编号ACCC11118）以体积比2：100接种到经121℃灭菌20分钟并冷却至25℃的重量百分比浓度为0.9%的生理盐水10ml中，震荡使其充分混匀，静置活化30分钟。将酪酸梭菌菌种（Clostridium butyricum，购自中国微生物菌种保藏中心，保藏编号CGMCC1.0209）以体积比2：100接种到经121℃灭菌20分钟并冷却至25℃的重量百分比浓度为
0.9%的生理盐水10ml中，震荡使其充分混匀，静置活化30分钟。
[0037] （2）一级种子的制备：在麦芽汁中加入酵母膏和碳酸钙得到液体发酵培养基，麦芽汁、酵母膏和碳酸钙的重量比为100：0.5：0.6，将液体发酵培养基100ml置于250ml三角瓶内，经121℃灭菌20分钟并冷却至25℃，将活化后的植物乳杆菌菌种以体积比1：10接种到所述的液体发酵培养基中，在摇床上以37℃，摇床转速180转/分钟厌氧培养24小时作为一级种子。
[0038] 在蒸馏水中加入糖蜜、玉米淀粉和碳酸钙得到液体发酵培养基，蒸馏水、糖蜜、玉米淀粉和碳酸钙的重量比为100：2：1.5：0.2，将液体发酵培养基100ml置于250ml三角瓶内，经121℃灭菌20分钟并冷却至25℃，将活化后的酪酸梭菌菌种以体积比1：10接种到所述的液体发酵培养基中，在摇床上以37℃，摇床转速180转/分钟厌氧培养24小时作为一级种子。
